人单核细胞白血病细胞系SHI-1的多药耐药和耐药蛋白的表达

目的 探讨人单核细胞白血病细胞系SHI-1多药耐药谱及其机制.方法 噻唑蓝(MTT)检测SHI-1细胞对柔红霉素、鬼臼乙叉甙、高三尖杉酯碱、紫杉醇和长春新碱的敏感性;流式细胞术(FCM)检测SHI-1细胞中P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)等耐药蛋白的表达.结果 MTT药敏实验结果显示SHI-1细胞存在着多药耐药,尤其对VP-16最为明显.FCM检测显示SHI-1细胞中P-gp阳性比例10.78%,相对荧光强度(RFI)为1.02;GST-π阳性率93.52%,RFI 6.91;LRP阳性率92.86%,RFI 8.00;MRP阳性率4.54%,RFI 1.38;BCRP阳性率3.84%,RFI 1.06.结论 SHI-1细胞存在多药耐药,以对VP-16最为明显,其耐药机制可能与LRP和GST-π的高表达有关.     

黄芩苷对肺腺癌细胞多药耐药性的影响及机制

目的探讨黄芩苷对人肺腺癌细胞株A549多药耐药性(MDR)的影响及作用机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549后给予0、0.5、1、2、4、8mg/L黄芩苷对细胞进行处理,MTT法检测不同浓度黄芩苷对A549细胞生长的影响情况;逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组细胞多药耐药基因1(MDR-1)、多药耐药相关蛋白-1(MRP1)、谷胱苷肽转移酶-π(GST-π)、拓扑异构酶(TOPO)ⅡαmRNA的表达情况。结果与对照组相比,黄芩苷组细胞生长明显受到抑制(P<0.05或<0.01);黄芩苷处理后肿瘤细胞MDR-1、MRP1、GST-π、TOPOⅡαmRNA表达水平降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 baicalin可以调节多种MDR基因的表达,具有明显的逆转肺腺癌细胞MDR的作用。     

复方当归注射液逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的:研究复方当归注射液对人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/A02MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷光甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因及其相应蛋白表达的影响。方法:采用台盼蓝染色法检测复方当归注射液的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法分别检测复方当归注射液在非细胞毒浓度(IC10)作用下对K562/A02细胞上述基因及其表达的影响。结果:复方当归注射液作用后,K562/A02细胞中MDR1基因及P-gp表达降低(P<0.01);TopoⅡ蛋白表达增高(P<0.01),TopoⅡ基因表达无显著变化(P>0.05);MRP、GST-π基因及其蛋白的表达无明显变化(P>0.05)。结论:复方当归注射液能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少及在蛋白水平上调K562/A02细胞TopoⅡ的表达有关。     

多药耐药基因在胃癌组织表达的特点及其与P53基因表达相关性分析

目的:分析多药耐药蛋白P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ在胃癌组织表达的特点,探讨P53基因突变和MDR基因激活之间相互诱导、调控和协同作用关系及其可能机制。方法:应用免疫组化检测我院50例胃癌组织中多药耐药蛋白P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ和突变型P53蛋白的表达,SPSS16.0统计软件分析胃癌中P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ阳性表达情况及其与突变型P53蛋白阳性表达的关系。结果:胃癌组织中P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ和P53蛋白的表达率分别为58%(29/50)、40%(20/50)、86%(43/50)、68%(34/50)、44%(22/50)。P-gp与胃癌组织TNM分期(P<0.01)和淋巴结转移(P<0.02)相关,而与分化程度无相关性(P>0.05);MRP与胃癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移均无相关性(P>0.05);GST-π与胃癌分化程度和淋巴结转移均相关(P<0.01),与TNM分期无关(P>0.05);Topo-Ⅱ与胃癌淋巴结转移有相关性(P<0.05),与分化程度和TNM分期无关(P>0.05);P53与胃癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移均无相关性(P>0.05);P-gp、Topo-Ⅱ与P53表达存在显著相关性(P<0.01)。结论:(1)P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ均与胃癌淋巴结转移有相关性,淋巴结转移的胃癌中P-gp、GST-π表达率较高,而Topo-Ⅱ表达降低,提示伴有淋巴结转移的胃癌化疗容易耐药,预后较差;(2)P-gp与胃癌TNM分期和淋巴结转移有关,伴有淋巴结转移的晚期胃癌P-gp表达增高,提示淋巴结转移和较晚分期是影响胃癌化疗效果和预后的重要因素;(3)胃癌中P-gp、Topo-Ⅱ与P53蛋白表达具有正相关性,提示胃癌中P53基因突变与多个MDR基因激活有协同作用。     

