CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜患者中的变化及意义

目的:通过检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者治疗前后外周血CD4 CD25 调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的比例及变化规律,探讨Treg细胞在ITP发病中的可能作用。方法:采集30例急、慢性ITP患者治疗前、后和20例正常对照者的外周血标本,流式细胞仪检测Treg细胞的比例及变化,并评价其与血小板计数的相关性。结果:30例ITP患者治疗前Treg细胞的比例为(1.59±0.86)%,明显低于正常对照组(3.87±1.73)%(P<0.01),治疗后其比例显著升高,为(2.51±1.17)%,明显高于治疗前(P<0.01),但仍低于正常对照组(P<0.01);Treg细胞在治疗显效和良效组显著高于进步和无效组(P<0.01),进步组与无效组比较差异无统计学意义(P>0.05);此外治疗前后Treg细胞比例与血小板计数呈显著正相关(P<0.05)。结论:ITP患者外周血Treg细胞比例降低,但随免疫抑制治疗的疗效逐渐升高,提示CD4 CD25 调节性T细胞可能参与了ITP的发病机制。     

糖皮质激素对ITP患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞含量及GR受体表达的影响

目的观察糖皮质激素(GC)对特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD4+CD2+5FOXP3+Treg细胞含量及GR受体表达的影响。方法将ITP患者按GC治疗反应情况分为激素敏感型19例(敏感组)和激素抵抗型11例(抵抗组),另选15例健康体检者作为对照组,采用流式细胞仪检测各组外周血CD4+CD2+5FOXP3+Treg细胞含量,RT-PCR法检测GC受体亚型GRα和GRβ表达水平。结果敏感组治疗前后CD4+CD2+5FOXP3+Treg细胞含量均明显低于对照组,GRβmRNA表达水平明显高于对照组,P均<0.05;抵抗组治疗前CD4+CD2+5FOXP3+Treg细胞含量明显低于对照组,GRβmRNA表达水平明显高于对照组,P均<0.05。结论 GC治疗ITP的重要机理在于可提高患者体内CD4+CD2+5FOXP3+Treg细胞含量,ITP患者对GC治疗的敏感性与GRβ表达水平有关。     

化疗对B细胞非霍奇金淋巴瘤患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg细胞的影响

目的探讨B细胞非霍奇金淋巴瘤（B—NHL）的发病机制及化疗对B-NHL患者机体抗肿瘤免疫状态的影响。方法采用流式细胞术分别检测35例B-NHL患者（观察组）化疗前后及30例健康对照者（对照组）外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞所占比例,RT—PCR法检测各组外周血中转录因子Foxp3 mRNA的相对表达水平。结果观察组化疗前后外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例、Foxp3 mRNA表达均显著高于对照组,化疗后显著高于化疗前,P均〈0．05。结论机体抗肿瘤免疫功能受抑是B—NHL患者发病原因之一;化疗在杀伤肿瘤细胞的同时亦可进一步削弱患者机体自身的抗肿瘤免疫功能。     

不稳定心绞痛患者CD4+CD25+调节性T细胞检测及意义

目的探讨不稳定性心绞痛患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)水平及意义。方法采用流式细胞分析法,检测13例不稳定性心绞痛患者、8例稳定性心绞痛患者和10例胸痛综合征患者外周血CD4 CD25 Treg占CD4 T细胞比例。结果不稳定性心绞痛患者外周血 Treg/CD4 T细胞比例(10．1±3．4％)显著低于稳定性心绞痛组(14．2±2．9％)和胸痛综合征组 (16．5±4．9％)。结论不稳定性心绞痛患者外周血Treg比例减少。Treg比例降低可能打破了外周免疫耐受,参与了动脉粥样硬化的发生发展。     

肺癌患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的检测肺癌患者外周血CD4 CD2 5调节性T细胞的分布并探讨相关机制。方法流式细胞仪分析46例肺癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞的比例;并用ELISA方法检测同标本血中转化生长因子-1(TGF-β1)的浓度。结果46例肺癌患者外周血中CD4 CD2 5调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞的比例为(19.1±2.3)%,与对照组(4.1±0.6)%比较差异有显著性(P<0.05)。22例鳞癌、19例腺癌、5例小细胞癌患者外周血中CD4 CD2 5调节性T细胞比例分别为(20.1±0.9)%、(18.8±0.4)%、(19.2±0.4)%,各组间比较差异无显著性(P>0.05);均显著高于对照组(4.1±0.6)%,P<0.05;20例Ⅲ、15例Ⅳ晚期肺癌患者外周血中CD4 CD2 5调节性T细胞比例为(21.4±2.1)%、(20.1±1.3%),均显著高于11例Ⅱ期患者(10.6±1.5)%,P均<0.05。肺癌组外周血清中TGF-β1的水平显著高于对照组,且随着TGF-β1浓度的增加,CD4 CD2 5调节性T细胞比例逐渐增高,两者呈正相关(r=0.0615,P<0.05)。结论肺癌患者外周血中有CD4 CD25 调节性T细胞比例增高,且与分期有关。     

