人β-葡萄糖醛酸苷酶基因复核表达载体的构建与鉴定

0引言卜葡萄糖醛酸耷酶（以下简称eG）是溶酶体内的一种水解糖昔酶，与机体的许多生理、病理及药物代谢过程关系密切「“．近年研究表明，该酶的活性高低，与肿瘤的恶性程度及侵袭能力有关．抗体导向前体酶解前体药疗法（ADEPT）已将该酶作为重要的研究对象”’，为了特异地研究pG作为前体酶及预施前体药抗肿瘤的生物学效应，我们构建了含人pG一全片段的逆转录病毒表达载体pDOR－pG，为探讨pG对肿瘤生物学行为的影响及基因治疗奠定了基础，1材料和方法1．l材料pGEM－4－pG质粒由加拿大Toronto大学KyleJW教授惠赠，在其ECORI位点…     

抗β—葡萄糖醛酸苷酶抗体的制备及意义

0引言β-葡萄糖醛酸告酶（eG）为溶酶体内的一种酸性水解糖着酶，该酶与机体的许多生理、病理及药物代谢过程关系密切。近年研究证明该酶的活性高低与肿瘤的恶性程度及侵袭能力有关。制备抗RG抗体对该酶的定性、定位和原位定量研究及对肿瘤组织和血液中游离6G的定量分析等具有重要意义。国内外尚未见抗RG抗体的商品供应，为此我们制备了兔抗pG抗体。回材料和方法采用pG（Sigma公司，EC3．2．1．3．l）为抗原，经背部多点皮下注射的方法免疫体重1．8kg～2．5kg的雄性新西兰大白兔（3只）及1．8kg～2．0kg日本大耳白兔门只），每只动物一…     

β-葡萄糖醛酸苷酶基因转染人卵巢癌细胞的生物学特性

目的：将β-葡萄糖醛酸苷酶(βG)基因转入卵巢癌细胞系3AO，建立高表达BG的卵巢癌细胞模型，并观察转染细胞的生物学特性．方法：构建真核表达的逆转录病毒载体pcDNA3．1-βG，利用阳离子脂质体将其转入人卵巢癌细胞株，用mRNA打点杂交、Western Bloling鉴定其转录与表达水平，并通过检测细胞生长、增殖及形态学的变化观察转染细胞的     

大肠癌组织中β-半乳糖苷结合蛋白-3与β-葡萄糖醛酸苷酶表达的意义

目的:通过观察β-半乳糖苷结合蛋白-3(Galectin-3)与β-葡萄糖醛酸苷酶(β-G)在大肠癌组织中的表达,与大肠癌的生物学特征进行比较,以探讨其临床意义.方法:采用SP免疫组织化学方法检测98例临床新鲜标本,其中包括15例癌旁正常大肠黏膜组织及83例大肠癌组织中galectin-3和β-G的表达情况,并进行两种蛋白的表达相关性分析. 结果:Galectin-3和β-G蛋白在浸润程度深、分化程度低及Dukes分期较晚的大肠癌组织中的表达高于浸润程度浅(0.15±0.03 vs 0.16±0.05, P=0.02)、分化程度高(0.15±0.012 vs 0.16±0.03, P=0.03)及Dukes分期较早(0.18±0.06 vs 0.17±0.05)的大肠癌组织(P<0.05);在大肠癌组织中,galectin-3的表达和β-G的表达呈正相关(r=0.628,P<0.01). 结论:Galectin-3和β-G的异常表达在大肠癌的发生、发展中起着重要作用,具有一定的诊断价值.     

ELISA法测定脑脊液中β-葡萄糖醛酸酶及临床意义

目的 :探讨脑脊液中 β-葡萄糖醛酸酶 ( β- G)活性测定对脑肿瘤诊断的临床意义。方法 :建立酶联免疫吸附试验 ( ELISA)技术测定脑肿瘤及非肿瘤脑病患者脑脊液中 β- G活性。结果 :恶性脑肿瘤患者脑脊液 β- G活性明显高于良性脑肿瘤、非肿瘤脑病患者及其他对照组 ( P<0 .0 1 ) ;恶性脑肿瘤患者术后脑脊液 β- G活性呈下降趋势。结论 :检测脑脊液中β- G活性 ,对恶性脑肿瘤诊断及病程判定有一定的参考价值     

人肝细胞内源性β-葡萄糖醛酸苷酶与胆红素结石关系的免疫电镜观察

人体组织自身内源性β葡萄糖醛酸苷酶（βＧ）的质和量与胆红素结石形成有关［１］。我们选取正常人及胆红素结石肝细胞为研究对象,参照肝细胞研究模型［２］,应用免疫电镜技术对其关系进行探讨,旨在寻找形态学证据。一、材料与方法１．实验分组：胆红素结石组：经...     

