活血降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞相关分子蛋白表达的影响

目的：探讨活血降糖胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞相关分子蛋白Nephrin、Podocin、CD2AP表达的影响。方法：应用单侧肾脏切除结合小剂量STZ单次腹腔注射方法建造DN大鼠模型,随机分为模型组（M组）、假手术正常对照组（N组）、活血降糖胶囊干预治疗组（H组）,每组6例。H组给予活血降糖胶囊的剂量折合生药2.5 g·kg^-1·d^-1灌胃,M组和N组给予等量纯化水灌胃。8周后检测各组大鼠的24 h尿蛋白定量、血生化等指标,应用免疫组化技术检测肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达的情况。结果：8周后,与N组比较,M组出现24 h尿蛋白定量增多,内生肌酐清除率（Ccr）下降（P<0.05）,肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平均下调（P<0.05）;与M组比较,H组24 h尿蛋白定量降低（P<0.05）,Ccr升高（P<0.05）,肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平均上调（P<0.05）。采用直线相关分析后发现,24 h尿蛋白定量与肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平呈负相关;Ccr与肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达水平呈正相关。结论：DN时存在足细胞相关分子Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达异常,活血降糖胶囊对DN大鼠肾脏的保护作用机制可能是通过增加足细胞相关分子nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达,减少蛋白尿而实现的。     

白藜芦醇及SRT1720对2型糖尿病大鼠肾小球足细胞裂孔隔膜分子表达的影响

摘要：目的 研究白藜芦醇和SIRT1激活剂SRT1720对糖尿病大鼠肾功能以及足细胞损伤的干预作用,探讨SIRT1活化改善肾损害的作用和机制。方法 采用高脂饮食联合单侧肾切除和链脲佐菌素诱导方法建立2型糖尿病大鼠模型,用白藜芦醇和SRT1720等进行干预治疗。留取血清和肾脏,分析肾重及肾重/体重,检测空腹血糖、血肌酐、尿素氮等,采用免疫组化、逆转录-实时荧光定量PCR技术检测肾皮质中足细胞裂孔隔膜分子Nephrin和Podocin等蛋白原位表达和基因表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠单侧肾重及肾重/体重比显著增高,空腹血糖、血肌酐和尿素氮均显著增高,肾皮质中Nephrin和Podocin蛋白表达和基因表达丰度显著降低。白藜芦醇和SRT1720治疗组各项检测指标均较模型组有所改善,白藜芦醇组肾重/体重指数、空腹血糖、Nephrin和Podocin表达等与模型组有统计学差异,SRT1720组空腹血糖、血肌酐、尿素氮、Nephrin和Podocin表达等与模型组均有统计学差异。结论 白藜芦醇、SRT1720 等SIRT1激活剂可显著改善糖尿病大鼠肾功能和足细胞损伤,在糖尿病肾病的防治方面具有重要价值和应用前途。 关键词：糖尿病肾病;白藜芦醇;SRT1720;Nephrin;Podocin     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin表达的影响及机制

目的探讨霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil,MMF)对糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin蛋白表达的影响及机制。方法建立链脲佐菌素诱导的单侧肾切除大鼠糖尿病模型,将模型大鼠随机分成糖尿病组(DM组)与MMF给药组(DM+MMF组,10mg·kg-1.d-1灌胃给药),另设对照组(C组)。8wk末检测血糖、24h尿白蛋白排泄率(AER)变化,通过免疫组化方法检测肾组织ED-1表达,Westernblot方法检测肾组织Nephrin、Podocin、白细胞介素-1(IL-1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达。结果DM组大鼠尿AER明显高于C组(P<0.01),DM+MMF组大鼠尿AER明显低于DM组(P<0.05)。DM组大鼠肾小球ED-1阳性细胞数明显高于C组(P<0.01),DM+MMF组肾小球巨噬细胞浸润明显低于DM组(P<0.05)。DM组肾组织Nephrin与Podocin表达较C组分别下降80.2%与65.1%,MMF可明显恢复肾组织Nephrin与Podocin表达(P<0.01)。DM组肾组织IL-1与TNF-α表达较C组分别增加2.8倍与3.8倍,MMF可明显降低肾组织IL-1与TNF-α表达(P<0.01)。结论MMF可能通过恢复糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin蛋白表达减少尿白蛋白排泄。     

