水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对小鼠巨噬细胞一氧化氮及活性氧生成的抑制作用

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)生成的影响。方法健康6～8周龄昆明种小鼠,腹腔提取巨噬细胞,培养成活后调细胞水平至2×108L-1,空白对照组加入等量的9g/L盐水,H2O2组加入H2O2,使其终质量浓度为1mmol/L刺激细胞30min,SPC干预组加入不同水平SPC干预细胞2h后加入终质量浓度为1mmol/LH2O2刺激30min。免疫细胞化学法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,Griess法测定上清液NO的生成量,荧光探针DCFH-DA法测定巨噬细胞内ROS生成。结果H2O2组上清液NO2-水平(相当于NO累积生成量)显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组NO2-水平降低,即NO表达减少,且呈质量浓度依赖性降低(P<0.05)。各组细胞质内iNOS表达同上清液NO的生成量呈现相应的变化趋势。H2O2组小鼠巨噬细胞内ROS显著升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),不同水平SPC预先干预2h后,ROS生成量呈质量浓度依赖性降低(P<0.01)。结论SPC可能是通过抑制iNOS表达来抑制H2O2诱导的小鼠巨噬细胞内NO的生成,另外SPC也可抑制小鼠巨噬细胞内ROS生成,从而减轻组织细胞的氧化损伤。     

新生小鼠轮状病毒腹泻诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达及其意义

目的研究新生小鼠轮状病毒(rotavirus,RV)腹泻小肠诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOS mRNA)的表达,探讨其在RV腹泻发病机制中的作用。方法48只3 d新生昆明小鼠随机分为实验组(32只)与对照组(16只),实验组经口灌入0.2 ml(2×108 PFU)含RV培养液,对照组灌入0.2 ml不含病毒的培养液,分别于接种后相应时间点观察腹泻情况并评分。ELISA方法检测粪便RV抗原,并取肠黏膜观察病理学变化,采用实时荧光PCR检测实验组iNOS mRNA表达变化,对腹泻程度及iNOS表达进行相关性分析。结果实验组小鼠接种病毒后24 h均出现腹泻,在接种后第4天达高峰,第10天完全恢复正常,粪便ELISA检测RV抗原均为阳性,小肠病理改变为上皮细胞空泡样变性;小肠iNOS mRNA的表达显著增强,乳鼠肠iNOS mRNA的表达变化趋势与腹泻发生程度有相关性(r=0.708,P0.05)。对照组未出现腹泻,病理改变不明显。结论新生小鼠RV腹泻小肠iNOS mRNA表达增强,乳鼠肠iNOS mRNA的表达变化与腹泻发生程度存在正相关,提示其在介导RV腹泻中发挥重要作用。     

静脉注射丙种球蛋白对过敏性紫癜患儿血清诱导血管内皮细胞表达TNF-α、诱导型一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

目的 探讨急性期过敏性紫癜(HSP)患儿血清对血管内皮细胞表达TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和一氧化氮(NO)的影响,以及静脉注射丙种球蛋白(IVIG)对上述各炎性因子表达过程的调节作用.方法 人脐静脉内皮细胞(ECV304)培养分为单独培养组、正常血清组、HSP血清组、HSP血清加IVIG组.分别应用RT-PCR法测定各组TNF-α、iNOS mRNA表达量,免疫印迹法测定各组TNF-α、iNOS 蛋白的表达量,硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清中NO水平.结果 HSP血清组TNF-α、iNOS mRNA 和蛋白表达量,以及细胞上清中NO 表达量均较单独培养组和正常血清组明显升高(Pa<0.01);而HSP血清加IVIG组TNF-α、iNOS mRNA 表达量及TNF-α、iNOS蛋白表达量,细胞上清中NO 表达量均较HSP血清组明显降低(Pa<0.01).结论 急性期HSP患儿血清能诱导血管内皮细胞TNF-α、iNOS mRNA和蛋白表达量,以及细胞上清中NO表达增加,可能参与HSP患儿急性期血管损伤发生;IVIG可下调急性期HSP患儿血清诱导血管内皮细胞TNF-α、iNOS和NO的表达,提示IVIG防治血管损伤的机制可能与其抑制血管内皮细胞表达TNF-α、iNOS、NO有关.     

