电镜组织自动制样机应用体会

随着电镜技术的发展,自动制样机以其卓越的性能及省时、省力等优点开始逐步取代人工制样技术[1].我科自2002年开始使用电镜自动制样机制备样品,为此缩短了电镜组织的制样时间,能做到48个标本在短时间内I司时制样而不影响超微切片的质量.本文将应用过程中的体会介绍如下.     

常规石蜡切片中浸蜡包埋方法的改进

病理技术的常规工作是制片。其程序一般是对取材组织进行脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封固。每一操作环节的好坏 ,都会影响制片质量。其中 ,浸蜡、包埋则是制片过程中手工操作较复杂而又重要的一个环节。目前大部分医院在病理制片过程中 ,尚未能完全取代手工操作。为确保制片质量 ,提高效率 ,避免差错 ,我们对多年沿用的浸蜡、包埋方法和步骤进行了改进 ,取得了满意的效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　单孔或多孔恒温水浴箱 1台 ,自制浸蜡包埋框、小镊子和其他常用包埋用具1 .2　方法　卸掉恒温水浴箱顶盖 ,放置自制浸蜡…     

四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

背景:由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究.选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题.目的:比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法.方法:取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增.结果与结论:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P<0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P>0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当.结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法.     

石蜡包埋组织FCM DNA检测技术方法的进展

石蜡包埋组织ＦＣＭＤＮＡ检测技术方法的进展张祥宏１９８３年Ｈｅｄｌｅｙ等［’Ｊ建立了以石蜡包埋组织进行ＦＣＭＤＮＡ检测的方法，该方法大大地促进了ＦＣＭ技术在医学研究领域、特别是肿瘤回顾性研究中的应用。但近两年来以石蜡包埋材料进行的研究趋向减少，其原因...     

石蜡包埋淋巴组织三种微量DNA提取方法的比较

目的为寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法，本研究比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响。方法选取淋巴相关组织的蜡块21例。三种DNA提取方法分别是简单消化煮沸法，酚／氯仿提纯法和试剂盒法。通过提取DNA的浓度和纯度、PCR扩增保守序列pglobin等方法，比较三种DNA提取方法的优劣。结果试剂盒法提取样品OD260／OD280平均比值位于1．6～1．8之间；提纯法位于1．3—1．5之间；简单消化煮沸法位于1，2—1．3之间。三种方法中，试剂盒法提取的DNA最为稳定。以3种DNA提取方法所获取DNA为模板，PCR扩增阳性率无统计学差异。结论从实用、快速、经济的角度综合分析，简单消化煮沸法简单快速，需要的组织样品少，是一个值得推荐的石蜡组织DNA提取方法。     

Spurr树脂低黏度包埋剂在电镜制样中的应用

电镜制样由于步骤多 ,周期长 ,无论哪个环节有问题 ,都会影响效果 ,其中包埋剂是重要环节之一。目前普遍采用的Ｅｐｏｎ812环氧树脂包埋剂 ,由于易吸潮 ,尤其是夏季 ,很难制作出令人满意的超薄切片。Ｓｐｕｒｒ树脂低黏度包埋剂 ,由于黏度低 ,渗透组织快 ,所需聚合时间短 ,大大缩短了制样周期。1　材料与方法Ｓｐｕｒｒ树脂低黏度包埋剂购自北京英特仪器公司 ,由ＥＲＬ42 0 6树脂、ＤＥＲ73 6增塑剂、ＮＳＡ硬化剂和ＤＭＡＥ催化剂 4种成分组成。在实际应用时 ,根据当地气候、工作条件和习惯调整配方 ,如ＤＥＲ可调整聚合块软硬度 ,ＤＭＡＥ…     

聚合酶链反应检出石蜡包埋肝癌组织的乙型肝炎病毒DNA

传统免疫组织化学方法及分子杂交检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ灵敏度低，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法能否检测到石蜡肝癌组织中的ＨＢＶＤＮＡ报道尚不多见。为此，采用ＨＢＶ与丙型肝炎病毒二合一ＰＣＲ试剂盒对１７例肝癌患者的石蜡包埋癌组织进行了ＨＢＶＤＮＡ检测，结果７例阳性，阳性率为４１％，而８例非肝癌对照患者则均阴性。组织ＨＢＶＤＮＡ结果与血清ＨＢｓＡｇ比较显示，该试剂盒有较高的检出率及符合率。这为今后进一步研究大量保存的肝病石蜡包埋组织的ＨＢＶ感染提供了一个可靠灵敏的方法，也为研究其他病毒感染的石蜡包埋材料提供了参考。     

