巴马小型猪脾虚痰浊证模型NEI网络相关指标水平变化的实验研究

目的:从神经内分泌免疫网络(NEI)角度研究脾虚痰浊证巴马小型猪脑肠肽和神经递质的影响。方法:将巴马小型猪随机分为正常组和模型组,施以每日冲刺跑步训练联合高脂单笼饲养干预,建立小猪脾虚痰浊证模型。应用酶联免疫法(Elisa)测定血清中皮质醇(COR)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、5-羟色胺(5-HT)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、乙酰胆碱(Ach)和去甲肾上腺素(NE)水平。结果:与正常组比较,模型组小型猪脑肠肽、神经递质水平发生差异性变化。结论:脾虚痰浊证模型神经内分泌免疫网络中脑肠肽、神经递质失常,提示NEI是客观存在的。某一环节的失衡可能是出现脾虚痰浊证的病理机制之一。     

脾虚痰浊证巴马小型猪心肌糖代谢相关分子的变化特点

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织葡萄糖代谢相关分子的变化特点。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组及脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)、磷酸果糖激酶1(Phosphofructokinase-1,PFK-1)、丙酮酸激酶(Pyruvate kinase2,PKM2)和己糖激酶(Hexokinase,HK)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织GLUT4、PFK1、PKM2和HK蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织GLUT4、PKM2、PFK1、HK mRNA表达水平显著下降(P0.01),GLUT4、PKM2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。PFK1、HK蛋白表达水显著下降P0.01)。结论:脾虚痰浊证小型猪心肌存在葡萄糖代谢异常,与葡萄糖转运及代谢相关分子表达呈下降趋势。     

脾虚痰浊巴马小型猪冠脉细胞凋亡与细胞生长和增殖相关基因差异性表达研究

目的:基于PCR array技术观察脾虚痰浊巴马小型猪冠脉组织细胞凋亡和生长与增殖相关基因差异性表达,探讨AS发生的可能机制。方法:在建立脾虚痰浊巴马小型猪模型基础上,应用PCR array技术检测巴马小型猪冠脉细胞增殖与凋亡的相关基因的表达差异性表达。结果:PCR array显示巴马小型猪冠脉细胞中与细胞凋亡相关基因BAX、BCL2、TGFβ1、TNF、BCL2L1及与细胞生长和增殖相关的基因CSF-2、CCL2、MMP1、MMP3、FGF2均发生差异性变化。结论:脾虚痰浊巴马小型猪冠脉细胞增殖与凋亡相关基因的变化可能是脾虚痰浊冠状动脉硬化发生的病理机制。     

冠心病中医证候及脾虚痰浊证与冠脉病变的关系对比观察

目的:观察冠心病不同中医证候及冠心病脾虚痰浊证与冠脉造影所反映的血管病变分布及狭窄程度的关系。方法:对81例经冠脉造影检查确诊为冠心病的患者进行中医辨证,观察冠心病不同中医证候与冠脉病变分布及病变程度之间的关系。结果:在81例中,以血瘀证病变支数最多,以寒凝证血管狭窄程度最重,气滞证及阴虚证冠脉病变程度较轻,但各证候组之间差异无显著性意义。在81例中,脾虚痰浊证(38例)与非脾虚痰浊证(43例)对比,在病变血管分布及血管狭窄程度上差异均有显著性意义,表现为脾虚痰浊证在右冠及回旋支分布较多,狭窄程度较重。结论:冠心病不同中医证候与冠脉病变分布及狭窄有相关性;冠脉血管病变可能与脾虚痰浊的临床表现有因果关系。     

脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织LKB1/MPK信号通路的变化

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌物质代谢相关通路LKB1/AMPK的变化。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组、脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p AMPK)、肝脏激酶B1(LKB1)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织AMPK、p AMPK、LKB1蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织AMPK、p AMPK mRNA表达水平显著下降(P<0.05),AMPK、p AMPK蛋白表达水平亦明显下降(P<0.01);与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织LKB1mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论:心肌组织LKB1/AMPK信号通路相关分子表达下调可能为脾虚痰浊证的分子生物学基础。     

脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路变化的实验研究

目的:观察脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路变化,探讨其信号通路变化与脾虚痰浊证的关系。方法:16只SD大鼠,每组8只,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组。全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDLC水平,ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测肝脏GP、CREB、PKA和PHK蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,TG含量显著增高,主动脉c AMP活性显著降低,GP、CREB、PKA、PHK mRNA含量显著下降,GP、CREB、PKA、PHK蛋白表达显著下降。结论:脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路的改变可能与调控血脂代谢相关基因GP、CREB、PKA、PHK的表达有关。     

脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪冠状动脉粥样硬化相关基因差异性表达研究

目的:利用PCR array技术检测脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪冠脉应激反应与脂质转运和代谢相关基因变化,探讨脾虚痰浊冠状动脉粥样硬化发生的病理机制。方法:随机将10只健康的广西巴马小型猪分为正常组和模型组,每组5只,正常组给予普通饲料饲喂,模型组给予球囊拉伤术联合高脂饮食饲喂进行脾虚痰浊动脉粥样硬化模型复制,实验24周后,观察巴马小型猪行为学变化。呼吸机麻醉后取材,分离血清和冠状动脉,测定血清血脂、hs-CRP、IL-6水平,HE染色观察冠状动脉组织形态学变化,对模型进行评价。应用PCR array技术观察巴马小型猪冠脉应激反应与脂质转运和代谢相关基因变化。结果:造模24周后,巴马小型猪出现食少且不欲饮食、神疲乏力、倦怠等明显脾虚证候,与正常组比较,模型组血清血脂、hs-CRP、IL-6水平显著升高,HE染色结果表明,模型组小型猪血管内膜损伤严重,提示模型复制成功。PCR array结果显示,与正常组比较,与应激反应相关的25个基因中,上调11个,下调3个,与脂质转运和代谢相关的15个基因中,上调5个,下调5个。结论:脾虚痰浊巴马小型猪冠脉应激反应与脂质转运和代谢相关基因变化可能是脾虚痰浊冠状动脉硬化发生的病理机制。     

跑步运动联合高脂单笼喂饲建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型

目的:通过跑步运动联合高脂单笼喂饲建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型。方法:选取6月龄雄性去势普通级小型猪47只,以随机数字表法随机分为对照组和模型组,对照组5只,模型组42只。模型组施以每日跑步训练联合高脂喂饲干预,对照组予普通饲料喂食,共喂饲24周。对巴马小型猪等待喂食行为、皮毛光泽、口色、粪便性状、划痕、生命体征、形体指标、血脂和行为学指标进行观测。结果:跑步运动联合高脂喂饲可使巴马小型猪出现高脂血症脾虚痰浊证表现:(1)模型组血清TC(14.89±5.56)mmol/L高于对照组(3.88±1.89)mmol/L,TG(1.00±0.36)mmol/L高于对照组(0.35±0.09)mmol/L,HDL-C(1.97±0.61)mmol/L高于对照组(0.77±0.17)mmol/L,LDL-C(8.00±3.17)mmol/L高于对照组(1.09±0.25)mmol/L,ox-LDL(8.84±0.86)μg/L高于对照组(8.04±0.25)μg/L,差异均有统计学意义(P0.01)。(2)模型组更趋于倦怠、懒惰,表现为咬物品、摆尾频次、闻物体、站立、走持续时间等低于对照组,闻同伴、卧、坐持续时间高于对照组(P0.01)。(3)模型组等待喂食行为、粪便性状、划痕、口色评分大于对照组(P0.05)。(4)模型组体质量、腹围、臀宽大于对照组(P0.01)。(5)模型组心率大于对照组,呼吸频率小于对照组(P0.01)。结论:跑步运动联合高脂单笼喂饲能成功建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型,为巴马小型猪进一步应用于中医药研究中提供有益的参考。     

健脾祛痰化瘀方药对脾虚痰浊巴马小型猪回肠线粒体能量代谢相关基因干预作用研究

目的:基于PCR array技术观察脾虚痰浊巴马小型猪回肠线粒体能量代谢相关基因差异性表达及健脾祛痰化瘀方药的干预作用。方法:随机将9只健康的广西巴马小型猪分为正常组、模型组和中药治疗组,每组3只,正常组给予普通饲料饲喂,模型组和中药治疗组采用疲劳过度联合高脂饮食饲喂的方法进行脾虚痰浊动脉粥样硬化模型复制,造模24周后,中药治疗组给予健脾祛痰化瘀方药,48周后,观察巴马小型猪行为学变化,呼吸机麻醉后取材,分离冠状动脉,应用PCR array技术观察巴马小型猪回肠线粒体能量代谢相关基因变化。结果:造模24周后,巴马小型猪出现食少且不欲饮食、神疲乏力、倦怠等明显脾虚证候;PCR array结果显示:与空白对照组比较,模型组变化水平在2倍以上,且经中药干预后表达水平异常被明显纠正的基因共10个,分别为:ATP4B、NDUFS2、NDUFS3、NDUFS4、PPA2、SDHB、SDHC、COX17、NDUFA9、NDUFB1。结论:健脾祛痰化瘀方药对脾虚痰浊巴马小型猪的干预作用可能通过对回肠ATP4B、NDUFS2、NDUFS3等与线粒体能量代谢相关基因实现。     

