慢性淋巴细胞白血病的T细胞亚群:分布与表面受体体外成熟的异常

“慢淋”主要是一种 B 细胞病,常伴有免疫球蛋白(Ig)生成异常,如低γ球蛋白血症或单克隆球蛋白血症。虽然血清蛋白病可能是B细胞功能功能异常的结果,但 T-B 细胞间的相互作用在 Ig 产生中是很关键的,T 细胞亚群对来自骨髓的 B 细胞的增生和激活起着正或负的影响。根据细胞功能、受体和抗原标记,人和小鼠的 T 细胞均可分成二群。人 T 细胞表面有带 IgG 受体(Fcy)和带 IgG(Fcμ)受体二种类型。当暴露于免疫复合物后,带 IgM 受体的 T 细胞在体外长期培养,可转变成带 IgM 受体的 T 细胞。本文通过比较“慢淋”患者和健康人末梢血中 T 细胞的比例、数量以及体外受体的转换情况进一步鉴定“慢淋”患者的 T 细胞特点.9例“慢淋”患者和10例健康者缓脉血标本经 Fi-coll-Hypaque 离心法分离出浓缩 T 细胞,活细胞率均在95～97%之间。二者细胞在体外培养期间生活率亦无差异。分别用 IgG 和 IgM 致敏的公牛红细胞进行EA-IgG 和 EA-IgM 测定:结果表明,培养前,“慢淋”患者血中带有 Fcγ受体的 T 细胞显著高于对照组     

用Fc受体和单克隆抗体鉴定人T细胞亚群

通常认为,人T细胞可以根据其表面的Fc受体的不同而分为两类,具有IgGFc受体者为Tγ细胞,具有IgM Fc受体者为Tμ细胞;并认为Tγ细胞具有抑制和杀伤功能,Tμ细胞具有辅助功能。作者用几种抗人T细胞的单克隆抗体和抗人单核细胞的及抗Ia抗原的单克隆抗体,对Tγ和Tμ细胞作了鉴定。本实验中所用的单克隆抗体具有①OKT_3(与100%人T细胞反应);②OKT_4(与60%的T细胞反应,这群细胞具有辅助功能);③OKT_5(与20%的T细胞反应,这群细胞具有抑制和杀伤功能);④OKM_1(与人单核细胞起反应);⑤OKI_1(与人Ia抗原反应);⑥OKT_6(只与人胸腺细胞反应而与外周成     

超抗原SEA对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响

目的观察超抗原SEA体外对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响。方法SEA体外诱导小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞、T细胞、B细胞的增殖能力,用流式细胞术检测淋巴细胞膜表型的变化,并测定脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的水平。结果不同浓度SEA诱导脾淋巴细胞的增殖能力不同,在1～4d内的增殖变化也不完全一样,SEA浓度为103ng/mL时,脾淋巴细胞的活化和增殖能力最强。SEA对T细胞(无APC)和B细胞的增殖无明显影响。细胞培养上清中IL-2和INF-γ的水平显著升高,IL-4和IL-10含量低。结论在APC递呈作用下,SEA能显著诱导初始CD4 T细胞和CD8 T细胞的活化和增殖,促使TH0细胞向TH1细胞分化,分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子。     

Ly49A基因转染的淋巴细胞对H-2~d小鼠正常和肿瘤细胞杀伤活性的实验研究

目的　观察Ly49A基因转染的C5 7BL/ 6小鼠的淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和 4T1乳腺癌细胞杀伤能力的变化与差异。方法　构建逆转录病毒表达载体pLXSN Ly49A ,经由PA317包装细胞包装后转染C5 7BL/ 6小鼠淋巴细胞。流式细胞仪检测Ly49A受体在转染后淋巴细胞上的表达率。MTT法检测转染后淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和 4T1乳腺癌细胞的杀伤活性 ,以空载体转染和未转染的淋巴细胞作对照。结果　Ly49A基因转染的C5 7BL/ 6小鼠的淋巴细胞 2 4h后Ly49A受体表达率为 (4 6 .6 7± 0 .35 ) % ,空载体转染组为 (18.73± 0 .85 ) % ,未转染对照组为 (19.6 0± 0 .2 7) % ,其对BALB/c小鼠正常成纤维细胞的杀伤活性明显降低 (抑制率 2 2 %～ 2 5 % ) ,对 4T1乳腺癌细胞的杀伤活性无明显改变 (P >0 .0 5 )。结论　转染Ly49A的C5 7BL/ 6小鼠淋巴细胞对BALB/c小鼠正常细胞的杀伤作用明显降低 ,但仍保留了对肿瘤细胞的杀伤活性 ,为解决异基因骨髓移植后移植物抗宿主病提供了实验依据     

