蓝莓花青素提取物对H2O2诱导人胃癌

目的 在细胞水平上分析蓝莓花青素提取物的抗氧化活性.方法 用6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL和100 μg/mL蓝莓花青素提取物预处理人胃癌BGC-823细胞24 h后,再加入1 mmol/L H2O2诱导损伤2h.按不同处理分为对照组、H2O2处理组和蓝莓花青素保护组.采用MTT比色法检测细胞活力、相差显微镜观察细胞形态、荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧(ROS)生成量、比色法和可见光法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性,分析不同浓度的蓝莓花青素提取物预处理对H2 O2诱导BGC-823细胞氧化损伤的影响.结果 与H2O2处理组相比较,6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50μg/mL和100 μg/mL蓝莓花青素提取物预处理均能增加BGC-823细胞活力(P＜0.05).25 μg/mL和100μg/mL蓝莓花青素提取物预处理能阻止H2O2诱导的BGC-823细胞形态损伤,抑制ROS生成,增加GSH-Px和CAT的活性.结论 蓝莓花青素提取物对H2O2诱导人胃癌BGC-823细胞氧化损伤具有保护作用.     

NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法H2O2 构建氧化应激模型,将实验分为正常 组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂（DPI）组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）改变, Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果H2O2 对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H2O2 700 μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%（P<0.05）,ROS升高2倍（P<0.05）。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20% （P<0.05）,ROS下降至正常水平（P<0.05）。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H2O2 浓度逐渐升高,而抑制 剂组表达接近正常水平。结论H2O2 可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。     

桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 研究桔梗多糖（PGP）对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性;DCFH-DA检测细胞内ROS;qPCR、Western Blot方法分别检测NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达。结果 与模型组相比,PGP预处理24h后,加入终浓度为600 μmol/L H2O2处理2h,LDH、MDA含量和细胞内ROS减少,SOD与GSH-Px活性增强,同时,PGP下调NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达水平。结论 PGP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制NADPH氧化酶2(NOX2)过表达有关。      

维生素E经LOX-1/NADPH氧化酶/ROS通路抑制oxLDL诱导的HUVEC细胞损伤

【目的】 复制氧化性低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤模型,建立慢病毒介导的LOX-1-shRNA转染HUVEC细胞模型,从LOX-1/NADPH氧化酶/ROS信号通路研究维生素E(Vit E)对oxLDL诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用。 【方法】 以200 μg/mL oxLDL与HUVEC细胞共孵育24 h,用于复制细胞损伤模型;实验设计分为:正常对照组、oxLDL模型组、药物组(200 μmol/L Vit E);以MTT检测细胞存活率,DCFH-DA检测细胞内ROS及蛋白质印迹法检测LOX-1、NADPH氧化酶亚基(gp91phox、p47phox、p67phox)蛋白经时改变(3、6、12、24 h);real-time PCR检测24 h后LOX-1、NADPH氧化酶亚基(p22phox、gp91phox、rac1)mRNA的表达,采用慢病毒介导的基因沉默技术抑制LOX-1表达48 h后,用oxLDL诱导24 h,检测LOX-1蛋白、NADPH氧化酶亚基(p47phox、p67phox、gp91phox)蛋白和ROS的含量。采用SPSS 17.0进行统计学分析。 【结果】 与正常组比较,oxLDL处理后细胞生存率仅为50.31%,LOX-1蛋白伴随细胞氧化损伤在3、6、12、24 h表达量显著增加,且在3 h和24 h时呈现两个表达高峰(P<0.05),NADPH氧化酶亚基(p47phox、p67phox、gp91phox)蛋白表达水平在各时间点均显著升高(P均<0.01),24 h达高峰,ROS检测结果表明其动态经时改变在3 h和24 h达峰值( P<0.05)。Real-time PCR结果显示,LOX-1 mRNA及NADPH氧化酶亚基(gp91phox、p22phox、rac1) mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。慢病毒介导LOX-1基因沉默后,最佳转染效率为73.23%。oxLDL诱导24 h后,LOX-1及NADPH氧化酶亚基(p47phox、p67phox、gp91phox)蛋白表达下调,ROS生成量相应降低。VitE组下调LOX-1和NADPH氧化酶的mRNA及蛋白质表达并降低ROS生成。 【结论】 oxLDL经LOX-1/NADPH氧化酶/ROS通路诱导HUVEC细胞损伤。200 μmol/L的VitE可通过抑制LOX-1/NADPH氧化酶/ROS信号通路的活化而发挥对oxLDL诱导的HUVEC细胞损伤的保护作用。     

