骨髓粒—单系祖细胞集落染色体SCE的制备及正常值初探

介绍骨髓粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）集落姊妹染色单体互换（ＳＣＥ）的制备方法，应用时应注意集落细胞的收集，Ｂｒｄｕ及秋水仙胺浓度和作用时间等问题，为临床细胞遗传学的研究提供了新的手段。本文用本法删定２７例健康成人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ集落染色体ＳＣＥ频率为４．５９±０．６７次／集落细胞，该值可作为正常人分髓ＣＦＵ－ＧＭ集落ＳＣＥ的正常值供临床和实验参考。     

人巨细胞病毒感染对脐血粒-单祖细胞集落染色体SCE的影响

目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对脐血粒-单祖细胞集落(colony forming unit-granulocyte/monocyte,CFU-GM)染色体的影响.方法采用造血祖细胞体外培养和祖细胞集落染色体(sister chromatid exchange,SCE)制备技术,以HCMVAD169为攻击病毒,研究其对定向CFU-GM祖细胞集落染色体SCE率的影响.结果 HCMV感染组CFU-GM集落染色体SCE率较实验对照组和空白对照组明显增高.结论 HCMV可造成CFU-GM集落染色体的损伤.     

人巨细胞病毒感染对脐血粒-单祖细胞生长及SCE的影响

目的探讨HCMV对CFU-GM集落生长及SCE的影响。方法采用造血祖细胞培养技术及集落染色体SCE制备技术,观察HCMV169感染的CFU-GM的产率,大集落所占比例,峰期,维持时间及SCE率。结果HCMV169感染的CFU-GM集落产率及大集落所占比例显著减少,集落维持时间明显缩短,集落SCE率显著提高。结论HCMV在体外能抑制CFU-GM集落生长并对其染色体有损伤。     

造血干细胞集落染色体SCE的制备

造血干细胞集落染色体ＳＣＥ的制备刘文君，何政贤，林桂真，王清文造血干细胞体外培养技术的成功，使血液病的研究进入了一个新阶段，通过对于细胞集落染色体的检查，可在一定程度上揭示干细胞病变［１～３］．作为反映染色体稳定性，检测人类遗传物质损伤、修复、突变较...     

造血祖细胞集落染色体的研究进展

随着造血祖细胞培养技术的发展与完善，近年一些学者进一步研究造血祖细胞集落染色体，以揭示某些血液病及病毒与骨髓衰竭的发病机理。本文就造血祖细胞集落染色体制备及其应用的情况进行综述。一、造血祖细胞集落染色体的制备７０年代初Ｐｉｋｅ和Ｒｏｂｉｎｓｏｎ开始体...     

人正常骨髓CD34~ 造血细胞体外扩增形成粒单系造血祖细胞的能力

CD34 造血细胞以其独特的生物学功能正成为造血调控、造血于细胞移植和基因治疗最理想的靶细胞。本文探讨人正常骨髓CD34 造血细胞在体外扩增形成单个核细胞（MNC）及粒单系集落形成单位（CFU－GM）的能力，采用CIMS－100新型免疫磁性无菌分离术可获得纯度＞90％的CD34 造血细胞，其直接形成CFLJ－GM的能力要较骨髓MNC提高的倍，并且在含EGIIS组合造血生长因子的无基质液培养系统中，CD34 造血细胞在四周内可持续扩增产生大量MNC及CFU－GM，最高分别可达1770倍和48倍，但不同个体问CD34 造血细胞的这种能力差别较大。上述结果提示，CD34 造血细胞在最佳组合HGFs的无基质液培养条件下，能扩增产生大量成熟及晚期造血祖细胞，可以适用于临床治疗的需求，     

