血管内皮生长因子和PCNA与结直肠癌淋巴结转移的关系

实体肿瘤的进行性生长与肿瘤血管的生成密切相关,结直肠癌淋巴结转移是其主要的转移途径.我们采用免疫组织化学技术检测结直肠癌标本中血管内皮生长因子和增殖细胞核抗原表达,观察它们与淋巴结转移的关系,为临床治疗方案的选择及判定预后提供参考依据.     

血管内皮生长因子165转染骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白的表达

背景：血管内皮生长因子是一种有效的血管形成和通透性诱导因子,其中在体内以血管内皮生长因子165和血管内皮生长因子121表达为主,具有强烈的促血管新生作用。目的：观察以血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞,继而分化为血管内皮细胞的可行性。方法：分离提取50gSD大鼠骨髓间充质干细胞,采用流式细胞仪鉴定,将携有血管内皮生长因子165基因的质粒pGLV．EFla,采用慢病毒转染骨髓间充质干细胞,转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果与结论：转染后12h可见细胞内有绿色荧光蛋白表达,48h后表达增多,72h后达到高峰,其后部分细胞荧光开始减退。结果证明血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞内有绿色荧光蛋白表达,提示细胞转染成功,骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性。     

结直肠癌中VEGF-C与TAM表达及临床意义

目的探讨结直肠癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)定量的关系及在淋巴结转移过程中的作用和可能机制.方法采用免疫组织化学SP法检测50例结直肠癌组织及正常黏膜组织中VEGF-C蛋白的表达,并在光镜下进行巨噬细胞计数.结果在结直肠癌组织中,VEGF-C阳性表达率为62%(31/50),显著高于正常肠黏膜的表达(P<0.01);TAM计数平均为(29.42±6.11)个/HP,显著高于正常肠黏膜(P<0.01).结直肠癌VEGF-C的表达和TAM计数均与淋巴结转移密切相关(P<0.01),与Dukes分期显著相关(P<0.01),而与病理分级无关(P>0.05).VEGF-C的表达和TAM计数呈正相关(rs=0.83,P<0.05).结论在结直肠癌组织中VEGF-C的表达和TAM浸润有关,两者在淋巴结转移中有协同作用,联合检测VEGF-C及TAM为评估结直肠癌预后提供了重要的参考指标.     

hVEGF165在兔骨髓间充质干细胞中的表达

目的培养和鉴定兔骨髓间充质于细胞，基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞，以流式细胞仪检测其表面抗原（CD29、CD44、CD45、HLA—DR）的表达。通过腺病毒载体转染hVEGF165后，采用RT—PCR、Western blot法检测hVEGF165在细胞中的表达。结果通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞，RT—PCR法、Western blot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。结论成功培养兔体外骨髓间充质干细胞，基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。     

血清肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子与结直肠癌的相关性分析

目的探讨结直肠癌患者术前血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)及血管内皮生长因子(VEGF)水平与直肠癌临床及病理特征的相关性。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测纳入研究对象血清TNF-α,VEGF水平,比较结直肠癌患者与健康对照人群之间差异;分析TNF-α、VEGF与结直肠癌患者临床及病理特征关系。结直肠癌组患者与健康对照组的血清细胞因子水平比较采用Mann-Whitney U检验,细胞因子与临床病理特征的相关性分析采用Mann-Whitney U和Knlskal-Wallis H方法。结果结直肠癌组和健康对照组血清VEGF表达水平差异无统计学意义(P>0.05),结直肠癌组血清TNF-α表达水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。肿瘤直径<5 cm患者血清VEGF表达水平低于直径≥5 cm患者,TNF-α表达水平高于直径≥5 cm患者(P<0.001)。结论结直肠癌患者术前血清TNF-α及VEGF水平对结直肠癌的诊断及肿瘤大小预测具有一定的临床价值。     

