单克隆荧光偏振免疫法、多克隆荧光偏振免疫法和高效液相色谱法分别测定环孢素A血药浓度结果的相关性探讨

 目的本实验定量比较当前通行的3种CsA(环孢素A)测定方法,考察方法间相关性,建立普遍适用的测定结果换算方法。方法分别采用高效液相色谱法、单克隆和多克隆荧光免疫法测定样品,测定结果采用Levene和Tamhane's T2进行方差分析,用Spearman进行相关性比较。结果经过统计分析得到3组方法结果互换方程式,Y_mFPIA=0.967 1X_HPLC+45.761; Y_pFPIA=1.493 7X_HPLC+205.94;Y_pFPIA=1.563X_mFPIA+129.72。结论高效液相色谱法、单克隆和多克隆荧光偏振免疫法三者间具有良好的相关性,通过方程式可将各自测定结果方便准确的互算。     

固相萃取-高效液相色谱法测定肝移植病人血清中麦考酚酸浓度

 目的　建立血清中麦考酚酸(霉酚酸)的高效液相色谱检测法,并监测肝移植病人霉酚酸血药浓度。方法　应用OASIS固相萃取小柱提取血清中霉酚酸,采用反相高效液相色谱法二极管阵列检测器检测,色谱柱为Symmetry C₁₈(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-2.5mmol·L^-1 KH₂PO₄ 缓冲液(50∶50),pH为4.5,流速为1.0mL·min^-1,柱温25℃,检测波长210nm。结果　霉酚酸在0.1～10.0μg·mL^-1内定量线性良好(r=0.9999),精密度和回收率均良好,成功用于肝移植病人霉酚酸血药浓度测定。结论　本方法适用于肝移植病人霉酚酸血药浓度的测定,但临床测定结果较文献报道的肾移植病人口服麦考酚酸酯后MPA血药浓度数据低,有待进一步研究。     

重症肌无力患者吗替麦考酚酯的血药浓度监测

 目的建立一种高效液相色谱法测定人血浆中吗替麦考酚酸的新方法,以进行吗替麦考酚酯的血药浓度监测。方法采用Phenomenex C₁₈(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱;甲醇-10mmol·L^-1醋酸铵水溶液(95%水-5%甲醇)为流动相,比例为60:40;流速:1mL·min^-1;柱温:25℃;紫外检测波长:250nm。结果当吗替麦考酚酸浓度在0.5～60mg·L^-1时,其峰面积与浓度的线性关系良好(r=0.9995);高、中、低3个浓度的绝对回收率分别为93.80%,95.82%和98.14%,相对回收率分别为88.20%,99.50%和101.36%,日内及日间精密度的RSD均小于5%。目前采用此方法已测定20例重症肌无力患者谷浓度血样52份,大多数在1～3.5mg·L^-1。临床观察的结果显示,吗替麦考酚酯可以改善患者的临床症状,85%患者的合并用药减少,一些患者有轻度的不良反应,但是所有患者未发生严重的不良反应。结论本方法测定结果准确、方法简便,可用于患者的血药浓度监测。     

高效液相色谱法测定山楂中枸橼酸的含量

 目的建立山楂中枸橼酸的高效液相含量测定方法。方法 高效液相色谱法,Zorbax-sb C₁₈柱,磷酸二氢铵-磷酸缓冲液为流动相,流速1.0 mL·min^-1;检测波长为210nm;柱温25℃。结果枸橼酸回归方程Y=3510.8+56992.3X,r=0.999 9,线性范围0.79～15.96μg。生山楂中枸橼酸平均回收率为103.4％,RSD=0.9％;焦山楂中枸橼酸平均回收率为98.8％,RSD=2.8％(n=5)。结论该方法简便易行,可用于山楂饮片中枸橼酸的含量测定。     

