卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响

目的观察卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响,评价其延迟心肌的保护作用。方法建立培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应组、卡托普利预处理组、蛋白激酶C阻断剂+卡托普利组、一氧化氮合酶阻断剂+卡托普利组和核因子κB阻断剂+卡托普利组。利用分光光度计测定丙二醛和超氧化物岐化酶含量;全自动生物化学分析仪测定乳酸脱氢酶含量。Flou3AM负载染色和流式细胞分析技术测定细胞内钙离子浓度。结果卡托普利预处理和缺氧预处理均可减轻缺氧再灌注时心肌细胞内钙离子浓度增加(594±5nmolL、507±32nmolL比789±9nmolL,P<0.01),抑制乳酸脱氢酶和丙二醛的增加和超氧化物岐化酶含量的降低;但与对照组(414±37nmolL)比较钙内流仍有轻度增加(P<0.05);预先分别加入蛋白激酶C阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂、核因子κB阻断剂与卡托普利共同孵育细胞,行缺氧复氧损伤所测得细胞内钙离子浓度分别为676±32nmolL、700±37nmolL和689±11nmolL,与卡托普利预处理组比较有所增加(P<0.05);但与缺氧复氧组比较仍有降低(P<0.05)。结论以上提示,卡托普利预处理可抑制缺氧复氧时的钙超载及其脂质过氧化损伤。其机制可能是通过轻度增加钙内流、启动心肌延迟保护作用;其过程可能涉及蛋白激酶C、一氧化氮合酶和核因子κB信号转导通路中的多个环节。     

心肌细胞葡萄糖转运机制的研究进展

葡萄糖是心肌能量代谢的主要底物之一,在心肌缺血/缺氧以及心脏负荷加重等代偿性适应阶段尤为重要。葡萄糖由细胞外向细胞内转运是心肌葡萄糖代谢的第一步,是心肌利用葡萄糖的限速步骤。葡萄糖进入心肌细胞主要通过易化性葡萄糖转运子家族(facilitativeglucosetransporters,GLUTs)实现。GLUTs的质和量对心肌葡萄糖跨膜转运的速度起决定作用。因此,明确心肌葡萄糖转运及心肌葡萄糖转运子表达的调控机制对生理条件下葡萄糖内稳态的调节以及病理状态下心肌能量代谢的纠正及心肌功能的改善都具有重要意义。本文将对近几年来有关心肌葡萄糖转运及葡萄糖转运子调控方面的研究进行综述。     

葡萄糖转运蛋白在糖尿病心肌细胞中的表达及调节

心肌细胞表达的葡萄糖转运蛋白( GLUTs)主要为GLUT-1和GLUT-4.GLUT-1主要调节组织细胞的基础葡萄糖需求,GLUT-4则在胰岛素、AMP活化蛋白激酶(AMPK)及Ca2+等刺激存在时,发挥转运葡萄糖的作用.糖尿病时心肌细胞GLUT-1和GLUT-4的表达及转位减少,其变化主要受血糖、晚期糖基化终末产物和缺血、缺氧状态的影响,同时受胰岛素、AMPK和Ca2+等信号通路的调节.上述多种因素共同调节糖尿病状态下心肌细胞GLUT-1、GLUT-4表达的变化及葡萄糖的摄取.     

维拉帕米对心肌细胞肥大的影响

目的研究维拉帕米对心肌细胞肥大的影响及其机制。方法测定培养的心肌细胞［Ｃａ２＋］ｉ和３Ｈ－亮氨酸（３Ｈ－Ｌｅｕ）参入。结果２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ维拉帕米对培养的心肌细胞［Ｃａ２＋］ｉ和３Ｈ－Ｌｅｕ参入无明显影响（Ｐ＞０．０５），２×１０－６～１０－５ｍｏｌ／Ｌ维拉帕米则可显著抑制培养的心肌细胞［Ｃａ２＋］ｉ和３Ｈ－Ｌｅｕ参入。与对照组相比，心肌细胞［Ｃａ２＋］ｉ和３Ｈ－Ｌｅｕ参入分别减低１０％～２７％（Ｐ＜０．０１）和１２％～２５％（Ｐ＜０．０５）。结论维拉帕米可以抑制培养的心肌细胞肥大，作用机制可能与其降低细胞内游离钙和细胞收缩性有关。     

一氧化氮对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:探讨左旋精氨酸(L-arginine,L-arg)及NG-亚硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitric-L-arginine-methyl ester,LNAME)对缺氧豚鼠心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化影响.方法:采用离体豚鼠心Langendorff法灌注,胶原酶I型分离细胞,再用荧光指示剂方法(Fure-2/AM)标记心肌[Ca2+]i变化.分为3组:对照组、L-arg组和L-NAME组.观察缺氧后心肌[Ca2+]i的变化.结果:①正常氧状态下,心肌[Ca2+]i均值为120.0±14.3 nmol/L(n＝10).②缺氧状态下心肌[Ca2+]i增加与缺氧时间(程度)成正相关,相关系数r为0.99左右.③一氧化氮(NO)在缺氧条件下对心肌[Ca2+]i有影响.结论:在短期轻度缺氧条件下,NO不足使心肌[Ca2+]i增加,若能设法增加细胞内的NO含量,可以提高心肌细胞的自我保护作用.在长时间重度缺氧条件下,NO可能对心肌细胞有损伤作用.     

高浓度葡萄糖对乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

目的：观察高糖对不同状态下乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因表达的影响,探讨TNF—α在糖尿病心肌病的非特异性炎症中的作用机制。方法：体外培养乳鼠心肌细胞,分别用不同浓度的葡萄糖（0、20、30、50mmol／L）干预正常心肌细胞、胰岛素抵抗心肌细胞,采用逆转录聚合酶链反应检测细胞TNF-α mRNA的表达水平,并在透射电镜下观察心肌细胞结构的变化。结果：（1）在50mmol／L葡萄糖作用下,正常心肌细胞TNF—α mRNA表达（0．58±0．03）明显高于20mmol／L（0．27±0．02）、30mmol／L（0．29±0．05）葡萄糖作用的正常心肌细胞,而后两组之间比较无统计学差异。（2）胰岛素抵抗心肌细胞在0、20、30、50mmol／L葡萄糖作用下,各组心肌细胞TNF-α mRNA表达均有显著性差异（P〈0．05）,并随着葡萄糖浓度的提高,TNF—α mRNA表达越高;在相同浓度葡萄糖作用下,胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显高于正常心肌细胞。（3）在高浓度葡萄糖作用下,正常心肌细胞和胰岛素抵抗心肌细胞出现线粒体肿胀,髓样结构形成,胞内脂滴增多等细胞结构损伤性改变。结论：高糖作用下胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显增加,引起胞内脂滴增多等细胞结构变化。     

高浓度葡萄糖对乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

目的：观察高糖对不同状态下乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因表达的影响,探讨TNF—α在糖尿病心肌病的非特异性炎症中的作用机制。方法：体外培养乳鼠心肌细胞,分别用不同浓度的葡萄糖（0、20、30、50mmol／L）干预正常心肌细胞、胰岛素抵抗心肌细胞,采用逆转录聚合酶链反应检测细胞TNF-α mRNA的表达水平,并在透射电镜下观察心肌细胞结构的变化。结果：（1）在50mmol／L葡萄糖作用下,正常心肌细胞TNF—α mRNA表达（0．58&#177;0．03）明显高于20mmol／L（0．27&#177;0．02）、30mmol／L（0．29&#177;0．05）葡萄糖作用的正常心肌细胞,而后两组之间比较无统计学差异。（2）胰岛素抵抗心肌细胞在0、20、30、50mmol／L葡萄糖作用下,各组心肌细胞TNF-α mRNA表达均有显著性差异（P〈0．05）,并随着葡萄糖浓度的提高,TNF—α mRNA表达越高;在相同浓度葡萄糖作用下,胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显高于正常心肌细胞。（3）在高浓度葡萄糖作用下,正常心肌细胞和胰岛素抵抗心肌细胞出现线粒体肿胀,髓样结构形成,胞内脂滴增多等细胞结构损伤性改变。结论：高糖作用下胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显增加,引起胞内脂滴增多等细胞结构变化。     

褪黑素对心肌细胞抗过氧化氢损伤的实验研究

目的 :观察 H2 O2 对心肌细胞内活性氧 （ROS）和游离钙 （[Ca2 + ]i）的影响及褪黑素 （MT）的保护作用。方法 :酶消化法原代分离培养乳鼠心肌细胞 ,分别用荧光探针 DCFH- DA和 Fluo- 3- AM标记 ,H2 O2 和 MT处理后 ,流式细胞仪检测细胞荧光强度的变化。结果 :低浓度的 H2 O2 （10 0 μm ol/ L）随着时间的延长可使心肌细胞内的 ROS呈上升趋势 ,30 m in,6 0 m in与 0 min或对照组相比均明显增高 （P<0 .0 1） ;MT干预后上升趋势均明显减弱 ,在 30 ,6 0 min两组均差异显著 （P<0 .0 1）。 [Ca2 + ]i 亦呈显著上升趋势 ,30 min时与 0 min或对照组相比有差异 （P<0 .0 5 ） ,6 0min时与 30 m in,0 min或对照组相比差异显著 （P<0 .0 1） ;MT干预后其上升明显减少 ,两者差异显著 （P<0 .0 1）。结论 :MT有很好的抗氧化效果 ,能起到保护心肌的作用。     

高葡萄糖在正常氧及缺氧条件下对乳鼠心肌细胞存活与凋亡的不同影响

目的探讨高葡萄糖在正常氧及缺氧条件下对乳鼠心肌细胞存活与凋亡的影响。方法原代培养乳鼠心肌细胞,予33mmol/L葡萄糖培养基分别在正常氧及缺氧培养条件培养,同时以5.5mmol/L葡萄糖培养基培养作为对照,氯化钴模拟缺氧环境,台盼兰染色检测细胞存活力,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术和AnnexinV-PI双染法流式细胞仪检测心肌细胞凋亡。结果正常氧条件下,33mmol/L葡萄糖时较5.5mmol/L葡萄糖时乳鼠心肌细胞存活率低(P<0.01),细胞凋亡率高(P<0.01);缺氧条件下,与5.5mmol/L葡萄糖浓度时比较,33mmol/L葡萄糖浓度时,心肌细胞存活率增高(P<0.01),凋亡率降低(P<0.05)。结论在正常氧条件下,高葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡。氯化钴模拟缺氧条件下,高葡萄糖在乳鼠心肌细胞凋亡损伤中发挥保护作用。     

氟对小鼠神经细胞内游离钙的影响

目的观察氟对小鼠神经细胞内游离钙(Ca~(2 ))的影响,为探讨氟中毒的发生机制提供实验依据。方法①采用细胞培养方法,体外培养小鼠神经细胞。根据加氟剂量(NaF,0、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0 mg/L)不同分为6组,在培养第15天,收集各组细胞,激光扫描共聚焦显微镜记录细胞内Ca~(2 )荧光图像;②出生后7d小鼠,按腹腔注射不同剂量的氟溶液(0、0.7、2.8、11.2 mg/kg)分为4组,于注射后8h处死小鼠,收集脑细胞,制备细胞悬液,记录细胞内Ca~(2 )荧光图像。结果体外培养加氟(≥5.0 mg/L)和体内腹腔注射氟溶液(≥0.7 mg/kg)均可导致神经细胞内Ca~(2 )增加,组间比较差异有统计学意义(F=191.20、93.83,P<0.01);各加氟组细胞内Ca~(2 )水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论氟诱导神经细胞内Ca~(2 )增加,且随着加氟剂量的增加,细胞内Ca~(2 )水平也增加,二者呈剂量效应关系。     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞胞内钙的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1)拮抗剂缬沙坦(Valsartan)对AngⅡ诱导的肥大心肌细胞胞内钙([Ca2+]i)变化的影响,并探讨其机制。方法:原代培养的大鼠心肌细胞,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,利用共聚焦显微镜技术测定[Ca2+]i。结果:AngⅡ诱导心肌细胞肥大48h后[Ca2+]i明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);缬沙坦预处理后,[Ca2+]i与肥大组相比下降,差异有统计学意义(P<0.01),与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AngⅡ诱导肥大心肌细胞[Ca2+]i增加,缬沙坦通过阻断AT1受体,抑制肥大心肌细胞[Ca2+]i增加。     

瘦素、胰岛素对OLETF大鼠心肌细胞GluT-4含量的影响

目的探讨瘦素、胰岛素与OLETF大鼠心肌胰岛素抵抗的关系。方法培养的12例大鼠心肌细胞分为11组,Western-blot方法检测不同浓度胰岛素、瘦素刺激不同时间葡萄糖转运子4（GLUT-4）转位效应的差异。结果瘦素和胰岛素促进GluT-4转位作用分别增加了2．28、3．14、3．07、9．06倍。胰岛素促GluT-4转位最佳时间为30min,瘦素最大效应浓度为100nmol／L,最佳刺激时间为30、60min。在OLETF大鼠,联合组GluT-4转位小于单纯胰岛素组,胰岛素组促进GluT-4转位作用也仅为对照组的69％。P均〈0．05。结论胰岛素和瘦素均促进GluT-4转位,呈时间剂量依赖性;OLEFT大鼠心肌细胞存在胰岛素作用障碍,且瘦素与胰岛素联合应用可影响胰岛素的作用。     

SJAMP对血小板胞内游离钙水平的影响

目的：探讨Ca2 在SJAMP诱导血小板聚集中的作用。方法：以Fura-2为钙荧光探针,应用双波长法测定了SJAMP对血小板胞内游离钙水平的影响。结果：发现SJAMP在100μg／ml时对血小板胞浆游离钙的影响最为显著,可使正常人血小板胞内钙水平从71．30±7.66nmol／L升至93．96±10．24nmol/L（n＝10）,在胞外存在1mmol／LCa2 时,SJAMP引起胞内游离钙升高幅度更大．可达116．72±10．66nmol／L（n=10）。另一方面,SJAMP对血小板胞内游离钙的影响,与其它诱导剂相比,其升高幅度较小且时限较长,同时如果血小板预先与环氧化酶抑制剂孵育．则SJAMP对血小板胞内钙的升高作用明显受抑。结论：推测SJAMP对血小板胞内钙的影响可能是一花生四烯酸及其代谢物有关的过程。     

辛伐他汀对高浓度葡萄糖诱导心肌细胞炎症反应的干预作用及机制研究

目的 （1）观察高浓度葡萄糖对心肌细胞的作用,探讨高浓度葡萄糖损伤心肌的可能机制;（2）观察辛伐他汀对高浓度葡萄糖刺激下心肌细胞炎症因子表达的影响,并探讨其可能机制。方法 （1）取SD乳鼠心肌细胞做原代培养。（2）阴性对照组（blank）:培养基中不加任何刺激物,培养72小时。（3）阳性对照组（positive control）:培养基中加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖刺激乳鼠心肌细胞,培养72小时。（4）甲羟戊酸对照组（MVA）:培养基中加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖和终浓度为200 umol/L的甲羟戊酸,培养72小时。（5）辛伐他汀干预组（Sim）:培养基内加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖,同时分为三组并分别加入浓度为10^-5 mol/L、10^-6mol/L、10^-7mol/L辛伐他汀培养72小时。（6）辛伐他汀+甲羟戊酸干预组（Sim+MVA）:培养基中加入终浓度为25mmol/L的高浓度葡萄糖,终浓度为10-5 mol/L的辛伐他汀和终浓度为200 umol/L的甲羟戊酸,培养72小时。（7）收集各组心肌细胞培养基上清液,用ELISA法测各组TNF-α、ICAM-1、MCP-1的表达;收集各组心肌细胞,用MTT法测定心肌细胞活力,RT-PCR法测心肌细胞AT1RmRNA、AT2R mRNA表达。结果 （1）与空白对照组比较,阳性对照组、MVA组心肌细胞活力显著下降（P<0.01）,TNF-α、ICAM-1、MCP-1表达均明显增加（P<0.01）。（2）与阳性对照组比较,辛伐他汀组心肌细胞活力明显提高（P<0.01）,TNF-oα、ICAM-1、MCP-1表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,且呈浓度依赖性;加入甲羟戊酸后（Sim+MVA组）,上述指标与阳性对照组比较无统计学差异。（3）与阳性对照组比较,辛伐他汀组[Sim(10^-5mol/L)组和Sim(10^-6mol/L)组]心肌细胞AT1R mRNA表达显著降低（P<0.05）,AT2R mRNA表达轻度增加（P<0.05）。（4）AT1RmRNA表达与TNF-α表达呈正相?     