运用德尔菲法对《冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证·中医证候计分表》条目筛选的研究

目的:(1)筛选、优化条目并制定《冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证·中医证候计分表》。(2)建立能体现中医药治疗冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证的疗效评价工具。方法:在参考国标、行标的基础上,结合专家会议意见形成《冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证·中医证候计分表》,运用德尔菲(Delphi)法向行业内50位专家发送2轮调查问卷,并对问卷调查结果进行统计分析。结果:调查问卷收回率100%,专家积极系数为100%,专家总体权威系数为85%,专家意见的总体协调系数W为0.296,P<0.05。共删除4个条目,确定将胸闷、胸痛、脘痞、便溏等16个条目及其轻重程度纳入中医证候计分表中。结论:参与调查的专家代表性和积极性均较高,其权威程度以及协调性较好。应用德尔菲法对《冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证·中医证候计分表》条目的筛选达成一致的专家共识。但是,仍需要进一步的临床实践来评价该证候计分表对于冠心病稳定型心绞痛病证结合疗效评价的作用价值。     

糖尿病勃起功能障碍痰浊病机分析

痰浊之邪是糖尿病血管病变的病理基础,也是糖尿病周围神经病变的重要证候要素。痰浊所致的血管和神经病变可进一步导致糖尿病勃起功能障碍(DIED)的发生,因此临床中应重视DIED发病的痰浊病机。     

脑动脉硬化痰证与TLR4、ICAM-1相关性探讨

目的探讨脑动脉硬化痰证与Toll样受体4（TLR4）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1,CD54）的相关性。方法收集临床脑动脉硬化患者病例95例,中医辨证分痰证组（41例）和非痰证组（50例）。酶比色法测定血脂,流式细胞术测定TLR4、ICAM-1表达率。结果痰证组总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）高于非痰证组,但无统计学意义;痰证组TLR4、ICAM-1均高于非痰证组,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论脑动脉硬化患者TLR4、ICAM-1的变化与中医痰证有相关性。     

脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织cAMP/PKA-Gp信号通路变化的研究

目的:通过分别观察脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织c AMP/PKA-Gp信号转导通路相关蛋白的变化,探讨脾虚痰浊证的改变与c AMP/PKA-Gp信号转导通路的相关性。方法:16只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组和脾虚痰浊组,每组各8只,脾虚痰浊证模型采用喂养高脂饲料,时间6个月。造模结束后,首先通过大鼠的一般状态和生理情况的改变进行模型评价,再分别取胃、心和下丘脑组织。分别采用ELISA法检测痰浊证大鼠不同组织c AMP活性,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测PKA、CREB、PHK和Gp mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组大鼠比较,脾虚痰浊证大鼠胃、心及下丘脑组织c AMP活性和PKA、CREB mRNA和蛋白的表达均有所减弱(P0.01或P0.05);并且脾虚痰浊证大鼠胃和心组织Gp mRNA和蛋白的表达也均有所减弱(P0.01或P0.05);此外,脾虚痰浊证大鼠心组织的PHK mRNA和蛋白的表达与正常组比较也存在显著性差异(P0.01)。结论:脾虚痰浊证大鼠模型成立后,其胃、心及下丘脑组织的改变均与c AMP/PKA-Gp信号转导通路存在一定的相关性。     

急性冠脉综合征患者血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L含量变化及与中医证型的关系

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及CD40配体(CD40L)水平变化及与中医辨证分型的关系。方法选择84例ACS患者作为ACS组,根据中医辨证分型标准分为心血瘀阻型、痰浊闭阻型、寒凝心脉型、气滞心胸型、心肾阳虚型、气阴两虚型;选择同期健康体检者20例及稳定型冠心病患者20例作为非ACS组。采用酶联免疫ELISA法测定所有受检者血清ICAM-1、VCAM-1及CD40L水平,比较ACS组与非ACS组间各指标的差异,分析血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L水平与中医辨证分型的关系。结果 ACS组血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L水平均显著高于非ACS组(P均<0.05)。痰浊闭塞型及心血瘀阻型血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L水平均明显高于其他4型(P均<0.05),痰浊闭塞型与心血瘀阻型各指标水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);寒凝心脉型血清ICAM-1水平明显高于气滞心胸型(P<0.05),其他2项指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05);气滞心胸型、心肾阳虚型、气阴两虚型血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 ACS患者血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L水平明显升高,痰浊闭塞型及心血瘀阻型血清ICAM-1、VCAM-1、CD40L水平更高。     

