黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化

目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。     

柴胡属5种植物RAPD分析与分类鉴定

目的 探讨正晶柴胡与同属近似种包括柴胡Bupleurum chinense、狭叶柴胡B.scozonerifolium、竹叶柴胡B.marginatum、小叶黑柴胡B.smithii var.parvifolium、大叶柴胡B.longiradiatum5种柴胡属植物鉴定的分子证据。方法 CTAB法提取柴胡属原植物总DNA，以随机引物进行非特异扩增。结果 用随机引物OPA－1（5‘－CAGGCCCTTC－3‘），OPD－8（5‘－GTGTGCCCCA－3‘）和OPD－11（5‘－AGCGCCATTG－3‘）能有效地鉴定这5种柴胡属植物。结论 RAPD法可准确鉴定正品柴胡及其近似种。     

当归药材道地性的RAPD分析

目的 从DNA分子水平上探讨当归药材道地性的生物学基础。方法 对来自不同产地的18个当归样品,提取其基因组DNA,并进行PAPD分析。对筛选出的10个引物的RAPD结果进行聚类分析,得出18个当归样品的聚合树状图。结果 显示地理分布距离越小,当归的遗传差异越小;反之,越大。但生态环境特别是小生境对当归遗传差异的作用亦不可忽视。结论 为我们从分子生物学角度研究当归药材道地性提供了新的启示。     

北柴胡种源道地性的RAPD分析

目的：鉴定吉林省东丰县北柴胡栽培基地5种柴胡样品的种源道地性。方法：用23种引物作RAPD分析。结果：3种引物能有效地鉴别北柴胡样品的道地性。结论：用RAPD法可以准确鉴定北柴胡种源道地性。     

丹参干叶片的DNA提取

目的以丹参干叶片为材料,优选一种有效去除多酚类杂质的DNA提取方法.方法先用PVP-40T与材料共研碎,加预冷的提取缓冲液冰置,弃去上清液,沉淀用加Vit C粉末(调pH＝6～6.5)的2×CTAB抽提缓冲液提取.结果得到的DNA可以很好地用于PCR扩增.结论该方法适用于提取含多酚材料的DNA.     

连翘干叶片和鲜叶片DNA提取方法和质量比较研究

目的探讨三种DNA提取方法对连翘干叶片和鲜叶片DNA质量的影响,比较干叶片和鲜叶片DNA提取质量。方法采用常规CTAB法、高盐低pH法和新改良CTAB法提取连翘干叶片和鲜叶片DNA,进行A260/A280测定、琼脂糖凝胶电泳检测和RAPD扩增分析。结果新改良CTAB法提取的连翘干叶片和鲜叶片DNA的A260/A280比值在1.8～2.0之间,电泳条带清晰无拖尾,选用随机引物（S7）对上述DNA样品进行RAPD扩增,可获得具有一定多态性扩增谱带。对连翘干叶片和鲜叶片DNA样品综合比较,结果显示由干叶片获得的DNA质量高于鲜叶片。结论新改良CTAB法是一种分离高质量完整DNA的简便、快速方法,该方法得到的干叶片DNA质量较鲜叶片更适合下一步分子生物学研究。     

东北产药材龙胆的DNA提取与RAPD分析

用分子生物学技术随机扩增多态性DNA(RAPD)对三种不同品种的龙胆进行鉴别。结果与结论：提供了东北产三种龙胆的鉴别的RAPD扩增指纹图谱，有鉴别意义。     

半夏基因组DNA的提取及鉴定

目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。     

枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析

目的建立一种适于RAPD分析的快速提取枸杞叶片基因组DNA的方法,并利用RAPD技术研究枸杞属植物基因组DNA指纹图谱。方法采用改进的CTAB法提取枸杞冷藏幼叶的基因组DNA,利用RAPD技术对其进行指纹图谱分析。结果改进的CTAB法提取的10份枸杞材料基因组DNA均适于RAPD分析;可提供清晰的RAPD指纹图谱,利用筛选出的2个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到56条带,其中多态性条带44条,多态性百分率为78.6%。结论表明改进的CTAB法提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析;RAPD对枸杞属植物进行指纹图谱分析是可行的。     

柴胡桂枝干姜汤治验

<正>《伤寒论》第147条云:"伤寒五六日,已发汗而复下之,胸胁满微结,小便不利,渴而不呕,但头汗出,往来寒热,此为未解也,柴胡桂枝干姜汤主之。"此表证内陷少阳,而兼饮停。盖少阳分司手足二经,胆与三焦皆属之,故水饮与邪热夹杂于三焦之故。笔者有幸入室江浙名家林丹峰,先生日诊近百之众,活     

南北柴胡HPLC-ELSD指纹图谱的研究

目的:采用HPLC-ELSD法分别建立南、北柴胡的指纹图谱,并进行真伪鉴别。方法:样品的甲醇提取液采用TOSOH TSKgel ODS-100V C18(4.6mm×15cm,5μm)色谱柱分析,乙腈-水梯度洗脱,流速:1.0 mL/min柱温:25℃,检测器为蒸发光散射检测器(ELSD)。并对结果进行相似度评价和主成分分析。结果:建立了含有11个共有峰的北柴胡HPLC-ELSD指纹图谱和含有14个共有峰的南柴胡HPLC-ELSD指纹图谱。伪品的相似度低,可以通过指纹图谱进行真伪鉴别。结论:该方法能快速可靠的鉴别和区分南、北柴胡,可以用于柴胡的质量控制。     