齐墩果酸诱导Kasumi-1细胞凋亡及对AML1-ETO表达的影响

目的 观察齐墩果酸(OA)诱导入急性髓系白血病M2型细胞株Kasumi-1凋亡及对AML1-ETO表达的影响.方法 用不同浓度OA作用于人急性髓系白血病M2型Kasumi-1细胞株,四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测AML1-ETO蛋白表达水平;荧光原位杂交(Fish)检测融合基因AML1-ETO的变化.结果 OA以时间和剂量依赖方式抑制Kasumi-1细胞的增殖,24,48,72 h的IC50分别约为0.58,0.41,0.35 μmol·L-1.不同浓度(0.4,0.6,0.9μmol·L-1)OA作用24h后,细胞凋亡率明显增加,AML1-ETO蛋白表达下调.结论 OA对Kasumi-1细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用可能与AML1-ETO的抑制有关.     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

ZNF300基因在肝癌耐药细胞HepG2/VCR中的表达及功能初探

目的建立人肝癌HepG2/VCR耐药细胞株,检测ZNF300基因在HepG2/VCR中的表达并初步分析其在肝癌多药耐药(MDR)中发挥的功能。方法采用体外低浓度梯度递增的诱导方法建立长春新碱(VCR)获得性HepG2/VCR耐药细胞株。MTT法检测确定HepG2/VCR耐药细胞株对VCR的耐药性,用Western blot方法检测人锌指蛋白ZNF300基因编码的ZNF300及多药耐药基因编码的P糖蛋白(P-gp)在HepG2和HepG2/VCR细胞中的表达差异;在HepG2/VCR细胞中转染ZNF300基因正向或反向cDNA质粒后,MTT法检测VCR对耐药细胞IC50值的变化,Westernblot方法检测细胞内P-gp表达的影响。结果 MTT检测确认HepG2/VCR耐药细胞构建成功,Western blot检测发现耐药细胞中ZNF300及P-gp的表达相对于HepG2细胞明显增高。在HepG2/VCR细胞中转染正向ZNF300 cDNA质粒后,MTT和Western blot检测发现ZNF300过表达可使VCR对耐药细胞的IC50值增高,并使细胞内P-gp表达上调;在转染反向cDNA质粒Knockdown ZNF300基因表达后得到相反的结果。结论 ZNF300基因在HepG2/VCR耐药细胞中表达明显增高,并能通过上调耐药蛋白P-gp的表达促进肝癌细胞耐药性,可以作为逆转肝癌多药耐药的分子作用靶点。     

乳腺癌组织中多药耐药基因的表达及其临床意义

目的探讨多药耐药基因蛋白P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)及DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法用免疫组化法检测78例原发乳腺癌组织中P-gp、GST-π及TopoⅡ的表达水平。结果(1)78例乳腺癌组织中P-gp、GST-π和TopoⅡ表达率分别为28.2%、38.5%和52.8%。(2)P-gp和GST-π表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、临床分期、组织学类型无显著差异(P>0.05),TopoⅡ表达与肿瘤大小、远处转移、临床分期、组织学类型无显著差异(P>0.05),但与年龄、淋巴结转移有显著差异(P<0.05)。P-gp和GST-π的表达呈正相关(P<0.05),P-gp和TopoⅡ的表达呈明显负相关(P<0.05),GST-π和TopoⅡ呈明显负相关(P<0.05)。结论(1)部分乳腺癌患者体内原发存在耐药基因,对抗癌药物已产生耐药性。(2)乳腺癌化疗前检测耐药基因P-gp、GST-π与TopoⅡ,对肿瘤的化疗药物选择具有指导作用,对判断预后及研究耐药逆转提供参考价值。     