人正常骨髓CD34^＋造血细胞体外扩增形成粒单系造血祖细胞 …

ＣＤ３４＾＋造血细胞以其独特的生物学功能正成为造血调控，造血干细胞移植和基因治疗最理想的靶细胞本文探讨人正常骨髓ＣＤ３４＾＋造血细胞在体外扩增形成单个核细胞（ＭＮＣ）及粒单系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的能力，采用ＣＩＭＳ－１００新型免疫磁性无菌分离术可获得纯度〉９０％的ＣＤ３４＾＋造血细胞，其直接形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力要较骨髓ＭＮＣ提高６５倍，并有在含ＥＧＩＩＳ组合造血生长因子的无基质液培养系统     

B淋巴细胞向粒单系祖细胞返祖转化的可能

本文报告了用细胞电泳分离小鼠B淋巴细胞(IBC),在体外不同培养条件中培养,观察它与CFU-Gm生成的关系。在特定的体外培养条件下,表面带Ig标志的B细胞样品中一部分细胞可以产生CFU-Gm集落;而M_(12,4,1)-转化B细胞株和小鼠胸腺细胞则不能。作者设想:已分化而具有Ig表面标志的一少部分B细胞在特定微环境下可能重新表达出造血祖细胞的功能,即返祖。实验又表明,这种返祖性转化是因子依赖性的。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿病人骨髓红系和粒－单系祖细胞的特点

本文采用造血祖细胞体外培养技术观察了阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）病人骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一Ｅ）和粒一单系祖细胞（ＣＦＵ一ＧＭ）的增殖能力；骨髓细胞经酸化ＡＢ型血清处理后的ＢＦＵ一Ｅ，ＣＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一ＧＭ的增殖能力；以及ＢＦＵ一Ｅ、ＣＦＵ一Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）和（ＣＦＵ一ＧＭ对粒一单系集落刺激因子（ＧＭ一ＣＳＦ）的反应能力，发现ＰＮＨ病人骨髓ＢＦＵ一Ｅ，ＣＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一ＧＭ集落数明显低于正常；骨髓细胞经新鲜酸化ＡＢ型血清处理后培养的ＢＦＵ一Ｅ、ＣＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一ＧＭ集落数明显低于经热灭活酸化ＡＢ型血清处理后培养的集落数；以及ＢＦＵ一Ｅ，ＣＦＵ一Ｅ对Ｅｐｏ和ＣＦＵ一ＧＭ对ＧＭ一ＣＳＦ的剂量反应曲线低平。因此认为ＰＮＨ病人骨髓红系和粒一单系祖细胞有以下特点：１．增殖能力降低：２．在酸性条件下对补体的敏感性增加；３．对造血因子的敏感性降低。     

脐带血清对骨髓粒—巨噬细胞集落形成的影响

在骨髓细胞半固体琼脂培养体系中，研究脐带血清（ＣＢｓ）对骨髓粒—巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响，单纯应用ＣＢｓ培养可使骨髓ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为２６．０３７５±１０．２３２７）显著的高于正常成人外周血清（ＰＢｓ）组（ｘ±ｓ为１１．５９１７±３．６０４７；Ｐ＜０．００１）。ＣＢｓ加粒－巨噬细胞刺激因子，ＧＭ－ＣＳＦ组ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为１１９．０７９２±３５．０９９１）是单纯ＣＢｓ组的４．５７倍；而ＰＢｓ加ＧＭＣ－ＳＦ组（ｘ±ｓ为９７．１２５±２６．７５５９）是单纯ＰＢｓ组的８．３８倍。有白细胞介素－６（ＩＬ－６）存在的ＣＢｓ组，ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为３１．９３３３±１０．９１４４）明显的高于单纯ＣＢｓ组（Ｐ＜０．０２）。提示ＣＢｓ中含有较高水平的内源性ＧＭ－ＣＳＦ。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿病人骨髓红系和粒—单系祖细胞的特点

本文采用造血祖细胞体外培养技术观察了阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）病人骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ）和粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）的增殖能力；骨髓细胞经酸化ＡＢ型血清处理后的ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的增殖能力，以及ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）和（ＣＦＵ－ＧＭ对粒－单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的反应能力，发现ＰＮＨ病人骨髓ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ     