贝那普利对阿霉素肾病大鼠肾脏保护作用的研究

目的：观察贝那普利对阿霉素肾病大鼠形态学和肾皮质结蛋白表达改变的影响,探讨其对足细胞损伤的保护作用。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、阿霉素肾病组和贝那普利治疗组。分别于给药4、7周后留取标本,检测24h蛋白尿、血肌酐,肾组织行形态学检查,应用免疫组化法检测肾皮质中结蛋白表达。结果：肾病组大鼠尿蛋白排泄明显高于对照组（P〈0．05）,且有明显的肾小球足细胞损伤的病理学改变。肾皮质结蛋白表达增加（P〈0．05）。贝那普利治疗后肾脏病理明显减轻,结蛋白表达降低（P〈0．05）。结论：在阿霉素肾病中,贝那普利可改善肾小球足细胞的损伤程度,降低结蛋白表达,对肾小球起保护作用。     

FoxO1在同型半胱氨酸诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用研究

摘要：目的　探讨叉头状转录因子O1（FoxO1）在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用。方法　采用高蛋氨酸饮食喂养胱硫醚β-合成酶（Cbs）基因正常Cbs+/+小鼠和单基因敲除Cbs+/-小鼠各10只。8周后处死,收集肾组织,PAS染色观察小鼠肾小球形态学变化。体外培养足细胞,分为Control组和Hcy组（用含80 μmol/L Hcy的细胞培养液干预48 h）。将携带绿色荧光蛋白（GFP）的过表达FoxO1腺病毒（Ad-FoxO1）和干扰FoxO1腺病毒（Sh-FoxO1）转染足细胞,分为对照组、Ad-GFP组、Ad-FoxO1组、Sh-NC组、Sh-FoxO1组、Ad-GFP+Hcy组、Ad-FoxO1+Hcy组、Sh-NC+Hcy组、Sh-FoxO1+Hcy组。Western blot检测小鼠肾组织和足细胞裂隙膜蛋白（Podocin和Nephrin）、FoxO1及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶12（Caspase12）蛋白表达;qPCR检测小鼠肾组织和足细胞中FoxO1 mRNA的表达。结果　PAS染色结果显示,Cbs+/+组小鼠肾小球结构正常,基底膜清晰且分布均匀,而Cbs+/-组小鼠肾小球基底膜则呈现节段性增厚,系膜基质增多;与Cbs+/+组小鼠比较,Cbs+/-组小鼠肾组织中Podocin、Nephrin和FoxO1蛋白、FoxO1 mRNA的表达明显降低（P＜0.01）。与Control组比较,Hcy组FoxO1 mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.01）;过表达FoxO1后,与Ad-GFP+Hcy组相比,Ad-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显升高,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显降低（P＜0.05）;而干扰FoxO1后,与Sh-NC+Hcy组相比,Sh-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显降低,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显增高（P＜0.05）。结论　FoxO1可减轻Hcy诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及凋亡。     

归芪合剂联合缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏功能的保护作用

目的研究归芪合剂联合缬沙坦对2型糖尿病（T2DM）大鼠肾脏功能的保护作用。方法建立T2DM大鼠模型,给予归芪合剂联合缬沙坦灌胃治疗12周,测定大鼠空腹血糖（FBG）、血脂（TG）、总胆固醇（TC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的水平;测定胰岛素敏感指数（ISI）、肾脏肥大指数（KW／BW）和肾皮质钠钾．ATP酶活性。结果①与正常对照组比较,T2DM模型组大鼠FBG、TG、TC、MDA和KW／BW显著升高,SOD、ISI和肾皮质钠钾．ATP酶活性显著降低（P〈0．01 or P〈0．05）;②与T2DM模型组比较,治疗组大鼠FBG、TG、TC、MDA和KW／BW显著降低,SOD、ISI和肾皮质钠钾-ATP酶活性显著升高（P〈0．01）。结论归芪合剂联合缬沙坦对T2DM大鼠肾脏功能具有明显保护作用。     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin表达的影响及机制