钙敏感受体对持续性肺动脉高压新生小鼠内皮型一氧化氮合酶及一氧化氮的影响

目的 探讨钙敏感受体（CaSR）在持续性肺动脉高压（PPH）新生小鼠模型中对内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达及一氧化氮（NO）浓度的影响。方法 将80只新生C57BL/6小鼠随机分为对照组、PPH组、激动剂组和抑制剂组。对照组小鼠暴露于空气中,PPH组、激动剂组和抑制剂组小鼠暴露于12%的氧浓度中。激动剂组和抑制剂组分别腹腔注射CaSR激动剂（GdCl₃）16 mg/kg、CaSR抑制剂（NPS2390）1 mg/kg,PPH组和对照组以生理盐水替代,共14 d。采用苏木精-伊红染色检测各组小鼠肺泡和肺血管变化;采用Westernblot、qRT-PCR和免疫组化检测各组小鼠肺组织中eNOS蛋白、mRNA的表达;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆中脑利钠肽（BNP）及NO的含量。结果 与对照组相比,PPH组和激动剂组肺泡平均内衬间隔、肺小动脉血管壁厚度、右心室与左心室壁厚度比（RV/LV）及BNP浓度均明显增大,径向肺泡计数明显减少（P < 0.05）;除RV/LV外,上述指标在抑制剂组均较PPH组和激动剂组有所改善（P < 0.05）。与对照组相比,eNOS蛋白、mRNA表达量及NO浓度在PPH组明显增高,在激动剂组中表达水平进一步增加,而在抑制剂组中表达减少（P < 0.05）。结论 CaSR可能通过影响eNOS的表达和NO浓度在新生小鼠PPH发病中发挥重要作用。     

姜黄素对哮喘小鼠Nrf2及HO-1的含量变化与表达的影响

目的 了解姜黄素对哮喘小鼠核因子相关因子2(nuclear factorerythroid-2-related factor 2,Nrf2)及血红素氧化合酶(HO-1)的含量变化与表达的影响.方法 将45只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组及姜黄素干预哮喘小鼠.应用免疫荧光检测各组小鼠肺组织Nrf2及HO-1的表达;应用Western blot方法检测各组小鼠肺组织Nrf2及HO-1的蛋白含量;应用EMSA方法测定各组小鼠肺组织Nrf2与ARE的结合活力.结果 免疫荧光检测显示姜黄素干预组肺组织较哮喘组及正常对照组Nrf2及HO-1的表达均增高;各组小鼠肺组织胞浆内Nrf2的蛋白含量无明显差异(P＞0.05),姜黄素干预组肺组织胞核内Nrf2及HO-1蛋白含量较其余两组明显增高,差异有统计学意义(Nrf2,P＜0.05;HO-1,P＜0.01).姜黄素干预组小鼠肺组织Nrf2-ARE的结合活力明显高于哮喘组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素可以增加哮喘小鼠体内Nrf2及HO-1的蛋白含量,减轻哮喘.     

诱导型一氧化氮合酶和缺氧缺血脑损伤

缺氧缺血可导致严重的神经系统疾病,如脑卒中、新生儿缺氧缺血性脑病。诱导型一氧化氮合酶在缺氧、缺血过程中被诱导表达,产生过量一氧化氮,导致神经系统的炎症反应及神经元死亡,加重神经损伤。抑制诱导型一氧化氮合酶表达在体内体外实验及临床应用中显示了一定的神经保护作用。该文综述了诱导型一氧化氮合酶在中枢神经系统中的表达及与缺氧缺血脑损伤的相关性,展望了诱导型一氧化氮合酶抑制剂作为缺氧缺血脑损伤治疗策略的前景。     

地塞米松对小鼠星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察内毒素导对体外培养的大鼠星形胶质细胞一氧化氮（ＮＯ）及其诱导一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化,以及地塞米松（ＤＥＸ）对其的影响。方法 采用Ｒｒｉｅｓｓ法和半定量反录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法,对正常、内毒素诱导后及加入ＤＥＸ的内毒素诱导后大鼠星形交质细胞ＮＯ及其ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达进行检测。结果（１）内毒素诱生形胶质细胞ＮＯ产生增另,且呈内毒素剂量和时间依赖性;（２）ＤＥ     

内源性一氧化氮合酶/一氧化氮体系对反复高热惊厥脑损伤的影响

目的 研究神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在反复高热惊厥(FS)中的变化规律，探讨NOS／一氧化氮(NO)体系对反复FS脑损伤的影响．方法 采用热水浴诱导大鼠FS。实验分两步进行。时第1批大鼠，采用定量RT-PCR方法检测海马nNOS cDNA含量，Western blot检测nNOS蛋白表达；对第2批大鼠，记录惊厥强度。潜伏期、持续时间及惊厥时肛温，HE染色观察海马神经元形态学改变。结果 反复FS后海马nNOS cDNA含量明显高于正常对照组和高热对照组，同时nNOS蛋白表达也出现一致性增高；随惊厥次数的增加。FS组大鼠惊厥潜伏期呈波动状，惊厥持续时间呈延长趋势，NOS抑制剂的干预使惊厥潜伏期呈延长趋势，惊厥持续时间的延长趋势较FS组降低。惊厥强度和惊厥时肛温在两组间无统计学意义；反复FS后，光镜下可观察到海马神经元出现组织学改变，抑制剂减轻了神经元损伤。结论 反复FS诱导nNOS的基因表达，NOS／NO体系的上调可能参与反复FS脑损伤发展。     

窒息对新生大鼠肾组织一氧化氮和一氧化氮合酶含量的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)在窒息后肾损伤中的作用。方法Wistar新生大鼠48只,随机分为对照组、窒息后复氧2h组、24h组和48h组,制备常压窒息模型。窒息30min后在上述时间点处死动物,测定肾脏NOS和NO含量,并在光镜下对肾小管损伤程度进行评分。结果窒息复氧2h肾脏NOS和NO即显著升高,持续时间达24h,肾小管评分在窒息后24h和48h明显增高。结论NOS和NO在新生大鼠窒息后的肾损伤中起重要作用。     

自发性高血压大鼠主动脉中一氧化氮/一氧化氮合酶体系的变化

目的 探讨自发性高血压大鼠主动脉中一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的变化.方法 随机选取健康雄性4周龄Wistar大鼠7只和4周龄自发性高血压大鼠7只,分别作为正常对照组及高血压组.4周龄及12周龄时检测二组大鼠血压.8周龄时取2组大鼠主动脉组织,采用硝酸还原酶法测定其NO水平,Western blot法检查其内皮型NOS(eNOS)以及诱导型NOS(iNOS)蛋白水平.用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析.结果 12周龄时高血压组大鼠血压明显高于正常对照组[(24.1±0 5) kPa vs (15.9±0.3) kPa](P<0.05).12周龄时高血压组大鼠主动脉组织中NO水平较正常对照组主动脉中NO水平低[(7.2±1 7) μmol·(g prot)-1 vs (17.1±5.3) μmol·(g prot)-1](P<0.05).12周龄时高血压组大鼠主动脉中eNOS蛋白表达量与正常对照组大鼠比较差异无统计学意义[(0.5±0.2) vs (0.5±0.3)](P>0.05);12周龄时高血压组大鼠主动脉中iNOS蛋白表达量显著低于正常对照组大鼠[(0.9±0.3) vs (1.5±0.5)](P<0.05).结论 自发性高血压大鼠主动脉中NO/NOS体系下调参与高血压的形成过程.     

一氧化氮、一氧化氮合成酶在免疫性血管炎致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)在免疫性血管炎致动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法4周龄雄性大耳兔24只分为3组。A组:基础饲料喂养对照组8只;B组:胆固醇喂饲组8只;C组:10%牛血清清蛋白注射并喂饲胆固醇饲料8只。实验满4周,A、B、C3组分别取心脏做主动脉组织病理学检查,主动脉血管弹力纤维染色及NOS组织化学染色,测血清NO和血浆血管内皮素(ET)含量。结果B组出现轻度AS,内弹力膜不完整;C组出现严重AS,内弹力膜断裂。3组NOS均呈阳性着色反应,C组阳性着色区域较A、B组明显扩大。C组与B组比较,其脂质斑块面积(PA)增大、小动脉粥样硬化发生率(IA)增高、NOS平均光密度(A)增高,血浆ET含量升高,血清NO含量降低,均有显著差异(P<0.01)。结论免疫性血管炎为AS发病的危险因素,NO/ET平衡失调,NOS活性异常可能参与免疫性血管炎致AS形成的病理过程。     

缺血再灌注大鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶表达的意义

目的观察缺血及缺血再灌注(IR)大鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化的规律。方法制作大鼠肾脏缺血及IR模型,不同时间摘取肾脏,免疫组织化学法检测iNOS表达变化。HE染色观察肾脏损伤程度。结果缺血时及IR后iNOS表达均明显增强(P<0.05),且随时间呈一定的变化规律,呈先升高后下降趋势,24 h达峰值,72 h时降至2 h水平。结论肾脏缺血早期iNOS即起损伤作用,并于再灌注后加重损伤。     

促红细胞生成素对缺氧缺血新生鼠脑匀浆一氧化氮及血浆内皮素的影响

目的探讨体外注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠缺氧缺血后脑组织一氧化氮(NO)和NO合成酶(NOS)及血浆内皮素(ET)水平的影响,阐明其对缺氧缺血(HI)新生动物神经保护作用的机制。方法将7日龄SD大鼠制备缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型及rhEPO治疗模型,将假手术组作对照。测定各组新生鼠HI后6 h脑组织匀浆NO和NOS含量以及血浆ET水平。结果HIBD组在HI后6 h脑组织NO、NOS及血浆ET均升高(P<0.05),rhEPO组脑组织NO、NOS显著降低水平(P<0.05),而血浆ET含量无明显改变。结论外源性rhEPO可通过减少NO的过量生成而对HIBD后的脑组织起到保护作用。     