丁香酚对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的 研究丁香酚对H₂O₂诱导H9C2心肌细胞损伤的影响。方法 使用不同浓度H₂O₂建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型,将建立好的心肌细胞氧化损伤模型分为对照组、50 μg/mL丁香酚处理组、100 μg/mL丁香酚处理组和200 μg/mL丁香酚处理组,采用MTT法观察吸光度值（OD）变化来评价丁香酚对H9C2心肌细胞活力的影响;采用Hoechst染色法观察细胞核形态变化,评价丁香酚对H9C2心肌细胞凋亡的影响;为进一步研究丁香酚的抗氧化损伤作用,采用比色法检测试剂盒观察丁香酚对H9C2心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响。结果 400 μmol/L H₂O₂显著降低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡,适宜建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型。100 μg/mL和200 μg/mL的丁香酚增加H9C2细胞活力,减少细胞凋亡（P<0.05）;同时,H₂O₂诱导H9C2细胞LDH及MDA含量增加和SOD含量减少的效应也可被100 μg/mL和200 μg/mL的丁香酚抑制。结论 丁香酚对H₂O₂诱导H9C2心肌细胞损伤具有保护作用。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

夹竹桃麻素对兔原代左心房肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的利用低浓度过氧化氢（H2O2）建立兔原代左心房肌细胞氧化损伤模型,研究夹竹桃麻素对心房肌细胞氧化损伤的影响。方法将18只新西兰白兔随机分为对照组、H2O2组和夹竹桃麻素组,分别进行左心房肌原代培养。H2O2组直接在培养好的原代心房肌细胞中加入终浓度为100μmol/L的H2O2培养2h;夹竹桃麻素组以100μg/ml浓度的夹竹桃麻素处理细胞1h,之后加入终浓度为100μmol/L的H2O2共同培养2h。检测氧化和抗氧化指标的变化。结果与对照组比较,H2O2组和夹竹桃麻素组的SOD活力及GSH含量显著减少（P〈0.05）,MDA含量和细胞内钙浓度,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶亚基p22phox表达均显著升高增加（P〈0.05）,H2O2组的线粒体mRNA表达增加。与H2O2组比较,夹竹桃麻素组SOD活力及GSH含量显著增加（P〈0.05）,MDA含量和细胞内钙浓度、NADPH氧化酶亚基p22phox和线粒体mRNA表达显著降低（P〈0.05）。结论夹竹桃麻素能够通过抑制NADPH氧化酶,对心房肌细胞的氧化损伤起保护作用。     

山楂叶总黄酮对过氧化氢所致大鼠H9c2心肌细胞氧化应激损伤及诱导凋亡的保护作用

目的:研究山楂叶总黄酮对过氧化氢(H2O2)所致大鼠H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及诱导凋亡的保护作用.方法:检测了细胞活性、LDH释放、细胞周期凋亡峰、hoechst 33342 DNA染色、ROS释放.结果:山楂叶总黄酮中、高浓度组(100 μg/mL,200 μg/mL)均能显著对抗过氧化氢(H2O2)所引起的大...     

