西妥昔单抗联合紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用的实验研究

目的：观察表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体西妥昔单抗（Cetuximab）联合紫杉醇（Paclitaxel,PTX）对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：实验分为对照组、Cetuximab组、PTX组、联合用药组。用MTT法检测Cetuximab、PTX及Cetuximab与PTX不同联合给药方案对MCF-7细胞的生长抑制率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和周期分布,免疫荧光法及RT-PCR法检测PTX组和对照组细胞的EGFR蛋白及mRNA的表达。结果：MTT法检测发现PTX对MCF-7细胞的抑制作用呈剂量依赖性;Cetuximab与PTX不同的联合给药方案对MCF-7细胞的抑制强度不同,先予PTX再予Cetuximab可见明显的协同作用。与对照组相比,其余3组的细胞凋亡率均有所增加,但联合用药组较单药组更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,PTX组细胞的EGFR蛋白、mRNA的表达均减少（P<0.05）。结论：人乳腺癌MCF-7细胞对PTX敏感;PTX对MCF-7细胞的抑制作用呈剂量依赖性;Cetuximab和PTX联用可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,促进其凋亡,二者联用具有协同作用。     

西妥昔单抗联合紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用的实验研究

目的:观察表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体西妥昔单抗(Cetuximab)联合紫杉醇(Paclitaxel,PTX)对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法:实验分为对照组、Cetuximab组、PTX组、联合用药组。用MTT法检测Cetuximab、PTX及Cetuximab与PTX不同联合给药方案对MCF-7细胞的生长抑制率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和周期分布,免疫荧光法及RT-PCR法检测PTX组和对照组细胞的EGFR蛋白及mRNA的表达。结果:MTT法检测发现PTX对MCF-7细胞的抑制作用呈剂量依赖性;Cetuximab与PTX不同的联合给药方案对MCF-7细胞的抑制强度不同,先予PTX再予Cetuximab可见明显的协同作用。与对照组相比,其余3组的细胞凋亡率均有所增加,但联合用药组较单药组更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,PTX组细胞的EGFR蛋白、mRNA的表达均减少(P<0.05)。结论:人乳腺癌MCF-7细胞对PTX敏感;PTX对MCF-7细胞的抑制作用呈剂量依赖性;Cetuximab和PTX联用可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,促进其凋亡,二者联用具有协同作用。     

IGF-ⅠR抑制剂联合西妥昔单抗对人肝癌细胞的体外抑制作用

目的探讨西妥昔单抗与胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)抑制剂aIR3对人肝癌细胞株HepG2细胞的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗(5~500)mg/mL和aIR3(2.5～250.0)μmol/L,单独或联合作用于HepG2细胞,观察不同时间对细胞增殖的抑制作用以及联用时的两药协同系数。结果单药西妥昔单抗与aIR3对HepG2细胞增殖的抑制作用均呈浓度依赖性与时间依赖性,二药单独作用于HepG2细胞72 h最大抑制率分别为42.2%、82.3%,二药联合作用于HepG2细胞72 h最大抑制率达91.8%。西妥昔单抗与аIR3不同浓度在各时间点的协同系数均小于1。结论西妥昔单抗和aIR3在体外对HepG2细胞的增殖均具有一定的抑制作用,联合应用时具有明显的协同效应。     

放疗与西妥昔单抗联合治疗头颈部鳞状上皮细胞癌

美国阿拉巴马大学医学部的研究人员最近在NEngl J Med杂志上发表了一篇多中心随机对照Ⅲ期临床试验的研究结果，该研究比较了单纯放疗与西妥昔单抗（一种表皮生长因子受体抗体）联合放疗在治疗头颈部局部深在的鳞状上皮细胞癌中的作用。     

新型表皮生长因子受体抑制剂--西妥昔单抗

西妥昔单抗是一种嵌合的单克隆抗体,它选择性地与表皮生长因子受体〔存在于正常细胞(皮肤和毛发细胞)和许多肿瘤细胞(如结肠癌、直肠癌)的表面〕特异性地结合,从而抑制肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。本文综述了西妥昔单抗的药理作用及临床评价。     

