酶电极法测定谷氨酸钾注射液中谷氨酸钾含量

 目的研究测定谷氨酸钾注射液中谷氨酸钾含量的新方法。方法以谷氨酸氧化酶(EC 1.4.3.11)与过氧化氢电极构成电流型酶电极，研究了谷氨酸酶电极分析法的各种分析条件及参数，并与旋光法对比测定谷氨酸钾注射液中谷氨酸钾含量。结果酶电极法测定结果与旋光法结果之间有较好的一致性。结论采用酶电极法测定谷氨酸钾注射液中谷氨酸钾含量具有专一性高、成本低、分析速度快等优点。.     

清开灵抗大鼠谷氨酸神经毒性脑损伤的实验研究

目的：观察清开灵对大鼠谷氨酸神经毒性脑损伤的作用。以寻找有效的抗谷氨酸神经毒性的中西药物。方法：采用细胞形态计量、电镜及免疫组织化学方法，观察清开灵对谷氨酸所致大鼠脑损伤的影响。结果：清开灵可对抗谷氨酸所致的大鼠脑组织水、钠含量的增加，减轻谷氨酸所致的皮层及海马细胞形态结构的损伤，降低脑组织中ｃ－ｆｏｓ阳性细胞率。结论：清开灵具有抗谷氨酸神经毒性作用。其作用机制与抑制谷氨酸所致的ｃ－ｆｏｓ基因表达     

脑泰方对缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响

目的探讨脑泰方对脑缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型。利用脑组织突触膜颗粒对3H L 谷氨酸摄入量及高效液相色谱仪观察脑泰方对脑组织谷氨酸含量的影响。结果 :模型组脑组织谷氨酸含量明显高于假手术组 (P <0 0 1) ,而其转运体功能则明显低于假手术组 (P <0 0 1) ;脑泰方治疗组能明显降低脑组织谷氨酸含量 (P <0 0 1)及显著升高大脑皮层、海马、纹状体谷氨酸转运体功能 (P <0 0 1)。结论 :脑泰方对缺血脑组织的保护作用是通过提高谷氨酸转运体功能以降低神经元突触中过多堆积的谷氨酸 ,从而减轻其兴奋性毒性     

脑泰方对缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响

目的：探讨脑泰方对脑缺血再灌注沙姒脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响。方法：采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型。利用脑组织突触膜颗粒对^3H-L谷氨酸摄入量及高效液相色谱仪观察脑泰方对脑组织谷氨酸含量的影响。结果：模型组脑组织谷氨酸含量明显高于假手术组（P＜0．01），而其转运体功能则明显低于假手术组（P＜0．01）；脑泰方治疗组明显降低脑组织谷氨酸含量（P＜0．01）及显著升高大脑皮层、海巴、纹状体谷氨酸转运体功能（P＜0．01）。结论：脑泰方对缺血脑组织的保护作用是通过提高谷氨酸转运体功能以降低神经元突触中过多堆积的谷氨酸，从而减轻其兴奋性毒性。     

中药9602减轻谷氨酸毒性作用的实验研究

目的:探讨中药9602对脑缺血损伤保护的作用环节。方法:(1)大鼠整体脑缺血后进行海马组织谷氨酸含量测定;(2)用高浓度谷氨酸灌流离体海马脑片,观察 CA_1区群峰电位(PS)的变化及9602对其影响;(3)利用荧光指示剂 Fura-2,采用急性分离海马细胞观察9602对谷氨酸和 KCl 诱导的细胞内 Ca~(2 )升高的影响。结果:反复脑缺血再灌后30min,海马组织谷氨酸含量明显高于假手术组;高浓度谷氨酸灌流离体海马脑片后,CA_1区 PS 逐渐变小直至消失。9602显著降低海马组织内谷氨酸的含量;延长离体脑片由谷氨酸引起 PS 消失前时间,提高 PS 恢复的百分率,并可明显拮抗谷氨酸诱导的[Ca~(2 )]_i 的升高,但对 KCl 引起的[Ca~(2 )]_i 增高无抑制作用,提示9602可以阻断谷氨酸介导的 Ca~(2 )内流。结论:抗谷氨酸作用可能是9602对脑缺血损伤保护作用的环节之一。     

清开灵和654-2对谷氨酸神经毒性脑水肿的影响

采用侧脑室注射谷氨酸诱发脑水肿,观察清开灵和６５４－２对谷氨酸神经毒性脑水肿的影响,结果发现：侧脑室注射谷氨酸可引起双侧大脑弥漫性脑组织水和钠含量增加,而伊文思蓝含量无明显的变化;大剂量清开灵可减轻谷氨酸所致脑组织水及钠含量的增加,而小剂量清开灵和６５４－２无明显作用,提示清开灵具有直接抗谷氨酸神经毒性作用,其作用与其剂量有关。     