NADPH氧化酶4在AGEs诱导内皮细胞活性氧生成中的作用研究

目的 晚期糖基化终末产物(AGEs)能诱发细胞内活性氧(ROS)生成增多而引起内皮细胞损伤,从而促进动脉粥样硬化的发生和发展,本组探讨AGEs刺激下内皮细胞ROS的生成及NADPH氧化酶4(Nox4)的作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察AGEs刺激下HUVECs细胞Nox4表达和ROS生成情况,应用RNA干扰技术沉默Nox4后,观察细胞内ROS的变化,分析Nox4的作用.结果 AGEs刺激后HUVECs细胞内ROS增加,而Nox4 siRNA转染后能显著降低内皮细胞ROS水平;Nox4 siRNA转染可以使基础水平的ROS减少45.9%,并对AGEs刺激后的ROS增加有明显的抑制作用.结论 Nox4是内皮细胞ROS生成过程中发挥调控作用的关键靶点,阻断Nox4能有效地抑制AGEs诱导的内皮细胞氧化损伤,进而可能阻遏动脉粥样硬化的发生和发展.     

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对过氧化氢（H2O2）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的改善作用。方法：体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H2O2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H2O2损伤组细胞经H2O2（400 μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H2O2损伤12 h后加入含50 μg/mL AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果：H2O2损伤后HAECs 丙二醛（MDA）含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧（ROS）水平显著增加,超氧化物歧化酶（SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性及线粒体膜电位显著降低;H2O2损伤的HAECs 经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论：AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一     

ABCG1在肿瘤坏死因子α诱导的氧化应激中的机制研究

目的  探讨三磷酸腺苷结合盒转运体G1（ABCG1）在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的氧化应激中的作用及可能的机制。方法  人脐静脉内皮细胞被特异性ABCG1 siRNA或ABCG1过表达质粒转染或使用LXR（肝X受体）激活剂T0901317预处理,随后给予肿瘤坏死因子（TNF-α）干预12 h。采用DCFHDA- AM（2’7’-二氯荧光双乙酸盐）荧光探针检测细胞内活性氧簇（ROS）的水平,分光光度仪测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷（NADPH）氧化酶活性,实时荧光定量聚合酶链反应法（qRT-PCR）和Western blot检测内皮细胞NADPH氧化酶亚型非吞噬细胞氧化酶4（NOX4）表达及超氧化物歧化酶（SOD）的表达。结果  ABCG1表达上调抑制TNF-α诱导的氧化应激,同时抑制促氧化应激的NADPH氧化酶的活性和NOX4的表达,促进抗氧化的SOD表达。相反,ABCG1表达下调进一步诱导ROS的产生,诱导NADPH氧化酶的活性和NOX4的表达,抑制SOD1表达。结论  ABCG1通过调节NADPH氧化酶/SOD抑制TNF-α诱导的氧化应激。

     

瑞舒伐他汀抑制同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞凋亡涉及Nox4氧化应激途径

目的研究瑞舒伐他汀（Rosu）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导的内皮祖细胞（EPCs）活性氧（ROS）产牛以及凋亡的影响。方法从外周血中分离EPCs与Hey共孵育,或经Rosu、不同的应激信号通路抑制剂甲羟戊酸（100μmlol／L）、乙酰半胱馘酸（NAC,10μmol／L）、NADPH氧化酶（Nox）抑制剂（DPI,10wmol／L）、内皮一氧化氮合成酶抑制剂（LNMA,1mmol／L）预培养后再加入Hcy共孵育。采用流式法检测细胞凋亡率,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐法（H。DCF—DA）检测细胞内ROS水平,光泽精化学发光法检测Nox活性,RT—PCR检测Nox4mRNA的表达。结果Rosu显著抑制了Hcy诱导的ROS蓄积和EPCs凋亡,拮抗了Hcy诱导的Nox激活以及Nox4mRNA表达。Nox4siRNA转染EPCs可以产生相似的效果。结论Rosu对EPCs的保护作用口f能址通过Nox4途径抑制Hcy诱导的Nox激活、ROS蓄积和EPCs凋亡来实现。     