目的探讨白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin蛋白表达的影响及机制。方法建立链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病模型,将模型大鼠随机分糖尿病组与TGP(50,100,200mg·kg-1.d-1灌胃)给药组,另设正常对照组。8wk末检测大鼠血糖、24h尿白蛋白排泄率(AER)变化,应用间接免疫荧光法检测肾组织Nephrin分布、West-ern杂交检测肾组织Nephrin、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与NF-κB-p65蛋白表达。结果模型组大鼠24hAER明显高于给药组,TGP治疗组大鼠24hAER明显减低。免疫荧光显示对照组肾小球Nephrin呈线状均匀分布;糖尿病组表达明显减少、呈颗粒状不均匀分布;TGP治疗组Nephrin表达增加,呈线状及颗粒状分布。Westernblot显示模型组肾组织Nephrin蛋白表达明显低于对照组,TGP治疗组表达增加;模型组肾组织TNF-α与NF-κB-p65蛋白表达明显高于对照组,TGP治疗组呈剂量依赖性降低它们的表达。结论TGP降低糖尿病大鼠尿蛋白机制可能部分与增加肾小球Nephrin表达有关。     

霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾足细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的研究霉酚酸酯(MMF)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾足细胞损伤的保护作用及其机制。方法用腹腔注射链脲佐菌素联合高脂饮食喂养建立DN大鼠模型。根据血糖值将大鼠随机分为模型组和实验组;另取正常大鼠作为正常组,每组10只。实验组灌胃MMF 15 mg·kg^-1,正常组和模型组给予等剂量0. 9%Na Cl,持续给药8周。检测大鼠血糖与尿肌酸酐,用免疫印迹法检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)与Bcl-2相关的X蛋白(Bax)的表达水平。结果正常组、模型组和实验组大鼠血糖值分别为(5. 0±0. 4),(26. 8±3. 2),(21. 7±2. 6) mmol·L^-1,组间两两比较差异有统计学意义(P <0. 05);这3组的尿肌酸酐含量分别为(7218. 9±1471. 4),(2280. 7±469. 1)和(4031. 4±641. 7)μmol·L^-1,组间两两比较差异有统计学意义(均P <0. 01);这3组的Nephrin相对表达量分别为2. 81±0. 70,0. 48±0. 21和2. 14±0. 45;这3组的Bax相对表达量分别为0. 21±0. 06,1. 71±0. 56和0. 63±0. 32,组间两两比较差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论 MMF能通过上调Nephrin、同时抑制凋亡蛋白的表达,从而保护DN大鼠肾足细胞损伤。     

伊贝沙坦预防链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾损伤的作用机制(英文)

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦(Irb)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的肾保护作用机制。方法:SD大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=7),糖尿病肾病组(DN组,n=6)Irb治疗组(DNI组,n=7)。SD大鼠单侧肾切除后,腹腔注射STZ诱导糖尿病模型,观察治疗后第4, 8,12周的血糖(BG)、体重(BW)、尿白蛋白排泄、24小时尿总蛋白的改变,同时观察12周时肌酐清除率(Ccr)、肾重(KW)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾组织总蛋白含量(RTP)、肾小球面积(A_G)和体积(V_G)、肾小球毛细血管基底膜(GBM)厚度的改变。通过免疫组化观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的表达。结果:DN组和DNI组间BG无差异(p>0.05)。Irb可显著抑制大鼠尿白蛋白、24小时尿总蛋白的排泄,抑制过度增高的Ccr(均为P<0.01)。而且Irb可显著抑制糖尿病大鼠KW、KW/BW、RTP、A_G和V_G的增加(P<0.05或P<0.01)。我们首次证实Irb能够显著抑制GBM的增厚和CTGF的表达(均为P<0.01)。另外,大鼠肾脏CTGF的表达与TGF-β_1的表达和肾小球体积呈显著正相关(均为P<0.01)。结论:早期应用Irb对糖尿病大鼠的肾保护作用可能与抑制肾脏肥大和肾脏CTGF表达有关。     

