建立血站检测抗-HCV ELISA试剂参考品方法初探

目的为保证输血安全,血站对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫吸附(EL ISA)试剂除注重特异性外,试剂的灵敏度要求更高,针对血站需求建立一套抗-HCV EL ISA试剂的参考品。方法收集一种或两种的抗-HCV EL ISA试剂检测阳性的血清,以抗-HCV确证试剂结果为准,选取抗-HCV抗体强阳性、非强阳性、单片断阳性血清组合建立阳性参考品,乙型肝炎病毒表面抗原(HB sA g)阳性、溶血、乳糜血及其它单或双抗-HCV EL ISA试剂阴性的标本,经确证试剂为阴性,以一定组合建立阴性参考品,检测试剂的灵敏度和特异性。结果建立参考品包括阳性参考品25份,阴性参考品25份。结论根据自身要求建立一套适合血站自身要求的抗-HCV EL ISA试剂质控品,严把试剂质量关。     

影响ELISA测定结果的因素

EL ISA即酶联免疫吸附试验 ,是一种常用的固相酶免疫测定方法。 EL ISA方法被广泛用于各种抗原抗体的测定 ,能够排除大部分具有血液传播疾病的献血者 ,但仍有部分具有传染性的献血者不能排除 [1 ]。一些处于窗口期的病毒携带者或试剂盒的差异 (如不同厂家的试剂所包被抗原片断不同 ) ,或实验室检测的误差 (如判断结果的方法和检测板中空白设置等 )因素 ,均可影响 EL ISA检测结果 ,为防止假阳性结果和假阴性结果的出现 ,以溶血是否影响 EL ISA检测结果 ,对 36 1份样本进行HBs Ag、抗 HCV检测分析 ,报告如下。1　材料和方法1.1　材…     

酶联免疫吸附法与胶体金法抗-HCV检测对比分析

我们自 2 0 0 1～ 2 0 0 2年对漯河市无偿献血人员 16 82 8人 ,采用酶联免疫吸附 (EL ISA)法与胶体金法两种方法进行了抗 -HCV的检测比较 ,现将结果报告如下。1　对象和方法1.1　对象　来自漯河市三县一区无偿献血人员 ,人群分布为干部、职员、工人、农民、学生等 ,年龄在 2 5～ 5 5岁之间。1.2　试剂　 EL ISA检测试剂 ,系上海实业科华生物技术有限公司及英科新创科技有限公司提供 ,胶体金法检测试剂 ,系艾康生物技术 (杭州 )有限公司提供 ,两种方法检测试剂均在有效期内使用。1.3　方法　两种方法都是常规静脉采血。EL ISA法 ,应…     

受血者输血前传染性血清标志物检测分析

本院于 1999年 6月起对受血者输血前血清 HBs Ag、抗 -HCV、抗 - HIV及梅毒抗体等 4项标志物进行检测 ,现将结果报告如下。材料与方法1　血清标本　所有血清均来自于 1999年 6月～ 2 0 0 1年 12月在本院住院需输血的患者 ,共 2 384 5例 ,标本均在输血前采集。2　检测方法　 HBs Ag与抗 - HCV检测采用 EL ISA法 ,试剂由北京耀华生物技术公司提供 ;抗 - HIV检测采用 EL ISA双抗原夹心法 ,试剂由北京万泰生物技术公司提供 ;梅毒抗体检测采用 EL ISA双抗原夹心法 ,试剂由北京金伟凯生物技术公司提供。梅毒抗体阳性标本用 TPPA作…     

酶标仪程序设置及应用

EL ISA(酶联免疫吸附实验)以其灵敏度高、特异性强、标本用量少、检测费用低等优点,已成为基层实验室的常规检测方法。酶标比色仪作为EL ISA的主要仪器,其设置、使用、维护得当与否对实验结果有很大影响。在对基层实验室的检查中,笔者发现许多实验室技术人员由于对酶标仪程序设     