UPLC-MS/MS法同时测定通塞脉微丸中10种有效成分

目的 建立同时测定通塞脉微丸中10种有效成分（绿原酸、芹糖甘草苷、毛蕊异黄酮苷、木犀草苷、甘草苷、阿魏酸、异甘草苷、哈巴俄苷、甘草素和肉桂酸）的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析方法。方法 采用BEHC₁₈（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,采用电喷雾电离源（ESI）,多反应离子监测（MRM）扫描方式进行检测。结果 10种成分线性关系分别为绿原酸Y＝294.09 X＋17 624;芹糖甘草苷Y＝19.296 X＋748.42;毛蕊异黄酮苷Y＝670.8 X＋11 121;木犀草苷Y＝490.45 X＋2 938.3;甘草苷Y＝33.489 X＋555;阿魏酸Y＝127.76 X＋1 343.5;异甘草苷Y＝57.87 X＋804.81;哈巴俄苷Y＝13.125 X－20.365;甘草素Y＝29.057 X＋367.71;肉桂酸Y＝72.867 X＋1 301.5,且各相关系数（r）均大于0.999 0。精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在96.00%～104.67%,RSD值均小于3%。结论 所建立的方法准确、快捷,重复性好,可用于通塞脉微丸中绿原酸、芹糖甘草苷、毛蕊异黄酮苷、木犀草苷、甘草苷、阿魏酸、异甘草苷、哈巴俄苷、甘草素和肉桂酸10种有效成分的同时测定。     

RP-HPLC测定人血浆中咪唑斯汀浓度

 目的测定人血浆中咪唑斯汀的浓度方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为日本HiQ silC₁₈ V(4.6 mm×150 mm,5μm),检测波长为285nm,流动相为0.025 mol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液-乙腈-甲醇(75:25:5)(pH=2.58).流速0.5 mL·mm^-1。结果回归方程Y=0.002 8X+0.0013(r=0.999 4),其线性范围为20.8～554.7 ng·mL^-1,最低检测浓度为13.87 ng·mL^-1(S/N>3),提取回收率在77.93%～88.84%之间(RSD为2.49%-7.45%),日内和日间RSD分别为4.58%～8.25%和2.08%～7.65% 结论该法操做简便、快速、准确、重现性好,适用于咪唑斯汀的药动学研究。     

HPLC法测定痔炎消颗粒中芦丁的含量

目的:建立测定痔炎消颗粒中芦丁含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Merck Lichrospher C₁₈柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-1%冰乙酸(32∶68);流速1mL.min-1;检测波长为257nm。结果:芦丁回归方程为Y=1865.5X+101.61,r=0.9995;线性范围为0.299～8.970μg(n=6,RSD=0.91%),平均回收率为99.54%,RSD为0.91%。结论:所建方法简便可行,快速,可用于痔炎消颗粒的质量控制。     

天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收动力学研究

目的: 研究天钩降压胶囊中有效成分钩藤碱、异钩藤碱的大鼠离体小肠吸收动力学。 方法: 采用外翻肠囊法,用HPLC测定不同取样时间肠内液钩藤碱、异钩藤碱的含量并计算累计吸收量,以钩藤碱、异钩藤碱的累计吸收量对时间作线性回归分析,计算吸收动力学参数。 结果: 钩藤碱回归方程为Y=0.000 9X-0.008 5(r=0.908 6),K_a=9.0×10^-4 (μg·min^-1·cm^-2),t_1/2=12.8 h,异钩藤碱回归方程为Y=0.008 6X-0.178 2(r=0.909 0),K_a=8.6×10^-3(μg·min^-1·cm^-2),t_1/2=1.34 h。 结论: 天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程。     