原发性肝癌中β-葡萄糖醛酸酶mRNA及蛋白的同步表达及意义

目的 同步探讨原发性肝细胞癌组织中β-葡萄糖醛酸酶（β—G）mRNA及蛋白的表达和肿瘤分级的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反β（RT—PCR）方法和Westemblot法,对25例原发性肝细胞癌组织和10例正常肝脏组织进行检测。结果β-GmRNA在正常肝及肝癌组织中均有表达．但在不同分化程度肝癌组织中的表达有显著差异,分别是高分化组（2．24&#177;1．12）、中分化组（3．91&#177;1．32）和低分化组（5．86&#177;1．69）;β-G蛋白在上述组织中的表达同样呈显著差异,分别是高分化组（0．24&#177;0．08）、中分化组（0．49&#177;0．12）和低分化组（0．96&#177;0．18）,两者均随着肿瘤恶性程度的增加而表达呈递增趋势。结论β-G与原发性肝细胞癌密切相关,随着癌细胞恶性程度的增加,β-G其表达量呈逐步递增,提示β-G可能参与肝细胞的癌变过程。     

结肠黏膜上皮细胞内β-葡萄糖醛酸酶超微结构的定位

目的观察结肠黏膜上皮细胞内β-葡萄糖醛酸酶在超微结构水平的精确定位。方法应用低温包埋、紫外线照射、胶体金标记、免疫电镜技术,在透射电镜下观察由White树脂包埋后的结肠黏膜上皮细胞内的β-葡萄糖醛酸酶。结果结肠黏膜上皮细胞的内质网、溶酶体内散在分布着标记β-葡萄糖醛酸酶的金颗粒,表明该酶主要分布于上述几种细胞器内。结论本研究为进一步研究结肠的各种疾病尤其是肿瘤中β-葡萄糖醛酸酶活性的变化,建立了实用的形态学模型。     

肝癌细胞内逆转录病毒介导β-葡萄糖醛酸苷酶基因的表达

目的 建立高表达β－葡萄糖醛酸苷酶（β－Ｇｌｕ）的肝癌细胞株。方法 采用脂质体介导法,将重组逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ－βＧ转染肝癌细胞,Ｇ４１８筛选出阳性克隆,用免疫组化法、酶组织化学法、原位杂交法及酶活性测定等方法观察β－Ｇｌｕ表达情况。结果 共获得４株转染阳性克隆,其中Ｆ１,Ｈ４为β－Ｇｌｕ高表达克隆。免疫组化法发现转染细胞β－Ｇｌｕ免疫阳性物质主要分布于胞质及胞核内,酶组织化学法观察转染细     

胆红素钙结石兔模型β-葡萄糖醛酸酶的变化

通过胆红素钙结石病兔模型,用生物化学和酶组织化学的方法,动态、系统地观察兔肝胆组织和胆汁中细菌性和组织源性β-葡萄糖醛酸酶在色素石成石过程中的变化,证实内、外源性β-葡萄糖醛酸酶均可参加成石过程。外源性β-葡萄糖醛酸酶在成石前期迅速升高,以后随胆道感染被控制而下降。内源性β-葡萄糖醛酸酶在成石初期逐渐升高,以后长期维持在较高水平,在成石初期和生长期的作用不容忽视。作者还讨论了β-葡萄糖醛酸酶在成石中的作用。     

血清β-葡萄糖醛酸酶诊断转移癌31例

0　引言　恶性肿瘤常见有多种酶的改变 [1 -3 ] ,近年发现 [1 ,4]肿瘤细胞含有大量的β-葡萄糖醛酸酶 ,β- GCD的水平与存活的细胞数有相关性 .采用 ELISA法测定健康人 35例 ,良性肿瘤患者 30例及恶性肿瘤患者 67例血清 β- GCD及 CEA,观察β- GCD治疗前后的变化如下 .1　材料和方法1 .1　材料　收集本院恶性肿瘤患者血清 67例 ,年龄 33～ 74(平均 44)岁 .原发未治疗癌 36例 ,转移癌 31例 (其中肺和胸壁转移癌 1 1例 ,骨转移癌 9例 ,远端淋巴结转移癌 6例 ,肝转移癌 3例 ,多器官转移癌 2例 ) .追踪转移癌 1 7例治疗前后 β-GCD和 C…     