HCMV—IgM捕获ELISA法的建立及其应用

目的　建立检测人巨细胞病毒 (HCMV)抗原特异性 Ig M的酶联捕获技术 (Capturing- EL ISA)。方法　应用 Capturing- EL ISA法检测 12 8份巨细胞病毒感染者血清中抗 HCMV- Ig M,并与常用的间接 EL ISA法进行比较。结果　抗原浓度、抗 HCMV抗体酶结合物浓度对所测得的标本 OD值都有不同程度的影响 ,用最适的实验条件建立的 Cap-turing- EL ISA法特异性及敏感性均高于间接 EL ISA法 ,且不受 RF因子的影响。结论　 Capturing- EL ISA敏感性高、特异性强 ,且简便、快速 ,重复性好 ,具有实际应用价值     

即刻法室内质控在ELISA实验中的应用

室内质控是保证血液质量的重要措施之一 ,EL ISA实验的质控一般采用临床化学实验质控的方法。由于 ELISA试剂盒效期短、批号更换频繁 ,试剂昂贵。加上其灵敏度高、特异性强 ,批内测定不能代表批间测定 [1] ,故实际操作较难。笔者在EL ISA实验中采用即刻法室内质控 ,并绘制了即刻法室内质控表。取得了良好的效果。现以 EL ISA法检测抗 - HIV为例报告如下。材料与方法1　质控血清　由卫生部临检中心提供 ,抗 - HIV4NCU/ml,批号 0 0 0 2。2　试验　抗 - HIV ELISA试剂盒 ,由北京金豪公司提供 ,批号 2 0 0 0 0 5 2 3。3　仪器　 …     

周口市2001～2003年献血者HBsAg测定不一致原因分析

为了解临床日常工作中EL ISA法检测HBs Ag误诊情况,笔者对2 0 0 1～2 0 0 3年河南周口地区无偿献血者2 384 5份血清标本,在相同的实验条件下分别用两种不同厂家试剂平行检测,结果分析如下。1　对象和方法1.1　对象　周口市中心血站无偿献血者血清2 384 5份。1.2　试剂与仪器　HBs Ag EL ISA试剂盒由河南理利生物技术公司、洛阳华美科技公司和北京万泰生物技术公司提供;试剂盒均经过国家批批检,并在有效期内使用,严格按说明书操作。L absystems Dragon Well Wash4 MK2洗板机,L absystemsWellscan MK3酶标仪(芬兰产)。1.3　方法　…     

酶联免疫吸附法检测艾滋病抗体室内质控血清的制备和应用

EL ISA法检测抗 - HIV的诊断试剂虽然经过中国药品生物制品检定所批批检的检测 ,但由于很多因素都会影响到 EL ISA法检测结果的准确性 ,所以每次检测都应进行室内质控 [1 ] 。因此我们试制了抗 - HIV室内质控血清 ,考核了其在不同温度存放时的稳定性和精密性 ,并与卫生部临床检测中心所购抗 - HIV室内质控血清进行了对照。结果显示该方法制备的室内质控血清具有较好的稳定性和精密性 ,比较适合在抗 - HIV初筛试验室中推广应用 ,现介绍如下。1　材料和方法1.1　试剂　 EL ISA检测抗 - HIV试剂盒 :上海科华 ,批号为2 0 0 10 915 ,…     

ELISA法测定HBsAg临床研究

为了解临床日常工作中 EL ISA法检测 HBs Ag误诊误报情况 ,笔者对 1998- 0 1～ 1999- 12河南周口部分地区无偿献血者、临床住院患者、中学生等 480 85份血清标本 ,在相同的实验条件下分别用两种不同厂家试剂平行检测 ,现将结果报道如下。1　对象和方法1.1　对象　血站无偿献血者血清 2 2 0 0 0例份 ,周口地区人民医院患者血清 3838例份 ,周口地区高考体检学生血清 2 2 2 47例份。1.2　试剂与仪器　 HBs Ag EL ISA试剂盒由河南理利生物技术公司、厦门新创科技公司和上海实业科华生物技术公司提供 ;试剂盒均经过国家批批检 ,并在有效期…     