LC-ESI-MS/MS快速测定人血浆中艾司西酞普兰的浓度

 目的建立测定人血浆中艾司西酞普兰浓度的高效液相色谱串联质谱电喷雾法(LC-ESI-MS/MS)。方法以Agilent C₁₈反相柱(Agilent C₁₈ column,2.1 mm×30 mm,3.5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-5 mmol·L^-1甲酸铵(75∶25),流速为0.4mL·min^-1,柱温:25℃,以正己烷-异戊醇(95∶5)为提取剂。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对艾司西酞普兰(m/z 325→109)和内标利培酮(m/z 411→191)进行测定。并用此法测定40例患者稳态血药浓度。结果艾司西酞普兰的高、中、低(25,10,0.5μg·L^-1)3个浓度的平均回收率分别为99.16%、99.94%和92.28%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于10%;分析方法的最低定量限为0.2μg·L^-1。线性范围为:0.2～50μg·L^-1,回归方程为Y=0.394 2ρ+0.020 5,r=0.999 4(n=8)。结论该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究。     

人血浆中霉酚酸浓度测定方法研究及药物监测应用

 目的建立用高效液相色谱快速测定人血浆中霉酚酸浓度的方法,对我院肾移植病人霉酚酸血药浓度进行监测。方法血浆样品加20μLH₃PO₄酸化,乙醚提取,萘啶酸为内标,采用Kromasil 100-5C₈(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.05 mol·L^-1 KH₂PO₄(用磷酸调pH2.8)(12∶38∶50)为流动相,流速0.5 mL·min^-1,柱温25℃,检测波长254 nm。结果霉酚酸在0.191～24.45 mg·L^-1内线性关系良好(r=0.999 8),最低定量限为0.191 mg·L^-1(S/N=10)。高、中、低3个质控样品的平均方法学回收率为89.7%～101.5%,提取回收率大于85%,日内、日间精密度的RSD均小于10%。监测肾移植患者环孢霉素或他克莫司的谷浓度同时,测定其MPA血药浓度,82.3%的患者MPA浓度小于2 mg·L^-1,低于有效治疗谷浓度。结论本法简便、灵敏、重现性好,可用于肾移植病人服用霉酚酸酯后霉酚酸血药浓度监测和霉酚酸酯药动学研究。     

色满卡林和舒喘灵在体内外舒张支气管作用比较

 目的:证实色满卡林(cromakalim)可治疗哮喘,比较色满卡林和舒喘灵在体内外的支气管舒张作用?方法:研究了色满卡林和舒喘灵在人离体气管平滑肌的松弛效能和吸入色满卡林和舒喘灵对哮喘患者气道的舒张作用?结果:在人离体气管平滑肌,色满卡林和舒喘灵对组胺或前列腺素F_2α引起的收缩产生的舒张反应没有显著差异(P>0.05),但对乙酰胆碱引起的收缩产生的舒张反应有显著差异(P<0.01)?色满卡林和舒喘灵能产生相加松弛反应?吸入色满卡林和舒喘灵后,16名哮喘患者的FEV₁,V₅₀和PD₂₀显著升高(P<0.01)?吸入色满卡林和舒喘灵后,PD₂₀的改变显著相关(r=0.87,P<0.01)?结论:色满卡林是一种可用于临床治疗哮喘的新药?     

Real-time PCR法检测肾移植患者外周血淋巴细胞次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因表达

 目的建立测定肾移植术后患者外周血淋巴细胞中次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)Ⅰ型和Ⅱ型基因表达水平的Real-time PCR方法,研究吗替麦考酚酯(MMF)药效个体差异。方法取肾移植后门诊复查患者外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,进行Real-time PCR反应,选用β-actin作为内参,靶基因的相对定量按公式得出:靶基因=2^-(△△Ct),高效液相色谱法测定吗替麦考酚酸(MPA)浓度。结果IMPDH表达个体间差异大(Ⅰ型0.118～3.313;Ⅱ型0.185～2.928),MPA对于个体IMPDH两种亚型的抑制程度不同,MPA的谷浓度>1.0mg·L^-1时,IMPDHⅠ型和Ⅱ型的基因表达水平表现出明显的抑制作用。结论本法实用性强,结果可靠、重现性好,可用于肾移植患者服用MMF后的药效个体化研究。     

