温郁金二萜类化合物C抗胃癌作用的实验研究

目的通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激胃癌细胞株SGC7901,探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶MAPK(p38MAPK)调控核转录因子(NF)-κB通路在温郁金二萜类化合物C抗炎和诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法将不同浓度的温郁金二萜类化合物C在不同的时间,体外作用于人脐静脉细胞(HUVECs)、胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测其对两种细胞株的增殖抑制率;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组胃癌细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测p65核转位情况,采用Western blot检测各组p38MAPK/P-p38MAPK、p65/P-p65及Caspase-3/P-Caspase-3蛋白表达量。结果温郁金二萜类化合物C对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,并能有效地诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡;温郁金二萜类化合物C能一定程度地减少胃癌细胞SGC-7901p65核转位发生;Western blot结果提示,p38MAPK、p65蛋白的表达随着温郁金二萜类化合物C浓度的提高而减少,而Caspase-3蛋白的表达则增加(P0.05)。结论通过p38MAPK调控p65来激活凋亡执行蛋白Caspase-3是温郁金二萜类化合物C发挥抗炎和抗癌可能的作用机制之一。     

温郁金醚提物中二萜类化合物C对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制及对其Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究温郁金醚提物中二萜类化合物C对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖的抑制作用及对胃癌细胞中Bcl-2、Bax表达的影响。方法:以含10%胎牛血清的RPMI1640为培养基,置37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养SGC-7901细胞;将温郁金醚提物中二萜类化合物C[1]溶于二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DM-SO),配成10mg/mL母液;以β-榄香烯、顺铂(cis-platinum complexes,DDP)为阳性对照药物,采用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)比色法检测两种药物在0、10、30、50、70μg/mL浓度(24、48、72h)对SGC-7901细胞增殖的影响;用Western Blot杂交法检测经温郁金二萜类化合物C作用后的人胃癌细胞SGC-7901中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达影响。结果:MTT法显示β-榄香烯、顺铂、化合物C48h对SGC-7901的半数抑制率(IC50)为分别为55.27、38.01、30.14μg/mL,在较低浓度时的抑制率与阳性对照组相似,在50,70μg/mL浓度时的抑制率与两对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);且具有一定的时间依赖性;Western Blot提示温郁金二萜类化合物C可上调促凋亡蛋白Bax的表达、下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:温郁金醚提物中二萜类化合物C对胃癌SGC-7901细胞的增殖有显著的抑制作用,高浓度时其抑癌率较β-榄香烯、顺铂的明显,其作用具有一定的时间和浓度依赖性;通过影响Bcl-2/Bax的表达是其发挥抗肿瘤作用的可能机制之一。     

黄芪提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究

目的:研究黄芪提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度的黄芪提取物干预人胃癌SGC-7901细胞。MTT比色法观察黄芪提取物对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位;分光光度法检测细胞Caspase-3和Caspase-9活性;电泳法检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:黄芪提取物(25、50、100 mg/L)以剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡,并且降低线粒体膜电位;增加Caspase-3和Caspase-9活性,上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达。结论:黄芪提取物可抑制人胃癌SGC-7901细胞体外增殖且通过线粒体途径诱导其凋亡。     

四藤方对SGC-7901胃癌Caspase-3、剪辑型PARP及Livin表达影响

目的：观察四藤方对人胃癌SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤Caspase-3、剪辑型PARP及Livin蛋白表达的影响。方法：人胃腺癌SGC-7901细胞BALB／C裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为3组,每组10只。对照组予生理盐水0．3mL灌胃,1次／d;四藤方组予四藤方煎剂0．3mL灌胃,1次／d;5-Fu组予5-Fu腹腔注射,1mg／次·周。免疫组织化学法检测胃癌组织Caspase-3、剪辑型PARP及Livin蛋白表达。结果：四藤方治疗后,SGC-7901裸小鼠移植瘤Caspase-3及剪辑型PARP蛋白表达升高（P〈0．05）;Livin蛋白表达降低（P〈0．01）。结论：四藤方可上调SGC-7901裸鼠移植瘤Caspase-3,促进PARP剪辑,下调Livin蛋白表达。     

温郁金对胃癌细胞的抑制作用及其对血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨温郁金对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用及其作用机理。方法:采用超临界二氧化碳萃取法提取温郁金成分;以5-Fu为阳性对照药物,采用MTT法,测定温郁金提取物对体外培养胃癌细胞SGC-7901增殖的影响;运用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测温郁金提取物对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。结果:温郁金提取物对胃癌细胞的生长有显著的抑制作用(均P<0.01),且抑制率随药物浓度的升高而增高,存在明显的量效关系;100mg/L、200mg/L浓度的温郁金提取物对胃癌细胞生长的抑制率分别为51.59%、64.44%,在这个浓度水平,其抑制肿瘤细胞生长作用与阳性对照药物5-Fu效果相当。温郁金提取物能下调VEGF121和VEGF165 mRNA表达。结论:温郁金提取物对人胃癌细胞SGC-7901生长有抑制作用,其抑癌作用的机制可能与下调VEGF表达水平有关。     

