补肾活血方中药对妊娠大鼠子宫内膜容受性的影响

目的:观察补肾活血方中药对妊娠大鼠子宫内膜容受性的影响.方法:选用妊娠SD大鼠随机分为空白组、模型组和中药组,于妊娠第l天模型组和中药组大鼠皮下注射米非司酮溶液1次(米非司酮溶液5 g/L,5 mg/kg)造成胚泡着床障碍模型,空白组皮下注射生理盐水1次(1 mL/kg).空白组和模型组从妊娠第l天起予生理盐水灌胃(6.7 mL/kg),2次,d,连续5 d.中药组从妊娠第1天起行补肾活血方中药灌胃(7.6g生药/kg),2次,d,连续5d.于妊娠第5天扫描电镜观察各组子宫内膜胞饮突发育情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测子宫内膜整合素αvβ3mRNA的表达,于妊娠第10天计数各组大鼠胚泡着床数.结果:模型组子宫内膜表面未见明显的胞饮突发育,表现为增生早期的子宫内膜变化.中药组可见发育中的胞饮突,发育形态明显超前于模型组,接近于空白组;模型组αvβ3mRNA表达水平(0.854 5±0.0747,0.3984±0.093 7)显著低于空白组(1.051 8±0.087 8,0.601 6±0.133 8)(P<0.01),中药组αvβ3mRNA表达水平(0.987 6±0.075 1,0.539 6±0.058 4)显著高于模型组(P<0.05);模型组胚泡着床数(4.63±3.66)显著低于空白组(12.63±2.07)(P<0.01),中药组胚泡着床数(10.75±2.44)显著高于模型组(P<0.01).结论:补肾活血方中药能明显改善胚泡着床障碍大鼠子宫内膜表面胞饮突的发育,并显著提高子宫内膜整合素αvβ3mRNA的表达,有助于子宫内膜容受性的建立,从而最终提高胚泡的着床率.     

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

温肾活血方改善胚胎着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:探讨温肾活血方对胚胎着床障碍模型小鼠妊娠结局及子宫内膜容受性的影响。方法:由米非司酮建立胚胎着床障碍模型小鼠200只,随机分为正常(N)组、模型(M)组、中药低剂量(L)组、中药高剂量(H)组和孕酮(P)组各40只。妊娠第1~4日早晨,H组、L组小鼠灌胃给予0.3 m L水煎剂,N组、M组小鼠每日以等体积生理盐水灌胃,P组小鼠以配制的黄体酮-橄榄油剂按照2 mg/只进行颈后皮下注射,妊娠第4日上午9︰00造模,N组小鼠颈后皮下注射0.1 m L橄榄油溶剂,其他各组小鼠颈后皮下注射米非司酮-橄榄油剂0.1 m L(1.93 mg/kg米非司酮)。分别于妊娠第4日、第5日、第8日上午9∶00脱颈椎处死每组各10只小鼠,检测妊娠率、着床位点数、子宫内膜组织形态、雌激素(E_2)及其受体(ER)、孕激素(P)及其受体(PR)、胞饮突。结果:N组着床位点数多于其它各组,H组与N组比较无统计学差异(P0.05)。子宫内膜发育水平N组最优,H组接近N组,M组滞后。妊娠第4日,N组的E_2、P和ER、PR的表达水平与M组比较无统计学差异(P0.05),低于P组与H组(P0.01);妊娠第5日,N组的E_2、P和ER、PR的表达水平显著高于M组(P0.05),N组的ER水平与P、H、L三组比较无统计学差异(P0.05),N组的PR高于P组和L组(P0.05),与H组比较均无统计学差异(P0.05)。P组P水平高于其它组(P0.01),E_2水平与ER结果相吻合。M组胞饮突发育滞后,H组胞饮突发育程度接近N组,P组偶见退化期胞饮突。结论:温肾活血方能够改善子宫内膜容受性,且其效果优于黄体酮。     