不同缺氧状态下骨髓间充质干细胞表达血管内皮生长因子的差异

背景:骨髓间充质干细胞在植入心肌缺血,梗死区域后,面临缺氧缺血微环境,其如何通过旁分泌细胞因子来发挥重建侧支微循环、修复心肌的作用,是目前存在争论的焦点之一.目的:探讨骨髓间充质干细胞在不同时程缺氧环境下血管内皮生长因子的表达规律.设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-03/1 1在南昌大学第二附属医院分子医学实验中心完成.材料:清洁级新西兰大白兔2只,由南昌大学医学院实验动物中心提供.方法:常规差速贴壁法分离培养兔骨髓间充质干细胞.细胞缺氧微环境在AnaeroPack密闭方盒中产生,盒中置入一次性缺氧催化袋GENbox anaer(可吸收O2,产生CO2),指示条监测氧的耗竭,根据缺氧培养时程分为缺氧0,6,12,24 h组.主要观察指标:RT-PCR法检测血管内皮生长因子mRNA的表达,Western Blot法检测血管内皮生长因子蛋白的表达.结果:血管内皮生长因子mRNA及蛋白的表达水平均为缺氧0 h组<6 h组<12 h组<24 h组(P<0.01).结论:缺氧24 h以内的培养环境下,骨髓间充质干细胞表达血管内皮生长因子的水平呈缺氧时程依赖性增加.     

骨髓间充质干细胞对慢性肾衰竭大鼠的修复作用

目的探讨经尾静脉移植骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对腺嘌呤所致慢性肾衰竭(CRF)大鼠的修复作用。方法经密度梯度离心法结合贴壁筛选法于体外分离培养并纯化BM-MSCs。36只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、CRF组、BM-MSCs移植组,每组12只。采用腺嘌呤200 mg·kg-1·d-1灌胃法制作大鼠CRF模型。造模成功24 h,正常对照组和CRF组经尾静脉注射1 ml磷酸盐缓冲液(PBS),BM-MSCs移植组经尾静脉注射1×106个BM-MSCs。8周后采血检测各组大鼠的肾功能,收集肾组织称重,计算大鼠的肾脏系数,并用JG12免疫组化检测肾小球毛细血管密度,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血管内皮生长因子(VEGF)的含量,并比较三组间各指标的差异。结果移植BM-MSCs 8周后,BM-MSCs移植组的肾脏系数较CRF组明显降低(0.99±0.10 vs.1.32±0.20,P=0.019)。BM-MSCs移植组尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)均较CRF组降低[BUN:(11.23±1.45)mmol/L vs.(14.25±1.23)mmol/L,P=0.033;SCr:(122.45±15.37)μmol/L vs.(183.33±41.66)μmol/L,P=0.028]。CRF组肾小球中JG12表达较正常对照组显著降低(33.85±2.28 vs.66.93±3.98,P<0.001),移植BM-MSCs后肾小球中JG12表达有所增加(50.84±1.29vs.33.85±2.28,P<0.001),血清VEGF的含量升高[(86.55±5.18)pg/ml vs.(55.74±2.74)pg/ml,P<0.001]。结论腺嘌呤所致CRF大鼠移植BM-MSCs后,肾小球毛细血管密度增加,肾功能改善;其作用可能与其旁分泌促血管生成因子VEGF有关。     

间充质干细胞与自身免疫病

间充质干细胞（MSCs）是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞.MSCs具有取材容易、易扩增、高遗传稳定、具有多向分化潜力以及无移植免疫排斥反应等特征.由于MSCs所具有的以上生物学特性,近年来一直是研究者关注的热点.该文就MSCs特点和移植治疗自身免疫病方面研究进展进行综述.     

比较VEGF及其受体KDR在结直肠腺瘤和腺癌中的表达及与预后的关系

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体KDR在结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达和临床病理的关系,了解VEGF和KDR的表达与预后的关系。方法选择结直肠腺瘤和结直肠腺癌组织标本各100例,采用免疫组织化学染色法检测VEGF和KDR在结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达情况,分析VEGF及KDR与各临床病理因素及预后之间的关系。结果VEGF和KDR在结直肠腺癌组中的阳性表达明显高于结直肠腺瘤组,二者表达差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGF和KDR在结直肠腺癌组织中的阳性表达与肿瘤大小、转移情况、浸润深度相关,差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGF和KDR在结直肠腺瘤组织中的表达与增生程度相关,差异有统计学意义（P〈0．05）;结直肠腺癌患者的Kaplan-Meier生存曲线显示,VEGF阳性表达较VEGF阴性表达术后生存率低（P〈0．01）,KDR表达与患者术后生存率差异无统计学意义（P〉0．01）。结论结直肠腺癌组织中VEGF和KDR的表达与肿瘤大小、转移情况和浸润深度密切相关,VEGF阳性表达较VEGF阴性表达者术后生存率低。VEGF和KDR在结直肠腺瘤中的表达与增生程度存在相关性。     