慢性心力衰竭患者CD4+CD25+调节性T细胞检测及意义

目的:探讨慢性心力衰竭(CHF)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)水平及意义。方法:采用流式细胞分析法,检测42例CHF患者(CHF组)和16例正常对照者(对照组)外周血CD4 CD25 Treg/CD4 T细胞比例。结果:CHF患者外周血CD4 CD25 Treg/CD4 T细胞比例[(12.2±3.8)%]显著低于对照组[(16.3±5.2)%]。CD4 CD25 Treg/CD4 T比例在缺血性心脏病者[(12.6±4.1)%]与非缺血性心脏病者(12.0±3.7%)间差异无统计学意义,但心功能NYHA分级Ⅲ~Ⅳ级者[(10.4±3.2)%]比例明显低于Ⅰ~Ⅱ级者[(13.3±3·8)%]。结论:CHF患者外周血Treg比例减少,且与心功能有一定关系。CD4 CD25 Treg比例降低可能打破了外周免疫耐受,参与了心力衰竭的发生发展。     

特发性血小板减少性紫癜患者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞凋亡率的研究

目的:通过检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率,探讨T淋巴细胞凋亡在特发性血小板减少性紫癜(ITP)免疫发病机制中的作用。方法:应用流式细胞仪检测ITP患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率;分离ITP患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC),分成A、B 2组,A组加入白介素2(IL-2),B组加入IL-2和地塞米松共培养,分别于24和48 h收获细胞,应用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率。结果:①ITP患者组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率均明显低于正常对照(均P<0.01);②细胞培养24 h时ITP患者组A、B 2组间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率间均差异无统计学意义(均P>0.05),而48 h时B组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率均明显高于A组(P<0.05或0.01);正常对照组24和48 h B组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率均明显高于A组(均P<0.05);③ITP患者组细胞培养24 h后A、B 2组间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率的差值均明显低于正常对照组(P<0....     

儿童AITP治疗前后CD4+CDHigh25 Foxp3+Treg细胞与Foxp3基因表达的变化

目的 探讨CD4 CDHigh 25Foxp3 Treg细胞在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)发病中的作用及对丙种球蛋白、激素治疗的效应关系.方法 流式细胞仪检测AITP患儿治疗前后CD4 CDHigh25Foxp3'Treg细胞比例变化,RT-PCR法检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达.结果 单用激素或联用激素和丙种球蛋白治疗后AITP患儿CD4 CDHigh25 Foxp3 Treg细胞比例和Foxp3基因表达水平较治疗前和正常对照组明显增高(P＜0.01),其中联用丙种球蛋白和激素组的增高水平更为明显(P＜0.01).结论 CD4 CDHigh25Foxp3 Treg细胞比例下降及Foxp3基因表达降低是AITP的发病机制之一,丙种球蛋白和激素可以通过诱导其扩增及活化发挥治疗AITP的作用.     

姜黄素对NOD糖尿病小鼠Th1细胞和CD4^+Treg细胞的作用

目的研究姜黄素对Th1细胞和CD4^+Treg细胞的作用,探讨姜黄素对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的治疗作用。方法将10周龄雌性NOD小鼠分为对照组和姜黄素组,分别用溶剂或姜黄素灌胃。第14周时测血糖。第20周时,流式细胞术分析外周血Th1细胞和CD4^+Treg细胞,分析胸腺CD4^+ CD8^-T细胞、CD8+CD4^-T细胞及CD4^+Treg细胞;分选脾CD4^+Treg细胞用于检测其抑制功能。结果姜黄素组血糖正常比例高于对照组。姜黄素组Th1细胞比例显著低于对照组(P<0.05),CD4^+Treg细胞比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05),CD4^+Treg/Th1显著高于对照组(P<0.05)。姜黄素组胸腺CD4^+CD8^-T细胞、CD8^+CD4^-T细胞及CD4^+Treg细胞比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05),胸腺总细胞数显著高于对照组(P<0.05)。姜黄素组CD4^+Treg细胞的抑制功能明显高于对照组(P<0.05)。结论姜黄素降低NOD小鼠外周Th1细胞、增加CD4^+Treg细胞抑制功能、缓解胸腺退化,延缓了NOD小鼠的高血糖症状。     