从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR扩增的影…

常规福尔马林固定、石蜡包埋的病理标本，由于出现ＤＮＡ降解，不适于做大片段靶序列的ＰＣＲ扩增。本文就不同的固定液、固定不同时间对ＤＮＡ模板的降解影响、ＤＮＡ提取各步应注意的事项及选用长短适宜的靶序列进行ＰＣＲ扩增等情况进行综述。     

聚合酶反应检出石蜡包埋肝癌组织的乙型肝炎病毒DNA

传统免疫组织化学方法及分子杂交检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ灵敏度低，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法能否检验到石蜡肝癌组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ报道尚不见。为此，采用ＨＢＶ与丙型肝炎病毒二合－ＰＣＲ试剂盒对１７例肝癌患者的石蜡包埋癌组织进行了ＨＢＶ ＤＮＡ检测，结果７例阳性，阳性率为４１％，而８例非肝癌对照患者则均阴性。组织ＨＢＶ ＤＮＡ结果与血清ＨＢｓＡｇ比较显示，该试剂盒有较高的检出率     

福尔马林固定石蜡包埋组织microRNA提取方法及质量控制

迄今为止,病理学诊断技术已从传统的大体解剖病理学和组织形态学诊断,发展到与免疫组织化学、原位杂交、DNA片段分析等分子诊断技术相互结合的新阶段。形态学诊断虽仍是病理诊断的基础和重要依据,但分子检测技术提供了更丰富的信息作为辅助,进而指导临床治疗。分子检测技术是分子诊断的前提和基础。病理诊断医师只有在熟练掌握分子检测技术的前提下,才能准确判读分子检测结果。目前,应用于病理科的分子检测技术有荧光原位杂交、实时定量PCR、DNA测序和片段分析等。利用上述     

石蜡包埋组织DNA的快速提取技术

传统方法提取石蜡包埋组织ＤＮＡ ,步骤繁琐耗时。本实验室以ＰＣＲ方法检测结核菌为例 ,摸索出一种不经过脱蜡及酚—氯仿抽提 ,直接提取石蜡包埋组织ＤＮＡ简捷而快速的方法。1　材料与方法1.1　主要仪器 :全电脑基因扩增仪ＮＴ116 9型 (北京新技术应用研究所 ) ;低温高速离心机ＵＮＩＶＥＲＡＬ - 16Ｒ(德国 ) ;多功能紫外透射仪 (温洲市孚华分析仪器厂 )。1.2　试剂1.2 .1　裂解液 10ｍｍｏｌ ＬＴｒｉｓＨＣＬ(ｐＨ8.0 ) ;2ｍｍｏｌ ＬＥＤＴＡ(ｐＨ8 0 ) ;0 5 %Ｔｗｅｅｎ - 2 0 (ｖ ｖ) ;0 5 %ＮＰ - 40 (ｖ ｖ)。1.2 .2　 2 0ｍｇ …     

石蜡包埋组织对流式细胞仪检测细胞凋亡率的影响

有关石蜡包埋组织进行细胞凋亡率检测探讨较少 ,本试验将 10周小白鼠脑组织分别用 70 %乙醇固定和进行石蜡包埋 ,用流式细胞术检测其凋亡率 ,目的是了解两种组织测定细胞凋亡率的差别。1　材料和方法1 1　材料　将 10周小白鼠处死后一部分脑组织用 70 %乙醇固定置 4℃保存待检 ,另一部分脑组织按常规进行石蜡包埋。1 2　单细胞样品制备方法1 2 1　乙醇固定组织单细胞悬液的制备　采用网搓法 ,将12 0目不锈钢网扎在小烧杯上 ,把剪碎的组织放在网上 ,用眼科镊子轻轻搓组织块 ,边搓边以生理盐水冲洗 ,直到将组织搓完为止。收集细胞悬液 ,10 0 …     

短串联重复序列基因座在石蜡包埋组织中的应用

目的探讨3种STR基因座分型系统在石蜡包埋组织基因座分型的差异。方法采用Qiagen法对保存1个月的石蜡包埋组织进行DNA提取,用Identifiler系统、PowerPlex 21系统及Investigator HDplex系统对STR基因座进行聚合酶链反应复合扩增、毛细管电泳、荧光检测及片段分析,比较3种系统的STR基因座检出率,并且采集组织同一个体的血液、毛发、口腔拭子等样本进行STR基因座分型,比较同一个体不同器官组织STR基因座分型的差异。结果经紫外分光光度计测定石蜡包埋组织的DNA浓度为6~85ng/μL,纯度1.7~2.2,Identifiler系统能够在DNA浓度大于15ng/μL时得到完整的基因座分型,PowerPlex 21系统在DNA浓度为85ng/μL时得到完整的基因座分型,而HDplex系统在石蜡组织检测中均未获得完整的基因座分型。石蜡包埋组织与其他器官组织分型结果存在差异,其中D6S474、D4S2366和D21S2055基因座存在等位基因不平衡或基因座丢失现象。结论石蜡包埋组织中DNA的浓度和纯度是STR基因座分型的重要影响因素,遗传信息丢失现象与检验对象的性状有关,也与所采用的检测系统有关,Identifiler系统对石蜡包埋组织的STR基因座分型具有较高的实用价值。     