不同孕期大鼠铅暴露胎盘一氧化氮/一氧化氮合酶系统与其超微结构改变的相关性

目的探讨不同孕期大鼠血铅水平与胎盘一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)与胎盘绒毛超微结构的关系。方法用硝酸还原酶法、NOS测定试剂盒测定46例(分为A、B、C组)不同孕期铅暴露和17例对照组孕鼠胎盘匀浆NO、NOS水平,并对受试胎盘组织切片进行电镜检查。结果A、B组NO及NOS高于正常对照组(P均<0.01);C组NO及NOS与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。阶段铅暴露组,电镜显示胎盘结构代偿增生或轻度损伤表现。全程铅暴露组血铅水平最高,胎盘结构呈现失代偿改变。结论孕期铅暴露血铅水平、胎盘局部NO/NOS水平变化与胎盘发生病理改变间关系密切,可能在围生期铅毒性发生发展中起重要作用。     

内毒素对幼鼠肺等组织一氧化氮合酶免疫活性的影响

目的探讨内毒素（LPS）对幼龄大鼠肺、小肠和脾内诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的影响。方法用免疫组织化学方法显示iNOS免疫活性表达。结果LPS可增力。肺、小肠和脾内巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞iNOS的表达。结论iNOS在不同细胞和器官的表达与注射LPS后的病理变化密切相关。     

姜黄素联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎小鼠的疗效

目的 探讨姜黄素联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎小鼠的疗效及作用机制.方法 50只小鼠分成5组:正常组、模型组、姜黄素联合美沙拉嗪治疗组、姜黄素治疗组和美沙拉嗪治疗组,采用传统的葡聚糖酸钠法制备小鼠溃疡性结肠炎模型.自造模成功次日,姜黄素联合美沙拉嗪治疗组予姜黄素灌肠及美沙拉嗪灌胃治疗;姜黄素治疗组仅予姜黄素灌肠治疗;美沙拉嗪治疗组予美沙拉嗪灌胃治疗;正常组及模型组均予9 g·L-1盐水灌胃.以上均为每日1次,共10 d.给药10 d后,观察其结肠病理组织学变化,并采用流式细胞术检测其结肠上皮细胞凋亡率,采用ELISA法测定小鼠血清IL-2、IL-10水平.结果 姜黄素联合美沙拉嗪治疗组结肠指数、结肠损伤评分、病理组织学评分及细胞凋亡率较模型组均明显下降(Pa<0.01).与姜黄素治疗组和美沙拉嗪治疗组比较,姜黄素联合美沙拉嗪治疗组结肠损伤评分、病理组织学评分及细胞凋亡率有所下降,且差异均有统计学意义(Pa<0.05);与模型组比较,姜黄素联合美沙拉嗪治疗组、姜黄素治疗组和美沙拉嗪治疗组血清IL-10水平均显著下降,血清IL-2水平显著升高(Pa<0.01).与姜黄素治疗组和美沙拉嗪治疗组比较,姜黄素联合美沙拉嗪治疗组血清IL-10水平显著下降,血清IL-2水平显著升高(Pa<0.05).结论 姜黄素联合美沙拉嗪治疗小鼠溃疡性结肠炎,效果较单用美沙拉嗪好,姜黄素联合美沙拉嗪治疗小鼠溃疡性结肠炎在降低IL-10、升高IL-2水平方面较单用美沙拉嗪显著.     

孟鲁司特对学龄前哮喘儿童血清一氧化氮水平的影响

目的探讨孟鲁司特对学龄前哮喘患儿血清一氧化氮(NO)水平的影响。方法对44例首次符合哮喘诊断标准的学龄前患儿予孟鲁司特治疗4周(4 mg/d,1次/d,)。分别在治疗前、治疗1周、治疗结束后进行3次检查,测定血清NO2-/NO3-水平,并与健康对照组比较。结果哮喘患儿治疗前血清NO2-/NO3-水平明显高于对照组(P<0.01);孟鲁司特治疗1周后哮喘患儿血清NO2-/NO3-水平与治疗前相比无显著差异,但明显高于对照组;治疗4周后其血清NO2-/NO3-水平明显下降,与对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论孟鲁司特治疗学龄前儿童哮喘可降低血清NO2-/NO3-水平,血清NO水平可作为评价哮喘儿童呼吸道炎症的重要指标。