特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞评价

目的研究CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）的关系。方法用流式细胞分析仪分析来自健康人和ITP患者外周血细胞中的调节性T细胞（Treg）数目及比例;BrDU酶联免疫吸附测定试剂盒测定淋巴细胞增殖。结果活动期和治疗未缓解的ITP患者调节性T细胞的百分比明显低于缓解阶段的ITP患者和对照组;ITP患者体内调节性T细胞对淋巴细胞增殖的抑制活性也存在缺陷。结论ITP患者体内调节性T细胞数量下降和功能改变可能与该病免疫发病机制有关。     

慢性特发性血小板减少性紫癜CD_4~+T细胞亚群变化的特点

目的 测定慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD_4~+T细胞亚群[Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)]和相应血浆细胞因子水平,探索其在ITP发病机制中的作用.方法 将35例成人慢性ITP患者分为疾病活动组、未缓解组、缓解组,18例体检正常者设为对照组.应用流式细胞仪检测表达细胞内因子干扰素(IFN)γ~+、白细胞介素(IL)-4~+、IL-17~+细胞及表达CD_(25)~+Foxp3~+细胞分别占CD_4~+细胞的百分率.应用ELISA检测血浆中IFNγ、IL-4、IL-17和IL-10的水平,分析活动组患者血浆细胞因子水平与血小板、骨髓巨核细胞计数间的相关性.结果 Th1、Th17细胞百分率及Th1/Th17比例在各组间比较差异均无统计学意义;Th2细胞百分率:活动组[(1.01±0.88)%]、未缓解组[(1.22±1.04)%]与对照组[(1.86±0.59)%]比较明显下降(P<0.05);Th1/Th2比例:活动组(15.04±9.67)、未缓解组(11.65±9.32)与对照组(7.02±3.01)比较明显增高(P<0.05); Treg细胞百分率:活动组[(0.89±0.58)%]、未缓解组[(1.46±1.27)%]与对照组[(5.73±0.71)%]比较明显下降(P<0.01).IFNγ、IL-17水平在各组间比较差异无统计学意义;IL-4水平:活动组[(2.25±2.05)ng/L]、未缓解组[(2.33±2.14)ng/L]与对照组[(5.54±4.00)ng/L]比较明显下降(P<0.05);IL-10水平:活动组[(5.07±4.10)ng/L]、未缓解组[(5.66±4.35)ng/L]与对照组[(14.21 ±7.31)ng/L]比较明显下降(P<0.01).上述各参数(Th2、Treg细胞百分率、IL-4、IL-10水平)在缓解组与对照组间比较差异无统计学意义.活动组患者血浆IL-10水平与血小板计数呈正相关(r=0.16,P=0.03),与骨髓巨核细胞数间无相关性(r=0.41,P=0.06).结论 慢性ITP患者疾病活动组Th1/Th2比值升高,这是由Th2细胞的百分率下降所致.Treg细胞百分率下降可能与慢性ITP发病机制有关,但Th17细胞百分率可能与慢性ITP疾病状态无关.     

Abnormality of CD4(+)CD25(+) regulatory T cells in idiopathic thrombocytopenic purpura

OBJECTIVES: The aim of this study was to explore the profile and function of CD4(+)CD25(+) regulatory T cells (Treg cells) in idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP) patients. METHODS: Treg cell numbers were analyzed by flow cytometric analysis in peripheral blood mononuclear cells collected from healthy donors or patients with ITP. Quantification of cell proliferation was assayed by an enzyme-linked immunosorbent assay kit, based on the measurement of BrdU incorporation during DNA synthesis. RESULTS: The percentage of Treg cells was significantly decreased in ITP patients in active and non-remission state(5.79 +/- 1.22%) when compared with the patients in remission(11.63 +/- 4.56%) and to healthy subjects(12.68 +/- 3.59%). The suppressive activity of Treg cells in ITP patients was also found to be impaired. CONCLUSION: These results suggest that decreased number and function of Treg cells might be one of mechanisms that cause immune regulation dysfunction in ITP.     

