索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的 探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2的抑制作用及其可能分子机制.方法 单独及联合给药后以MTT法测定HepG2细胞的增殖,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,用Western blotting观察ERK及pERK蛋白的表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用(P＜0.05).索拉非尼及DDP分别主要使细胞阻滞于G1及G2期.两药联用后同时阻滞于G1及G2期.联合组凋亡率明显比单药组高(P＜0.05).单用及联合用药对HepG2细胞ERK表达无明显影响,索拉非尼及联合用药减少pERK的表达.结论 索拉非尼和DDP对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用,其机制可能与细胞周期的双重阻滞及细胞增殖通路Raf/MEK/ERK的抑制有关.     

顺铂诱导人肝癌细胞凋亡模型的构建

目的 建立肝癌细胞凋亡模型,探讨顺铂抗癌作用机理,为进一步研究细胞凋亡分子机制打下基础。方法 用抗癌药顺铂诱导增减的人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞发生凋亡,用四氮甲唑蓝比色试验（ＭＴＴ）,细胞形态学检查,ＤＮＡ凝胶电泳检测。结果 顺铂可显著抑制ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长,并有很好的量效和时效关系,经药物作用后,肝癌细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳吴现明显的梯度     

顺铂诱导肝细胞性肝癌细胞凋亡及其临床意义

目的：探讨顺铂（ＣＤＤＰ）体内诱导肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）细胞凋亡的发生情况及其临床意义。方法：１８例ＨＣＣ患者随机分成２组,１０例行ＣＤＤＰ诱导治疗,另８例作对照。用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测２且患者患者手术切除之肿瘤组织,作凋亡及细胞周期分析。结果：ＣＤＤＰ治疗组肝癌细胞凋亡率较对照组显著增高。ＣＤＤＰ治疗组肿瘤细胞Ｇ０－Ｇ１期对照组明显增加;而Ｓ期细胞有显著减少。细胞增殖指数（ＰＩ）在ＣＤＤＰ治     

顺铂诱导肝细胞性肝癌细胞凋亡及其临床意义

日的 :探讨顺铂 (CDDP)体内诱导肝细胞性肝癌 (HCC)细胞凋亡的发生情况及其临床意义。方法 :18例HCC患者随机分成 2组 ,10例行CDDP诱导治疗 ,另 8例作对照。用流式细胞仪 (FCM )检测 2组患者手术切除之肿瘤组织 ,作凋亡及细胞周期分析。结果 :CDDP治疗组肝癌细胞凋亡率较对照组显著增高 (P <0 .0 1)。CDDP治疗组肿瘤细胞G0 -G1 期较对照组明显增加 (P <0 .0 5 ) ;而S期细胞有显著减少 (P <0 .0 1)。细胞增殖指数 (PI)在CDDP治疗组显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :CDDP在体内能显著增加HCC细胞的凋亡。小剂量CDDP诱导治疗为肝癌辅助治疗可行方法之一     

顺铂对肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法将肝癌细胞株传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的顺铂,并设空白对照组,用MTT比色法观察顺铂对体外培养的肝癌细胞生长的抑制作用,在光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 MTT比色法测定显示,顺铂作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论顺铂能抑制体外培养的肝癌Hepg2细胞的增殖。     

人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2的建立

目的体外建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(HepG2/DDP),研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2/DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2/DDP的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2/DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1.35μg/ml,HepG2/DDP的IC50为23.35μg/ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0/G1期细胞减少、S期与G2/M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2/DDP。     

人肝癌顺铂耐药细胞株 HepG2的建立

目的：体外建立顺铂（ DDP）诱导的人肝癌耐药细胞株（ HepG2／DDP）,研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2／DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2／DDP的半数抑制浓度（IC50）和耐药系数（RI）,绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪（ FCM ）检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2／DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1．35μg／ml,HepG2／DDP的IC50为23．35μg／ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0／G1期细胞减少、S期与G2／M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2／DDP。     