胆汁内源性β－葡萄糖醛酸酶真实活力的观察

胆汁内源性β－葡萄糖醛酸酶真实活力的观察陈道纯，陈锡谋，林谷珍关键词：β－葡萄糖醛酸酶，胆汁，胆结石胆汁内源性β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇ）与胆道的结石、炎症和损伤等有密切关系，本文观察胆汁β－Ｇ活力受胆汁成分干扰的程度，探讨β－Ｇ真实活力的观察方法，并...     

胆汁内源性β－葡萄糖醛酸酶的酸化沉淀浓缩

胆汁内源性β－葡萄糖醛酸酶的酸化沉淀浓缩陈道纯，陈锡谋，林谷珍关键词：β－葡萄糖醛酸酶，胆汁，乙酸缓冲液为从胆汁分离内源性β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇ），须先把胆汁浓缩。我室近年建立了一种酸化沉淀浓缩方法，兹报告实验结果。１材料和方法１．１胆汁为胆结石病...     

脆弱类杆菌与大肠杆菌的β-葡萄糖醛酸酶活性的测定比较

作者测定了二株脆弱类杆菌与大肠杆菌3360(O_(157)K_(88))株的β-G活性,并进行了比较。结果表明:脆弱类杆菌ATCC25285的β-G平均活性为94.7u,明显高干脆弱类杆菌CDC14462株及大肠杆菌3360株。作者选定脆弱类杆菌ATCC25285株为胆红素结石动物模型的模式菌株。     

淋巴细胞内β—葡萄糖醛酸酶超微结构定位研究

应用低温包埋，紫外线照射，胶体金标记免疫电镜技术，首次在透射电镜下确定Ｗｈｉｔｅ树脂包埋淋巴细胞内β－葡萄糖醛酸酶在超微结构水平的精确定位，观察到淋巴细胞的内质网，高尔基复合体，溶酶体内散在分布着标记β－葡萄糖醛酸酶的金颗粒，表明该酶主要分布于这几种细胞器内。     

胆石症患者胆道细菌的研究(Ⅱ、胆石症胆道细菌及其β-葡萄糖醛酸酶的研究)

本文对65例胆红素钙结石患者胆汁及胆囊粘膜进行细菌培养,观察细菌产生β-葡萄糖醛酸酶的能力及各菌β-葡萄糖醛酸酶最适反应pH值。首次提出不同部位胆红素钙结石均有较高的需氧菌和厌氧菌检出率,所有胆道分离菌的绝大部份(98％)菌株均能产生β-葡萄糖醛酸酶的观点。     

原发性肝内胆管结石胆汁和唾液中内源性β－葡萄糖醛酸酶的检测及临床意义

目的探讨内源性β－葡萄糖醛酸酶（β－glucuronidase，β－G）活性在原发性肝内胆管结石形成中的作用和意义。方法采用改良的Fishman方法对原发性肝内胆管结石患者胆汁、唾液中内源性β－G进行测定，分析内源性β－G活性变化与肝内胆管结石的关系。结果无论术前及术后，肝内胆管结石患者胆汁和唾液中内源性β－G活性均明显高于对照组（P〈0．05）；与术前相比，术后2周胆汁和唾液中内源性β－G水平均较术前降低，但是只有胆汁内源性β－G水平变化有统计学意义（P〈0．05）。结论内源性β－G可能与原发性肝内胆管结石的成石有关。     

正常肝细胞与肝癌细胞内β—葡萄糖醛酸酶免疫电镜定位

采用低温包埋、胶体金标记、免疫电镜技术，进行了正常肝细胞和肝癌细胞内β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）的定位研究。结果表明，β－Ｇ存在于内质网，溶酶体和高尔基复合体内，同时观察到肝癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目多于正常肝细胞中的数目。对肝细胞癌的早期发现，早期诊断可能具有意义。