清开灵注射液对缺氧/缺糖再给氧损伤时神经细胞线粒体膜电位的保护作用

目的:以缺氧/缺糖再给氧为模型,观察清开灵注射液对神经细胞线粒体膜电位的保护作用。方法:四唑盐比色实验(MTT)检测细胞线粒体活性,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙离子含量([Ca²⁺]i),流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果:缺氧-缺糖5 h再给氧3 h时,细胞内[Ca²⁺]i和细胞凋亡率明显增加,并随再给氧时间的延长而明显增高,线粒体膜电位和活性明显降低,并随再给氧时间的延长而进一步下降,清开灵注射液能显著降低细胞内[Ca²⁺]i浓度,抑制细胞凋亡的发生,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧-缺糖再给氧组相比均有显著性差异(P<0.05,<0.01)。结论:清开灵注射液可抑制缺氧-缺糖再给氧损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,而对海马神经细胞起到保护作用,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关。     

附子人参不同配伍比例对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用

目的观察不同配伍比例的附子人参对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用。方法将原代培养6 d的心肌细胞分为正常对照组、模型组、不同配伍比例的附参组、空白血清组。建立原代大鼠心肌细胞缺糖缺氧/复糖复氧损伤模型,观察不同配伍比例的附子人参血清对损伤心肌细胞自发搏动、细胞活力的作用,并测定心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及心肌组织上清液中一氧化氮(NO)分泌量和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果与空白血清组比较,各附参配伍组心肌细胞自发搏动频率、细胞活力显著升高(P0.05),心肌细胞SOD活性显著升高(P0.05),MDA含量、NO分泌量和LDH释放率均显著降低(P0.05),而且附参(2∶1)组对心肌细胞的自发搏动频率、细胞活力、SOD、MDA和LDH作用均不同程度地优于其余各配伍组。结论各附参配伍组对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞具有保护作用,其中以附参(2∶1)组作用效果最为显著。     

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.     

丹参素对缺糖-缺氧损伤神经细胞的保护作用

研究表明脑组织缺血性损伤过程中存在着神经细胞凋亡。且神经细胞凋亡在缺血性脑损伤中起十分重要的作用。药物可通过干预神经细胞凋亡过程阻止缺血性损伤的进一步发展，而发挥对神经细胞损伤的保护作用。细胞内Ca^2 超载是缺血性脑损伤的发病机制之一，在缺血后神经元凋亡发生中也     

参麦注射液对缺氧复氧致鼠大脑皮层神经细胞损伤的影响

目的：研究缺氧/复氧对小鼠大脑皮层神经细胞的损伤及参麦注射液对其保护作用。方法：取体外原代培养6d的小鼠大脑皮层神经细胞,置于95％N2和5％CO2的缺氧罐中造成神经细胞不同时间的缺氧复氧。用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力,用乳酸脱氢酶(LDH)释放率作为评价损伤的指标,并进行了形态学观察。结果：原代培养小鼠大脑皮层神经细胞缺氧6h,再给氧18h后,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低,LDH释放量显著增加。参麦注射液可显著对抗缺氧复氧致小鼠大脑皮层神经细胞的损伤,剂量依赖性地抑制LDH释放量的增加,并能减轻细胞的形态学损伤。结论：参麦注射液对小鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧性损伤具有保护作用。     

三七总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠海马神经细胞凋亡的研究

目的 :以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧 /缺糖再给氧为模型 ,观察三七总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法 :流式细胞仪检测凋亡细胞百分率 ,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca²⁺浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率 ,同时 ,测定细胞乳酸脱氢酶 (LDH)的释放。结果 :神经细胞缺氧 /缺糖 5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死 ,并显著增加细胞内Ca²⁺浓度和LDH的释放 ,并随再给氧时间的延长而增加。三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内Ca²⁺浓度 ,减少LDH的释放 ,三七总皂苷的作用随剂量增加而作用增强。结论 :三七总皂苷对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用 ,这种作用可能与其能降低细胞内Ca²⁺浓度有关。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