山楂叶不同提取物对血瘀大鼠全血黏度影响的谱效关系研究

目的研究山楂叶不同提取部位指纹图谱与其降低血瘀大鼠全血黏度的相关性,为建立指纹图谱与药效关联的中药质量控制模式提供理论依据和数据支持。方法采用高效液相色谱法建立山楂叶不同提取部位的指纹图谱;采用MATLAB软件的逐步后退分析方法,计算指纹图谱共有峰(X)与全血黏度药效值(Y)的多元线性回归方程。结果指纹图谱共有峰有32个,其中X_9、X_(10)、X_(11)、X_(13)、X_(14)、X_(15)、X_(17)、X_(19)、X_(27)、X_(29)和Y具有相关性,组成功效成分组;X_(10)、X_(11)、X_(13)、X_(19)、X_(29)与Y呈负相关,有可能是活性单体成分,其中X_(14)为牡荆素葡萄糖苷,X_(17)为牡荆素,X_(19)为芦丁。结论利用MATLAB统计软件计算得到的多元回归方程具有统计学意义,为进一步研究山楂叶提取物的活性成分提供理论依据。     

血脑同步微透析研究大鼠口服银杏酮酯后内酯类成分的血脑分布

目的研究大鼠口服银杏酮酯(GBE)后内酯类成分在脑部和血液中的药物质量浓度及药物分布系数(AUC脑/AUC血)。方法采用血脑同步微透析方法与高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)技术相结合,通过在大鼠脑部和颈静脉处同步埋置探针,收集大鼠口服GBE后不同时间段的脑部和血液微透析液,用HPLC-MS/MS对透析液中的内酯类成分进行分析,根据分析结果描绘血药浓度和脑药浓度曲线图,并分别计算各成分在脑部和血液中的药物分布系数。结果大鼠ig给予GBE混悬液(600 mg/kg)后,通过HPLC-MS/MS技术,血液微透析液中能检测到银杏内酯A、B、C和白果内酯;而脑部微透析液中只能检测到银杏内酯A、B、C,无法检测到白果内酯。各类成分在脑部和血液中的药物分布系数分别为银杏内酯A 2.911%、银杏内酯B 3.126%、银杏内酯C 0.337%。结论多点同步微透析技术可以同步检测中药中多种成分在多个效应部位的分布情况,还具有活体连续取样、节省动物、采样量小、组织损伤轻等特点,能较好地为探索多成分中药的效应物质基础提供一定的参考。     

UPLC-MS/MS法同时测定注射用益气复脉(冻干)中13种成分

目的 建立同时测定注射用益气复脉(冻干)(YFI)中人参皂苷类(人参皂苷Rb₁、Re、Rg₁、Rc、Rd、Rf、Rg₃、F₂和三七皂苷R₁)和木脂素类(五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素)共13种成分的UPLC-MS/MS分析方法,并对YFI中上述成分进行定量分析.方法 采用液质联用法,应用C₁₈柱,流动相为含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液梯度洗脱,质谱采用正离子模式,多反应监测扫描.结果 YFI中13种成分线性关系、精密度、稳定性、重复性均符合方法学测定要求,加样回收率为98.28%～101.08%.应用所建立的方法测定了5批次YFI中人参皂苷类和木脂素类共13个成分的量.结论 所建立的用于同时测定YFI中13种成分的分析方法简单、重复性好、准确可靠,可为YFI质量控制提供依据.     