探讨P-gp和GST-π在肺鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨P-gp和GST-π在肺鳞状细胞癌中的表达与临床意义。方法应用免疫组织化学技术,检测87例肺鳞状细胞癌中P-gp和GST-π多药耐药的表达。结果87例肺鳞状细胞癌中P-gp和GST-π表达的阳性标记与肺鳞状细胞癌临床化疗有相关性(P<0.05)。结论P-gp和GST-π联合表达与肺鳞状细胞癌化疗密切相关,检测P-gp和GST-π对鳞状细胞癌化疗方案的制定具有重要的意义。     

肺癌组织中糖转运蛋白1的表达与肿瘤耐药的关系

目的探讨肺癌组织中糖转运蛋白1(glucose transporter1,GLUT1)、多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance related protein,MRP)和谷胱甘肽S转移酶-π(glutathione S-transferasepi,GST-π)的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学方法检测42例(其中男28例,女14例;平均年龄54.7岁。分型:小细胞癌2例,鳞癌21例,腺癌16例,细支气管肺泡癌3例)肺癌组织中GLUT1、MRP和GST-π的表达。结果42例肺癌组织中GLUT1阳性表达36例(85.7%);MRP阳性表达24例(57.1%);GST-π阳性表达23例(54.8%)。GLUT1表达与GST-π蛋白表达呈显著正相关性(P<0.05),与MRP表达无相关性(P>0.05)。肺癌组织T3、T4与T1、T2相比GLUT1、MRP和GST-π高表达率均明显增加,差异有统计学意义(P均<0.05)。肺癌组织有淋巴结转移与无淋巴结转移相比,GLUT1、MRP和GST-π高表达率均明显增加,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论GLUT1在肺癌组织中高表达,并与GST-π表达有显著正相关性;GLUT1可能对GST-π的表达起上调作用。GLUT1、MRP和GST-π高表达与肺癌的浸润程度和淋巴结转移有关。     

荜茇酰胺对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用

目的:研究荜茇酰胺对人肺癌A549/顺铂(DDP)细胞耐药性的逆转作用。方法:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,用MTS法检测肿瘤细胞抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、细胞周期、P-糖蛋白(P-gp)表达和肿瘤细胞内罗丹明Rht123含量的变化;Western blotting法检测多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1、DNA拓扑异构酶(Top)Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、凋亡抑制蛋白Survivin、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)1和蛋白激酶(PK)Cζ蛋白表达;实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin和CDK1 m RNA表达;酶标仪检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8活性。结果:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP对肿瘤细胞增殖的抑制率明显升高;与0μmol/L比较,20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP导致的细胞凋亡率和G2期/M期明显升高,P-gp表达明显减弱,Rh-123浓度明显增加,MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin、CDK1和PKCζ蛋白表达明显减弱,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDK m RNA表达明显减弱,Caspase-3、8的活性明显增强。结论:荜茇酰胺可逆转人肺癌A549/DDP细胞DDP耐药性,可能与其调节多药耐药相关基因表达有关。     

P-pg、MRP1和GST-π在宫颈鳞癌中的表达及对新辅助化疗敏感性的预测研究

目的探讨宫颈癌新辅助化疗前后P-gp、MRP1和GST-π的表达及其与化疗疗效的关系。方法运用S-P法检测30宫颈鳞癌新辅助化疗前后P-gp、MRP1和GST-π的表达水平。结果①化疗后宫颈鳞癌组织中P-gp阳性表达率为83.3%,显著高于化疗前55.5%(P<0.05);化疗前P-gp阴性患者有效率为100%显著高于P-gp表达阳性患者有效率64.1%(P<0.05)。②化疗后宫颈鳞癌组织中GST-π阳性表达率为83.3%,显著高于化疗前60%(P<0.05);化疗前P-gp阴性患者有效率为83.3%显著高于P-gp表达阳性患者有效率66.7%(P<0.05)。③化疗前后宫颈鳞癌组织中MRP1阳性表达率分别为为86.7%和93.3%,二者间无显著性差异(P>0.05);化疗前P-gp阴性、阳性患者有效率分别为100%和76.9%,二者间无显著性差异(P>0.05)。结论P-pg和GST-π可作为预测宫颈鳞癌化疗敏感性指标。     