Ly49A 基因转染的淋巴细胞对H—2^d小鼠正常和肿瘤细胞杀伤活性的实验研究

目的观察Ly49A基因转染的C57BL/6小鼠的淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和4T1乳腺癌细胞杀伤能力的变化与差异。方法构建逆转录病毒表达载体pLXSN-Ly49A,经由PA317包装细胞包装后转染C57BL/6小鼠淋巴细胞。流式细胞仪检测Ly49A受体在转染后淋巴细胞上的表达率。MTT法检测转染后淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和4T1乳腺癌细胞的杀伤活性,以空载体转染和未转染的淋巴细胞作对照。结果Ly49A基因转染的C57BL/6小鼠的淋巴细胞24?h后Ly49A受体表达率为(46.67±0.35)%,空载体转染组为(18.73±0.85)%,未转染对照组为(19.60±0.27)％,其对BALB/c小鼠正常成纤维细胞的杀伤活性明显降低(抑制率22％～25%),对4T1乳腺癌细胞的杀伤活性无明显改变（P＞0.05）。结论转染Ly49A的C57BL/6小鼠淋巴细胞对BALB/c小鼠正常细胞的杀伤作用明显降低,但仍保留了对肿瘤细胞的杀伤活性,为解决异基因骨髓移植后移植物抗宿主病提供了实验依据。     

纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法

背景:通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作.目的:制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达.方法:将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC),标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达.结果与结论:纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%.流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达.结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行.     

慢性B淋巴细胞白血病IJ-2的产生

慢性 B 淋巴细胞白血病(B-CLL)是以 B 小淋巴细胞单克隆增殖为特征的恶性疾病。通常认为 B 细胞分化受控于 T 辅助(TH)和 T 抑制(Ts)细胞。B-CLL 患者 T 细胞数明显低于正常人,且 TH/Ts 比例下降,纯化 T 细胞对植物凝集素反应延迟,自身和同种异体混合淋巴细胞反应受损。白细胞介素Ⅱ(IL-2)在 T 细胞的增殖和功能中起中枢作用。IL-2还通过诱导 TH 产生 B 细胞辅助因子间接参与 B细胞分化。最近证明 IL-2也可直接作用于 B 细胞增殖。作者研究了22例 B-CLL 患者外周血单个核细胞(PBMCs)产生 IL-2的能力,并与15名健康献血员比较。研究结果表明:①B-CLL 患者 PBMCsIL-2的产生与疾病的临床阶段和病情恶化无关;②     

纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法

背景：通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作。目的：制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。方法：将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素（FITC）,标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。结果与结论：纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%。流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达。结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行。     

共刺激阻断剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig基因修饰树突状细胞对移植肾存活的影响

背景：前期的研究表明，通过受体全身注射T细胞活化所需的B7／CD28共刺激信号阻断剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig可以明显延长大鼠移植肾存活，但所需剂量大、影响范围广、特异性差，可能造成全身性不良反应。 目的：为了提高细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig治疗的靶向性，采用细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig基因对肾移植供、受体树突状细胞进行体外修饰，观察两种树突状细胞单独以及联合应用对移植肾存活的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2003—04／2004—07在解放军全军肾病中心实验室完成。 材料：肾移植供体为近交系Brown-Norway（BN）大鼠，受体为近交系Lewis大鼠，Wistar大鼠作为无关淋巴细胞供体。 方法：分离培养供、受体大鼠骨髓源性树突状细胞，以细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig基因重组腺病毒转染供、受体大鼠骨髓源性树突状细胞。构建大鼠肾移植模型，将单独的供、受体树突状细胞，混合的供、受体树突状细胞于肾移植前24h经股静脉注入受体，以未注射树突状细胞的受体为对照。 主要观察指标：①移植肾存活时间。②术后20d应用MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激反应程度。 结果：与对照组比较，受体树突状细胞未能延长移植肾存活，但与供体树突状细胞联合应用时可使移植肾存活时间较单独应用供体树突状细胞时明显延长（P〈0．01）。注入供体树突状细胞与混合的供、受体树突状细胞大鼠的脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于对照组（P〈0.01），而对无关抗原刺激的反应与对照组无差异。 结论：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig基因修饰的供体树突状细胞可以明显延长大鼠移植肾存活时间，受体树突状细胞无此作用，但两种树突状细胞联合应用可以使移植肾获得更长的存活时间。     

