齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的：采用高浓度胰岛素体外诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗的细胞模型,观察齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法：用CCK-8法筛选齐墩果酸作用于HepG2细胞的实验浓度,然后用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的齐墩果酸（0.1、1、10、100μmol·L-1）、吡格列酮（10μmol·L-1）干预,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量。结果：1不同浓度齐墩果酸对HepG2细胞增殖无明显影响。2与对照组比较,高浓度胰岛素作用24 h后,模型组葡萄糖消耗量明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,齐墩果酸组HepG2细胞葡萄糖消耗量随浓度增加而增加,成一定的量效关系,浓度为10μmol·L-1和100μmol·L-1时葡萄糖消耗量显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。结论：齐墩果酸能改善高浓度胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

辅助降糖片对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的以HepG2细胞为实验对象,探讨辅助降糖片的体外降糖效果及胰岛素传导关键信号胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、丙酮酸脱氢激酶-1(phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK1)的影响。方法培养HepG2细胞,CCK-8法检测辅助降糖片对HepG2细胞增殖的影响以确定其可作用于HepG2细胞的的浓度,采用高浓度胰岛素刺激建立胰岛素抵抗模型,用葡萄糖检测试剂盒检测辅助降糖片对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,Western Blot法探讨其可能的作用机制。结果辅助降糖片浓度高于300μg/mL时对HepG2细胞有较强的抑制作用,300、150与模型组相比葡萄糖消耗量具有极显著差异(P0.05)。Western Blot显示与正常组相比,模型组PDK1、InsR蛋白表达显著降低(P0.05),与模型组比较给药组,PDK1、InsR表达显著升高(P0.05)。结论辅助降糖片对HepG2细胞胰岛素抵抗有改善作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路来改善2型糖尿病的胰岛素抵抗。     

白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗改善作用的实验研究

目的 探讨白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用.方法 用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对正常HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,并于葡萄糖消耗实验结束后用MTT法检测白子菜对细胞增殖的影响;将HepG2细胞置于10-8 mol·L-1胰岛素培养液中36h复制胰岛素抵抗模型;用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响.结果 白子菜对HepG2细胞增殖无影响,并可促进正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗.结论 白子菜可明显改善HepG2细胞胰岛素抵抗.     

桑叶降糖有效部位对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响

目的:初步探讨桑叶有效部位对胰岛素抵抗(IR)HepG2细胞模型的保护作用及机制。方法:测定HepG2细胞的生长曲线,成功复制HepG2细胞IR模型后,采用各降糖有效部位的提取液进行干预,并与常用的罗格列酮和参芪降糖胶囊进行对照,测定各组药液对HepG2细胞及IRHepG2细胞增殖的影响,观察比较各给药组细胞的葡萄糖消耗量。结果:筛选出2.5-10μg/L的罗格列酮、5-100mg/L的参芪降糖胶囊、2-12mg/L的桑叶生物碱、5-100mg/L的桑叶黄酮、5-100mg/L的桑叶多糖、5-100mg/L的桑叶水提物对HepG2细胞及IRHepG2细胞增殖无影响,每组给予不同浓度的药物干预后,高、中、低剂量的生物碱、水提物组和高剂量的黄酮、多糖组可显著增加其葡萄糖消耗量(P<0.01)。结论:桑叶生物碱具有显著的改善模型细胞IR的作用,可能与其增加HepG2细胞的葡萄糖消耗量和促进葡萄糖的吸收及摄取有关。     

降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响.方法:以浓度分别为5×10-5,5×10-6,5×10-7,5×10-8,5×10-9mol·L-1的胰岛素孵育HepG2细胞24 h,建立并筛选最佳HepG2胰岛素抵抗模型,分别以20％大鼠空白血清及5 μmol· L-罗格列酮为对照,采用细胞培养、糖原染色、葡萄糖摄取分析等方法检测20％降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗相应指标的变化.结果:以5×10-7 mol· L-1的胰岛素成功建立HepG2胰岛素抵抗模型.与胰岛素抵抗模型组相比,降脂平肝汤含药血清组及罗格列酮组在基础状态下和胰岛素刺激状态下细胞的葡萄糖摄取以及糖原含量均明显增加,细胞糖原颗粒显著增多,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:降脂平肝汤含药血清能减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗.     