氢化物发生-原子荧光光谱法测定锁阳中汞和砷的含量

目的: 建立氢化物发生-原子荧光光谱法测定锁阳药材中有害元素汞、砷的定量检测方法。 方法: 采用高氯酸-硝酸消解,原子荧光光谱法测定。 结果: 汞在0.1~0.5 ng ·mL^-1线性关系良好,回归方程Y=3.54×10²X+9.54,r=0.999 7,最低检出限为0.022 ng ·mL^-1;砷在1.0~10.0 ng ·mL^-1线性关系良好,回归方程Y=1.65×10²X-3.89,相关系数r=0.999 9,最低检出限为0.151 ng ·mL^-1。 结论: 该方法简便快速,结果准确可靠,结果满意,可为锁阳药材质量标准体系中有害成分的限量规定提供参考。     

肾移植患者麦考酚酸的群体药动学研究

 目的建立国人肾移植患者在移植初期3个月的群体药动学模型。方法研究对象为52例采用环孢素、吗替麦考酚酯(MMF)和糖皮质激素三联免疫抑制治疗方案的肾移植患者。收集其服药后不同时相的血样560份以及相应的生理、病理和实验室检查数据。运用非线性混合效应模型建立麦考酚酸的群体药动学模型,考察身高、体重、年龄、性别、剂量、血清肌酐、移植术后天数、合并用药、UGT1A9启动子11个单核苷酸基因多态性等对药动学参数的影响。模型验证采用200次bootstrap。结果以一级吸收和消除的二房室模型拟合麦考酚酸的药动学过程为佳,一级速率条件算法计算。体重和移植术后时间是麦考酚酸清除率的影响因素。麦考酚酸清除率的群体药动学公式为:CL/F(L·h^-1)=0.554.TBW(kg).(1-e^-1.14·POD)。MPA平均清除率为31 L·h^-1,与白种人的文献报道值相吻合。Bootstrap法的验证结果与模型计算值也相符。结论建立的麦考酚酸群体药动学模型有一定代表性,为采用Bayesian法进行个体化给药奠定基础。     

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??OBJECTIVE To develop an UPLC method for the determination of mycophenolic acid(MPA) for studying the pharmacokinetics of mycophenolate mofetil(MMF) dispersible tablets after multiple oral doses in early kidney transplant recipients for the rational use in the clinical practice.METHODS A total of 15 Chinese postoperative renal transplant recipients were given a multiple-dose of MMF (750 mg, q12 h) for 6 d. Their blood specimens (2 mL) were collected at 0 and 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12 h after drug oral administration on day 7. The concentrations of MPA in plasma were determined using UPLC-UV. The main pharmacokinetic parameters were assessed.RESULTS Determination of MPA had good linearity in the concentration range of 0.1-40 ??g??mL^-1, lower limit of quantization was 0.10 ??g??mL^-1.The main pharmacokinetic parameters on day 7 of MMF dispersible tablets were as follows:AUC_{0-12 h} was (24.63??9.51) ??g??h??mL^-1, ??_max was (6.51??3.27) ??g??mL^-1, t_max was (1.83??1.30) h, ??₀ was (1.26??0.99) ??g??mL^-1,CL was (34.66??12.45) L??h^-1. Most of the patients revealed a second small peak in the 4-12 h.CONCLUSION This established method is simple, rapid and suitable for determination of MPA in human plasma.Interindividual variability in AUC_{0-12 h}, ??_max and ??₀ values was considerable in the early renal transplant patients. The MPA exposures under the fixed dose of MMF are low. It is necessary to monitor the MPA-AUC_{0-12 h} to guide the adjustment of drug dosage.     

他可莫司血药浓度监测

 目的：为临床肾移植患者他可莫司(FK506)的合理用药提供参考。方法：采用微粒子酶免分析法对206例肾移植患者进行血药浓度监测, 并对其结果及疗效进行分析总结。结果：为206例肾移植患者监测了1732例次FK506血药浓度, 其中有效血药浓度范围内的有917例次, 占52.9%; 低于有效血药浓度的有649例次, 占37.5%; 高于有效血药浓度的有166例次, 占9.6%。结论：为用药安全有效, 应监测FK506血药浓度，实行个体化给药。