登革病毒Ⅱ型对人脐静脉血管内皮细胞通透性的研究

目的 研究登革病毒Ⅱ型(DENV-2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)通透性的影响.方法 DENV-2病毒滴定,DENV-2接种HUVEC单层细胞,用间接免疫荧光法动态观察DENV-2感染HUVEC的情况(30 min,l、3、6、12、24、30、36、42、48、72 h),实时定量荧光PCR方法检测病毒载量,transwell法检测DENV-2对HUVEC通透性的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果 DENV-2对HUVEC通透性的影响30 min时作用最为明显,其次为42 h时.且病毒载量与HUVEC通透性改变呈正相关.透射电镜结果显示有细胞微绒毛脱落,胞质溶解,部分核膜间隙增宽,甚至是细胞核中也存在裂隙,部分线粒体嵴消失甚至空化,线粒体髓样变,包膜不完整.结论 DENV-2对HUVEC通透性有影响,为探究登革病毒的发病机制提供一定的理论依据.

Abstract：

Objective To research Dengue virus type 2 (DENV-2) to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) permeability. Methods The titration of DENV-2 was detected and HUVEC infection DENV-2 layer of cells. At different time points after infection (30 min, 1 h, 3 h, 6 h, 12 h, 30 h,36 h, 24 h, 42 h, 48 h,72 h), the permeability in HUVEC were detected after Dengue virus infection. The virus load in HUVEC was detected by quantitative real-time PCR. And ultrastructure in HUVEC was observed by electron microscope. Results The permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection by time lasting. The most permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection at 30 min and 42 h. And at the same time the virus load were most value in all of time. The results of the cell membrane were changed by electron microscope. The deciduous cell microvillus and dissd endochylema were founded. And some of nuclear membrane blank was wided by Dengue virus. Even the leakage was founded in cell nucleus. The other change included that disappearance mitochondrial and vacuolization crista, elder pith change mitochondria. In addition, the complete of cell membrane were dissolved. Conclusion The permeability of HUVEC was changed by DENV-2. To explore the pathogenesis of Dengue virus provide certain theoretical basis.     

脐血清对培养人造血祖细胞集落生长的影响

目的：研究脐血清对培养人造血祖细胞集落生长的影响。方法：采用半固体细胞培养法。结果：在正常足月胎儿脐血清中有较高粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）活性，单用脐血清作刺激因子来源，在体外进行粒系造血祖细胞培养，可产生１４８１±８８７个粒系集落（ＣＦＵ－Ｇ），而植物血凝素刺激的单个核细胞条件培养液为５９０±２８８个ＣＦＵ－Ｇ，差别非常显著（Ｐ＜０００１）。脐血清组与３０ｎｇｒｈＧ－ＣＳＦ组所产生１５２０±３４５个ＣＦＵ－Ｇ相比，差别无显著（Ｐ＞００５）。并且我们还观察到脐血清组培养随时间延长有较多粒－巨噬细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）生长，有些可出现混合爆式集落。结论：脐血清富含多种造血生长因子，并且Ｇ－ＣＳＦ水平较高     

体外沙利度胺对正常骨髓造血祖细胞集落形成的影响

目的：为了探讨沙利度胺对正常人和多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓造血祖细胞功能的影响及其作用机制。方法：体外用甲基纤维素半固体方法培养经不同浓度沙利胺处理过的正常人和MM患者骨髓GM－CFU、E－CFU、MK－CFU的形成，用ELISA法检测祖细胞悬液IFN－γ、TNF－α水平。结果：当沙利度胺浓度≥200μg/ml或≥100μg/ml时分别对正常人或MM患者GM－CFU的形成有抑制作用；当沙利度胺浓度≥300μg/ml或≥150μg/ml时分别对正常人或MM患者MK－CFU的形成有抑制作用；但10－400μg/ml浓度的沙利度胺对正常人和MM患者的E－CFU的形成均无影响；沙利度胺≥100μg/ml或≥200μg/ml时分别使MM患者和正常人骨髓造血祖细胞分泌的INF－γ水平增高，沙利度胺浓度≥300μg/ml时MM患者TNF－α水平减少。结论：不同浓度的沙利度胺对正常人和MM患者骨髓造血祖细胞的造血功能产生不同的影响，其作用机制可能与沙利度胺增加正常人或MM患者的造血祖功能IFN－γ分泌水平有关。     