中药复方及有效成分对骨骼肌胰岛素抵抗PI3K/AKT通路的影响

2型糖尿病(T2DM)是一种多基因遗传的代谢性疾病,其主要病、生理特征为胰岛素抵抗(IR),而骨骼肌是IR的主要靶器官。骨骼肌胰岛素抵抗的发生发展机制与PI3K/AKT信号转导通路有着密切的关系。临床及实验研究显示,中药复方及中药有效成分可改善骨骼肌IR,防治T2DM。因此,本文就近年来中药复方和中药有效成分通过PI3K/AKT信号通路改善T2DM的骨骼肌IR的机制进行综述。     

藤茶主要成分对胰岛素抵抗HepG2细胞内氧化应激水平的影响

目的:探讨藤茶主要成分,二氢杨梅素、没食子酸、二氢槲皮素、杨梅素及杨梅苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗及细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)、三磷酸腺苷(ATP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。方法:将HepG2细胞分为正常对照组、胰岛素抵抗模型组和样品干预组。用高糖(55 mmol·L-1)诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型,用MTT法检测样品对HepG2细胞增殖的影响;用葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖的含量;用分光光度法检测细胞内MDA、LD含量及SOD、CAT活性;用荧光酶标仪检测细胞内ROS和ATP水平。结果:五个化合物在有效浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响;样品干预组葡萄糖消耗量较模型组显著升高;与模型组相比,五个化合物某个或某几个浓度组显著降低细胞内MDA含量,提高SOD、CAT活性及ATP水平;没食子酸、二氢槲皮素和杨梅苷显著降低细胞内ROS水平;除二氢杨梅素外,其余四个化合物均能降低细胞内LD含量。结论:胰岛素抵抗HepG2细胞与对照组细胞相比有较高的氧化应激水平,抗氧化能力减弱。藤茶主要成分能通过降低细胞的氧化应激水平,增加细胞的抗氧化能力,从而预防胰岛素抵抗。     

藤茶不同提取部位对HepG2细胞胰岛素抵抗改善作用的研究

目的:研究藤茶不同提取部位改善胰岛素抵抗的活性。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测藤茶不同提取部位对Hep G2细胞增殖的影响;用葡萄糖氧化酶法检测藤茶不同提取部位对Hep G2细胞糖消耗的影响;用高糖(55 mmol·L-1)诱导Hep G2细胞,建立胰岛素抵抗模型,并用葡萄糖氧化酶法检测藤茶不同提取部位对胰岛素抵抗Hep G2细胞糖消耗的影响。结果:在有效浓度范围内,藤茶各提取部位对细胞增殖无明显影响,对Hep G2细胞的糖消耗无显著影响。藤茶总提物、正丁醇部位和水部位对胰岛素抵抗Hep G2细胞糖消耗影响显著,与模型组相比,均可使细胞糖消耗量增加50%以上。结论:藤茶不同提取部位对Hep G2细胞糖消耗无显著影响,除石油醚及乙酸乙酯高浓度组(25和50μg·m L-1)外,其余各部位均能提高胰岛素抵抗的Hep G2细胞的葡萄糖消耗,改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗。     

芒果苷对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的探讨芒果苷在体外的降糖效果及对胰岛素传导关键信号蛋白磷酸化蛋白激酶B[p-AKT(Thr308)]、磷酸化糖原合成激酶3β[p-GSK-3β(Ser9)]、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)表达的影响。方法培养HepG2细胞,用CCK-8法检测芒果苷对HepG2细胞增殖的影响;采用浓度为1×10^-6 mol/L的胰岛素刺激细胞36 h建立胰岛素抵抗模型;用葡萄糖检测试剂盒检测芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,用western blot法探讨其可能的作用机制。结果芒果苷浓度在>125μg/mL浓度后对HepG2细胞生长有抑制作用,故采用浓度为60、30、15μg/mL的芒果苷进行葡萄糖消耗实验,发现实验组与模型组比较,葡萄糖消耗量明显增加且具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。western blot结果表明,与正常组比较,模型组p-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα、GLUT2蛋白表达明显降低且存在显著性差异(P<0.05);与模型组比较,实验组蛋白表达均明显增加,且高剂量组均存在显著性差异(P<0.01,P<0.05),低剂量组除GLUT2蛋白表达具有显著性差异(P<0.05),其他蛋白虽有增加但无统计学意义。结论芒果苷对HepG2细胞胰岛素抵抗有改善作用,其作用机制可能是通过调控p-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα及GLUT2等蛋白的表达来改善2型糖尿病的胰岛素抵抗。     

HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立与鉴定

目的:采用胰岛素体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,为研究胰岛素抵抗及2型糖尿病提供一种可靠的体外胰岛素抵抗模型。方法:采用含不同胰岛素浓度的RPMI 1640培养基作用于HepG2细胞,葡萄糖-己糖激酶法检测作用不同时间点培养基中葡萄糖含量,MTT法检测各胰岛素浓度对HepG2细胞存活率的影响,确定胰岛素抵抗最佳作用浓度及时间;并以油红O染色观察细胞形态的变化;Real-time PCR法检测IRS-2 mRNA的表达,酶联免疫法检测葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的表达。结果:细胞产生胰岛素抵抗的最佳作用时间为36 h,最佳胰岛素浓度为1×10-8mol.L-1。建立模型后鉴定,模型细胞与正常细胞相比脂滴明显增多;IRS-2 mRNA的表达较正常细胞明显降低(P<0.05),G-6-Pase的表达较正常细胞明显升高(P<0.05)。结论:采用胰岛素体外诱导的方法,在胰岛素浓度为1×10-8mol.L-1,作用36 h后,可建立稳定的HepG2细胞胰岛素抵抗模型。     

橄榄苦苷对胰岛素抵抗HepG2肝细胞胰岛素信号传导的影响

目的:观察橄榄苦苷(oleuropein,OL)对胰岛素抵抗HepG2肝细胞的胰岛素信号传导的影响。方法:常规复苏细胞,于10%FBS+1%青-链霉素的DMEM(1 g·L~(-1)葡萄糖)培养基中,37℃5%CO_2细胞培养箱中培养,常规细胞培养传至第3代待用;利用1×10~(-6)mol·L~(-1)胰岛素溶液刺激HepG2肝细胞36 h后建立肝细胞胰岛素抵抗模型,分为模型组,OL组(50μmol·L~(-1)),另设正常HepG2肝细胞为正常组,每组设6个复孔;对数生长期细胞,饥饿培养24 h后,诱导建立胰岛素抵抗模型,进行药物干预36 h后,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测OL对细胞活性的影响;OL对胰岛素抵抗HepG2肝细胞干预后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肝细胞胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1),葡萄糖转运蛋白-2(GLUT-2)mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组胰岛素抵抗的HepG2肝细胞活性明显降低(P0.05),胰岛素信号分子InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。与模型组比较,OL干预后胰岛素抵抗的HepG2肝细胞活性显著升高(P0.01);胰岛素信号分子InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:OL能够增加胰岛素抵抗肝细胞活性,上调肝细胞胰岛素信号通路中InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白的表达,这可能是其改善胰岛素抵抗的机制之一。     

尖叶假龙胆乙酸乙酯部位对胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、Akt的影响

目的：研究尖叶假龙胆乙酸乙酯部位对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素关键信号IRS-1、Akt的基因、蛋白的影响。方法：以CCK-8法检测HepG2细胞活性;采用人肝癌HepG2细胞,并用高浓度胰岛素（10 -6 mol·L -1 ）培养HepG2细胞36 h,建立胰岛素抵抗细胞模型。根据CCK-8法结果分为正常组（Control组）、模型组（IR组）、尖叶假龙胆乙酸乙酯部位IR+50 μg·mL -1 组、IR+500 μg·mL -1 组及二甲双胍组,以葡萄糖试剂盒检测葡萄糖消耗量。尖叶假龙胆乙酸乙酯部位给药6 h后RT-PCR检测胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、Akt基因表达;尖叶假龙胆乙酸乙酯部位给药6 h后,利用Western blot法检测IRS-1、Akt的蛋白表达。结果：尖叶假龙胆乙酸乙酯部位浓度为500 μg·mL -1 时,存活率达到95%。浓度高于500 μg·mL -1 时,存活率下降;与IR组比较,IR+50 μg·mL -1组与IR+500 μg·mL -1 组促进胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖的消耗量,但其作用不及盐酸二甲双胍组。给药6 h后与IR组比较,IR+50 μg·mL -1 组与IR+500 μg·mL -1 组的RT-PCR检测胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、Akt的基因表达显著升高,P<0.01。给药6 h后与IR组比较,IR+50 μg·mL -1 组与IR+500 μg·mL -1 组的Western blot法检测IRS-1、Akt的蛋白表达显著升高,P<0.01。结论：尖叶假龙胆乙酸乙酯部位上调HepG2细胞胰岛素信号通路关键靶点IRS-1、Akt基因表达,以及IRS-1、Akt蛋白表达从而可能是其改善胰岛素抵抗作用的机制。     