河北道地药材北柴胡HPLC-UV指纹图谱研究

目的:建立河北道地药材北柴胡的HPLC-UV指纹图谱分析方法,并与不同产地柴胡药材指纹特征相比较,为科学评价与有效控制柴胡质量提供新方法。方法:采用HPLC-UV法测定了道地北柴胡等21个不同来源的柴胡样品。色谱条件:C18柱,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长203 nm,流速1.0 m l/m in,柱温30℃。结果:建立了北柴胡HPLC-UV指纹图谱共有模式,并对不同产地柴胡药材进行了相似度比较。结论:色谱指纹图谱分析法能简便、快速鉴别和区分不同来源的柴胡药材,为全面控制柴胡药材的质量提供了依据。     

北柴胡植株生长分析

目的：了解北柴胡生长发育规律，为栽培技术制定提供依据。方法：用植物生长分析方法调查各器官数量。结果：北柴胡植株由根、根颈、主茎、基生叶、主茎叶、各级分枝和叶、顶花序和各级侧生花序组成；1、2级分枝干物质占全部分枝的93．8％，3、4级分枝弱小但数量多，根-冠比只有0．19；植株具3—4级侧生花序，以1级和2级为主要构成部分；繁殖器官消耗了全部干物质的38．1％；主根长度只有17．2cm，与侧根的于物质重约各占50％。结论：北柴胡家种时间短，野生性强，很多性状不符合以根为收获物的要求，应加以合理调控和选育。     

北柴胡器官建成与干物质积累规律的研究

目的：了解北柴胡生长发育规律，为栽培措施提供依据。方法：在北柴胡不同发育阶段取样调查。结果：北柴胡生长发育历经出苗期、苗期、拔节期、花果期和休眠期等明显阶段；叶片出现依次为子叶、基生叶和茎枝叶，并不断衰亡；拔节约在1个月内完成；根长在苗期基本定型，7～8月是根径快速增长期；拔节后地上部干物质快速积累；7月中旬至8月中旬，及随后的花果期的9月中旬至10月中旬根干物质分别增加42．4％和94．0％，10月中旬后仍能增加40．1％。结论：可根据北柴胡生长发育的三个关键时期：苗期、拔节期和花果期特点，制定不同的管理技术措施。     

北柴胡移栽试管植株与种子植株中皂苷的动态分析

目的为应用离体快速繁殖技术进行北柴胡优良种质选育提供实验依据。方法应用分光光度法测定北柴胡移栽试管植株不同生长期的根、茎叶中柴胡总皂苷的量,应用柱前衍生化HPLC-UV法测定柴胡皂苷a和d的量,并以同型、同时的种子植株作为对照。结果北柴胡试管植株根、茎叶中柴胡总皂苷及皂苷a和d的量在试管苗阶段最低,在一年生植株中最高,在两年生植株中的营养生长期次高,在花期、果期、枯萎期依次降低;在根中的量远高于茎、叶;引种自山西左权的移栽试管植株的量均高于引种自山西陵川和万荣的类型;移栽试管植株根、茎叶中的量均高于相同类型的种子植株中的量。结论离体快速繁殖是纯化北柴胡种质和提升药材品质、提高药材产量的有效方法;快速繁殖植株具有优良的遗传稳定性,选择综合性状好的种质作为繁殖的起始材料,能够保证后代性状的优良和整齐一致;果期二级花序的种子成熟期为移栽试管植株根的适宜采收期。     

北柴胡快速繁殖及种子萌发条件研究

目的 建立北柴胡的选优育优技术体系,规模化生产北柴胡优质种苗和种子.方法 应用植物组织培养技术分别对种植于山西陵川、万荣及甘肃陇西、陕西商洛等8个地区的优质北柴胡进行快速繁殖;对种植于山西万荣的中柴1号北柴胡种子进行种皮损伤和植物激素处理,比较各种处理对种子萌发率的影响.结果 附加6-BA 1.0mg/L和KT 0.2 mg/L的B5培养基适合于各地北柴胡芽的快速增殖与生长;附加NAA 0.1 mg/L、IBA 0.5 mg/L和DSC 1.0mg/L的1/2MS培养基对北柴胡试管苗的生根有良好的促进作用;北柴胡试管苗的年繁殖系数超过1×108,移栽成活率达94%～97%.植物激素处理对北柴胡种子萌发无明显作用,打磨损伤处理种皮可使种子的萌发率提高20%,并且能大幅度缩短种子的萌发时间.结论 植物组织培养技术是快速、大量繁殖优质北柴胡的有效手段,一定程度的种皮损伤可以促进北柴胡种子的萌发.     

超声提取柴胡挥发油工艺及其GC-MS分析

目的:采用响应面法优选超声提取柴胡挥发油的工艺,并研究柴胡挥发油成分。方法:采用Box-Behnken响应面法设计试验,运用3因素3水平,以柴胡挥发油的得率为响应指标,考察液料比、提取温度、超声时间对得率的影响;对超声提取的挥发油进行GC-MS分析,采用峰面积归一化法,确定各成分的相对含量并进行鉴定。结果:最佳工艺为:料液比1∶16、提取温度51℃、超声时间26 min,经验证此条件下的挥发油得率为14.77%,与理论值14.85%相比差别不大,表明此法较为准确;采用GC-MS分析所得到的挥发油成分中,共鉴定出46种化合物,占总挥发油组分的96.84%。其中相对含量较高的成分为1,2-二甲基环戊烷、甲基环己烷、庚烷等,其中甲基环己烷为含量最高成分。结论:响应面法用于超声提取柴胡挥发油工艺的优选准确、可靠;超声法能较好的应用于柴胡挥发油的提取。