肝硬化骨髓微环境与造血祖细胞集落相关性的研究

用电镜观察了11例肝硬化骨髓微环境,同时进行骨髓CFu-E、CFu-GM及CFu-F的培养研究,结果发现肝硬化患者骨髓间质、内皮细胞呈萎缩性改变,CFu-E、CFu-GM及CFu-F三系集落产率均低于对照组(P值均<0.05～0.001),骨髓间质细胞受损与CFu-F产率减低似有平行关系,CFu-E及CFu-GM集落     

克隆的人LAK细胞对骨髓粒单系造血祖细胞体外增殖的抑制作用

本文应用琼脂半固体培养法观察了克隆化的人LAK细胞对骨髓粒单系造血细胞(CFU-GM)增殖的影响。LAK细胞对CFU-GM集落形成有抑制作用:2×10~5/mlLAK细胞与1×10~5/ml骨髓单个核细胞BMMNC预孵育0.5小时可使集落数减少43.8%(P<0.01),LAK与BMMNC预孵育4小时对CFUGM的抑制更为明显,0.5×10~5/ml LAK细胞即可使集落数减少58.8%(P<0.01),随LAK浓度加大抑制效应增强;当LAK与BMMNC在双层培养体系中不接触时,高浓度(4×10~5/ml)亦可表现集落抑制活性。抑制率28.8%(P<0.05)。自体LAK细胞对CFU-GM的抑制效应与异体相比无显著差异(P>0.20)。作者认为LAK细胞对CFU-GM的抑制作用为细胞直接作用与分泌可溶性因子介导的双重效应。     

Rituximab减少SLE患者B淋巴细胞对骨髓粒-巨噬细胞集落的抑制作用

目的 :了解不同浓度Rituximab对SLE患者B淋巴细胞、对正常人及SLE患者骨髓粒 巨噬细胞集落形成单位(GM CFU)抑制作用的影响及其机制。方法 :体外用终浓度为 0 1、0 5、1、3、6、9μg ml的Rituximab与SLE患者B淋巴细胞共同加入SLE患者及正常人骨髓GM CFU的培养体系中 ,观察它们对SLE患者及正常人骨髓GM CFU形成的影响 ,用流式细胞仪检测经不同浓度Rituximab处理前后SLE患者B淋巴细胞上的CD2 0表达水平 ,逆转录PCR法检测与终浓度为 9μg mlRitux imab共同孵育前后SLE患者B淋巴细胞的IL 10mRNA与β actin的比值。 结果 :加入终浓度为 0 1、0 5、1、3、6、9μg ml的Ritux imab和SLE患者B淋巴细胞后 ,正常人骨髓GM CFU产率分别为 180± 37、2 0 0± 5 4、2 2 6± 4 5、2 4 8± 71、2 5 1± 5 6、2 5 8± 6 6个 10 5细胞 ,与不加Rituximab和SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM CFU产率 (2 5 6± 80个 10 5细胞 )比较 ,前二组P <0 0 5 ,后四组P >0 0 5 ,与仅加入SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM CFU产率 (199± 92个 10 5细胞 )对比 ,前二组P >0 0 5 ,后四组P <0 0 5。加入以上 6种相同浓度的Rituximab和SLE患者B淋巴细胞后 ,SLE患者骨髓GM CFU产率分别为 119± 71、116±78、177± 6 8、2 0 2± 4 9、