党参皂苷L1抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参皂苷L1对神经细胞凋亡的抑制作用.方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earles液进行缺氧/缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst 33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2 浓度,评价药效.结果:(1)细胞存活率(%):与模型组(29.89±6.28)比较党参皂苷L1 1.0mg/L组(46.05±8.92)、0.1mg/L组(46.83±6.76)、0.01mg/L组(41.05±9.18)均能显著提高细胞存活率(P<0.01和P<0.05);(2)细胞坏死率(%):与模型组(44.99±12.81)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(19.45±2.31)、0.1mg/L组(18.78±4.95)和0.01mg/L组(22.37±4.44)能显著降低细胞坏死率(P<0.001);(3)原位双染法细胞凋亡率(%):与模型组(17.44±4.82)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(8.75±1.88)、0.1mg/L组(9.73±1.76)能显著降低细胞凋亡率(P<0.01和P<0.05);(4)流式细胞术检测细胞凋亡率(%):与模型组(8.55±3.84)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(4.21±2.31)、0.1mg/L组(3.83±2.95)能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);(5)细胞内Ca2 平均荧光值,与模型组(47.37±9.68)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(28.67±11.12)、0.1mg/L组(27.34±8.57)能显著降低细胞内Ca2 平均荧光值(P<0.05),表明党参皂苷L1能明显降低细胞内Ca2 浓度.结论:党参皂苷L1对缺血再灌注损伤后神经细胞的坏死和凋亡过程均具有抑制作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2 浓度有关,提示党参皂苷L1是党参治疗脑卒中急性期的主要效应成分.     

丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

参麦注射液对自由基损伤后海马神经细胞凋亡的影响

参麦注射液是中医院急症常备之药 ,治疗气阴两虚证 ,疗效确切。我们采用胞形态学、细胞化学方法 ,试图阐明参麦注射液对胎鼠海马神经细胞氧自由基损伤后发生凋亡的影响 ,现将研究结果报告于下。1　材料与方法1 1　实验动物　Ｓｐｒａｐｕｅ -Ｄｅｗｌｅｙ系胎鼠 ( 16～ 19ｄ) ,由湖南中医学院实验动物中心提供。1 2　主要试剂及药物　参麦注射液 ,正大青春宝药业有限公司生产 ,生产批号 :ＺＺ -5 40 0 -浙卫药准字 ( 1996 )第 0 3130 1号 ;2 0 %ＢＳＡ ,华美公司 ,批号 :970 5 ;Ｆ1 2 干粉培养基 ,美国 ,Ｇｉｂｃｏ ;ＭＡＰ2 试剂盒 ,美国 ,…     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧心肌细胞损伤的抗氧化作用研究

目的评价薯蓣皂苷对心肌细胞的抗氧化保护作用。方法对培养的乳鼠心肌细胞造成缺氧/复氧损伤模型,比较正常对照组、缺氧/复氧损伤组、以及薯蓣皂苷各组(10ml/L、30ml/L、100ml/L)培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果缺氧/复氧损伤组SOD活性明显降低,MDA和NO含量较正常显著升高;而薯蓣皂苷中、高剂量组上述指标都有不同程度的改善。结论薯蓣皂苷对缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤具有保护作用,并呈现剂量依赖关系,作用机制与增强细胞抗氧化作用、减轻自由基和脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关。     

参麦注射液对内皮细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨参麦注射液对血管生成的影响。方法：采用MTT法检测参麦注射液对牛血清和肿瘤细胞条件培养液促进的牛主动脉内皮细胞增殖的影响，采用琼脂糖刮除法检测参麦对牛血清和肿瘤条件培养液促进的牛内皮细胞迁移的影响。结果：在含10％新生小牛血清培养液中和在肿瘤细胞条件培养液中，参麦都能明显抑制牛主动脉内皮细胞增殖，且呈量效关系，对肿瘤细胞条件培养液诱导的内皮细胞迁移抑制作用显著。方法：参麦能抑制牛内细胞增殖和迁移，具有抑制血管生成的作用。     

葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤时NO产量增加的抑制作用

目的 :观察葛根素对缺氧 复氧损伤诱导的大鼠乳鼠心肌细胞一氧化氮 (NO)产生的作用。方法 :采用硝酸还原酶法测定对照组、模型组、及 1,0 .1,0 .01g·L^-1Pue给药组在各个时间点时细胞培养上清液中NO含量的变化。结果 :复氧开始后 ,模型组NO合成显著性地增加 (P<0 .0 1)。复氧后 6h ,NO合成激增 ,并一直保持。 3种剂量的Pue在复氧后 6h才表现显著性抑制 (P<0.01)NO合成的作用 ,并保持至其后 24h。结论 :在NO合成量激增时Pue才表现出显著降低缺氧 复氧损伤时心肌细胞分泌的NO ,并呈剂量依赖趋势。     