一种新的检测人外周血K细胞ADCC实验系统的建立

介绍一种人NK 细胞抵抗的黑色素瘤细胞和相应抗体作为指示系统,采用~(51)Cr6h 释放试验来检测人外周血K 细胞的ADCC 活性。     

西妥昔单抗诱发Grover病

一例71岁的男性患者在应用表皮生长因子(EGF)受体拮抗剂西妥昔单抗治疗转移性结肠癌2周后,其面部及躯干上部出现了急性痤疮样皮疹。在停用西妥昔单抗及局部应用皮质类固醇后皮疹消退。3周后再次使用西妥昔单抗后引起了更大面积皮疹的复发,此时皮损临床和组织学上都符合暂时性棘     

抗体修饰抑制性Ly49受体对小鼠NK细胞功能的影响

目的:观察单克隆抗体修饰小鼠NK细胞的抑制性Ly49受体对NK细胞功能的影响.方法:免疫磁性分选近交系小鼠C57BL/6J脾脏NK细胞,以小鼠肿瘤细胞YAC-1和M1细胞为研究对象,观察单克隆抗体封闭NK细胞的抑制性受体Ly49C/I后,对YAC-1和M1细胞的杀伤作用和对M1细胞克隆形成的影响,并观察抗体修饰对C57BL/6J小鼠脾脏NK细胞与BALB/C小鼠脾单个核细胞之间单向混合淋巴细胞反应的影响.结果:抗体修饰后,NK细胞对M1细胞的杀伤能力增强(10.7%±0.5% vs 84.4%±2.9%),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05);而对YAC-1细胞的杀伤作用则无明显的变化,仅0 μg/ml组与60 μg/ml组有统计学差异(P<0.05).抗体作用后,对M1细胞克隆形成的抑制率增高(8.2%±2.2% vs 94.0%±3.3%),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05).混合淋巴细胞反应中反应细胞的增殖指数降低(0.398±0.025 vs 0.128±0.014),并具有统计学差异(P<0.05).结论:以抗体修饰抑制性Ly49受体有助于活化NK细胞,提高抗肿瘤能力.     

表皮生长因子受体表达水平对西妥昔单抗及其介导的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用杀伤肺腺癌A549细胞的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)表达水平对西妥昔单抗及其介导的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)对肺腺癌A549细胞杀伤的影响。方法 以肺腺癌A549细胞作为靶细胞,NKTm细胞作为效应细胞,将pEGFR-EGFP质粒用核转染技术导入A549细胞,免疫组织化学法检测转染组与野生组A549细胞表面EGFR蛋白的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8法检测西妥昔单抗以及西妥昔单抗介导的ADCC作用对转染后A549细胞与野生组A549细胞的体外杀伤率。结果 免疫组织化学结果显示,野生组A549细胞EGFR表达呈弱阳性,而转染后的A549细胞EGFR表达呈强阳性。西妥昔单抗介导的ADCC作用对转染后高表达EGFR的A549细胞具有更强的杀伤作用(P<0.05),而西妥昔单抗单独作用时,转染组与野生组间的杀伤率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 细胞表面EGFR蛋白的表达水平能够影响西妥昔单抗介导的ADCC作用对肺腺癌A549细胞的杀伤,而对西妥昔单抗本身的杀伤作用无影响。     

大肠癌患者T细胞亚群和NK细胞活性检测的意义

目的：通过检测大肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的表达,研究大肠癌患者免疫状况与肿瘤分期的关系,以预测术后恢复情况。方法：采用流式细胞分析法检测60例大肠癌患者和30例对照者外周血中T淋巴细胞亚群及NK细胞活性。结果：大肠癌患者CD4^＋细胞值、CD4^＋／CD8^＋比值下降且NK细胞活性显著降低,CD8^＋细胞值显著高于对照组,这种变化随临床分期的增高更加显著（P〈0．05）;化疗后CD4^＋细胞值、CD4^＋／CD8^＋比值的下降和NK细胞活性的降低及CD8^＋细胞值的增高更为突出（P〈0．01）;术后发生转移的患者CD4^＋细胞值、CD4^＋／CD8^＋比值下降及NK细胞活性下降,CD8^＋细胞值再回升。结论：大肠癌患者细胞免疫功能明显紊乱,并随病情进展及肿瘤转移而加重,切除肿瘤有助于改善患者细胞免疫功能。     

NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性研究

 目的探讨自然杀伤NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性。方法采用流式细胞术检测人红白血病细胞K562、乳腺癌细胞Bcap37、肾癌细胞769P及肺癌细胞A549表面MICA/B的表达,RosetteSep誖改进法分离人外周血NK细胞,MTT法检测不同效靶比时NK细胞对几种肿瘤细胞的杀伤活性。结果K562、Bcap37、769P及A549细胞表面MICA/B的表达阳性率分别是(60.35±0.50)%、(90.72±0.64)%、(55.59±0.55)%、(3.84±0.10)%;RosetteSep誖改进法分选出的NK细胞纯度为(96.52±2.42)%,在同一效靶比时,NK细胞对K562、Bcap37及769P的杀伤活性较强,与A549相比有显著性差异(P<0.01),其中K562与Bcap37之间无显著性差异(P>0.05);效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,NK细胞的杀伤活性与4种肿瘤细胞表面MICA/B表达均呈正相关关系(P<0.01),随着效靶比增加,相关性增强。结论NK细胞的杀伤敏感性与肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平相关,肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平影响NK细胞的杀伤活性。     

胃肠癌患者外周血T细胞及NK细胞免疫功能状况的实验研究

目的 :研究胃肠癌患者外周血T细胞及NK细胞免疫功能状况。方法 :免疫细胞化学方法检测 49例胃肠癌患者外周血T细胞及NK细胞。结果 :与正常人相比 ,胃肠癌患者外周血中CD3+ 、CD4+ 细胞数明显减少 (P <0 .0 1) ,CD8+ 细胞数明显增多 (P <0 .0 5 ) ,CD4+ CD8+ 比值明显降低 (P <0 .0 1) ;NK细胞数量明显减少 (P <0 .0 5 )。胃肠癌患者的细胞免疫状态与肿瘤的TNM分期呈负相关 (P <0 .0 5 ) ,病期越晚 ,患者的免疫损害越严重。结论 :胃肠癌患者细胞免疫功能低下 ,对肿瘤患者T细胞及NK细胞进行监测 ,有利于了解病情 ,为肿瘤的免疫增强治疗提供参考。     

DC疫苗联合CIK细胞治疗非小细胞肺癌疗效观察

目的探讨自体肿瘤抗原负载的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在非小细胞肺癌治疗中的临床疗效.方法采集70例非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞,加入细胞因子定向诱导成CIK及DC,培养的第5天用自体肿瘤抗原（Ag）负载DC,第8天将DC与CIK细胞共培养,14d后将联合培养的细胞（Ag-DC-CIK）分次回输给患者.治疗4周后,流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应;以35例单纯的CIK细胞治疗作为对照.结果（1）培养的第14天,Ag-DC-CIK细胞的增殖达（20.6±2.16）倍,对照组仅为（12.2±2.65）倍（P〈0.05）;CD3＋CD8＋细胞及CD3＋CD56＋细胞的表达也明显高于对照组（P〈0.05）;（2）70例接受治疗的患者中CD3、CD4、CD8T细胞的百分比均较治疗前有不同程度的提高,Ag-DC-CIK组57.14%（20例）的患者CD4/CD8比例调节至正常,与对照组（42.85%,15例）相比差异有统计学意义（P〈0.05）;（3）Ag-DC-CIK治疗后51.42%（18例）的患者Thl/Th2细胞因子比例恢复正常,而对照组恢复正常者仅占37.14%（13例）（P〈0.05）;（4）Ag-DC-CIK治疗组中Ⅱ、Ⅲ期患者的有效率分别为39.30%和28.60%,与对照组的相应期别（Ⅱ期26.90%,Ⅲ期22.20%）相比差异有统计学意义（P〈0.05）;（5）治疗后的副反应包括寒颤、发热及兴奋失眠,无1例出现毛细血管渗漏综合征及实质脏器的损害.结论肿瘤抗原负载的DC细胞可增强CIK细胞在非小细胞肺癌治疗中的临床疗效,有推广运用的价值.     

抗EGFR/CD3双特异性抗体的制备与功能的初步研究

目的 构建抗表皮生长因子受体(anti-EGFR)和抗CD3(anti-CD3)的双特异性抗体(anti-EGFR/CD3),并在体外初步评价其杀伤肿瘤的功能. 方法 通过基因工程技术,利用 knobs-into-holes模式分别构建表达anti-EGFR-HC-knob、anti-EGFR-LC和anti-CD3-scFV-HC-hole的载体,共同转染 Expi 293F细胞,表达双特异性抗体,依次用抗体特异的亲和层析和分子排阻层析进行纯化,再用流式细胞仪和实时无标记细胞功能分析仪评价其体外结合能力和体外肿瘤杀伤功能. 结果 成功获得较高纯度的抗体.流式细胞仪体外结合实验结果显示,双特异性抗体能够同时与EGFR+的U87 Ⅷ脑胶质瘤细胞系、HCT-116结肠癌细胞系和CD3+的Jurkat T 淋巴瘤细胞系结合,具有2种抗体的功能,同时还能很好地激活T细胞(P<0.0001);在体外杀伤效果方面,双特异性抗体作用后杀伤效果明显高于其他抗体和对照组(均为 P<0.0001),具有很好的杀伤效果. 结论 用knobs-into-holes技术获得的anti-EGFR/CD3具有较好的生物活性,为双特异性抗体的肿瘤免疫治疗奠定了一定的基础.     