顺铂联合索拉非尼协同抑制三阴性乳腺癌细胞的体外研究

目的探讨顺铂(DDP)联合索拉非尼对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的抑制作用及其可能的分子机制。方法单独及联合给药后采用MTT法测定多种TNBC细胞的增殖,采用Western blot观察MAPK通路关键蛋白的表达情况。结果 MTT法检测发现DDP单药和索拉非尼单药在体外对TNBC细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468、CAL-51增殖都有一定的抑制作用。其中MDA-MB-468和CAL-51细胞对DDP更为敏感。通过中效原理,证实DDP和索拉非尼联合应用时,在各个细胞株中均为协同效应。DDP联合索拉非尼对各细胞株协同抑制的分子机制主要是通过影响MAPK通路关键蛋白的表达实现的,Western blot检测显示各细胞株均表现为p-ERK蛋白表达水平不同程度的下降以及p-JNK蛋白表达水平不同程度的升高。结论 DDP联合索拉非尼在体外能协同抑制多种TNBC细胞株的增殖。     

青蒿琥酯增强顺铂对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用

目的 研究青蒿琥酯(Art)及其联合顺铂(DDP)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别采用不同浓度的Art(0.16、0.8、4、20、100μmol/L)、DDP(0.16、0.8、4、20、100 mg/L)及Art(4μmol/L)和DDP(4 mg/L)联合处理HepG2细胞24 h、48 h和72 h,MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测Art(4μmol/L)组、DDP(4mg/L)组和Art(4μmol/L)+DDP(4 mg/L)联合处理组细胞48 h的凋亡状况.结果 随着处理时间延长(24～72h),Art和DDP对HepG2细胞生长的抑制/杀伤作用明显增强;它们在暴露72 h的条件下分别在0.16 μmol/L和0.8 mg/L以上浓度具有浓度依赖性细胞毒作用.Art联合DDP处理细胞组对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用比单用Art或DDP组更强(P＜0.05);人肝癌HepG2细胞48 h的早期凋亡率分别为:Art组23.5％,DDP组27.8％,Art+DDP联合用药组49.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可抑制人肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡;它与顺铂联合应用可能增强后者对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用.     

胡桃醌联合顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨胡桃醌与顺铂（DDP）联合应用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法采用不同浓度的胡桃醌或（和）顺铂处理肝癌HepG2细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,通过MTT法检测其对HepG2细胞生长的抑制作用.结果 不同浓度的药物作用可导致HepG2细胞发生形态学变化,MTT比色法测定显示,采用胡桃醌、顺铂合用,可显著抑制HepG2细胞的增殖,单用不同浓度的胡桃醌与顺铂分别作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性.胡桃醌联合顺铂增强了HepG2细胞的凋亡.结论 胡桃醌联合顺铂与单药相比能更显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,促进其凋亡,两药对肝癌细胞的杀伤效应具有一定的协同作用.     

Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法应用免疫细胞化学法检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFRs）蛋白的表达；ELISA法检测HepG2细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达；Bevacizumab处理HepG2细胞48h后，MTT法检测Bevacizumab对细胞增殖的抑制作用，用流式细胞仪检测并分析细胞凋亡变化。设不加药物的HepG2细胞为对照组。结果HepG2细胞中VEGF和VEGFR蛋白呈阳性表达，其细胞培养上清液中存在VEGF蛋白分泌；Bevacizumab可抑制HepG2细胞增殖；并可诱导HeF，G2细胞的凋亡，凋亡率为（17．04±0．14）％，明显高于对照组（2．85±0．08）％（P〈0．05）。结论Bevacizumab町直接抑制肝癌细胞株HepG2的增殖，并诱导其凋亡；为Bevacizumab除抗血管生成之外的抗肿瘤作用机制提供新的研究依据；为Bevacizumab在肝细胞癌治疗的应用提供理论依据。     