神经性疾病相关的谷氨酸转运体研究进展

谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中最重要的神经递质之一。谷氨酸转运体可分为兴奋性氨基酸转运体(excitatory amino acid transporters,EAATs),即高亲和力转运体和囊泡谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporters,VGLUTs),即低亲和力转运体2种类型。其中,EAATs为维持正常的兴奋性突触的转运及受体激活所必需,人类已发现有5个胞浆膜谷氨酸转运体亚型(EAAT1-EAAT5);VGLUTs的功能是特异地将突触囊泡外的谷氨酸转运至突触囊泡内,主要由3个成员组成,分别为VGLUT1,VGLUT2和VGLUT3。近年研究发现:很多神经系统疾病都伴随着谷氨酸转运体功能的异常,且其病理特征与谷氨酸转运体亚型、分布、结构以及功能相关。有报道认为,中药中某些成分如麝香酮抗脑缺血损伤与其调节谷氨酸转运体有关。     

星形胶质细胞中谷氨酸转运体EAAT2作为癫痫治疗靶点的探讨

癫痫是一种复杂的神经系统疾病,现有的治疗药物虽然可以抑制癫痫发作,但抗癫痫药物（AEDs）的剂量依赖和副作用对癫痫患者造成了很大的困扰,目前的手术治疗方案尚不成熟,因此,开发有效的治疗方案减少神经元的死亡至关重要。星形胶质细胞作为神经系统中广泛存在的细胞,是中枢神经系统重要的稳态调节因子,其谷氨酸稳态失衡是癫痫的初始损伤机制。兴奋性谷氨酸转运体（EAATs）对于维持细胞外谷氨酸浓度,防止细胞外间隙谷氨酸堆积而引起的兴奋性毒性至关重要。本文以星形胶质细胞谷氨酸稳态在癫痫发病中的作用机制为切入点,一方面分析讨论了癫痫发作时星形胶质细胞谷氨酸稳态的重要性、神经元与星形胶质细胞之间谷氨酸的转移以及谷氨酸转运体EAAT2对谷氨酸稳态作用,提出将星形胶质细胞谷氨酸转运体EAAT2作为治疗癫痫的靶点之一,以更好地了解星形胶质细胞兴奋性神经毒性在癫痫神经元死亡过程中的重要作用;另一方面阐述中医药通过上调EAAT2保护神经元而发挥抗癫痫的作用,揭示了中医药可能是以EAAT2为靶点治疗癫痫。     

水牛角提取液中谷氨酸含量的测定

目的测定水牛角提取液中谷氨酸的含量。方法采用氨基酸分析仪测定水牛角提取液中的谷氨酸含量。结果水牛角提取液中谷氨酸的含量为0.225%。结论本法稳定、可行,为评价水牛角药材质量提供依据。     

知母皂苷元对谷氨酸诱导的皮层神经元损伤的保护作用及其机制

目的:观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用及其机制研究。方法:大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长情况;用MTT法测定细胞活力;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、p-PDK1、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平。结果:形态学观察结果显示谷氨酸(150μmol/L)可明显抑制神经元树突的生长发育。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组可明显对抗谷氨酸的抑制作用。谷氨酸150μmol/L+SAR30μmol/L+各阻断剂组能够阻断SAR的作用。谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组能明显抑制谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L+各阻断剂组能够阻断SAR的保护作用。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP、p-PDK1、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组可明显增加SYP、p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR蛋白表达水平。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L+各阻断剂组能够明显降低神经元SYP、p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR的蛋白表达水平。结论:SAR对谷氨酸引起的体外培养皮层神经元的损伤有保护作用,这种作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号转导通路有关。     

左旋单钠谷氨酸致肾阴虚模型大鼠神经细胞凋亡的变化

目的 :研究左旋单钠谷氨酸大鼠神经细胞凋亡的变化。方法 :利用末端标记法和流式细胞仪 ,测定左旋单钠谷氨酸造模前后和左归丸干预前后大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况。结果 :造模后 30天 ,左旋单钠谷氨酸大鼠大脑皮层、海马、下丘脑神经细胞凋亡数增多 ,以海马和下丘脑更明显 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 ) ,左归丸可减少左旋单钠谷氨酸大鼠大脑皮层、海马、下丘脑神经细胞凋亡 (P <0 0 1 )。结论 :左旋单钠谷氨酸可导致大鼠神经细胞凋亡 ,左归丸可减少左旋单钠谷氨酸大鼠神经细胞凋亡。     

补肾方含药血清拮抗谷氨酸兴奋性神经毒作用及其机制的初步研究

目的：研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸诱导凋亡PC12细胞的保护作用；并观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙信号转导机制的影响。方法：采用MTT法测定谷氨酸致损伤后PC12细胞的存活力；采用荧光显微镜技术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响；以流式细胞术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响；运用蛋白免疫印迹(Western—blotting)技术观察BS对凋亡的PC12细胞CaMKⅡ的影响。结果：20％浓度BS含药血清可以拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用，抑制PC12细胞凋亡；加％浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高，抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高。结论：BS含药血清具有拮抗谷氨酸兴奋性神经毒的作用，其神经保护作用的机制可能与减轻钙超载，调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关。     