天花粉蛋白抑制胃癌细胞生长及其分子机制研究

目的观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对人胃癌细胞SGC7901诱导凋亡的作用及机制。方法应用荧光显微镜观察0、7、14、28μmol/L TCS对SGC7901细胞形态学的影响及细胞计数。应用流式细胞仪测定各浓度TCS对SGC7901细胞周期及凋亡的作用。应用Western Blot法观察SGC7901Caspase-9、Caspase-3、PARP、pERK、ERK蛋白表达。结果 TCS处理后的SGC7901出现了皱缩、变形,对SGC7901细胞的生长有明显的抑制作用,并且阻滞于S期。TCS诱导SGC7901发生凋亡,呈浓度依赖性(r=0.901,P0.05)。Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达降低,呈浓度依赖性(r=-0.984,r=-0.991,r=-0.951,P0.05)。并且随着TCS浓度的升高,ERK表达降低,呈药物浓度依赖性(r=-0.957,P0.05),TCS处理(7μmol/L和14μmol/L)激活ERK,磷酸化ERK升高(P0.05)。结论 TCS可以抑制SGC7901细胞的生长,诱导细胞凋亡,其机制与ERK信号通路有关。     

猕猴桃根多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及p-p38表达的影响

目的探讨猕猴桃根多糖（Actinidia chinensis Planch polysaccharid,ACPS）对人胃腺癌细胞（SGC-7901）增殖和凋亡的影响,及对SGC-7901细胞磷酸化p38（p-p38）蛋白表达的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度ACPS对SGC-7901细胞的24、48、72h的抑制作用;流式细胞技术检测各浓度ACPS作用48h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot法检测各浓度ACPS作用SGC-7901细胞后前体半胱氨酰天冬氨酸酶-9（pro-caspase-9）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）和p-p38蛋白量的表达,以及p38特畀性抑制剂预处理细胞后pro-caspase-9、PARP和p-p38蛋白量的表达。结果与对照组比较,1、2．5、5、10mg／mLACPS作用胃癌SGC．7901细胞后吸光度下降（P〈0．05）;同时药物剂量越高,作用时间越长,吸光度越低（P〈0．01）;24、48、72hIC50分别为7．43、3．88、1．32mg／mL;ACPS能下调SGC-7901细胞中pro-caspase-9蛋白的表达（P〈0．01）,增加PARP剪切蛋白的表达（P〈0．01）;进一步研究发现,ACPS处理SGC-7901细胞24h后,p38的磷酸化水平升高（P〈0．05）,p38特异性抑制剂处理细胞2h后能抑制p38磷酸化表达,并能抑制ACPS诱导的细胞凋亡。结论ACPS具有抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡的作用;激活p38途径,进而激活caspase-9和PARP,最终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一。     

银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2对胃癌SGC-7901细胞凋亡及其通路的影响

目的 研究银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2体外对人胃癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,应用MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测培养上清中基因蛋白Caspase-9、Fas及Survivin的含量.结果 GBEE-2(5～160μg·mL-1)对SGC-7901细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度依耐性,IC50为83 μg·mL-1;在10～160 μg·mL-1浓度下体外培养,GBEE-2可提高SGC-7901细胞的凋亡率,可使Caspase-9、Fas蛋白表达量增加(P<0.05或0.01),而Survivin蛋白的表达则减少(P<0.05或0.01).结论 GBEE-2抑制人胃癌SGC-7901细胞的作用机制与诱导细胞凋亡有关,其凋亡通路涉及Caspase途径.     

七方胃痛颗粒对胃癌细胞中Fas/FasL通路的影响

目的探讨七方胃痛颗粒对胃癌细胞中Fas/Fas L通路的影响。方法参照血清药理学方法制备七方胃痛颗粒含药血清,以10%、20%、30%浓度七方胃痛颗粒含药血清作用SGC-7901胃癌细胞后,MTT法检测七方胃痛颗粒对SGC-7901细胞的生长抑制作用; Western Blot和RT-PCR法检测经七方胃痛颗粒干预前后胃癌细胞SGC-7901中Fas,Fas L,FADD,Caspase-3、Caspase-8因子的蛋白及mRNA表达变化。结果与空白对照组相比,七方胃痛颗粒能抑制SGC-7901的增殖(P 0. 05),并呈浓度、时间依赖性;中药血清干预后人胃癌细胞株Fas,Fas L,FADD,Caspase-3、Caspase-8蛋白和mRNA表达升高,与空白对照组相比差异具有统计学意义(P 0. 05),并呈浓度、时间依赖性。结论在体外试验中,七方胃痛颗粒能抑制SGC 7901的增殖并促进其凋亡,可能通过下调胃癌细胞Fas、Fas L、FADD、Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达水平,从而达到抗癌作用。     