基于PI3K/AKT信号通路的谷红注射液抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的基于PI3K/AKT信号通路,探讨谷红注射液(guhong injection,GHI)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法培养H9c2心肌细胞,CCK-8比色法筛选GHI实验剂量。将细胞随机分为8组:正常组、模型组、GHI低、中、高剂量组(30、60和90μL·mL^-1)、阳性药组(维拉帕米注射液7.5μL·mL^-1)、GHI+LY294002(PI3K抑制剂)组和LY294002组。除正常组外,其他组均建立缺氧4 h复氧16 h的H/R损伤模型。ELISA检测各组细胞内肌酸激酶同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测各组细胞内p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT及GSK-3β蛋白表达水平。结果与模型组相比,各给药组LDH、CK-MB均降低(P<0.05),MDA降低(P<0.01)、SOD升高(P<0.01)。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均升高(P<0.01)。给予LY294002后,与模型组相比,LDH、CK-MB、MDA及SOD无显著性差异,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论GHI可以明显减轻H/R对H9c2心肌细胞造成的损伤,表现出抗氧化应激与抗凋亡的作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

前列地尔对兔内皮细胞缺氧复氧损伤后抗栓功能的影响

 目的 研究前列地尔（PGE₁对兔内皮细胞缺氧复氧损伤后抗栓功能的影响。方法 采用体外培养的兔内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型, 实验分正常组、模型组、加入不同浓度（0.05,0.20,0.40 μg·mL^-1PGE₁的给药组,将PGE₁分别加入缺氧复氧液中调整至以上终浓度。测PGE₁（0.05,0.20,0.40 μg·mL^-1不同浓度组及模型组、对照组培养上清液中丙二醛（MDA含量、超氧化物歧化酶(SOD活力和一氧化氮（NO含量、细胞内血管假性血友病因子(vWF的表达。结果 与正常组比较,模型组丙二醛（MDA含量增加,SOD活性、NO含量下降, vWF表达下降（P<0. 05。PGE₁各浓度组与模型组比较,PGE₁各浓度组SOD活性及NO含量有所增加,丙二醛（MDA含量降低,vWF表达增强（P<0. 05。结论 PGE₁对缺氧/复氧损伤后血管内皮细胞的抗栓功能有保护作用。     

通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用

目的探讨通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料，制备缺氧、缺糖损伤模型：MTT法测定PC12细胞存活数及乳酸脱清酶法测定细胞损伤程度。结果形态学检查发现，通塞脉微丸和丁基苯酞对两种损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用，MTT染色和乳酸脱氢酶活性测定显示，通塞脉微丸和丁基苯酞可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数，降低细胞损伤程度，其中以对缺氧损伤保护作用尤为显著。结论通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧和缺糖损伤模型均有显著保护作用。     

参麦注射液对神经细胞凋亡及胞浆钙变化的影响

目的：研究神经细胞缺氧／缺糖培养诱导的凋亡发生率、胞内游离钙离子变化及参麦注射液的治疗作用。方法：碘化丙啶染色，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3负载，流式细胞仪观察胞内钙平均荧光值变化。结果：缺氧／缺糖培养可诱导神经细胞凋亡和引起细胞内游钙离子增高，参麦注射液能抑制细胞凋亡、降低细胞内游离钙钙离子浓度。结论：凋亡是神经细胞死亡方式之一，参麦注射液抑制缺氧／缺 导的神经细胞凋亡及钙超载，有社会细胞保护作用。     

黄芪总苷对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响

目的 探讨黄芪总苷（astragalosides, AST）对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响。 方法 建立原代培养的大鼠海马神经元的缺氧/复氧模型。采用四唑蓝（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞活力;检测细胞上清液中丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;Hoechst染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜和Ca2+荧光探针Fluo-3/AM观察细胞内游离钙[Ca2+]i。 结果 黄芪总苷可以提高缺氧/复氧后神经元的活力,降低细胞上清液中MDA和NO含量,提高SOD活性,降低细胞凋亡率,减轻神经元内的钙超载。 结论 黄芪总苷对缺氧/复氧损伤的神经元具有保护作用,其机制可能与抗氧化和减轻钙超载有关。