厄贝沙坦对糖尿病肾病模型大鼠结缔组织生长因子的影响

目的 观察血管紧张肽Ⅱ受体拮抗药厄贝沙坦对2型糖尿病模型大鼠肾脏结缔组织生长因子（CTGF）的影响。方法将SD大鼠分为假手术组（sham组）、糖尿病肾病模型组（DN组,采用右肾切除+高脂饮食+STZ制作糖尿病肾病模型）和厄贝沙坦治疗组（DNE组,采用STZ制作糖尿病肾病模型后给予厄贝沙坦治疗）,实验第12周末测定大鼠血糖、血胰岛素、血脂、24 h尿蛋白定量、肌酐清除率（Ccr）,免疫组化观察肾CTGF表达情况。结果DN组大鼠血糖、血胰岛素、血脂、24 h尿蛋白定量、肌酐清除率（Ccr）及CTGF的表达均高于Sham组（P＜0.05或P＜0.01）,DNE组明显低于DN组（均P＜0.05）。肾局部CTGF与尿蛋白、肾小球体积呈正相关（P＜0.05）。结论2型糖尿病肾病CTGF表达升高,厄贝沙坦可能通过抑制CTGF表达而减轻DN损害,保护肾功能。     

大黄酸对2型糖尿病模型大鼠的保护作用

目的:研究大黄酸对2型糖尿病模型大鼠的保护作用。方法:腹腔注射链脲佐菌素联合高脂饲养以复制大鼠2型糖尿病模型。实验分为正常对照(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、吡格列酮(10 mg/kg)组、大黄酸(100 mg/kg)组。灌胃给药,每天1次,连续8周。测定大鼠尿量(UV)、体质量(BW)、肾质量(KW)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)、肌酐(Cr)含量,尿蛋白(UPRO)、尿白蛋白(UALB)量,计算肾脏肥大指数(KW/BW)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、尿蛋白/肌酐比值(PCR)、尿白蛋白/肌酐比值(ACR)、内生肌酐清除率(Ccr)。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠UV、BW、KW、TG、TC、FPG、FINS、Cr、UPRO、UALB量增加,KW/BW、HOMA-IR、PCR、ACR、Ccr升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,大黄酸组大鼠KW、TG、TC、FPG、Fins、UPRO、UALB、Cr量减少,KW/BW、Ccr升高,HOMA-IR、PCR、ACR降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:大黄酸具有降低2型糖尿病模型大鼠尿蛋白排泄的作用,其机制可能与改善胰岛素抵抗有关。     

早期糖尿病肾病大鼠肾脏线粒体功能及超微结构变化

目的观察早期糖尿病肾病大鼠肾脏线粒体功能和结构变化。方法将20只健康雄性大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组,每组10只。糖尿病组大鼠采用链脲佐菌素诱导糖尿病模型。第10周末测定2组血糖、肾重/体质量、24h尿蛋白定量;检测各组肾脏线粒体丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量及锰超氧化物歧化酶（Mn-S0D）、总一氧化氮合酶（T-NOS）、组分ATP酶活性和线粒体呼吸控制率（RCR）,分析线粒体比表面。结果与正常对照组比较,糖尿病组血糖、肾重/体质量、24 h尿蛋白定量明显增加（P〈0.01）,肾脏线粒体MDA、NO含量、T-NOS明显增加（P〈0.01）,Mn-S0D、组分ATP酶活性、线粒体RCR及比表面明显减少（P〈0.01）。结论早期糖尿病肾病大鼠肾脏线粒体存在明显的氧化损伤和功能、结构障碍。     