盐酸小檗碱对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、自噬及MAPK通路影响的研究

目的观察盐酸小檗碱对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、自噬及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响,探讨盐酸小檗碱治疗胃癌的可能分子机制。方法通过CCK-8实验检测0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5 g/L的盐酸小檗碱培养24 h、48 h、72 h后胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测0 g/L(空白组)、4 g/L和8 g/L的盐酸小檗碱培养48 h后胃癌SGC-7901细胞凋亡情况,采用Western blot实验检测0 g/L(空白组)、4 g/L和16 g/L的盐酸小檗碱培养12 h后胃癌SGC-7901细胞中Bax、Caspase-3、Bcl-2、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1、RAS、p38蛋白表达情况。结果从2 g/L盐酸小檗碱浓度开始,胃癌SGC-7901细胞存活率随着盐酸小檗碱浓度的增加而逐渐降低,差异均有统计学意义(P均0.05);胃癌SGC-7901细胞凋亡率随着盐酸小檗碱浓度的增加而递增;与空白组比较,16 g/L盐酸小檗碱培养后胃癌SGC-7901细胞中Bax、Caspase-3、LC3Ⅱ、Beclin 1、RAS、p38表达量均显著增高,Bcl-2、LC3I蛋白表达量均显著减少,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论盐酸小檗碱可通过调控Bax/Bcl-2蛋白的表达抑制胃癌SGC-7901细胞增殖及促进其凋亡,可通过激活p38 MAPK信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬,从而达到对胃癌的干预和治疗作用。     

花椒毒素通过死亡受体途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的 研究伞形科药用植物花椒毒素对细胞增殖和凋亡的影响,并探究其对人胃癌SGC-7901细胞的体外作用机制。 方法 用不同浓度的花椒毒素（10,20,60,80,100,120,140和160μg/ mL）处理SGC-7901,HepG-2,MCF-7和A549细胞48h,用MTT法测定细胞活力（IC 50）;用Hoechst 33258染色试剂盒和Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒观察花椒毒素诱导的细胞凋亡;流式细胞术检测花椒毒素处理后人胃癌SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Fas / FasL,Bid和DR5 / TRAIL; 通过Flouormetric Assay Kit测定花椒毒素对细胞中Caspase-8蛋白表达的影响。 结果 花椒毒素明显抑制SGC-7901,HepG-2,MCF-7和A549细胞增殖,其抑制作用呈浓度依赖性;;流式细胞术结果显示,在一定浓度范围内,黄嘌呤毒素可以以浓度依赖性方式增加Fas / FasL和DR5 / TRAIL蛋白的表达水平。 细胞中Bid蛋白含量增加,且表现出浓度依赖性。 结论 花椒毒素可通过Fas / FasL蛋白介导的死亡受体途径或DR5 / TRAIL介导的死亡受体途径在一定浓度范围内诱导SGC-7901细胞凋亡,并增加死亡受体蛋白的表达水平,激活Caspase-8,激活下游影响因子,诱导细胞凋亡,或激活Caspase-8切割蛋白Bid,然后进入线粒体途径,诱导细胞凋亡。     

南蛇藤提取物通过调控基质金属蛋白酶组及其抑制因子抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平。RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3的m RNA表达情况。结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性。Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调。RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的m RNA水平有轻微升高趋势,而TIMP1和TIMP3的m RNA水平明显大幅上调(P0.001)。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关。而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的m RNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的。     

三物白散对胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin基因表达的影响

目的观察三物白散药物血清对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin mRNA表达的影响。方法选择人胃癌细胞株SGC-7901,分为空白对照组、阳性对照组及三物白散低、中、高剂量组。三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,采用荧光染色法检测胃癌细胞的凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果不同剂量组的三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,与空白对照组比较,各组细胞的凋亡率升高,且细胞凋亡率随药物血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐升高;三物白散各剂量组survivin mRNA的表达均有不同程度的下降,与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,且survivin mRNA表达随三物白散含药血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐下降。结论三物白散可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,抑制survivin mRNA的表达。     