DNA甲基化在成人特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

目的 从DNA甲基化角度探讨成人特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制.方法 应用SYBR Green实时定量PCR方法测定48例成人ITP患者与36例正常对照者外周血单个核细胞DNA甲基转移酶1(DNMTl)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)和DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的mRNA的相对表达水平.采用反相高效液相技术(HPLC)检测ITP患者与正常对照血浆中S-腺苷蛋氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量.运用流式细胞术检测ITP患者与正常对照外周血CD_4~+和CD_8~+T细胞表面淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)亚单位C11a的表达水平.结果 成人ITP患者外周血单个核细胞DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平较对照组减低(P<0.01);DNMTl mRNA表达水平与对照组相比有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).成人ITP患者血浆SAH与对照组相比增高,差异有统计学意义(P<0.05);而血浆SAM和SAM/SAH比率与正常对照组相比差异无统计学意义(P值均>0.05).成人ITP患者外周血CD_8~+CD_(11a)~+细胞比例显著高于对照组(P<0.01),而CD_4~+CD_(11a)~+细胞比例和CD_4~+CD_(11a)~+/CD_4~+CD_(11a)~+比率较对照组显著降低(P值均<0.01),差异有统计学意义.结论 成人ITP患者外周血存在淋巴细胞低甲基化状态以及T细胞亚型上存在异常的CD_(11a)/LFA-1表达.DNA甲基化可能在ITP的发病中起一定的作用,但确切的作用机制还有待于进一步深入研究.     

Functional role of CD4+CD25+ regulatory T cells and transforming growth factor-beta1 in childhood immune thrombocytopenic purpura

CD4+CD25+ regulatory T cells (Tregs) are critical in maintaining self tolerance and preventing organ specific autoimmune diseases. Their role in childhood immune thrombocytopenic purpura (ITP), an immune disorder in which the production of platelet autoantibodies might be caused by cytokine network dysregulation, has not been clearly defined. Transforming Growth Factor-beta1 (TGF-beta1) has been suggested to mediate Tregs suppressive function. The aim of this study was to assess cell populations of CD4+CD25+ T regulatory cells as well as mRNA expression of TGF-beta1 level in peripheral blood of children with ITP and evaluate their possible role in prediction of disease severity and response to therapy. Thirty-three children with ITP (13 acute and 20 chronic cases) and 10 healthy controls were studied. CD4+CD25+ regulatory T cells were assessed in peripheral blood by flowcytometry. Expression of TGF-beta1 mRNA was examined by real-time quantitative polymerase chain reaction assay. The frequency of CD4+CD25+ Tregs was significantly decreased in acute and chronic ITP patients as compared to controls. Acute ITP patients had significantly lower percentage of Tregs compared with chronic ITP patients. Higher frequency of CD4+CD25+ Tregs was detected in chronic ITP patients with platelet count >100 x 10(9)/L compared with patients with platelet count <100 x 10(9)/L and in steroid responsive patients compared with steroid resistant patients. The expression of mRNA TGF-beta1 level was significantly lower in acute and chronic ITP patients compared with controls and in chronic ITP patients with pltc <100 x 10(9)/L in comparison with patients with pltc > 100 x l0(9)/L. A significant positive correlation was found between percentage of CD4+CD25+ Tregs and mRNA expression of TGF-beta1 in chronic ITP patients. In conclusion, immune regulation of TGF-beta1 by Tregs may play a fundamental role in the pathogenesis of childhood immune thrombocytopenic purpura. This might form a base for future specific immunomodulatory therapies for ITP.     

M受体拮抗剂对提高慢性阻塞性肺疾病患者调节性T细胞表达的影响

目的 观察COPD稳定期患者体内是否存在CD_8~+CD_(25)~+Foxp_3~+调节性T细胞(Treg细胞),以及M受体拈抗剂噻托溴铵对其表达的影响.方法 2007年10月至2008年3月,选择23例COPD稳定期患者,每日1次吸入噻托溴铵18 μg,连续治疗3个月.分别在治疗前后榆查患者的肺功能和检测外周血中T细胞亚群的数量.两组间均数比较采用配对t检验,相关分析采用直线相关分析.结果 COPD稳定期患者在吸入噻托溴铵治疗后,外周血巾CD_4~+为(36±46)%,CD_8~+CD_(25)~+Treg 细胞为(21±21)%,明显高于治疗前的(28±10)%和(8±8)%;CD_4~+CD_(25)~+为(4±3)%,明显低于治疗前的(10±7)%,差异均有统计学意义(t值为2.72～3.78,P<0.01和P<0.05).CD_8~+、CD_8~+CD_(25)~+和CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞均有表达,但治疗前后无明显变化.治疗后肺通气功能得到明显改善,FEV_1、FEV_1占预计值%和FEV_1/FVC分别由(1.0±0.3)L、(35±10)%和(41±8)%提高到(1.1±0.3)L、(40±11)%和(45±11)%,差异均有统计学意义(t值为2.37～2.65,均P相似文献   