来自转基因小鼠的人类抗体

在由靶基因对内源性H和kL链基因座抑制的背景下,作者研制出了“人类免疫球蛋白”,该球蛋白是由小鼠携带人H链(IgM)和K型(Igk)、λ型(Igλ)L链转基因座。转基因座的引进补充了小鼠脾脏中循环B细胞池存在的衰竭。这些小鼠的B淋巴细胞膜上表达了人IgM和Igk或Igλ蛋白质,携带的人Igλ基因座的显性性状大于k基因座。小鼠血清中分泌人IgM。在角疫作用之后,能产生特异性抗体反应。IgH重排时多样性和结合片段的作用和人B细胞非常相似。提示人细胸中通常直接重排的信使序列在小鼠B细胞中功能是完全的。另外,重排期间,片段之间加入了非模板‘N’核苷酸以增加多样性,在人B细胞中,同时存在H和L链,而转基因座小鼠只有H链。人Ig小鼠仅在H链上重排‘N’核苷酸,提示Ig转基因座重排在同发育阶段。在不同片段的启动基因序列中,由于可产生差异的V区基因的限制作用,H链似乎受到限制,这将影响重排期间“人免疫球蛋白”的活性。转基因小鼠重排的H链序列几乎没有由于种系不     

流式细胞术检测TH1/TH2的方法探讨

1986年Mosm ann等[1]根据T辅助淋巴细胞(CD4 )分泌的细胞因子谱的不同,将CD4 细胞分为TH1和TH2亚群。测定TH1和TH2亚群的变化,可以了解机体的免疫状况,为临床调整TH1/TH2失衡提供正确的治疗措施。由于目前尚无区分TH1和TH2细胞的表面标志物,所以只能根据细胞亚群分泌细胞因子的不同,间接检测TH1和TH2细胞的数目和功能[2]。以往用流式细胞术(flow cytom etry,FCM)检测TH1/TH2细胞的方法主要有两种:一是用单标记法对细胞膜表面分子和胞内的细胞因子进行染色,以FCM分析通过群组信息来确定TH1/TH2细胞的表达水平[3];二是用三标…     

自然杀伤细胞表面受体NKp46的研究进展

一、自然杀伤细胞(natural killer cells,NK细胞)简介NK细胞来源于骨髓的淋巴细胞,是机体抵抗病毒感染和防止肿瘤发生的第一道防线,与T细胞不同,NK细胞无需抗原的刺激即可杀伤靶细胞。NK细胞表面活化性受体和抑制性受体的平衡调控NK细胞的活性[1]。NK细胞表面受体包含在免疫球蛋白超家族(immunogloblin gene superfamily,IgSF)或细胞毒性T淋巴细胞受体(cytotoxic T lymphocytes receptor,CTLR)     

负载肝癌肿瘤抗原的B淋巴细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的实验研究

目的:探讨体外经小鼠肝癌细胞不同抗原致敏的CD40配体活化的B淋巴细胞诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤免疫的能力.方法:分离、纯化T、B混合淋巴细胞,并在CD40L、rmIL-4联合作用下培养.然后分离T、B淋巴细胞以备用.将凋亡的肝癌细胞及其冻融裂解物作为实验组,1640培养基作为空白对照组分别与B淋巴细胞共同培养,检测培养后各组B细胞表面抗原呈递细胞标记(CD40、CD80、CD86)及主要组织相容性抗原的表达情况.利用混合淋巴细胞增殖实验检测T细胞增殖情况.以负载肿瘤抗原的B淋巴细胞诱导的CTL作为效应细胞,肝癌细胞Hepal-6为靶细胞,LDH释放实验检测杀伤活性.结果:负载肿瘤抗原的B淋巴细胞具有刺激T细胞增殖的能力,实验组的B淋巴细胞,其组织相容性分子及其刺激分子表达明显高于空白对照组,其对靶细胞的杀伤率与空白对照组比较经统计学分析差异有显著性.结论:负载肝癌肿瘤抗原的B淋巴细胞作为抗原呈递细胞诱导的CTL可有效产生特异性抗肝癌免疫作用.     

NKT细胞的研究进展

NKT细胞是一类具有NK细胞受体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面性质的T细胞亚群。NKT细胞于1987年由Fowlker等首先在小鼠中发现，到20世纪90年代后期才在人类中发现，由于其表型和功能与传统T、B、NK细胞的不同，立即受到学者们高度重视。NKT细胞表达保守的限制性的TCR谱，其αβTCR结构单一。人NKT细胞由恒定的Vtr24 Jα18TCRα链和Vβ11TCRβ链组成，鼠NKT细胞由恒定的Vα14 Jα18TCRα链和多克隆的Vβ8.2、Vβ7和VB2TCRβ链组成。NKT细胞同时共表达NK细胞特有标志CD161（NK1．1抗原，鼠；NKR-P1抗原，人）。对NKT细胞的研究表明，简单把它理解成T淋巴细胞同时表达NK细胞受体是不准确的。许多传统的T淋巴细胞在活化后可上调NK细胞受体（包括CD161），而对于Vα24^＋NKT细胞则无这种表现。对人类淋巴细胞的研究发现，很大比例的T淋巴细胞都表达CD161，Vα24^＋Vβ11^＋细胞只是其中一个少数的亚群。     