丹参饮加味方诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的： 探讨丹参饮加味方体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的分子机制。 方法： 以丹参饮加味方120,240,480 mg·L^-1作用细胞24,48,72,96 h后,应用四甲基偶氮唑盐法（MTT）和流式细胞仪检测该方对胃癌SGC-7901细胞的抑制率和凋亡率的影响;采用免疫组化法检测丹参饮加味方对Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。 结果： 与空白对照组相比,丹参饮加味方各组细胞抑制率、凋亡率明显升高（P<0.05）,Bax蛋白表达量显著增强（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达量明显降低（P<0.05）。 结论： 丹参饮加味方能体外抑制胃癌细胞的生长,其诱导SGC-7901细胞凋亡的作用机制可能与上调Bax,下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨

目的探讨三氧化二砷(AS_2 O3)诱导人胃癌 SGC-7901细胞凋亡的可能机制。方法光学及电子显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidy transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)判定细胞凋亡;免疫组织化学 SABC 法检测凋亡相关基因蛋白 Bcl-2、Bax、c-Myc 及 P53的表述;流式细胞术检测Caspase-3蛋白表达;以二硫代苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)为二硫键还原剂,观察其对 As_2O_3所致的 SGC-7901细胞凋亡的影响。结果 As_2O_3作用后光镜及电镜下观察到典型凋亡细胞的形态学特征;FCM 检测在细胞周期 G_1期前出现亚二倍体凋亡峰,同时见不同程度的 G_2/M 期阻滞;TUNEL 标记发现 DNA 链的断裂;As_2O_3 作用后 Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,c-Myc 蛋白在 As_2O_3处理12、24 h 后表...     

榄香烯对人胃癌细胞SGC-7901的体外生长及CD44v6、CD44的影响

目的:探讨榄香烯对人胃癌细胞株SGC-7901体外生长及细胞黏附分子CD44v6、CD44的影响。方法:Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测榄香烯对SGC-7901细胞增殖的影响;采用DAPI荧光染色法进行细胞核形态学分析;流式细胞仪检测细胞膜表面CD44v6、CD44表达。结果:榄香烯抑制SGC–7901细胞增殖,其呈量效和时效关系;DAPI染色显示榄香烯诱导SGC-7901细胞凋亡并显示特征性的凋亡细胞核形态;流式细胞仪检测结果显示榄香烯20、30、40μg/mL组与对照组相比,SGC-7901细胞膜表面CD44v6表达明显减少(P<0.01),CD44表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:榄香烯能抑制SGC-7901细胞增殖、诱导细胞凋亡,其抗肿瘤转移的机制可能与下调CD44v6表达相关。     

当归贝母苦参丸含药血清对胃癌细胞SGC-7901抑制作用机制的研究

目的:研究不同浓度当归贝母苦参丸含药血清抑制胃癌细胞SGC-7901的机制。方法:将120只Wistar大鼠分为当归贝母苦参丸高、中、低剂量组(0.3,0.2,0.1 g·kg~(-1))和正常组,每组30只,ig 2次/d,连续给药7 d,制备含药血清,以空白血清处理胃癌细胞SGC-7901为空白组,实验组以当归贝母苦参丸含药血清高、中、低剂量组处理SGC-7901细胞后用RTq PCR技术检测环氧合酶-2(COX-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达水平、用免疫细胞化学技术检测COX-2,BAX,PTEN蛋白表达情况。结果:与正常组比较,高剂量组使SGC-7901细胞COX-2 mRNA的表达量下降68%,BAX和PTEN mRNA的表达量分别升高99.7%和85.6%(P0.05),含药血清可以降低SGC-7901细胞COX-2的阳性表达率,升高其平均灰度值,升高BAX和PTEN的阳性表达率,减低其平均灰度值(P0.05)。结论:当归贝母苦参丸含药血清能抑制胃癌细胞SGC-7901,BAX,PTEN,COX-2 mRNA和蛋白的表达。     

培养基不同血清比例对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:探讨细胞培养基中不同血清比例对人胃癌细胞SGC-7901生长状态的影响,为减少培养该细胞时血清的用量。方法:用分别含有3%、6%和9%小牛血清的1640培养液分别培养SGC-7901细胞12h、24h和48h,以无血清培养基作为空白对照;倒置显微镜观察细胞的生长状况,通过基于酶标仪的MTT方法检测细胞在不同比例血清中的生长与增殖的差异。结果:SGC-7901细胞在含3%和6%小牛血清的细胞培养基中生长状态与常用的含9%小牛血清的培养基中的生长情况相比,未见显著性的差异(P>0.05);也不呈时间依赖性,但与空白血清对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在体外培养RPMI-1640细胞时,可将培养基中小牛血清的比例降至3%～6%,从而降低在培养该细胞过程中的的实验成本,减少不必要的血清浪费。