左归丸加减方对谷氨酸诱导的体外培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡影响

目的 :研究左归丸加减方对谷氨酸引起的体外培养的小脑颗粒神经元 (CGNs)兴奋毒性死亡是否有抑制作用及其可能的分子机制。方法 :采用二乙酸荧光素 (PDA)和Hoechst332 5 8DNA染色法 ,观察神经元存活率及形态学特征 ,用琼脂糖凝脉电泳分析神经元死亡的生化特征。结果 :30 0 μmol·L- 1 谷氨酸可引起体外培养的CGNs调亡 ,左归丸加减方水提物 (ZGP)可以剂量依赖地阻断谷氨酸所致的CGNs调亡。PD980 5 9可以阻断谷氨酸的诱导CGNs调亡作用 ,协同ZGP的抗谷氨酸诱导CGNs调亡作用。LY2 94 0 0 2可以阻断ZGP的抗谷氨酸诱导CGNs调亡作用。结论 :ZGP对谷氨酸诱导的体外培养的大鼠CGNs调亡有保护作用 ,PI3 K Akt信号传导通路可能参与其作用。     

补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究

目的:运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法:以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果:BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用最强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论:补肾方BS可能具有神经保护作用.     

马桑内酯对大鼠大脑皮层突触体和脑片谷氨酸摄取、释放功能的影响

目的：研究致痫剂马桑内酯对谷氨酸摄取和释放功能的影响，以探讨马桑内酯致痫的可能机制。方法：放射性同位素分析技术。结果：在０．３５～３５０μｍｏｌ·Ｌ－１浓度范围内，马桑内酯使高钾（５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）去极化引起的脑片谷氨酸释放增加，增加率为１１．２％～３３．２％，剂量效应关系明显，３５μｍｏｌ·Ｌ－１和３５０μｍｏｌ·Ｌ－１组与对照组相比谷氨酸释放显著增加（Ｐ＜０．０１），各浓度马桑内酯对静息态谷氨酸基础释放均无明显作用。在３５０μｍｏｌ·Ｌ－１马桑内酯作用下，突触体谷氨酸摄取降低，降低率为７．９４％，与对照组差异显著（Ｐ＜０．０５），其它浓度马桑内酯作用不明显。结论：马桑内酯使谷氨酸释放增加，摄取减少，突触间隙谷氨酸聚积。     

非药物预处理对脑缺血后兴奋毒性的调控作用

兴奋性神经递质谷氨酸过量释放引起的神经毒性是脑缺血后一系列级联事件发生的主要初始病理变化。非药物预处理可通过抑制缺血后兴奋毒性减轻神经损伤。将首先梳理脑区谷氨酸代谢过程,包括谷氨酸突触前生成和释放、突触间隙重摄取以及突触后与受体结合;然后围绕谷氨酸代谢过程中的作用位点对非药物预处理在兴奋毒性方面的研究进展进行概述,为进一步研究非药物预处理对抗脑缺血后兴奋性氨基酸毒性的作用机制提供参考。     

补肾益智方对痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响

目的：比较补肾益知蚊及双益平对痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响,并进一步探讨药物的作用途径及机制。结果提示：中药补肾益智方治疗老年痴呆有着剂量相关性,中药效果要优于双益平。老年痴呆的发病机制与脑内作为神经递质的谷氨酸系统有关,既与谷氨酸递质释放量减少,与受体结合的减少有关;又与谷氨酸递质释放异常增多,产生神经毒民生有关。补肾益智方治疗老年痴呆的主要可能是通过主调海马内谷氨酸受体的数目,或对抗谷氨酸的神经毒性来实现的,而又益平则主要通过上调乙酰胆碱受体数目来实现的。     

电针镇痛对小白鼠脑内游离氨基酸含量的影响

我们曾发现电针镇痛与脑内游离氨含量变化关系密切,当电针镇痛有效时皮层和丘脑游离氨含量明显下降,而无效时显著升高。后来证实电针时脑游离氨含量的变化受脑谷氨酸调节。现已确认γ-氨基丁酸(GABA)是抑制性递质,谷氨酸可能是兴奋性递质,而大脑的功能性变化常可导致谷氨酸转变成谷氨酰胺反映出来。因此探讨针刺镇痛对GABA以及谷氨酸—谷氨酰胺含量的变化关     

β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mLβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶渗漏;15、30μg/mLβ-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。结论β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

刺五加注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受体表达的影响

目的观察刺五加注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中谷氨酸及其受体表达的影响,并探讨相关机制。方法实验动物随机分成正常对照组、庆大霉素组、刺五加+庆大霉素组和刺五加注射液组。采用腹腔注射庆大霉素制作耳毒模型,刺五加注射液进行干预治疗。连续用药10 d后,观察各组实验动物听阈变化、耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受体表达情况。结果与正常对照组和刺五加注射液组相比,庆大霉素组豚鼠听阈阈值和耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受体的表达明显增高;刺五加注射液可显著改善庆大霉素所致的听阈改变和降低谷氨酸及其受体的表达。结论庆大霉素作用下耳蜗螺旋神经节细胞中谷氨酸和其相应受体表达增高;刺五加注射液可通过抑制谷氨酸及其受体在耳蜗螺旋神经节中的过度表达,对螺旋神经节细胞起到保护作用。