献血者丙型肝炎病毒核酸检测分析

目的　为了解抗 - HCV阴性和阳性与 HCV- RNA检测分析的符合率 ,选取 HCV检测的筛查方法。方法　用现代分子技术 ,对 30 0 0例 EL ISA抗 - HCV检测阴性和 2 80例 EL ISA抗 - HCV检测阳性的样本进行 HCV- RNA检测分析。结果　 EL ISA抗 - HCV阴性样本中 ,HCV- RNA检测阳性率为 0 .17% (5 / 30 0 0 ) ,EL ISA抗 - HCV阳性样本中 ,HCV- RNA检测阳性率为 87.8% (2 4 6 / 2 80 )。结论　 EL ISA抗 - HCV阴性样本中有 HCV感染窗口期漏检样本 ,EL ISA抗 - HCV阳性样本中 HCV- RNA阴性检出率为 12 % (34/ 2 80 ) ,血液 HCV感染的检测需同时使用 EL ISA和 HCV- RNA两种方法检测。     

不同洗板次数对检测抗—HCV的影响

抗 - HCV检测的原理是酶联免疫吸附试验 (EL ISA)中的间接方法 ,其中试验过程中要经过 2次洗板。有时试验过程中个别批号连续出现花板 ,怀疑是洗板的问题 ,为排除此原因 ,作者采用不同样品探讨洗板次数对检测抗 - HCV的 OD值的影响 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　材料　抗 - HCV EIA试剂盒 (国内某著名试剂厂家 ) ;RSP2 0 0全自动加样器 (瑞士 Tecan公司 ) ;BEP (德国 Behring公司 )。1.2　方法　取有代表性的 6个样品 ,除每次洗板次数不同外 ,其余按抗 - HCV试剂盒说明书操作。2　结果不同的洗板次数对检测抗 - HCV的 OD值…     

体液结核分枝杆菌三种检测方法临床应用价值

目的比较体液结核分枝杆菌三种方法检测结果,探究其临床应用价值。方法应用EL ISA法检测结核分枝杆菌抗体、结核分枝杆菌噬菌体生物扩增法、直接涂片抗酸染色法分别对临床可疑结核感染体液标本进行检测。结果结核分枝杆菌噬菌体生物扩增法、结核抗体EL ISA法检测与直接涂片抗酸染色法有统计学差别(P<0.05),结核分枝杆菌噬菌体生物扩增法与结核抗体EL ISA法检测二者无显著性差异(P>0.05),噬菌体生物扩增法与结核抗体EL ISA法阳性符合率为80.3%,阴性符合率为97.2%。结论结核抗体EL ISA法检测和结核分枝杆菌噬菌体扩增法比直接涂片法阳性率高,具有一定的临床应用价值。     

ELISA法检测HBsAg出现"花板"问题的解决

在使用某公司EL ISA HB sA g试剂进行血液检测过程中,有时会出现空白和阴、阳性对照以及室内质控孔的结果正常(Cut off=0.105),而血液标本孔的A值却较高的情况(大多数A值≥0.060),标本的阳性率很高(每板90份标本中有10~20份阳性,且大多数可疑标本都出现弱阳性结果(0.105≤A值≤     

国产ELISA试剂检测抗-HIV假阳性原因分析

酶联免疫吸附试验 (EL ISA)是检测人类免疫缺陷病毒抗体 (抗 - HIV)最常用的方法 ,国产 EL ISA试剂以其较高的敏感性和较好的特异性以及价格低廉为国内许多初筛实验室所采用。但在实际工作中我们有时会遇到假阳性的困扰 ,结合近几年国内试剂的发展 ,就其影响因素进行分析如下。1　材料和方法1.1　材料　抗 - HIV使用美国 BIO- RAD公司 CODA 型全自动酶免分析系统检测 ,国产第 2代试剂盒 A(批号 2 0 0 2 0 92 2 )、第 3代试剂盒 B和 C(批号 2 0 0 2 12 0 1和 2 0 0 30 4 16 ) ;类风湿因子(RF)采用胶乳凝集法 ,试剂由军事医学科…     