黑升麻提取物对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究黑升麻提取物对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响。方法将肝癌HepG2细胞依据随机数字法分为黑升麻药物0、10、20、30、40、50μg/mL组,采用细胞计数试剂盒8检测实验组不同浓度(10、20、30、40、50μg/mL)黑升麻处理后HepG2细胞的增殖抑制率。流式细胞仪、Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染检测对照组(黑升麻药物浓度0μg/mL)及不同浓度(10、20、32μg/mL)黑升麻处理后实验组的HepG2凋亡细胞比率; Western blot检测凋亡相关胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达。结果 0、10、20、30、40、50μg/mL组抑制率分别为0%、(12. 51±9. 31)%、(27. 85±1. 51)%、(53. 20±5. 55)%、(67. 42±3. 54)%、(81. 43±0. 73)%,各组比较差异有统计学意义(P <0. 05),随着各组给药浓度的增加抑制率逐渐升高(P <0. 05)。黑升麻IC50为32. 010μg/mL。与0μg/mL组比较,10、20、32μg/mL组凋亡逐渐增加(P <0. 05),Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-8蛋白表达上调(P <0. 05)。结论黑升麻提取物可有效抑制肝癌HepG2细胞系增殖,促进细胞凋亡,该作用至少部分依赖于外源性死亡受体途径。     

Genistein调节肝癌HepG2细胞Caspase3蛋白表达诱导凋亡的作用研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和Caspase3蛋白表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组,实验各组以60μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Westernblotting分析细胞Caspase3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Genistein作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h,各时相IP3含量显著低于对照组[(12.0±1.4)pmol/106cells、(7.5±0.8)pmol/106cells、(5.6±0.5)pmol/106 cells、(4.3±0.6)pmol/106 cellsvs(29.2±0.6)pmol/106 cells,P<0.01];24h后Caspase3蛋白的RI显著高于对照组(2.7±0.2,7.4±0.5,7.4±0.5,30.7±1.6vs0.24±0.06,P<0.05);24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组[(2.7±0.2)%、(7.4±0.5)%、(20.5±2.0)%、(30.7±1.6)%vs(2.6±0.1)%,P<0.01]。结论Genistein能减少IP3生成,上调Caspase3蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

三羟异黄酮上调肝癌HepG2细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用

 【目的】探讨三磷酸肌醇（IB）和PTEN蛋白变化在三羟异黄酮（genistein）诱导肝癌细胞凋亡中的作用。【方法】以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组，实验各组以60Ixmol／L三羟异黄酮作用于HepG2细胞不同时间后，应用同位素试剂盒检测细胞嵋含量，Western blot分析细胞PTEN蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。【结果】对照组Ib含量为（29．2±0．6）pmol／10^6 cells，PTEN蛋白与内参actin蛋白灰度和面积之积的比值V-PTEN／V-actin为0．12±0．00；细胞凋亡率为（2．6±0．1）％。三羟异黄酮作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h后珉分别为（12．0±1．4）pmol／10^6cells，（7．5±0．8）pmol／10^4 cells，（5．6±0．5）pmol／10^6cells，（3．3±0．6）pmol／10^6 cells；V-PTEN，V-actin分别为13．13±0．20，19．17±1．09，28．51±2．18，41．12±3．80；细胞凋亡率分别为（2.7±0．2）％。（7．4±0．5）％，（20．5±2．0）％，（30．7±1．6）％。与对照组比，三羟异黄酮作用于肝癌HepG2细12h后各时相珉显著降低（P〈0．01），PTEN蛋白表达显著增高（P〈0．01），24h后各时相细胞凋亡率显著增高（P〈0．01）。【结论】三羟异黄酮能减少瑕生成，上调PTEN基因表达，诱导肝癌细胞凋亡。     

抗肿瘤抗生素云南霉素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的观察抗肿瘤抗生素云南霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,MTT法检测云南霉素对细胞增殖的影响,Hoechest33342法检测细胞凋亡的形态变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP的表达,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果云南霉素对HepG2细胞增殖抑制的IC50值为24.13μmol/L;HepG2细胞经云南霉素作用24h后,可诱导胞内凋亡标志蛋白PARP的切割,并随浓度的增高而作用增强;而HepG2细胞经云南霉素作用48h后,可出现典型的凋亡形态变化,呈剂量依赖性引起细胞凋亡。结论云南霉素可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞发生凋亡。     

沉默Glypican-3基因增强人肝癌细胞HepG2对5-FU致凋亡作用的敏感性

目的沉默人肝癌细胞HepG2的GPC3基因表达,观察其对5-氟尿嘧啶（5-FU）的药物敏感性及细胞凋亡情况的影响。方法①构建干扰GPC3的shRNA载体,将其转染至肝癌细胞,并设立对照组。（2）Western blot测定GPC3蛋白表达情况。③利用MTT法测定转染后肝癌细胞对5-Fu的药物敏感性。④采用流式细胞技术观察转染后肝癌细胞在5-Fu作用下的细胞凋亡情况。结果转染shRNA的肝癌细胞其GPC3表达阴性;其对5-Fu的药物敏感性增加（P〈0．05）;细胞凋亡较对照组增加（P〈0．05）。结论GPC3的高表达在肝癌细胞中起到抗凋亡作用,而下调GPC3可作为一个潜在的靶目标,增加肝癌细胞对5-Fu诱导细胞凋亡的敏感性。     

DAMPs对人肝癌HepG2细胞增殖能力影响的机制研究

目的:探讨在损伤相关模式分子(DAMPs)诱导下人肝癌HepG2细胞增殖能力变化的发生机制。方法:将HepG2细胞分为对照组,DAMPs组,IL-6 siRNA组,IL-6 siRNA+DAMPs组;MTT比色法检测HepG2细胞增殖能力的变化;实时荧光定量PCR法检测IL-6及STAT3 mRNA的表达;Western blot法测定HepG2细胞STAT3蛋白和磷酸化STAT3蛋白的表达。结果:DAMPs组细胞增殖能力较对照组显著增强,IL-6 mRNA及STAT3 mRNA的表达较对照组显著上调,差异均有统计学意义(P<0.01);Western bot法检测出四组STAT3蛋白表达无明显差异,而DAMPs组磷酸化STAT3蛋白的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DAMPs可能通过IL-6/STAT3信号通路促进人肝癌HepG2细胞的增殖。     

抗肿瘤抗生素云南霉素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的观察抗肿瘤抗生素云南霉素对人肝癌HepG,细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG,,MTT法检测云南霉素对细胞增殖的影响,Hoechest33342法检测细胞凋亡的形态变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP的表达,AnnexinV—FITC／PI双染结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果云南霉素对HepG2细胞增殖抑制的Ic,。值为24．13μmoL／L;HepG2细胞经云南霉素作用24h后,可诱导胞内凋亡标志蛋白PARP的切割,并随浓度的增高而作用增强;而HepG2细胞经云南霉素作用48h后,可出现典型的凋亡形态变化,呈剂量依赖性引起细胞凋亡。结论云南霉素可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞发生凋亡。     

阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中Survivin表达的影响

目的探讨阿霉素(ADM)对人肝癌细胞株HepG2中Survivin表达的影响。方法用不同浓度的ADM对人肝癌细胞株HepG2作用不同时间,然后以免疫细胞化学和RT-PCR方法检测HepG2细胞中Survivin蛋白和SurvivinmRNA表达的改变。结果未加药物干预之前,免疫化学中,HepG2细胞被Survivin抗体染成棕黄色,核内染色深于胞浆;琼脂糖凝胶电泳中,可见SurvivinmRNA明亮条带;各种浓度的ADM均可降低HepG2细胞Survivin免疫染色和Sur-vivinmRNA在凝胶电泳中的灰度;并且随干预浓度的增加或作用时相的延长,降低更明显。结论人肝癌HepG2细胞表达Survivin,且核内Survivin蛋白表达比胞浆表达强;ADM可降低HepG2细胞中Survivin表达,并呈浓度和时间依赖性;ADM可能通过下调Survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡而发挥其抗癌作用。