EBV诱发淋巴瘤的组织病理学观察及肿瘤发生来源鉴定

目的 观察EB病毒(EBV)在人淋巴细胞/SCID嵌合体小鼠(hu-PBL/SCID)体内诱发肿瘤的病理形态，检测诱发瘤的免疫标志和人特异性Alu序列，确定EBV诱发肿瘤的性质、类型和来源。方法 从无偿义务献血员取外周静脉血分离淋巴细胞(PBL)并将人PBL移植到SCID小鼠体内，再经腹腔注射EBV悬液进行实验感染。观察4月后处死动物进行病理解剖，取小鼠体内肿瘤进行组织病理学观察，以及免疫组化染色、原位分子杂交。结果 在34只存活的hu-PBL/SCID嵌合体小鼠中，有24只小鼠诱发出肿瘤。诱发瘤常见于小鼠腹腔后壁和纵隔，呈结节状实体瘤。光学显微镜下观察肿瘤细胞呈圆形，体积较大，弥漫排列，为大裂一无裂混合细胞，伴有浆样淋巴细胞和免疫母细胞样形态。电子显微镜观察瘤细胞核为圆形或不规则状，核内可见成群或散在的EB病毒颗粒。诱发瘤免疫组化染色结果为人类白细胞共同抗原CD45(LCA)阳性，B细胞标记CD20(L26)阳性，T细胞标记CD3(PSI)和CD45RO(UCHL-1)全为阴性。以人Alu序列为探针标记地高辛进行原位分子杂交，肿瘤细胞核显阳性信号。结论 在人淋巴细胞/SCID嵌合体小鼠建立了EBV诱发性肿瘤模型，病理分类是非何杰金氏恶性淋巴瘤(大裂-无裂混合细胞型)，肿瘤起源于移植的人B淋巴细胞。     

杀伤细胞受体KIRs的研究进展

自然杀伤(Natural killer,NK)细胞是骨髓来源的大颗粒淋巴细胞,NK细胞不同于T、B淋巴细胞,它不表达抗原特异性受体,其功能的发挥主要依赖于NK细胞能够表达多种能与MHC或非MHC配体结合的免疫球蛋白样受体(Killerim munoglobulin-like receptors,KIRs)KIRs为免疫球蛋白超家族成员,表达于NK细胞和某些T细胞亚群.KIRs包括抑制型和激活型受体,其通过识别表达于靶细胞上的人类白细胞抗原1(MHC-1)类分子,调节NK细胞的杀伤活性,在自身免疫性疾病、妊娠、移植、肿瘤免疫等生理病理过程中起重要的作用.     

MHC四聚体技术的应用研究进展

通过描述免疫应答和免疫反应特征来定义抗原特异性T淋巴细胞反应类型的方法具有繁杂、准确性差等缺点。为精确辨别T淋巴细胞反应类型,发展了可直接对抗原特异性T淋巴细胞进行标记的MHC四聚体(tetramer)技术。利用T细胞受体(TCR)与MHC分子识别结合机制在T细胞表面结合肽-主要组织相容性复合物(peptide major histocompatibility complex,p MHC)配基,T细胞聚合形成可溶性肽-MHC四聚体,增加特异性T细胞检测的灵敏度,该技术即四聚体技术。该文主要论述MHC四聚体技术的原理和临床应用。     

CD+4CD+25CDlow/-127细胞体外抑制效应T淋巴细胞增殖的影响

1995年,Sakaguchi等 [1]率先在小鼠外周血中分离获得发挥免疫抑制功能的CD+4CD+25T淋巴细胞,被称为调节性T淋巴细胞(Regulatory T cells,Treg).Treg细胞不仅具有抑制自体反应性T淋巴细胞的功能,还能阻止效应性T淋巴细胞的过度增殖和活化,甚至能影响B淋巴细胞产生免疫球蛋白 [2].因此,对Treg细胞的功能研究正成为当今国内外的研究热点.本研究以CD+4CD+25CDlow-127为膜表面标志分选Treg细胞,利用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diaeetate,succinimidyl ester,CFSE)方法 体外检测其对效应T淋巴细胞增殖的影响,从而为Treg细胞的功能研究奠定实验基础.     

恒定自然杀伤T细胞在过敏性哮喘中的调节机制

恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞是T淋巴细胞中独特的亚群,也是经典的自然杀伤T(NKT)细胞,既表达T细胞的表面标志,又表达自然杀伤(NK)细胞的表面标志CD161(NK1.1)分子和NK细胞受体P1C。活化iNKT的经典抗原是糖脂类抗原α-半乳糖神经酰     

白介素13受体α2的研究进展

1 IL-3及其受体简介 IL-13是由不同T细胞亚群和树突状细胞产生的多效能细胞因子．主要由激活的辅助T淋巴细胞（TH2细胞）分泌,另外肥大细胞、NK细胞、树突细胞、角质细胞也可以产生少量。