补肾活血方对阿霉素肾病小鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

【摘要】 目的 观察补肾活血方治疗对阿霉素(ADR)诱导的阿霉素肾病小鼠肾小球足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达的影响,并探讨其作用机制。方法 用ADR诱导产生局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)肾病模型,1周后用补肾活血方治疗(治疗组),持续6周。并设空白对照组、模型组。收集各组血、尿及肾组织,检测其体质量、右肾质量、血清白蛋白(ALB)、尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)。光镜观察肾组织形态改变;免疫荧光测定小鼠肾小球足细胞nephrin的表达;RT-PCR检测各组肾组织nephrin mRNA的表达。结果 模型组UACR显著高于对照组与治疗组,体质量和ALB显著低于对照组和治疗组(均P<0.01);对照组肾小球足细胞nephrin免疫荧光呈连续性表达,治疗组呈轻微缺失,模型组呈少量点状或片状表达,较对照组和治疗组表达强度明显减少。模型组nephrin mRNA表达水平均显著低于对照组和治疗组(P<0.01)。结论 补肾活血方能减少阿霉素肾病小鼠的蛋白尿,可能与改善肾小球足细胞nephrin的表达减少有关。     

贝纳普利对糖尿病大鼠肾脏中ICAM-1 mRNA和尿微量白蛋白的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂贝纳普利对糖尿病肾脏病变的保护作用和对细胞间粘附分子(ICAM-1)mRNA及蛋白表达的影响.方法STZ诱发大鼠糖尿病,实验设正常组,糖尿病对照组,贝纳普利组和胰岛素治疗组,贝纳普利1.1mg·kg-1·d-1治疗2月,观察肾脏肥大、尿蛋白变化以及用免疫组化和RT-PCR方法检测ICAM-1在肾组织的定位、半定量表达.结果与糖尿病组相比,贝纳普利能显著降低肾重/体重,24h尿微量白蛋白(P<0.01).免疫组化和RT-PCR半定量结果显示贝纳普利能显著降低ICAM-1表达(P<0.01).结论贝纳普利能够降低STZ诱发糖尿病大鼠肾脏组织ICAM-1 mRNA和蛋白表达,对糖尿病肾脏病变有保护作用.     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin及podocin表达的影响

目的：探讨厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞分子 nephrin、podocin mRNA表达的影响。方法：将36只Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（N组）、糖尿病肾病组 （DM组 ） 和厄贝沙坦干预组（E组）。E组大鼠给予厄贝沙坦50mg·kg^-1·d^-1 灌胃,N组和DM组大鼠给予等量饮用水灌胃。于第8周和第12周检测3组大鼠24h尿蛋白 （Pro） 定量、血清肌酐（Scr）水平;用RT-PCR方法检测肾皮质nephrin、podocin mRNA表达水平。结果：造模后第8周和第12周,DM组大鼠24hPro、Scr水平与N组比较,差别有统计学意义（P〈0.01）;造模后第8周和第12周,E组大鼠24h Pro与DM组比较,差别有统计学意义（P〈0.05）;造模后第12周Scr水平与DM组比较,差别有统计学意义（P〈0.05）。第8和第12周,DM组大鼠nephrin和podocin mRNA表达水平与 N组比较,差别有统计学意义（P〈0.01）;E组大鼠nephrin和podocin mRNA表达水平与DM组大鼠比较,差别亦有统计学意义（P〈0.05）。结论：厄贝沙坦能通过上调nephrin和 podocin表达水平来改善足细胞功能,减少糖尿病肾病大鼠蛋白尿。     

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠组织TGF-β1及OPN表达的影响

目的:观察雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠组织TGF-β1及OPN表达的影响。方法:Wistar大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发DN大鼠模型。大鼠随机分三组,分别为:对照组、模型组和雷帕霉素治疗组,给药8周,实验第2,4,8周,测定24h尿蛋白定量;治疗8周后,定时定量PCR法测肾小管间质OPN mRNA表达;免疫组化法检测肾小管间质TGF-β1表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白定量明显升高(P<0.05),肾组织TGF-β1、OPN表达明显增加(P<0.01)。雷帕霉素治疗组大鼠24h尿蛋白定量明显降低,肾小管间质组织OPN、TGF-β1表达减少,与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能减少DN大鼠尿蛋白,下调肾小管间质组织OPN、TGF-β1表达水平,减轻DN肾小管间质病变。