基于PCRarray技术探讨脾虚痰浊AS对心肌线粒体能量代谢通路相关基因mRNA表达的影响

目的:利用PCRarray的技术检测脾虚痰浊动脉粥样硬化(AS)巴马小型猪心肌线粒体能量代谢信号通路相关基因mRNA的表达。方法:普通级雄性巴马小型猪10只,随机分为正常组,脾虚痰浊AS组。脾虚痰浊AS组予饮食不节、劳倦过度结合高脂饲料饮食。使用全自动生化分析仪测定TC、TG、LDL-C水平,提取各组巴马小型猪心肌总RNA,应用线粒体能量代谢信号通路PCR芯片测定脾虚痰浊AS巴马小型猪线粒体能量代谢通路相关mRNA表达。结果:各组巴马小型猪血脂的比较:模型组较正常组TC、TG、LDL-C水平明显升高;PCRarray结果显示:模型组与正常组相比,下调的≥4倍基因有17个,占总基因数的20%,如:ATP5A1、ATP5L、ATP5F1、ATP4A、ATP6V1E2等;上调≥4倍的基因转录占基因总数的10%,为OXA1L、NDUFB8、NDUFB9、NDUFS2、NDUFS8,涉及氢离子转运,琥珀酸脱氢酶亚基,NDUF脱氢酶亚基相关基因。结论:脾虚痰浊AS对心肌线粒体能量代谢的影响可能与涉及氢离子转运,琥珀酸脱氢酶亚基,NDUF脱氢酶亚基相关基因表达改变有关。     

基于液相色谱-质谱分析冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证代谢组学研究

目的 基于血清代谢组学研究分析冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证的差异代谢物和相关代谢通路。方法 招募60例冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证患者和60例同期健康志愿者,采用超高效液相色谱-质谱联用测定两组受试者的血清代谢组学,通过原始谱图和原始数据进行多元统计分析鉴定差异代谢物,进行KEGG代谢通路富集分析。结果 冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊组总计60例患者参与研究,对照组总计60例健康志愿者参与研究,两组受试者的一般资料、生化指标均无统计学差异（P>0.05）;共鉴定得到18个差异代谢物,其中苯乙醛、正磷酸盐、鸟嘌呤核苷、磷酸二乙酯、2-脱氧-D-葡萄糖酸盐、鸟嘌呤、5-(2-羟乙基)-4-甲基噻唑表达下调,牛黄胆酸、2-丙基戊二酸、8-氨基-7-氧代壬酸、L-酪氨酸、S-磺基-L-半胱氨酸、环己甲酸、紫质胆素原、（R）-3-羟基-2-丁酮、辛酰基葡糖苷酸、褪黑素、A-茄碱表达上调;涉及苯丙氨酸代谢、硫胺素代谢以及嘌呤代谢等代谢通路。结论 差异代谢物在一定程度上从微观层面揭示了冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证的代谢本质以及为冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证患者临床早期预警提供线索。     

脾虚模型大白鼠血清脂质过氧化的实验研究

本文采用番泻叶水浸剂胃饲大白鼠,半月后出现了脾虚模型,用 TBA和 FCL 法测得,实验组较对照组血清脂质过氧化作用明显增强,初步说明了脾虚证在分子水平的病理改变。     

益气活血方对肺纤维化黏附分子表达影响的实验研究

[目的]通过观察中药益气活血方对博莱霉素肺纤维化大鼠肺组织黏附分子[细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)]的影响,进-步探讨中药益气活血方治疗肺纤维化的机制.[方法]采用经典的博莱霉素肺纤维化模型,将80只符合实验标准的大鼠随机分为4个组,即正常对照组、模型组、泼尼松组、益气活血方组,镜下观察各组病理形态学表现及肺组织炎症积分的情况,并采用免疫组化法观察各组肺组织黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达,将结果进行统计学分析.[结果]益气活血方能减轻博莱霉素肺纤维化大鼠肺泡炎程度;益气活血方能下调黏附分子ICAM-1、VCAM-1在肺组织的表达.[结论]中药益气活血方能下调黏附分子ICAM-1、VCAM-1在肺组织的表达,这可能是其治疗防治肺纤维化的机制之-.     

解毒化浊方对慢性输卵管炎细胞黏附分子的影响

目的:探讨解毒化浊方对慢性输卵管炎血管内皮细胞的血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响及其作用机制。方法:解毒化浊方治疗慢性输卵管炎患者50例,观察治疗前后血清中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)的变化。结果:解毒化浊方能降低慢性输卵管炎患者血清中sICAM-1、sVCAM-1的含量(均P<0.01)。结论:解毒化浊方可阻断黏附分子促进白细胞浸润至炎症部位,起到"抗黏附治疗"作用,为治疗慢性输卵管炎的有效方药,其机制可能与抑制炎症反应有关。