两种靶细胞在ADCC检测中的比较

选用绵羊红细胞 (SRBC)和鸡红细胞 (CRBC)作为靶细胞 ,用微量比色法检测人外周血单个核细胞 (PBMC)的抗体依赖细胞介导的细胞毒 (ADCC)活性。结果测得靶细胞对绵羊红细胞细胞毒指数为 9 0 3± 6 74 % ,对鸡红细胞的指数为 31 77± 16 2 7%。经t检验 ,有显著性差异 (t =4 75,P <0 0 1)。在 10例配对比较中 ,经相关性检验 ,对两靶细胞的指数具有显著相关性 (r =0 7152 ,P <0 0 5) ;经t检验 ,对两靶细胞的指数具有极显著差异 (t=4 33,P <0 0 1)。相同条件下 ,对CRBC的指数比SRBC的指数高。故认为 ,用CRBC作为靶细胞检测人PBMC的ADCC活性较好。     

抗表皮生长因子受体单克隆抗体抑制和杀伤肺癌细胞的机理

目的：探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）单克隆抗体（ｅｇｆ／ｒ３ ＭｃＡｂ）抑制和杀伤肺癌细胞机理。方法：细胞毒活性检测采用ＭＴＴ法，移植瘤膜表面ＥＧＦＲ的检测采用免疫组化法。     

不同序贯的西妥昔单抗与化疗药物联合对HepG2和 Bel-7402细胞的增殖抑制作用

 【目的】 观察不同序贯的西妥昔单抗(cetuximab)与化疗药物联合对人肝癌细胞系HepG2和Bel-7402的增殖抑制作用,并分析其意义? 【方法】 浓度递增的cetuximab和表柔比星?奥沙利铂?泰素?伊立替康四种化疗药物分别按照不同给药序贯联合作用于HepG2和Bel-7402细胞,使用细胞计数试剂盒CCK-8检测不同给药序贯的药物对HepG2和Bel-7402细胞的增殖抑制作用,利用生物学软件Calcusyn计算不同给药序贯时cetuximab和化疗药物的半数抑制浓度(IC50)的变化,计算其作用的协同系数(CI)? 【结果】 Cetuximab和化疗药物联用对HepG2和Bel-7402细胞的增殖抑制作用受给药序贯影响:cetuximab先于化疗药物给药,两者的IC50较单用时降低,但是CI值均大于1,两者之间为拮抗效应;cetuximab后于化疗药物给药,两者的IC50较单用时降低更为明显,且CI值均小于1,两者之间具有较明显的协同效应? 【结论】 Cetuximab与化疗药物联用对肝癌细胞的增殖具有协同抑制作用,较佳的给药序贯是化疗药物先于cetuximab给药,能获得明显的协同效应,这有助于临床用药时降低药物剂量,减少毒副作用?     

妊娠早期子宫NK细胞中HIF和VEGF的表达

目的:探讨妊娠子宫自然杀伤细胞(uterinenaturalkillercell,uNK)和外周血NK细胞(peripheralnaturalkillercell,pNK)中乏氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor,HIF)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)C、VEGFE的表达。方法:采用免疫磁珠法分离纯化妊娠早期uNK和pNK细胞,提取其总RNA,采用RT-PCR技术检测HIF和VEGF的mRNA在人妊娠早期uNK细胞和pNK细胞中的表达。结果:①人妊娠早期uNK细胞中HIFmRNA表达强于pNK细胞(2.31±0.19和0.12±0.02);②VEGFC和VEGFE在两种细胞中均有表达,但VEGFE在uNK中的表达强于pNK(0.82±0.03和0.10±0.01),VEGFC在两种细胞中的表达相近。结论:人妊娠早期uNK细胞HIF和VEGFE的强表达可能与uNK细胞在胎盘血管形成中的作用密切相关。