骨髓间充质干细胞旁分泌作用与脑缺血后的细胞凋亡

背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血的机制之一是骨髓间充质干细胞的旁分泌作用,而目前对于这一机制的研究报道较少.目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对脑缺血后细胞凋亡的抑制作用并探索相关机制.方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠大脑中动脉缺血模型.24只SD大鼠随机数字表法分为4组,每组6只.细胞移植给药组:大鼠纹状体内移植骨髓间充质干细胞后给予ERK1/2抑制剂U0126;非移植给药组:注射等量的PBS后给予U0126;细胞移植对照组:移植骨髓间充质干细胞后给予溶剂对照;非移植对照组:注射等量的PBS后给予溶剂对照.7 d后通过Western blot检测血管内皮细胞生长因子、磷酸化ERK1/2蛋白的表达;TUNEL染色检测梗死区周围及皮质区细胞凋亡情况.结果与结论:细胞移植组较非移植组大鼠纹状体内血管内皮细胞生长因子蛋白的表达明显增高,磷酸化ERK1/2表达增强,细胞凋亡数明显减少;经U0126处理后,血管内皮细胞生长因子的表达没有变化,而随着磷酸化ERK1/2的表达受到抑制,细胞凋亡数明显增高.提示骨髓间充质干细胞在大脑纹状体内可以旁分泌血管内皮细胞生长因子,并通过激活ERK1/2抑制了脑梗死区细胞的凋亡.     

携血管内皮生长因子基因骨髓间充质干细胞治疗缺血性疾病的研究进展

缺血性疾病严重威胁人类的健康,尤其是因弥漫性血管病变、远端动脉流出道差、体质差无法耐受手术者,目前临床治疗方法疗效有限,严重影响患者生活质量。治疗性血管新生疗法为此类疾病患者带来了希望。本文就携血管内皮生长因子基因骨髓间充质干细胞治疗缺血性疾病的研究进展进行综述。     

骨髓间充质干细胞对衰老心脏血管内皮生长因子表达的影响

背景：骨髓间充质干细胞分泌的血管内皮生长因子可能对心脏衰老有治疗作用,但这一作用是否与其能否归巢到心脏有关呢？目的：分析骨髓间充质干细胞对衰老心脏的影响。方法：取大鼠骨髓间充质干细胞。40只大鼠随机数字表法均分为正常组、造模组、治疗组和荧光标记剂组。后3组皮下注射D-半乳糖建立衰老心脏模型,后2组造模后尾静脉注射未标记和经羧基荧光素乙酰乙酸标记后的骨髓间充质干细胞;观察细胞是否定位于心脏、心脏组织各因子的表达。结果与结论：骨髓间充质干细胞能够归巢到衰老心脏;与模型组比较,骨髓间充质干细胞治疗后能够使血清与心脏中超氧化物歧化酶活性均明显增高、丙二醛含量显著降低（P〈0.05）、心脏组织血管内皮生长因子表达升高（P〈0.05）;说明骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子可能是其改善衰老心脏的机制之一。     

兔骨髓间充质干细胞向成骨分化对血管内皮细胞形成的可能影响

背景：种子细胞的成骨功能及局部血管形成是骨组织工程修复重要影响因素。目的：体外研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)诱导培养分化为成骨细胞的功能表现及血管内皮生长因子(vascular endothelia gmwth factor，VEGF)的表达。探讨MSCs向成骨分化及对血管内皮细胞形成的可能影响。设计：以细胞为研究对象，单一样本研究，重复观察测量。单位：一所大学组织胚胎学教研室。材料：本实验于2002-03／12在广东医学院组织胚胎学教研室完成。对象为兔骨髓间充质干细胞。方法：分离、培养新生兔骨髓间充质干细胞，用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养液诱导MSCs向成骨细胞分化，观察诱导细胞碱性磷酸酶(ALP)染色、钙化结节形成以及VEGF的表达。主要观察指标：①细胞形态学观察。②培养细胞的成骨分化鉴定。③诱导培养的成骨细胞VEGF表达。结果：MSCs诱导培养后，细胞ALP呈强阳性染色，形成矿化结节，且VEGF表达增强，其灰度值为132．3&;#177;4．6，与MSCs的VEGF表达灰度值(148．5&;#177;5．3)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：兔MSCs经诱导可分化为成骨细胞，且VEGF表达增强，可能参与内皮细胞的形成。     