补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响

目的　观察补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响。方法　选择 8～ 12周龄昆明小鼠 ,于妊娠第 4天 (Pd4 )晨 ,皮下注射米非司酮 ,制成胚泡着床障碍模型。然后将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组 ,治疗组从Pd1开始灌服中药 (补肾益气和血方 ) ,正常组和模型组则给予等量生理盐水灌服 ,模型组和治疗组于Pd4晨皮下注射米非司酮 ,正常组则注射等量生理盐水。采用扫描电镜观察各组小鼠在Pd4晚 2 1时 30分～ 2 2时 (第 1时间点 ,T1)和Pd5上午 9时 30分～ 10时 (第 2时间点 ,T2 ) ,共两个时间点子宫内膜表面胞饮突的表达。结果　模型组妊娠率 ( 2 5 % )较正常组 ( 90 % )显著降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,模型组平均着床胚泡数为 ( 7 7± 1 3)个 ,正常组为 ( 14 7± 1 4 )个 ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1) ;治疗组的妊娠率 ( 5 5 % )及平均着床胚泡数 [( 12 3± 0 8)个 ]均较模型组显著增加 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。T1时正常组子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突 ,至T2时则表达大量发育完全的胞饮突 ;T1时模型组子宫内膜发育不同步 ,胞饮突仅在局部少量表达 ,至T2时则表达完全消失 ;T1时治疗组子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突 ,与正常组相比略延     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜的形态学影响

目的从形态学角度探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜的影响。方法将56只C57小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、阿司匹林组、二补助育汤低、中、高剂量组,每组8只。用吲哚美辛建立胚胎着床障碍动物模型,小鼠妊娠第5日下午脱颈椎处死,计算各组小鼠妊娠率及胚胎着床位点数;光学显微镜下观察各组小鼠子宫内膜形态结构;透射电子显微镜下观察超微结构、胞饮突表达情况,并计算胞饮突评分。结果 (1)模型组平均着床位点数(1.8±2.1)明显低于空白组(8.1±4.2)(P0.05);中药中、高剂量组平均着床位点数(分别为62.5%,75.0%)明显高于模型组(P0.05);与补佳乐组和阿司匹林组间无统计学差异。(2)光学显微镜下形态学观察:正常组内膜间质疏松、腺体和血管丰富、腺体扩张;模型组内膜变薄或消失、腺体和血管减少;二补助育汤各剂量组、补佳乐组、阿司匹林组内膜均有改善,以二补助育汤中剂量组与正常组最接近。(3)电子显微镜下超微结构观察:空白组子宫内膜上皮细胞及细胞器结构清晰;模型组细胞破坏严重甚至局灶性坏死,线粒体膜不完整、嵴结构消失,胞质中较多空泡样变,核糖体和内质网明显减少;二补助育汤各剂量组、补佳乐组、阿司匹林组细胞及细胞器有不同程度破坏,与模型组相比有明显改善。(4)胞饮突:空白组胞饮突丰富,绒毛较少;模型组绒毛丰富,但胞饮突很少;二补助育汤各剂量组胞饮突较模型组丰富,见少量绒毛;补佳乐组和阿司匹林组可见少量胞饮突,较模型组增加,绒毛表达稀疏。(5)胞饮突评分:模型组胞饮突评分(1.1±0.3)较空白组低(2.5±0.7)(P0.05);中药中剂量组(2.3±0.9)、阿司匹林组(2.0±0.7)评分高于模型组(P0.05),亦高于补佳乐组(1.3±0.5)(P0.05)。结论二补助育汤能够促进子宫内膜发育及胞饮突,从而提高子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。     

