Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对Patrick Brown 实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

基于核酸保护原理的DNA芯片检测技术

目的：制备出3－末端与载玻片交联,5－末端用32P标记的检测DNA的芯片。方法：以化学法合成了3－末端为尿嘧啶核糖的寡聚脱氧核糖核苷酸片段,用32P标记寡核苷酸的5－末端,经过高碘酸氧化后与玻璃基片表面的脂肪胺基缩合,并用硼氢化钠还原,制成寡核苷酸3－末端与玻片共价交联,5－末端为同位素标记的DNA芯片,将芯片与液相中的核酸片段杂交,再用酸酶S1酶切,结果,当液相中的核酸与玻片上共价交联的寡核苷酸片段产生特异性杂交配对时,核酸酶S1不能酶切玻片上的寡核苷酸片段,且玻片上被保护的寡核苷酸量与液相中的与核酸,由于该法制备的DNA芯片各个位点的DNA探针的含量为已知,待测的核酸样品无需进行同位素或荧光标记,操作简便,适用于对样品的DNA或RNA进行检测。     

构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

戊型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步研究

目的制备戊型肝炎病毒诊断基因芯片并进行杂交验证。方法利用Oligo6.0软件针对戊型肝炎病毒诊断基因保守区域设计多对寡核苷酸探针,用芯片点样仪将其按照阵列设计打印在玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交,进而在芯片扫描仪中对得到的探针数据进行分析并实验验证。结果芯片杂交后得到的探针荧光强度好,信噪比高,符合临床样品的基因亚型,RT-PCR验证后得到的电泳结果与芯片实验一致。结论实验设计并制备的寡核苷酸戊型肝炎病毒诊断芯片能用于戊肝的检测,为这项疾病的实验室诊断提供了一种快速平行的检测方法。     

一种用于芯片质控的通用序列标签寡核苷酸探针的设计

目的设计一种带有通用序列标签的寡核苷酸探针以应用于寡核苷酸芯片点样的质量控制。方法以HIV寡核苷酸探针作为核心序列,在其一端或两端连接上多种通用序列标签（usz）构建新型探针。然后打印芯片,以Cy5标记的通用引物（Cy5-UP,与UST互补）进行杂交,筛选出5条荧光信号强的探针,重新打印芯片。再分别以不同浓度梯度的、Cy5标记的通用引物（Cy5-UP）和随机引物（Cy5-RP）与芯片杂交,比较两者杂交效率。结果Cy5-UP的杂交结果显著优于Cy5-RP的杂交结果,特别是在较低浓度时。结论利用Cy5标记的通用引物检测探针上的通用序列标签,可以为芯片点样的质量控制提供一种更有效的方法。     

结核杆菌检测基因芯片的制备研究

目的　建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术。方法　制备和标记靶基因 ,用点样仪将靶基因点于玻片介质上 ,并经点样后处理制成基因芯片 ,用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化 ,计算 DNA固定率 ,同时测定和比较两种不同玻片、不同点样液和三种不同点样后处理方法的 DNA固定率。结果　制备结核杆菌检测基因芯片 ,用醛基修饰玻片作为介质 ,用 DMSO溶液作为点样液 ,点样后芯片处理以水合 1小时再干燥 30分钟为佳。结论　本研究所建立的结核杆菌检测基因芯片制备技术具有较高的效率和可靠的实用性能     

基因芯片中60 mer寡核苷酸SARS冠状病毒探针的制备

目的用合成仪合成60 mer寡核苷酸SARS冠状病毒的探针来制作寡核苷酸基因芯片.方法根据寡核苷酸探针的制作要求,选取SARS冠状病毒的特异序列30条、长度为60 mer的片段进行合成,并对合成后的纯化方法与条件进行探索.将经12%变性PAGE胶纯化后的探针直接点样制备成12×12阵列的寡核苷酸的基因芯片,初步与处理后的临床样品进行杂交.结果经PAGE纯化的寡核苷酸探针的纯度高,能满足寡核苷酸芯片制备的要求.临床SARS患者标本进行处理后与寡核苷酸芯片杂交、扫描检测,效果较好.结论该室合成的60 mer的寡核苷酸SARS冠状病毒探针能用于基因芯片的制备与检测,这为该疾病的实验室诊断提供了一种快速、平行的检测方法.     

两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较

目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后，一种用多组分多氨化合物包被，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化；另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体，活化剂是碳二业胺／N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基闲组DNA芯片的制备，并进行杂交检测分析结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层，与商业化的芯片比较发现，两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰，杂交点饱满、同一性好。结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功，其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产，是一种较理想的芯片表面制备方法。     

两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较

目的 探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法 玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析。结果 经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好。结论 两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法。