肉桂多酚改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的:研究肉桂多酚改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制。方法:以HepG2细胞为模型,设立对照组和肉桂多酚实验组,肉桂多酚组设5,10,15 mg.L-13种不同质量浓度组。肉桂多酚作用细胞24 h后,运用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测肉桂多酚对胰岛素抵抗HepG2细胞内葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)基因表达的影响。结果:与对照组比较,肉桂多酚作用细胞24 h后,降低了GLUT2 mRNA的表达(P<0.05);肉桂多酚能够明显降低PEPCK,G-6-Pase mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),且随着浓度的升高,肉桂多酚对PEPCK和G-6-Pase mRNA表达的抑制作用越明显。结论:肉桂多酚对HepG2胰岛素抵抗具有明显的改善作用,其机制可能与降低细胞内GLUT2,PEPCK和G-6-Pase mRNA的表达有关。     

白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗作用的分子机制

目的:观察白子菜对胰岛素抵抗人肝癌Hep G2细胞的胰岛素受体(insulin receptor,InsR),葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter4,GLUT4)mRNA表达和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB),糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)蛋白表达的影响,探讨其干预胰岛素抵抗的分子机制。方法:用胰岛素诱导Hep G2细胞使其产生胰岛素抵抗,实验分为空白组,模型组,白子菜水提物(Gynura divaricata hot water extracts,GDE)高、低质量浓度(1.0,0.5 g·L-1)组,白子菜总黄酮(G.divaricata flavonoids,GDF)高、低质量浓度(0.2,0.1 g·L-1)组,白子菜总生物碱(G.divaricata alkaloid,GDA)高、低质量浓度(0.1,0.05 g·L-1)组,二甲双胍(1×10-3mol·L-1)组,葡萄糖氧化酶法检测Hep G2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR)检测Hep G2细胞InsR,GLUT4 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Hep G2细胞PKB,GSK-3β的蛋白表达。结果:与模型组比较,1.0,0.5 g·L-1GDE组上清液葡萄糖含量极显著降低(P0.01),0.2 g·L-1GDF组上清液葡萄糖含量显著降低(P0.05);GDE,GDF组InsR,GLUT4的mRNA表达显著增加(P0.05);GDE组PKB的蛋白表达显著增加(P0.05),GSK-3β的蛋白表达显著降低(P0.05),GDF组PKB的蛋白表达极显著增加(P0.01),GSK-3β的蛋白表达极显著降低(P0.01)。结论:白子菜可改善胰岛素抵抗Hep G2细胞对葡萄糖的摄取,其机制可能与上调胰岛素抵抗Hep G2细胞InsR,GLUT4 mRNA表达和PKB的蛋白表达及降低GSK-3β的蛋白表达相关。     

手法对家兔不同急性损伤骨骼肌卫星细胞影响观察

目的：观察手法对急性损伤骨骼肌卫星细胞增殖的影响,分析机械损伤和失神经因素在肌卫星细胞增殖中的作用和手法促进骨骼肌增殖的机制与途径。方法：取6月龄新西兰家兔258只建立家兔单纯钝挫伤、单纯失神经、钝挫伤＋失神经动物模型,于造模后第2天行手法治疗,于造模后第1、2、3周和第1、2、4、6个月各取1小组家兔观察肌卫星细胞数目变化情况,按照日期对肌卫星细胞的增殖情况作一连续动态观察。结果：失神经后骨骼肌卫星细胞数目比无神经损伤组增加明显,在第3周达到峰值,而后迅速下降,4个月后低于正常水平。结论：神经因素在骨骼肌卫星细胞的激活与增殖中有重要作用,手法可以加快失神经早期骨骼肌卫星细胞激活与增殖速度,可能加速了肌卫星细胞向成肌纤维的肌组织转化。