补肾活血方中药对妊娠大鼠子宫内膜容受性的影响

目的：观察补肾活血方中药对妊娠大鼠子宫内膜容受性的影响。方法：选用妊娠SD大鼠随机分为空白组、模型组和中药组,于妊娠第1天模型组和中药组大鼠皮下注射米非司酮溶液1次（米非司酮溶液5g／L,5mg／kg）造成胚泡着床障碍模型,空白组皮下注射生理盐水1次（1mL／kg）。空白组和模型组从妊娠第1天起予生理盐水灌胃（6．7mL／kg）,2次/d,连续5d。中药组从妊娠第1天起行补肾活血方中药灌胃（7．6g生药／kg）,2次/d,连续5d。于妊娠第5天扫描电镜观察各组子宫内膜胞饮突发育情况,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测子宫内膜整合素αvβ3mRNA的表达,于妊娠第10天计数各组大鼠胚泡着床数。结果：模型组子宫内膜表面未见明显的胞饮突发育,表现为增生早期的子宫内膜变化,中药组可见发育中的胞饮突,发育形态明显超前于模型组,接近于空白组;模型组αvβ3mRNA表达水平（0．8545±0．0747,0．3984±0．0937）显著低于空白组（1．0518±0．0878,0．6016±0．1338）（P〈0．01）,中药组俚届3mRNA表达水平（0．9876±0．0751,0．5396±0．0584）显著高于模型组（P〈0．05）;模型组胚泡着床数（4．63±3．66）显著低于空白组（12．63±2．07）（P〈0．01）,中药组胚泡着床数（10．75±2．44）显著高于模型组（P〈0．01）。结论：补肾活血方中药能明显改善胚泡着床障碍大鼠子宫内膜表面胞饮突的发育,并显著提高子宫内膜整合素αvβ3mRNA     

经后增殖方和促黄体方能诱导超促排卵小鼠子宫内膜中整合素β_3的表达

目的:观察益气血补肝肾方对控制性超促排卵小鼠子宫内膜组织中整合素β3表达的影响。方法:将实验小鼠随机分为COH模型组、中药治疗组和对照组。进入实验后,中药治疗组每日给予中药灌胃,其余小鼠以等量生理盐水代替。COH模型组和中药治疗组给予GnRHa降调节,PMSG+hCG促排。每组分别于孕第1日(pd1)、pd2、pd4、pd5、pd6处死10只动物,取子宫内膜采用实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹的方法分别在mRNA和蛋白水平定量检测子宫内膜整合素β3表达情况。于妊娠第8日(pd 8)剖腹取各组小鼠子宫(每组10只),观察胚泡着床情况。结果:整合素β3在各组小鼠子宫内膜中呈周期性的表达,从孕第1日(pd 1)开始整合素β3表达逐渐增强,pd 4显著增加,pd 6表达开始减弱。与COH模型组相比,中药治疗组小鼠子宫内膜中整合素β3表达增强,两者相比有统计学意义(P<0.05);整合素β3在中药治疗组和对照组中的表达水平相近,两者相比无统计学意义(P>0.05)。COH模型组pd 8的平均胚胎着床数与中药治疗组和对照组相比,明显减少(P<0.05),而中药治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:益气血补肝肾方可诱导小鼠子宫内膜中整合素β3的表达,并提高超促排卵小鼠的胚胎着床率,提示该方可能具有改善子宫内膜容受性的作用。     

自噬在围着床期小鼠子宫内膜中作用初探

目的: 探索围着床期小鼠子宫内膜自噬情况。方法: 选择36只ICR妊娠小鼠随机分为空白组、胚胎着床障碍模型组,每组小鼠18只。模型组采用米非司酮制备,每组每日予以生理盐水灌胃,分别于妊娠第4、5、6天脱颈处死小鼠各6只。观察子宫形态,计算各组平均胚胎着床位点数,检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）,透射电镜观察子宫内膜细胞中自噬小体的表达。结果: 空白组妊娠第4天（pd4）子宫无明显串珠样改变,妊娠第5天（pd5）、妊娠第6天（pd6）子宫串珠样改变明显且分布均匀。模型组pd4、pd5未见明显串珠样改变,pd6可见少量串珠稀疏分布。空白组pd6的胚胎着床位点数较pd4增多,差异有统计学意义（P<0.05）;而pd5的胚胎着床位点数与pd4比较有增多,但差异无统计学意义（P>0.05）。模型组pd5、pd6平均胚胎着床位点数分别低于空白组pd5、pd6（P<0.05,P<0.01）。2组LC3-Ⅱ蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。透射电镜下空白组小鼠子宫内膜细胞完整,pd5自噬小体数量较pd4减少,pd6又增多。模型组部分细胞损伤、坏死,pd4自噬小体表达较空白组多,亦较模型组pd5、pd6多。结论: 自噬参与并调控胚胎着床过程,自噬异常可能破坏子宫内膜细胞活性和功能,影响胚胎着床。     