两种方法检测抗-HIV在献血者中的应用

国产 ELISA抗 - HIV体外免疫诊断试剂盒有间接法和双抗原夹心法两种。为了加强对献血者抗 - HIV检测的质量控制 ,笔者对 1 997年～ 2 0 0 1年 5月间本站用 EL ISA抗 - HIV间接法筛选的结果进行了分析 ,同时又对 2 0 0 1年 1～ 5月间用两种不同厂家的 ELISA抗 - HIV间接法检测呈现阳性反应的 1 8份血标本 ,再次用多家 ELISA抗 - HIV的间接法试剂和多家双抗原夹心法试剂进行对比检测分析 ,现将结果报告如下。材料与方法1　抗 - HIV诊断试剂盒　 EL ISA抗 - HIV间接法所采用的试剂盒分别来自北京吉比爱生物技术有限公司 ,批…     

ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原的比较

乙型肝炎在我国的发病率很高,是当前严重危害人们身体健康的传染病之一。乙型肝炎表面抗原(HBsA g)是乙肝的感染指标之一,因此,HBsA g的检查往往是体检的项目之一,对乙肝的预防和治疗具有重要的意义。本文采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)夹心法以及胶体金免疫层析法(G ICA)对2 879例体检者血清进行了HBsA g检测,将两法作了比较,并对一些实验的影响因素作了探讨。1材料与方法1.1检测对象2 879例体检者,年龄14~70 y;40例本院住院病人,年龄25~75 y。1.2试剂与仪器HBsA g EL ISA试剂盒(上海实业科华公司);HBsA g试纸条(北京蓝十字生物…     

配平条在ELISA检测中的应用

随着EL ISA技术在基层检验领域的普及应用,洗板问题带来的误差日益引起检验工作者的重视,为解决这一问题,绝大多数单位配备了洗板机。但在实际应用中,经调查发现,90%的检测单位的洗板机仅用于整批检测的洗板,而非整批(不足8或12孔)的检测则采用手工洗板,致使洗板机不能得到良好     

2000～2002年周口市无偿献血者输血传染病标志物检测结果分析

从计划献血到自愿无偿献血是保证血液质量和输血安全的关键 ,为了解本地无偿献血的基本情况 ,笔者对 2 0 0 0～ 2 0 0 2年无偿献血者血液标本的检测结果进行分析 ,现报告如下。1　对象和方法1.1　对象　 2 0 0 0～ 2 0 0 2年度 ,周口市参加无偿献血者 35 195人次 ,年龄 18～ 5 5岁。1.2　仪器　 L absystems MK2洗板机 ,Wellscan MK3酶标仪(芬兰产 )。1.3　方法　 HBs Ag抗 - HCV、抗 - HIV检测均采用 EL ISA法 ,梅毒采用 TRUST和 EL ISA法 ,AL T采用赖氏法 (试剂分别由洛阳华美 ,河南理利 ,上海生物制品研究所提供 )批批检合…     

丙型肝炎病毒（HCV）携带献血者及丙型肝炎（HC）患者HCV基因分型检测

丙型肝炎病毒 (HCV)具有高度变异性 ,以其核酸序列不同可将其分为不同的型 ,不同型之间的流行特点、致病性、相应的治疗方法及预后情况存在差异。我们采用套式 RT- PCR法对HCV携带献血者及 HC患者进行基因分型检测 ,以了解本地区不同人群 HCV基因型流行情况。1　对象和方法1.1　对象　本中心无偿献血者抗 - HCV检测阳性血样 ,HC患者 (平均年龄 4 7岁 )样品由河南省人民医院检验科提供 ,经荧光定量 PCR检测 HCV阳性。1.2　试剂　献血者抗 - HCV EL ISA(酶联免疫实验 )检测试剂 :初检为北京万泰公司产 ,复检美国强生 ORTHO公…