环氧合酶-2与血管内皮生长因子-C共表达在大肠癌患者淋巴结转移中的作用

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在大肠癌组织中的共同表达与患者淋巴结转移等预后因素之间的关系。方法:运用免疫组化方法检测54例大肠癌组织中COX-2的表达,同时检测VEGF-C的表达状况。结果:COX-2在大肠癌中的阳性表达率为72.2%(39/54),在伴有淋巴结转移的大肠腺癌中,COX-2阳性表达率为87.5%(21/24),转移组与非转移组相比较差异有显著性(P<0.05);COX-2蛋白表达还与浸润深度、Duke′s分期有关(P<0.05)。VEGF-C蛋白在大肠癌中的阳性表达率为64.8%(35/54),在伴有淋巴结转移的大肠腺癌中,VEGF-C的阳性表达率为91.7%(22/24),转移组与非转移组相比较差异有显著性(P<0.05);COX-2与VEGF-C表达之间存在明显关系(P<0.01);VEGF-C表达与浸润深度、Duke′s分期有相关(P<0.05),与分化程度无关(P>0.05)。结论:COX-2蛋白与VEGF-C共表达可增加大肠癌局部侵袭和淋巴结转移能力,其检测有助于大肠癌恶性程度评价及临床预后的判断。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的能力

目的：研究绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchvmal stem celis，MSCs)体外扩增及其向内皮细胞定向分化能力，为血管组织工程在体研究提供实验依据。方法：实验于2003—10／2004—10在第三军医大学基础部解剖学教研室完成。无菌条件下采集绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓，用直接贴壁法获得小鼠MSCs，然后以血管内皮生长因子(vascular endothelial growth faclor，vEGF)进行诱导分化，最后对扩增的细胞特征进行八因子(Willbrand factor，vWF)免疫荧光鉴定观察。结果：MSCs每扩增一代，细胞数量增加4～8倍，7．0&;#215;10^3个原代MSCs体外扩增3代即获得1．4&;#215;10^8个细胞。在70％～80％融合时呈现“铺路石”样形态，说明绿色荧光蛋白转基因小鼠MSCs在体外的培养扩增条件与一般小鼠相同。添加VEGF诱导2周后，以免疫荧光法检测细胞的vWF的表达发现，诱导组的vWF呈阳性表达，对照组vWF表达呈阴性。结论：绿色荧光蛋白转基因小鼠MSCs在体外的培养扩增能力强，在vEGF作用下可以向内皮细胞转化。     