纤维连接蛋白在胚胎着床前后子宫内膜组织中的动态表达

为了探讨纤维连接蛋白(FN)在胚胎着床中的作用,本研究应用蛋白印迹和免疫印迹法检测小鼠孕3、5、7、15天子宫内膜及未妊娠小鼠子宫内膜组织中FN蛋白表达量,对免疫印迹法结果进行VDS扫描半定量分析后发现:与未妊娠小鼠相比,妊娠各期小鼠子宫内膜组织中FN蛋白表达量明显升高,其高峰在着床后的孕7天,直至孕15天.这一结果说明,在着床前,小鼠子宫内膜细胞外基质已发生变化,FN表达增高以利胚胎着床,而着床这一过程又加剧细胞外基质的变化,使FN在着床后表达到高峰,着床完成后,细胞外基质趋于稳定,FN又有所下降.本研究还用以上方法测定了人早孕胚囊平均直径在7～25mm(相当于孕35～49天)时的蜕膜组织中FN的表达,发现孕35～49天各期蜕膜组织中的FN表达量无差异,但均明显较未孕组高,说明人胚胎着床后,FN表达也明显增多,并到一定程度后趋于稳定.FN在着床前后的活跃变化说明它与着床有密切关系.     

着床研究模型:离体胚泡与子宫内膜“共培养”

本工作用小鼠和豚鼠的离体胚泡与子宫内膜共培养方法,为研究着床与抗着床机理提供了一个体外研究模型。子宫内膜取自妊娠小鼠第5天上午8时前和妊娠豚鼠第4天下午,分别与小鼠或豚鼠胚泡共培养。经培养2～3天后可见胚泡从透明带逸出并附着于子宫内膜,部分植入内膜。     

GnRH-a控制性超促排卵(COH)对小鼠着床期Hoxa-10基因表达的影响

目的:研究GnRH-a长方案控制性超促排卵(COH)对小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期HOXA-10基因表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制。方法:实验动物随机分为实验组(GnRH-a+hMG+hCG)和对照组(生理盐水),雌、雄合笼后观察小鼠阴栓率,于着床期取小鼠子宫,观察妊娠率及胚胎着床数,计算着床率;应用RT-PCR、Real-time PCR方法及免疫组织化学法分别检测小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10 mRNA及蛋白的表达。结果:实验组小鼠阴栓率及妊娠率均明显低于对照组(P<0.01),实验组胚胎着床数高于对照组(P<0.01),但胚胎着床率较对照组显著降低(P<0.05),着床期小鼠子宫内膜Hoxa-10mRNA及蛋白表达下降,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:GnRH-a长方案COH可引起小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10表达下降,导致子宫内膜容受性降低,从而影响小鼠妊娠及胚胎着床。     

药物流产的安全性及不良反应

据统计,全世界每年有2.6亿妇女合法终止妊娠,2亿妇女非法流产,其中死亡人数超过7.8万。1988年法国首先使用米非司酮终止早孕,随后中国、瑞典、法国等国家开始使用。现已被发达国家和发展中国家妇女所接受。我国应用米非司酮终止早孕的妇女已超过600万。安全的药物终止妊娠,对妇女健康和医疗事业有重要意义。 一、流产药物的作用机制 受精卵着床涉及与子宫内膜复杂的相互作用。受精卵在排卵后第6～10d与子宫内膜上皮接触并植入内膜,这些过程均依赖于孕激素的作用。孕激素在受精卵着床的过程中,调节着许多基因的转录过程同时也抑制子宫收缩。用于终止妊娠的药物,能抑制孕激素的合成,拮抗孕激素的作用,诱导子宫收缩     

控制性卵巢刺激中黄体期添加雌激素对小鼠子宫内膜组织胞饮突变化和白血病抑制因子表达的影响

目的 研究控制性卵巢刺激(COS)中黄体期添加雌激素对子宫内膜容受性的影响,探讨COS中不同黄体期支持方案对小鼠子宫内膜中胞饮突发育情况、白血病抑制因子(LIF)表达的影响.方法 将正常雌性昆明小鼠随机分为A组(单纯COS)、B组(COS+黄体酮)、C组(COS+黄体酮+雌激素)和D组(自然周期,未应用药物)共4组,扫描电镜下观察各组小鼠妊娠第3～5天子宫内膜胞饮突的发育情况;采用免疫组化方法 检测LIF蛋白在各组小鼠妊娠第3～5灭子宫内膜中的表达情况.结果 (1)B、C、D组小鼠妊娠第3天子宫内膜出现发育中的胞饮突,妊娠第4天出现完全发育的胞饮突,妊娠第5天出现退化的胞饮突;A组小鼠妊娠第3天可见少量完伞发育的胞饮突,妊娠第4天可见退化的胞饮突.(2)妊娠第3～5大小鼠子宫内膜LIF蛋白表达水平的平均值,C组(138.5±20.3)、D组(143.1±19.0)均明显高于A组(103.2±5.0),差异均有统计学意义(P<0.05),C、D组妊娠第4天LIF蛋白表达均最强,呈强阳性;B组表达水平(123.5±10.8)高于A组,但低于C、D组,差异也均有统计学意义(P<0.05),B组妊娠第4天LIF蛋白表达最强,呈阳性;A组小鼠妊娠第3天LIF蛋白表达最强,呈弱阳性.A组妊娠第3天小鼠与B组、C组和D组妊娠第4天小鼠子宫内膜中LIF蛋白表达水平之间两两比较,差异均有统计学意义(F=55.76,P<0.01).结论 COS中黄体期支持时添加雌激素能改善小鼠子宫内膜中胞饮突的发育及LIF蛋白的表达,从而增加子官内膜容受性.     

黄芩、白术通过调节岩藻糖基转移酶Ⅳ、Ⅶ的表达促进胚胎体外黏附

目的:探讨黄芩、白术对胚胎体外黏附的影响及其调控的糖分子机制。方法:培养人子宫内膜细胞(RL95-2)和人绒毛膜细胞(JAR),并经米非司酮诱导后建立着床障碍模型。通过黏附实验观察不同浓度黄芩、白术水煎液对胚胎黏附率的影响,采用RT-PCR、Western blotting检测着床相关寡糖合成关键酶的表达变化。结果:黄芩、白术50 mg/L治疗组胚胎黏附率较模型组显著升高(P0.05),着床相关的岩藻糖基转移酶Ⅳ、Ⅶ(FUT4、FUT7)的m RNA及蛋白表达显著增加(P0.001)。结论:中药黄芩、白术可通过上调FUT4、FUT7的表达促进胚胎体外黏附。     

内皮型一氧化氮合酶表达及微血管密度评估体外受精患者子宫内膜容受性的价值

目的:探讨着床窗口期子宫内膜内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及微血管密度(MVD)评估体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕患者子宫内膜容受性的价值。方法:纳入IVF-ET助孕患者60例,于移植前一周期着床窗口期行子宫内膜取样,采用免疫组织化学SP法检测eNOS蛋白的表达及MVD,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测eNOS mRNA的表达。根据临床妊娠结局分为妊娠组(30例)和未妊娠组(30例),比较两组eNOS mRNA、蛋白表达及MVD的差异。结果:妊娠组eNOS mRNA(0.72±0.21)明显高于未妊娠组(0.29±0.12),差异有统计学意义(P0.05);妊娠组子宫内膜eNOS蛋白阳性表达率(80.0%)明显高于未妊娠组(13.3%),差异有统计学意义(P0.05);妊娠组MVD(14.53±3.28)明显高于未妊娠组(12.20±3.83),差异有统计学意义(P0.05);子宫内膜eNOS蛋白表达水平与MVD呈正相关(r=0.814,P0.01)。结论:着床窗口期子宫内膜eNOS mRNA及蛋白的高表达和MVD增加均能够改善子宫内膜容受性,有利于IVF妊娠结局。     

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织中螺旋动脉改变及怀孕结局的影响

目的：通过观察寿胎丸对复发性流产（RSA）小鼠蜕膜组织子宫螺旋动脉改变及怀孕结局的影响,探讨其保胎的作用机制。方法：以CBA/J雌鼠×BALB/c雄鼠建立正常怀孕小鼠模型（12只）,CBA/J雌鼠×DBA/2雄鼠建立RSA小鼠模型（43只）,RSA小鼠按怀孕先后顺序随机分为RSA模型对照组（11只）、寿胎丸低剂量组（11只）、寿胎丸中剂量组（11只）及寿胎丸高剂量组（10只）,于孕第4～9天灌胃给药,孕14 d处死孕鼠,计数吸收胚胎数,计算各组胚胎吸收率,光镜下观察各组蜕膜组织中螺旋动脉生理性改变的发生率,并测量螺旋动脉的管腔直径及管壁厚度,透射电镜下观察蜕膜组织中螺旋动脉超微结构。结果：RSA模型对照组胚胎吸收率高于正常怀孕模型组（29.49% vs. 4.55%,χ2=18.887,P=0.000）。寿胎丸低、中、高剂量组的胚胎吸收率比RSA模型对照组均降低（均P＜0.05）。RSA模型对照组蜕膜组织中子宫螺旋动脉生理性转变率低于正常怀孕模型组（11.90% vs. 44.68%, χ2=11.522,P=0.001）。RSA模型对照组蜕膜组织中子宫螺旋动脉平均管腔直径及管壁厚度均低于正常怀孕模型组（P＜0.05）。寿胎丸高剂量组子宫螺旋动脉生理性转变发生率增高,管腔扩张,管壁厚度变薄（均P＜0.05）。结论：寿胎丸可能通过促进RAS小鼠蜕膜组织中子宫螺旋动脉生理性重铸发挥保胎作用。     

Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

米非司酮对小鼠着床期子宫内膜活化的β-连环蛋白(active β-catenin)表达的影响

目的:探讨活化的β-连环蛋白(active β-catenin)在胚胎着床过程中的作用。方法:将孕第2日(d2)昆明小鼠随机分成3组,每组30只,A组:孕d2单次背部皮下注射0.1ml米非司酮(1.2mg/ml);B组(溶剂对照):以等量1,3-丙二醇代替米非司酮;C组:不作任何处理。用免疫组织化学、间接免疫荧光、Western blotting方法定性、定量、定位检测3组小鼠在妊娠d3￣7活化的β-连环蛋白的动态表达。结果:B、C组小鼠子宫内膜中活化的β-连环蛋白于孕d3在腺上皮和腔上皮、基质细胞质和细胞膜表达;妊娠d4在腔上皮细胞质和细胞膜强表达,并达高峰;妊娠d5￣7在腺上皮、血管内皮、腔上皮下基质细胞膜和细胞质表达,且B、C组间在妊娠d3￣7各时间点的表达无显著性差异(P>0.05);A组小鼠妊娠d3￣7活化的β-连环蛋白的表达较B、C组显著降低(P<0.01),在妊娠d4表达量未见高峰,且表达部位局限于基质细胞,腔上皮无表达。结论:米非司酮可能通过抑制孕激素与其受体结合而下调活化的β-连环蛋白表达,进而抑制子宫内膜黏附性,影响子宫内膜容受性的建立而阻碍胚胎顺利着床。     

Asoprisnil抗小鼠孕卵着床效果及对子宫内膜容受性的影响

目的:探讨Asoprisnil抗小鼠孕卵着床的效果及其对小鼠着床窗期子宫内膜容受性的影响。方法:将孕第1日小鼠随机分成4组,分别为Asoprisnil低(5μg/g)、中(10μg/g)、高(20μg/g)剂量组和对照组,每组22只,于孕第1~3日每日灌胃给药1次,对照组以体积分数1%羧甲基纤维素钠替代,第5日每组处死孕鼠5只取子宫组织,HE染色观察子宫内膜形态学改变,免疫组织化学S-P法检测子宫内膜PCNA表达。第8日处死余下的孕鼠,计数着床点数。结果:①Asoprisnil高、中和低剂量组的妊娠率分别为11.76%、35.29%和76.47%,与对照组(94.12%)比较差异有统计意义(P<0.001)。②Asoprisnil高、中、低剂量组着床胚泡数第50百分位数(P50)分别为13(10.5~14)、10(0.5~11)和0(0~12),与对照组0(0~0)比较差异均有统计学意义(P<0.001)。③对照组围着床期子宫内膜腺体弯曲折叠,为复层高柱状上皮细胞;基质细胞蜕膜变,细胞大且排列疏松,胞质丰富透亮;内膜中腺体和血管丰富。Asoprisnil组子宫内膜腺体为单层或者复层上皮细胞;内膜基质细胞蜕膜变不明显,基质细胞较小,排列致密;腺体和血管增生不明显。④围着床期小鼠子宫内膜腺体和基质中均有PCNA表达。内膜腺体中Asoprisnil高、中、低剂量组PCNA表达强度(AIOD)分别为0.15±0.01、0.16±0.03和0.14±0.02,与对照组(0.21±0.03)比较差异有统计学意义(P<0.001)。Asoprisnil高、中、低剂量组内膜基质细胞中PCNA表达强度(AIOD)分别为0.17±0.01、0.18±0.03和0.17±0.02,与对照组(0.15±0.02)比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Asoprisnil能显著抑制着床窗期子宫内膜腺体增殖,促进子宫内膜基质细胞增殖,但阻止基质细胞蜕膜化,降低子宫内膜容受性而发挥抗小鼠胚胎着床效应,显示出潜在的子宫内膜靶向避孕前景。     

子宫内膜三维超声能量多普勒血流图预测冻融优良胚胎移植妊娠结局

目的:探讨三维超声能量多普勒血流图(3-DU-PDA)在预测自然周期冻融优良胚胎移植(FET)后不同妊娠结局患者的子宫内膜血流灌注特点的价值.方法:选择南方医院生殖医学中心2008年12月至2009年12月189例自然周期FET患者,按移植后第10 ～ 12天血β-HCG结果分为妊娠组(98例)和非妊娠组(91例);移植后第10周再将妊娠组分为持续妊娠组(87例)和早期流产组(11例).分别比较妊娠组和非妊娠组、持续妊娠组和早期流产组的临床特征和子宫内膜3-DU-PDA参数.结果:①妊娠组和非妊娠组、持续妊娠组和早期流产组的基本临床特征、促排卵药物用量、黄体生成素(LH)峰日血雌二醇(E2)浓度、内膜厚度、内膜形态、移植胚胎数、着床率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②妊娠组和非妊娠组3-DU-PDA各项参数比较,差异无统计学意义(P＞0.05);持续妊娠组内膜血管指数(Ⅵ)和血管血流指数(VFI)均高于早期流产组,差异有高度统计学意义(P=0.000,P=0.006).③采用ROC曲线分别确定子宫内膜Ⅵ和VFI预测持续妊娠结局的效能,子宫内膜Ⅵ的ROC曲线下面积为0.579 (95％ CI 0.498 ～0.660),内膜VFI的ROC曲线下面积为0.584(95％ CI 0.503 ～0.666).结论:自然周期LH峰日子宫内膜血管化参数不能预测冻融优良胚胎FET的着床结局,但在一定程度上能够预测着床后的早期流产.