α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

目的 探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧(ROS)产生及其对激活信号通路的影响.方法 用小分子RNA干扰(siRNA)技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47phox亚基;用分子探针2,7-DCF测定细胞内ROS的产生量;用RT-PCR测定p47phoxmRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47phox蛋白的表达;用Western印迹测定ERK<,2>及核因子(NF)-кB、应激蛋白(SP-1)和活化因子蛋白的表达.结果 TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155.4%;α-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF-α对ROS的诱导效应.TNF-α作用细胞24 h后,p47phox的mRNA表达水平较对照组高212.8%,蛋白的表达也明显高;α-玉米赤霉醇预处理使TNF-α诱导的p47phox mRNA表达水平低63.0%,蛋白表达水平也明显下降.p47phox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生.α-玉米赤霉醇预处理和p47phox的siRNA均阻断TNF-α对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位,明显地抑制了NF-кB的核转位.结论 α-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF-α诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路,主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47phox亚基的表达.     

沙棘黄酮对粥样硬化大鼠NADPH氧化酶亚基Nox4及ox-LDL的影响

目的：探讨沙棘黄酮（TFH）对粥样硬化大鼠NADPH氧化酶亚基Nox4及ox-LDL的影响及机制。方法将50只SD大鼠随机分为：正常对照组（CON组）、粥样硬化组（AS组）、沙棘黄酮低、中、高剂量组,除CON组其余4组喂高脂饲料,TFH低、中、高剂量组以不同剂量TFH灌胃,60 d后,取血清测定SOD、MDA及ROS水平, ELISA技术测主动脉ox-LDL和Nox4蛋白表达水平。结果 AS组比CON组SOD下降,MDA及ROS含量升高;沙棘黄酮干预能改善以上指标;沙棘黄酮降低了AS大鼠Nox4及 oxLDL蛋白表达水平。结论沙棘黄酮可降低AS大鼠Nox4及ox-LDL蛋白表达从而减少ROS生成防治粥样硬化。     

丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究

目的 观察丹酚酸B(Sal B)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 首先构建H9c2心肌细胞缺氧复氧模型,采用噻唑蓝(MTT)法研究丹酚酸B与H9c2心肌细胞活力的量效关系,确定丹酚酸B的保护作用,给药方式为预给药.实验分为正常对照组、丹酚酸B组、模型组(H/R组)、H/R+丹酚酸B组,分别检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的含量变化.Western印迹检测添加丹酚酸B对Akt磷酸化的影响,添加Akt抑制剂LY294002加以比较.结果 与正常对照组相比较,模型组LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px以及CAT含量水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B能够显著提高SOD、GSH-Px以及CAT含量水平(P<0.05),显著降低LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平(P<0.05).Western印迹结果显示与正常对照组相比较,模型组Akt磷酸化水平显著降低(P<0.001),相对于模型组丹酚酸B能够显著提高Akt的磷酸化水平(P<0.01),而这种保护作用能被LY294002所阻断(P<0.01).结论 丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)通路相关.     

二氢杨梅素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的 ：研究二氢杨梅素（DMY）对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响并探讨其作用机制。方法：用不同浓度DMY（5μg·mL-1,20μg·mL-1,80μg·mL-1）预处理保护HUVECs 12 h,再用0.5 mmol·L-1 H2O2干预12 h,用MTT法检测细胞活力;用Hoechst33258进行细胞核染色;并取上清液检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用流式细胞仪分别测活性氧（ROS）和细胞内钙离子含量。结果：DMY能明显提高H2O2（0.5 mmol·L-1）损伤后HUVECs存活率（P＜0.05）,增加上清液SOD活性,降低MDA含量,减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度,其中DMY 5μg·mL-1时效果最明显。结论：DMY对H2O2诱导内皮细胞损伤具有保护作用,其机制与清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡相关,浓度以DMY 5μg·mL-1时效果最明显。