生长因子及骨髓间充质干细胞与肺再血管化修复烟熏大鼠肺气肿模型

背景:作者以往研究初步证明在单纯使用胰蛋白酶制作的大鼠肺气肿模型上骨髓间充质干细胞可以归巢到病损肺组织,并参与肺血管形成促进肺组织修复.碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子同样具有强大的促进血管新生的作用.目的:观察碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子、骨髓间充质干细胞对肺气肿模型大鼠肺毛细血管再生和肺气肿病理修复的影响.方法:除正常对照组外,其余5组大鼠均采用烟熏加气管内一次性滴注猪胰弹性蛋白酶法建立肺气肿模型.成功造模后,碱性成纤维细胞生长因子组气管内注入400 U碱性成纤维细胞生长因子,血管内皮生长因子组气管内注入2 μg血管内皮生长因子,1次,周,共3次;单纯细胞移植组于尾静脉注入4×10~9L~(_1).骨髓间充质干细胞悬液1 mL;血管内皮生长因子+细胞移植组气管内注入血管内皮生长因子的同时,尾静脉注入骨髓间充质干细胞:模型对照组、正常对照组给予相同体积的生理盐水.干预4周后行动脉血气分析,观察肺组织病理改变及形态学指标变化,免疫组化法检测肺组织CD34~+的表达.结果与结论:与模型对照组比较,血管内皮生长因子组PaO_2值明显升高(P<0.05),余指标无明显变化(P>0.05);其余组各项指标均无明显变化(P>0.05).大体及光镜观察可见,正常对照组肺表面光滑平整,呈淡粉红色,弹性好,切面可见肺泡大小均匀一致;模型对照组出现慢性阻塞性肺气肿病理改变;余4组均较模型对照组病变程度有所好转.与模型对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组、血管内皮生长因子组、单纯细胞移植组、血管内皮生长因子+细胞移植组平均肺泡数、CD34~+相对阳性面积均明显增加(P<0.05),平均肺泡面积、平均内衬间隔则明显减少(P<0.05),此4组之间各指标比较均无明显差异(P>0.05).提示碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、骨髓间充质干细胞均能在一定程度上修复烟熏加气管内滴入弹性蛋白酶构建的大鼠肺气肿模型的病变,可能的作用机制是增加肺的毛细血管数、扩张肺血管,增加肺血流量,改善通气,血流,肺组织通过自身的代偿缩小了肺泡面积,减小肺容积.     

骨髓间充质干细胞在关节软骨损伤中的应用

随着细胞生物学、分子生物学和材料学等基础科学的快速发展,组织工程研究和应用得以飞速发展,为软骨缺损修复这个医学难题开辟了全新领域。骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)在体外大量扩增对其最终在体内形成软骨组织无明显影响并可分化成软骨和骨组织,正是由于这些特性,使之成为组织工程软骨构建中热门的种子细胞。本文对BM-     

大肠癌系膜根部淋巴结微转移与大肠癌生物学行为的关系

本研究采用间断连结切片结合CK20免疫组化检测大肠癌其系膜血管根部淋巴结微转移情况，并探讨大肠癌系膜血管根部淋巴结微转移与大肠癌临床病理因素的关系，并作为是否选择大肠癌根治术的基础依据。     

VEGF与肿瘤的相关性及其对间充质干细胞分化为血管内皮细胞诱导作用的研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在肿瘤患者的表达水平及与愈后的相关性，并探讨VEGF对间充质干细胞（MSCs）分化为血管内皮细胞的诱导作用。方法用ELISA法检测初发及愈后出院的肿瘤患者血清VEGF含量；分离骨髓单个核细胞，经贴壁法获取MSCs，体外经高浓度VEGF诱导分化，通过流式分析表面分子CD34、CD31和vWF以及体外成血管实验对分化细胞进行鉴定。结果初发患者与正常对照相比高水平表达VEGF（P〈0．01），而愈后明显降低（P〈0．01）。MSCs经VEGF诱导后呈现“纤维细胞”样长梭形，内皮系表面分子CD34、CD31、vWF均有不同程度表达，在半固体培养基中可形成“血管管腔样”结构。结论VEGF与肿瘤的发生及其愈后有明显的相关性；在体外培养条件下可诱导MSCs分化为血管内皮细胞。     

骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤的旁分泌机制

背景:骨髓间充质干细胞已用于肾缺血再灌注损伤修复的实验动物研究。目的:探讨骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤的旁分泌机制。方法:体外培养、纯化并体外DAPI标记大鼠骨髓间充质干细胞,经下腔静脉移植入肾缺血再灌注损伤模型大鼠体内,观察骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤肾功能的保护作用以及在受体鼠体内的迁移情况,并应用免疫组织化学法检测骨髓间充质干细胞治疗后第2天缺血肾脏组织中血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子α细胞因子的表达。结果与结论:与注射生理盐水的对照组比较,细胞移植组大鼠血清肌酐和尿素氮水平在移植后第1、2天明显降低(P<0.05),但细胞移植组移植后第1、2天肾组织中均未见DAPI阳性细胞;第3、4天则逐渐可见DAPI阳性细胞。免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,移植后第2天肾组织中可见较多血管内皮生长因子阳性细胞,而肾组织中肿瘤坏死因子α阳性细胞明显减少。结果显示旁分泌机制参与了骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤。