反相离子对HPLC同时测定制马钱子中4种生物碱的含量

目的建立同时测定制马钱子中4种生物碱士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物含量的反相离子对HPLC法。方法应用Lichrospher S C18色谱柱(4.6mm×300mm,5μm),以乙腈-水(38:62,每1000mL加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相,流速:1.0mL.min-1,柱温:30℃,检测波长:260nm。结果4种生物碱士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物和马钱子碱氮氧化物的线性范围分别为13.7～219.1,12.55～200.8,0.3743～5.988和0.6225～9.96mg.L-1(r>0.9999),平均回收率分别为98.0%,102.2%,103.3%和99.9%(RSD均小于2.5%)。结论该方法简便、准确,重复性好,适用于制马钱子中士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物的含量测定。     

热痹清片中马钱子碱和士的宁在大鼠体内的药动学分析

目的:大鼠灌胃给予热痹清片和制马钱子粉后,计算马钱子碱和士的宁的药动学参数,比较二者在血浆中的药动学特征变化。方法:采用UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中马钱子碱和士的宁的含量。Agela Venusil ASB C18色谱柱(2.1mm×50 mm,3μm),流动相乙腈-0.15%甲酸溶液(60∶40),柱温35℃,流速0.1 m L·min-1,进样量5μL。以盐酸克伦特罗为内标,采用ESI+模式,多反应离子监测(MRM),定量分析的离子分别为马钱子碱m/z 395.22~243.97,士的宁m/z 335.14~183.96,盐酸克伦特罗m/z 277.11~202.87。样品处理采用液液萃取法。利用DAS 2.1软件计算药动学参数。结果:热痹清片和制马钱子粉中马钱子碱的达峰时间(tmax)分别为(27±11),(40±12)min,士的宁依次为(30±9),(42±14)min,马钱子碱的药峰浓度(Cmax)分别为(5.6±1.2),(4.5±1.7)μg·L-1,士的宁依次为(27.3±10.8),(15.9±7.0)μg·L-1,马钱子碱的药时曲线下面积(AUC0-t)分别为(922±96),(710±126)μg·min·L-1,士的宁依次为(3 957±651),(2 031±256)μg·min·L-1,马钱子碱的清除率/生物利用的(CL/F)分别为(4 596±306),(87±34)L·min-1·kg-1,士的宁依次为(880±84),(49±10)L·min-1·kg-1。结论:马钱子碱和士的宁在大鼠体内药动学行为均符合二房室模型。与制马钱子粉比较,热痹清片能显著提高生物利用度,使其有效成分吸收、消除加快。     

双波长RP-HPLC同时测定骨刺膏渗漉液中马钱子碱、士的宁和乌头碱的含量

目的:建立RP-HPLC同时测定骨刺膏渗漉液中马钱子碱、士的宁和乌头碱含量的方法。方法:Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-水(B)(含0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节p H 3)梯度洗脱(0~22 min,11%A;22~23 min,11%~33%A;23~36 min,33%A;36~37 min,33%~11%A;37~40 min,11%A),检测波长为乌头碱235 nm,马钱子碱和士的宁260 nm。结果:马钱子碱、士的宁和乌头碱的线性范围分别为0.026 4~0.264,0.039 6~0.396,0.016~0.160μg;平均加样回收率分别为98.44%,98.63%,99.08%,RSD分别为1.84%,1.66%,0.97%;样品中三者的平均质量浓度分别为1.29,1.92,0.79 mg·L-1。结论:该方法操作简便、准确可靠、重复性好,为完善骨刺膏的质量标准提供实验依据。     

马钱子生物碱血浆蛋白结合率的测定与比较

目的:测定马钱子总生物碱中主要有效成分马钱子碱和士的宁的血浆蛋白结合率,并与同浓度单成分的血浆蛋白结合率进行比较.方法:采用超滤法和高效液相色谱法对马钱子生物碱在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率进行测定.结果.单成分的马钱子碱在0.520,1.300,2.600 mg·L-1下的血浆蛋白结合率分别为(65.60±3.01)%,(68.20±7.80)%,(59.58±3.78)%.单成分的士的宁在0.936,2.340,4.680 nag·L-1下的血浆蛋白结合率分别为(66.17±6.36)%,(67.10±2.52)%,(57.21±0.79)%.马钱子总生物碱中马钱子碱在0.519,1.288,2.607 nag·L-1下的血浆蛋白结合率分别为(62.19±2.45)%,(69.55±5.84)%,(61.76±3.68)%;马钱子总生物碱中士的宁在0.940,2.338,4.674 nag·L-1下的血浆蛋白结合率分别为(54.79±3.55)%,(57.13±4.49)%,(59.31±3.65)%.结论:马钱子碱和士的宁与血浆蛋白具有中等强度的结合,马钱子总生物碱中马钱子碱与同浓度单体相比,蛋白结合率差异不大;总碱中士的宁与同浓度单体相比,蛋白结合率有所降低.     

HPLC法测定接骨丸中马钱子士的宁含量

目的:利用高效液相色谱法测定接骨丸中成药马钱子士的宁的含量,为控制接骨丸的质量提供可靠依据。方法:利用高效液相色谱法,waters C18(250 mm×4.6 mm,5μm)反相色谱柱;流动相∶乙腈∶0.2%磷酸水溶液(20∶70)等度洗脱;柱温:25℃;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:260 nm。结果:士的宁的线性范围是0.080 g·L-1~0.400 g·L-1;r值均为0.99997,平均加样回收率为99.30%,RSD分别为0.89%。结论:利用高效液相色谱法测定接骨丸中士的宁的含量,具有良好的重现性和专属性,且准确快捷,能够很好地控制接骨丸的内在质量。     

LC-MS/MS测定马钱子总碱囊泡凝胶经皮给药后大鼠的血药浓度

目的:建立LC-MS/MS测定大鼠血浆中的马钱子碱和士的宁含量,以溶剂萃取法提取大鼠血浆中的待测成分。方法:以他克林为内标,采用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水(0.05%甲酸,10 nmol.L-1甲酸铵)梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM),用于定量分析的离子对依次为m/z 395.2/324.2(马钱子碱),m/z 335.2/184.2(士的宁)和m/z 199.1/171.1(他克林)。结果:测定血浆样品2种成分的线性范围分别为0.195～100,0.078 1～40μg.L-1,相关系数分别为0.994,0.996,马钱子碱的提取回收率为78.9%～102.4%,士的宁的提取回收率为95.2%～106.1%,方法的精密度、准确度、基质效应和稳定性均符合要求。结论:方法专属性强、灵敏度高,适用于血浆马钱子类生物碱的药代动力学研究。囊泡制剂能够降低马钱子碱进入体循环的药物浓度,且具有缓释作用。     

RP-HPLC测定风湿安泰片中士的宁的含量

目的:建立风湿安泰片中士的宁的含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),以80%乙腈-0.01mol·L-1辛烷磺酸钠与0.02 mol·L-1磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值2.8)(25:75)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm,柱温:30℃.结果:士的宁理论板数大于5000,在0.262～1.312μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.10%,RSD为1.15%.结论:RP-HPLC测定风湿安泰片中士的宁含量,方法快速,结果准确,操作简便,可用于风湿安泰片产品质量研究.     

反相高效液相色谱法同时测定马钱子酊中士的宁和二甲氧基士的宁的含量

 目的：建立马钱子酊中士的宁和二甲氧基士的宁(马钱子碱)的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法以甲醇-乙腈-水-冰醋酸（35∶40∶25∶0.5）为流动相，Zorbax SB-C₁₈ ODS(4.6 mmx250 mm，5 μm)为分析柱, 紫外线测定波长为254 nm。结果：二甲氧基士的宁线性范围为0.05～0.45 μg，r=0.9997,测量平均回收率为99.4%, RSD为2.2%；士的宁线性范围为0.06～0.54 μg，r=0.9994,测量平均回收率为101.3%,RSD为1.22%。结论：本法简便，快速，灵敏。     

HPLC法测定风湿关节炎片中士的宁的含量

目的:建立风湿关节炎片中士的宁的定量分析方法。方法:色谱柱为Agilent ZORBAX C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为甲醇-水一醋酸-三乙胺(20∶80∶0.8∶0.15);流速为:1.0 mL/min;检测波长254 nm。士的宁保留时间为10~11 min。结果:线性关系良好,平均加样回收率为99.38%,RSD%=2.23%。结论:此方法简便、准确,可作为风湿关节炎片中士的宁的定量分析方法。     

HPLC测定活血止痛膏中芍药苷、马钱子碱、士的宁的含量

目的:建立高效液相色谱法测定活血止痛膏中芍药苷、马钱子碱、士的宁的含量。方法:采用AgilentTC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为25℃,流速为1 mL.min-1;芍药苷的流动相为乙腈-水(16∶84),检测波长为230 nm;马钱子碱、士的宁的流动相为乙腈-0.01mol.L-1庚烷磺酸钠与0.02mol.L-1磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸溶液调节pH值至2.8)(21∶79),检测波长为260 nm。结果:两种液相方法可分别测定活血止痛膏中芍药苷、马钱子碱、士的宁的含量。芍药苷浓度在25.2～200.2μg.mL-1(r=0.9996),马钱子碱浓度在2.45～19.6μg.mL-1(r=0.9998),士的宁浓度在2.95～23.6μg.mL-1(r=0.9997)范围内与其峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为95.13%(RSD=1.77%),87.63%(RSD=2.99%),90.93%(RSD=2.57%)。结论:两种液相测定方法专属性强,结果准确,可用于活血止痛膏的质量控制。     

Toxic effects of strychnine and strychnine N-oxide on zebrafish embryos

AIM： The application of strychnine（S） is limited due to its toxicity; strychnine N-oxide（SNO） is a derivative of strychnine. The aim was to employ zebrafish embryos to investigate and compare the developmental toxicity induced by S and SNO. METHODS： The toxicity of S and SNO was examined through the hatching rate and survival rate. Morphological changes of the zebrafish were observed with a dissecting microscope. Apoptosis was detected through acridine orange（AO） staining and flow cytometry. Apoptotic genes were measured by RT-PCR. RESULTS： Embryo malformation was observed in the embryos exposed to S at 200 μmol·L–1. When SNO concentration was increased to 1 mmol·L–1, scoliolosis, and pericardial edema could be seen in some embryos. Results from fluorescence microscopy and flow cytometry analysis showed that S at 200 μmol·L–1 induced apoptosis, whereas the apoptotic rate in the SNO-treated group（200 μmol·L–1） was much lower than that in the S group. RT-PCR analysis showed that p53 mRNA expression and the ratio of Bax/Bcl-2 in the S group were significantly altered compared with the control group（＊P 〈 0.05）. Moreover, Bax mRNA expression in both S and SNO group were significantly different from that in the control group（＊＊P 〈0.01）. CONCLUSION： These results lead to the conclusion that SNO has significantly lower toxicity than S in zebrafish embryos.     

士的宁对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制作用的实验研究

目的:研究士的宁(Strychnine)对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制的逆转作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测士的宁的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)分别检测非细胞毒浓度(IC10)的士的宁对K562/A02细胞MDR1基因、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)基因、拓扑异构酶Ⅱ(topoi-someraseⅡ,TopoⅡ)基因、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione s-transferase,GST-π)基因及其表达产物的影响。结果:非细胞毒浓度(IC10)的士的宁作用后,K562/A02细胞的MRP基因及其表达产物表达降低;而MDR1、TopoⅡ、GST基因及其蛋白的表达无明显变化。结论:士的宁能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MRP基因及其蛋白的表达有关。     

HPLC法测定跳骨胶囊中士的宁的含量

目的：测定跳骨胶囊中士的宁的含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱：Diamonsil C18（250×4．6mm，5μm）；流动相：0．03mol／L；甲酸溶液（用三乙胺调节PH至3．0±0．1）-乙腈（78：22）；流速：1．0ml／min；检测波长：254nm。结果：士的宁在196．8～426．4ng范围内，浓度与峰面积线性关系良好（r=0．9984）。平均回收率为99．70％。KSD为2．2％（n=9），方法的精密度、稳定性及重现性良好。结论：本试验所建立的定量分析方法简便、快速准确，可作为跳骨胶囊的质控标准。     

薄层扫描法测定通痹胶囊中士的宁含量

目的：测定通痹胶囊中士的宁的含量，为其质量控制提供依据。方法：采用日本岛津CS-9000型双波长飞点扫描仪，检测波长为235nm。用薄层扫描法对通痹胶囊中士的宁进行含量测定。结果：在1．0～8．Oμg范围内与峰面积呈良好线性关系；加样回收率为99．43％％，尺SD为1．51％，相关系数为O．9997。结论：该方法操作简便，精密度好，结果准确可靠。     

三鼎丹胶囊中士的宁的含量测定

目的建立测定三鼎丹胶囊中士的宁的含量测定方法。方法以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨溶液(16∶12∶1∶4)的上层溶液为展开剂,采用双波长反射锯齿扫描法,测定波长λS=254 nm,参比波长λR=325 nm,测定士的宁的含量。结果样品平均回收率为99.5%,板内RSD=4.48%(n=5)。结论此测定方法简单可行,重现性好,可作为该药质量控制的参考依据。     

HPLC法测定腰痛宁流浸膏中士的宁的含量

目的：建立腰痛宁流浸膏含量检测方法。方法：采用HPLC法测定腰痛宁流浸膏中士的宁的含量,采用Inertsil C8-3（4.6×250 mm,5 um）色谱柱,甲醇-水-冰乙酸（100：480：35）,用三乙胺调PH值为3.1为流动相;流速：1.0 ml·min^-1;检测波长：254nm。结果：腰痛宁流浸膏中士的宁的含量在4.0—6.0 ug·ml^-1范围内线性关系良好,r=0.9999,加样回收率结果为99.1%,RSD值为1.24%（n=6）。结论：本方法操作简便、快速、准确,可作为腰痛宁流浸膏中士的宁的定量分析方法。     

高效液相色谱法测定痹痛宁胶囊中士的宁的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定痹痛宁胶囊中士的宁含量的方法。方法采用Sh im adzu-C18柱,乙腈-1%的冰醋酸(10∶90)为流动相,254 nm为检测波长。结果测得线性范围0.105~0.525μg(r=0.999 9),平均回收率为98.63%,RSD为1.06%(n=5)。结论该法准确,专属性强。     

RP-HPLC测定接骨挫伤胶囊中士的宁含量

目的：建立接骨挫伤胶囊中士的宁的含量测定方法.方法：采用高效液相色谱法,DiamonsilC18（250mm×4.6mm,5mm）,流动相为乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量的混合液（用10％磷酸调节pH值2.8）（21∶79）,流速1.0mL/min,柱温35℃,检测波长为254nm.结果：士的宁在0.01604～0.3028mg/mL范围内（进样量1（0μL）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.06％、RSD-0.46％.结论：本方法简便、准确、重现性好,适用于该制剂的质量控制.     

薄层扫描法测定含马钱子中成药中士的宁和马钱子碱的含量

采用双波长薄层扫描法对马钱子散、九分散、养血祛风丸、滋阴补肾丸、伤科七味片、益髓冲剂中的士的宁和马钱子碱进行含量的测定，可以有效地控制药品质量，结果准确。     

测定大鼠血浆中士的宁和马钱子碱含量的方法研究

目的：探讨可以同时测定大鼠血浆中士的宁和马钱子碱含量的方法研究。方法：Wistar大鼠血浆样品经液液萃取处理后用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱分离,流动相为乙腈-酸水（17?83）,酸水为0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾与0.014 8 mol·L^-1庚烷磺酸钠等量混合,并用10%磷酸调体系pH为2.8;检测波长为260 nm。结果：Wistar大鼠血浆中杂质不干扰样品的含量测定,士的宁含量在0.067 84-3.392 00 μg·mL^-1,马钱子碱含量在0.052 48-2.624 00 μg·mL^-1,线性良好,日内、日间精密度均小于10%,平均回收率均大于85%,稳定性符合体内药物分析要求。结论：UPLC检测法灵敏度高、精密度好,可应用于通脉丸中士的宁与马钱子碱药物动力学研究。