三苯氧胺诱导人乳腺癌MCF-7细胞株耐药及自噬的关系研究

背景与目的:三苯氧胺(tamoxifen)作为第一代选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM)被广泛地应用于激素敏感型乳腺癌的内分泌一线治疗。三苯氧胺耐药的发生严重限制了临床治疗,是乳腺癌患者用药面临的重大难题,明确其耐药机制对乳腺癌的治疗有重要临床意义。本研究通过体外诱导人乳腺癌细胞MCF-7三苯氧胺耐药,探讨细胞产生三苯氧胺耐药时自噬水平的变化与MAPK家族蛋白细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)蛋白表达量及磷酸化水平的变化。方法:浓度递增筛选法诱导MCF-7细胞耐药,透射电镜观察MCF-7细胞与耐药细胞内的自噬泡数量,CCK8法检测细胞增殖状态,应用Western blot检测LC3Ⅱ、ERK1/2、Phospho-ERK1/2蛋白的表达情况。结果:诱导的三苯氧胺耐药细胞株TR5达到5μmol/L的耐药浓度。TR5细胞内的自噬泡数量与LC3Ⅱ表达量明显高于MCF-7细胞。ERK蛋白在两种细胞中的表达量差异无统计学意义,但其在TR5中的磷酸化水平比MCF-7细胞高。结论:...     

稳定转染ERβ基因对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响

目的研究在不同处理因子作用下,外源基因ERβ的表达对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响。方法利用lipofectamine 2000将ERβ真核表达载体pCDNA3,ERβ导入MCF-7乳腺癌细胞系。采用含雌激素应答元件（ERE）的荧光素酶报告基因及Western blot方法,检测转染细胞中ERβ的转录活性和蛋白表达水平,筛选阳性克隆。以亲本细胞MCF-7及转染空载体质粒pCDNA3的MCF-7细胞为对照,在雌激素E2和雌激素受体拮抗剂4-OHT作用下观察细胞的生长特点。结果在转染ERβ基因的MCF3细胞系中,ERβ的转录激活活性明显升高;Western blot检测证实,ERβ的蛋白表达水平显著增高。在无处理因子情况下,外源基因ERβ在MCF-7细胞系中的表达对细胞的形态及生长速度无明显影响。与亲本细胞MCF-7及转染空载体质粒的MCF-7细胞相比,稳定转染ERβ的MCF-7细胞对雌激素的敏感性下降,但对4-OHT处理的敏感性无明显减少。结论外源性ERβ基因在MCF-7乳腺癌细胞中的稳定表达不增加对4-OHT的耐药性,但使之对雌激素的敏感性下降。     

他莫昔芬对转染ERβ1基因的MCF-7细胞生长特性的影响

目的研究在不同处理因子作用下,外源基因ERβ1的表达对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响。方法利用脂质体转染方法将ERβ1真核表达载体pcDNA3.1-EGFPERβ1导入MCF-7乳腺癌细胞系。采用Western blot方法检测转染细胞中ERβ1的蛋白表达水平,筛选阳性克隆。以亲本细胞MCF-7为对照,分别在雌激素和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用下观察细胞的生长特点。结果在转染ERβ1基因的MCF-7细胞系中,Western blot检测证实ERβ1的蛋白表达水平显著增高。在无处理因子的情况下,外源基因ERβ1在MCF-7细胞系中的表达能抑制细胞生长。与亲本细胞MCF-7细胞相比,转染ERβ1的MCF-7细胞对雌激素的敏感性下降,但对他莫昔芬的敏感性无明显变化。结论外源性ERβ1基因在MCF-7乳腺癌细胞中的稳定表达不增加对他莫昔芬的耐药性,但使之对雌激素的敏感性下降。     

ER阳性和阴性人乳腺癌细胞株整合素亚型α_5β_1、α_4β_1及组织蛋白酶D表达的研究

目的　研究ER阳性和ER阴性的人乳腺癌细胞株整合素亚型α5β1、α4β1和组织蛋白酶D蛋白的表达和细胞生物学特性的关系。　方法　采用细胞培养、Southern杂交、Northern杂交和免疫组织化学技术,检测ER阳性MCF7及ER转染阳性MDAMB231和ER阴性MDAMB231人乳腺细胞中整合素亚型α5β1、α4β1和组织蛋白酶D蛋白的表达,了解它与细胞生物学特性的关系。　结果　MCF7、ER转染阳性MDAMB231和MDAMB231细胞中整合素亚型α5β1基因DNA,mRNA表达量各不相同。整合素亚型α5β1、α4β1和组织蛋白酶D蛋白在三株人乳腺癌细胞中的定位各不相同,且存在数量上的差别(P<005)。三苯氧胺具有诱导α5β1表达的作用,而对α4β1和组织蛋白酶D无影响。　结论　雌激素受体的表达和整合亚型α5β1、α4β1和组织蛋白酶D状态有关,三苯氧胺具有诱导转移相关基因表达的作用     