石蜡包埋组织中DNA提取方法的比较

目的通过比较两种从石蜡包埋组织中提取基因组DNA的方法,确定一种高效、经济而简便的方法指导实际工作。方法按照两种方法（脱蜡法与非脱蜡法）提取DNA,比较所提DNA的质量,PCR扩增β-Globin基因作为基因分析的对照扩增,并对其中非脱蜡法进行改良。结果两种方法所提取的DNA均能达到相关分子学实验的要求,PCR扩增带清晰,结果较为相似。结论非脱蜡法也能提取出适用于PCR技术要求的DNA,方法简便、经济。     

一次性刀片在临床病理石蜡包埋组织切片中的应用技巧

随着科技的进步和临床病理学科的发展，病理相关设备也在不断地研制和改进。一次性刀片以其具有锋利的刀刃，能够切出高质量的切片并能节约磨刀时间和节省劳动力而备受青睐，日益得到推广普及。它的使用为病理技术工作带来了方便。但是一次性刀片的价格昂贵，一般每张刀片仅能切30～50个组织蜡块。所以如何提高刀片的使用率，节省成本，成为病理技术至关重要的问题。作者在工作中积累了一些使用一次性刀片的技巧，现从组织蜡块加工和刀片使用两方面作简要介绍。     

石蜡包埋肿瘤组织单细胞核悬液制备方法的改进

从石蜡包埋肿瘤组织提取的细胞核可以用于流式细胞仪检测肿瘤细胞DNA的含量、DNA图像定量及荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization，FISH）分析等实验。以往从石蜡包埋组织中提取细胞核的方法是将组织消化后得到的细胞悬液及未消化的块状组织用200目的细胞筛进行分离，除去未被消化的组织，该法不仅增加细胞悬液被污染的机会，而且对微量的液体进行操作比较困难。本研究在上述方法的基础上加以改进，使实验操作更加简便，并获得了良好效果。     

用于甲醛固定石蜡包埋组织的改良免疫荧光法

背景：甲醛固定石蜡包埋的标本易于保存,免疫荧光法定位定量能精确支持多种标记物。目的：建立适合于甲醛固定石蜡包埋组织的改良免疫荧光法。方法：将取自类风湿性关节炎和无骨性关节炎患者的滑膜血管翕和髋臼增生组织的石蜡切片进行常规脱蜡复水,观察不同的柠檬酸缓冲液热修复时间、血清封闭时间、一抗浓度和荧光标记物在免疫荧光法中显色的差异。结果与结论：柠檬酸高温修复15min后滴加抗原修复液比单纯高温修复10～20min,组织结构保存更为完整,且背景染色无显著区别;选择体积分数10%二抗来源正常血清室温封闭40min作为最佳的抗原封闭条件,既可以保证良好的封闭效果,同时又不影响一抗和抗原位点结合;较高一抗浓度（10mg/L）能保证明显的荧光信号、低背景和可接受的成本。进行石蜡切片免疫荧光实验,并用普通荧光显微镜观察,应避免采用FITC等蓝色激发光、呈现绿色荧光信号的标记染料基团。提示柠檬酸高温修复15min后滴加抗原修复液,选择体积分数10%二抗来源正常血清室温封闭40min,较高一抗浓度,普通荧光显微镜观察可提高免疫荧光法的检测质量。     

从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR扩增的影响因素

常规福尔马林固定、石蜡包埋的病理标本,由于出现DNA降解,不适于做大片段靶序列的PCR扩增。本文就不同的固定液、固定不同时间对DNA模板的降解影响、DNA提取各步应注意的事项及选用长短适宜的靶序列进行PCR扩增等情况进行综述。     

石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应影响因素的研究

目的　探讨石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。方法　应用从石蜡包埋组织中提取的DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子 ,分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。结果　 10 .0 μm× 1组织切片组 ,PCR反应循环次数 4 0次组 ,PCR反应模板量 0 .0 5 μg组PCR反应取得高质量目的基因DNA。结论　减少提取组织用量有利于减少抑制PCR物质的量 ,有利于反应的成功 ;PCR反应循环次数一般应大于 4 0次 ;PCR反应时减少模板量有利于PCR反应成功。