左氧氟沙星联合CD_(25)单克隆抗体治疗小鼠结核病的初步研究

目的 研究CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞(Treg细胞)消除与左氧氟沙星联合治疗对小鼠结核病细胞免疫作用的影响.方法 3～4周龄C57BL/6雌性小鼠76只,体重17～19 g,随机数字表法分为对照组、CD_(25)单克隆抗体(PC61)消除组、左氧氟沙星组和联合治疗组,每组19只.PC61消除组和联合治疗组小鼠腹腔注射含50 μg PC61的PBS,0.2 ml/只,对照组和左氧氟沙星组小鼠腹腔注射含50μg小鼠IgG同型对照的PBS,0.2ml/只.全部小鼠3 d后尾静脉注射0.1 ml的H_(37)Rv(1×10~6 CFU)造模,左氧氟沙星组和联合治疗组小鼠于攻毒后第2天每只给予左氧氟沙星200 mg·kg~(-1)·d~(-1)连续灌胃45 d.分析小鼠体内不同组织中Treg细胞百分率及其对特异性细胞免疫、肺组织病理变化的影响.应用单因素方差分析对4组连续变量进行检验,组间比较采用q检验,组内不同时间点比较采用t检验.结果 感染MTB第10天和第30天小鼠脾细胞中Treg细胞百分率:对照组分别为(30±4)%和(17.3±1.6)%,PC61消除组分别为(21±4)%和(16.1±1.3)%,左氧氟沙星组分别为(44±6)%和(24.7±2.0)%,联合治疗组分别为(24±3)%和(10.4±1.0)%,除第10天联合治疗组与PC61消除组比较无明显差别外,其他各组间比较均差异有统计学意义(q值为3.62～5.56,均P<0.05).联合治疗组小鼠的肺组织病变较轻,死亡数量较少.结论 Treg细胞消除联合左氧氟沙星治疗可促进结核病小鼠的特异性细胞免疫,使肺内病变有所改善,并可降低小鼠的病死率.     

CTLA4-Ig对老年支气管哮喘病人CD4+ CD45 RO+ T细胞功能的影响

目的研究老年支气管哮喘病人周围血CD4 CD45RO T细胞表达IL-4及IL-13的情况及CTLA4-Ig对其影响。方法用ELISA方法测定老年支气管哮喘病人CD4 CD45RO T细胞产生IL-4和IL-13的水平及CTLA4-Ig对其影响。结果老年支气管哮喘病人CD4 CD45RO T细胞分泌IL-4、IL-13增多,IL-13增多较IL-4更为明显(P<0.01),CTLA4-Ig可有效抑制老年哮喘病人CD4 CD45RO T细胞分泌IL-4和IL-13(P<0.01)。结论CD4 CD45RO T细胞产生的IL-4和IL-13在老年哮喘发病中起重要作用,CTLA4-Ig可有效抑制IL-4和IL-13的分泌。     

Circulating dendritic cells subsets and CD4+Foxp3+ regulatory T cells in adult patients with chronic ITP before and after treatment with high-dose dexamethasome

Immune thrombocytopenic purpura (ITP) is an autoimmune disorder, and high-dose dexamethasome (HD-DXM) has been used as a first-line therapy for patients with ITP. However, little is known about the role of dendritic cells (DCs) and CD4(+)Foxp3(+) regulatory T (Treg) cells in the pathogenesis of chronic ITP and the effects of HD-DXM on DCs and Treg cells. In this study, we investigated the amounts of circulating myeloid DCs (mDCs), plasmacytoid DCs (pDCs), and CD4(+)Foxp3(+) Treg cells in 26 untreated adult patients with chronic ITP. All patients had thrombocytopenia (platelet count <50 x 10(9)/L) for more than 6 months. We also observed short-time changes of DCs and Treg cells after treatment with HD-DXM in these patients. Both mDCs and pDCs numbers in patients were comparable with that of healthy controls. In contrast, the percentage of Treg cells was significantly reduced in patients when compared with healthy controls (P < 0.0001). After 4-days treatment with HD-DXM, Treg cells and mDCs were increased (P < 0.0001 and P < 0.05), while pDCs decreased (P < 0.0001), and CD11c expression level in mDCs was downregulated (P < 0.0001). These results suggest that Treg cells are deficient in ITP and the immunosuppressive therapy of glucocorticoids could cause the short-time changes of these cells.