β-榄香烯联合三苯氧胺抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的实验研究

目的:研究β-榄香烯联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞生长有无协同抑制作用,并探讨其可能的机制.方法: 采用MTT法检测β-榄香烯联合三苯氧胺对MCF-7细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,免疫组化SP法检测bcl-2、pS2表达变化.结果: 不同剂量的β-榄香烯联合治疗剂量的三苯氧胺,吸光度均值较单用三苯氧胺明显下降,相应 的细胞抑 制作用明显上升;流式细胞仪检测G0/G1期细胞比例增加,用药后凋亡率升高,bcl-2、pS2在联合用药后表达明显下调.结论:β-榄香烯使三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用显著增强,提示榄香烯与三苯氧胺具有协同增效作用,其作用机制与影响细胞周期进程,协同促进凋亡,下调bcl-2、pS2表达有关.     

雌激素受体β亚型与丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的相互作用机制探讨

目的：探讨雌激素受体β亚型（ERB）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路在乳腺癌发生、发展及凋亡过程中的作用及两者的相互作用机制。方法：将小鼠随机分为4组：对照组、三苯氧胺（TAM）组、环磷酰胺（CTX）组和联合组（TAM＋CTX）。用免疫组化法联合检测给予三苯氧胺和环磷酰胺后小鼠乳腺癌（BCML—TA299）组织中ERβ、MEK-2和p-ERK的表达情况，用流式细胞仪检测各组肿瘤细胞的细胞周期和细胞凋亡的改变，并进行形态学方面的观察。结果：三苯氧胺和环磷酰胺均可抑制肿瘤生长，环磷酰胺组和联合组尤为明显（F=14．554，P〈0．05）；与对照组相比．其他三组肿瘤细胞增殖受到抑制，S期细胞百分比明显下降，均有统计学意义（P〈0．05）。三苯氧胺组和联合组在G0期左侧出现凋亡峰，凋亡率分别为2.3％和13．1％，统计学上有差异（P〈0．05）；病理观察对照组肿瘤细胞生长活跃．呈侵袭性生长，核分裂象多见。其他各组肿瘤细胞呈不同程度的灶状坏死，细胞核肿胀变空，可见核固缩、核碎裂和凋亡小体，联合组尤为明显；三苯氧胺和环磷酰胺均可抑制ERβ、MEK-2和p-ERK的表达，与对照组相比有统计学差异（F=211．88、179．08、156．44，P〈0．05）．且各组中ERβ与MEK-2、p-ERK的表达有明显的协同作用。结论：ERβ和MAPK通路的相互作用共同影响乳腺癌的发展、凋亡及内分泌治疗耐药的发生，可能成为乳腺癌内分泌治疗和化学治疗的新靶点。     

三氧化二砷对乳腺癌细胞MDA-MB-231雌激素受体α的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷（As2O3）作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231后,对雌激素受体α（ERα）表达的影响,并初步探讨其机制。方法用As2O3处理ERα阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,甲基化特异性PCR（MSP）检测ERα启动子CpG岛的甲基化状态,反转录PCR（RT-PCR）检测ERα mRNA表达水平的变化。以雌激素受体α阳性的人乳腺癌细胞MCF-7 为阳性对照。结果MDA-MB-231细胞ERα启动子CpG岛存在高甲基化,经过As2O3处理后,CpG岛高甲基化水平降低,ERα mRNA恢复表达。结论 一定浓度的As2O3能够使人乳腺癌细胞MDA-MB-231 ERα启动子中的CpG岛发生去甲基化,重新恢复mRNA的表达。     

三苯氧胺在乳腺癌治疗中的应用

自1966年首次生产出三苯氧胺(tamoxifen)新型抗雌激素药物后,从70年代初开始已越来越多地用于治疗乳腺癌。本文就近年来对三苯氧胺治疗乳腺癌的研究情况综述如下。 一、三苯氧胺的作用机理 三苯氧胺治疗乳腺癌的作用有激素相关和非激素相关两方面的机理。三苯氧胺及其代谢物能通过阻断雌激素与其受体结合而发挥抗雌激素作用。雌激素和靶细胞核的受体蛋白结合后刺激细胞生长,增加细胞自身分泌生长因子(TGF-α)和其它蛋白,     

靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影向

目的观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强(P＜0.05).结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.