糖尿病对心肌细胞钠离子流的影响

研究发现,糖尿病在致钠离子流异常的过程中扮演着重要角色,可显著增加糖尿病相关心律失常的发生及发展。研究发现糖尿病可致心肌细胞钠离子流异常,主要表现为峰钠电流降低,晚钠电流增大,控制血糖及心肌细胞钠离子流异常对预防和减少心律失常发生具有重要的临床意义。     

扩张型心肌病患者血清抗ADP／ATP载体抗体对心肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

用荧光探针Ｆｕｒａ－２／ＡＭ观察扩张型心肌病（ＤＣＭ）患者血清抗ＡＤＰ／ＡＴＰ载体抗体对培养大鼠心肌细胞胞浆游离钙浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ）的影响，结果表明：１：３０～１２０倍稀释度抗血清均显著增加［Ｃａ￣（２＋）］ｉ，先加维拉帕米可抑制该效应。正常人及冠心病患者血清无此作用；ＤＣＭ患者抗ＡＤＰ／ＡＴＰ载体抗体阴性血清亦无此作用。提示：抗ＡＤＰ／ＡＴＰ载体抗体引起心肌细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ增加可能是ＤＣＭ患者心肌损害的原因之一。     

利格列汀对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察利格列汀对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其对心肌细胞的保护作用。方法健康雄性Wistar大鼠36只随机分为正常对照组(A组,8只)和利格列汀对照组[B组,8只,3 mg/(kg·d)利格列汀]。饲养4 w后,A、B组腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液,20只大鼠腹腔单次注射小剂量35 mg/kg链脲佐菌素(STZ),并于3 d后尾静脉取血测血糖浓度,血糖浓度≥16.7 mmol/L确定为建模成功,6 w后,17只存活的糖尿病大鼠随机数字表法分为糖尿病组(C组,8只)和糖尿病/利格列汀组[D组,9只,3 mg/(kg·d)利格列汀],持续药物治疗4 w,分别于1 w、4 w末采集数据。结果末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)细胞凋亡检测,C组和D组治疗4 w时心肌细胞凋亡数量较1 w显著增多,凋亡率显著增加(P<0.05)。D组心肌细胞凋亡程度显著低于C组,凋亡率显著降低(P<0.05)。Western印迹检测,C和D组治疗4 w时caspase-3、Bax蛋白表达较1 w时显著增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05);治疗4 w时,C组caspase-3、Bax蛋白表达显著高于A、B组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著低于A、B组(P<0.05);D组caspase-3、Bax蛋白水平显著低于C组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著高于C组(P<0.05)。结论利格列汀可能通过降低caspase-3、Bax表达,上调Bcl-2表达,减少心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用。     

缬沙坦对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨缬沙坦对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的作用。方法随机选择29只健康雄性SD大鼠中的21只,以高糖高脂饲料喂养4周后腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg,3d后测血糖≥16.7mmol/L者（n=19）入选糖尿病大鼠模型,并随机分为糖尿病组（DM组,n=9）和缬沙坦治疗组（VAL组,n=10）,另外8只健康雄性SD大鼠为对照组（CN组,n=8）。VAL组给予缬沙坦（20mg/kg.d）治疗6周,检测各组大鼠血生化和胰岛素水平,各组大鼠于第12周末处死,取部分左心室前壁组织以TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化法检测Caspase-3、NF-κB的表达。结果与CN组相比,DM组和VAL组大鼠心肌细胞凋亡及Caspase-3和NF-κB的阳性表达显著增多,差异具有统计学意义（P〈0.05）;与DM组相比,VAL组大鼠心肌细胞凋亡及Caspase-3和NF-κB的阳性表达明显减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论缬沙坦能够抑制糖尿病大鼠心肌细胞的凋亡,具有心肌保护作用。