肺癌中多药耐药因子的表达相关性及临床意义的研究

目的 探讨多药耐药因子在肺癌中表达与共表达的水平、相关性及临床意义.方法 采用免疫组化SP技术检测60例肺癌患者组织芯片中P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、谷胱苷肽-S转移酶-π(GST-π)等多药耐药因子的表达水平.结果 ①P-gp、MRP、LRP、GST-π阳性表达率分别为53.3%(32/60)、63.3%(38/60)、70.0%(42/60)、80.0%(48/60).②耐药因子在不同病理类型中表达差异有统计学意义(P＜0.05),在NSCLC中表达高于SCLC;在不同TNM分期、不同分化程度间表达差异无统计学意义(P＞0.05).③各耐药因子之间阳性共表达的结果分别为P-gp+MRP:41.6%,P-gp+LRP:35.0%,MRP+LRP:53.3%,MRP+GST-π:50.0%,LRP+GST-π:58.3%,P-gp+GST-π:45.0%,P-gp +MRP+LRP+GST-π:20.0%.其中P-gp与MRP间具有相关性(r=0.756,P＜0.01),P-gp与LRP间具有相关性(r=0.689,P＜0.01),MRP与LRP间具有相关性(r=0.669,P＜0.01),MRP与GST-π间具有相关性(r=0.546,P＜0.01),LRP与GST-π间具有相关性(r=0.848,P＜0.01),P-gp与GST-π具有相关性(r=0.535,P＜0.01).结论 肺癌的多药耐药现象是由多个耐药因子共同参与作用的结果,肺癌多药耐药的发生在肿瘤细胞的病理分型间有差异性,在不同分化程度、不同TNM分期间无差异性.

Abstract：

Objective To study the expression,co-expression, and clinical significance of four multi-drug resistance factors in lung cancer. Methods The P-glycoprotein (P-gp), mullidrug resistance-associated protein ( MRP, lung resistance protein ( LRP), glutathione-S-transferase (GST-π) of 60 lung cancer patients were detected by immunohistochemical methods. Results The positive drug resistance rate of P-gp, MRP, LRP, GST-π was 53.3% (32/60) ,63.3% (38/60) ,70.0% (42/60) ,80.0% (48/60) respectively. Patients with NSCLC had significantly higher expression of the drug resistance factors than those with SCLC. No relation was observed among the expression of drug resistance factors and TNM stage and cell differentiation. The-expression rate was as follows: Pgp + MRP :41.6%, P-gp + LRP :35.0%, MRP + LRP :53.3%, MRP + GST-π:50.0%, LRP + GST-π: 58.3%, Pgp + GST-π:45.0%. P-gp + MRP + LRP + GST-π:20.0%. Among them, significant relation was detected between P-gp and MRP ( rs = 0.756, P ＜ 0. 0 ), between P-gp and LRP ( rs = 0.689, P ＜ 0.01 ), between MRP and LRP (rs = 0.669, P ＜ 0.01 ), between MRP and GST-π( rs = 0.546, P ＜ 0.01 ), between LRP and GST-π ( rs = 0.848, P ＜0.01 ), between P-gp and LRP( rs =0.535 ,P ＜0.01 ). Conclusions The Multi-drug resistance in lung cancer patients is affected by various multidrug resistance factors. The drug resistance factors' expression is related to histology, but not to TNM stage end cell differentiation.     

氧化苦参碱对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)耐药逆转机制的研究

目的:研究天然有效成分氧化苦参碱对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)耐药逆转的机制。方法:以放射线照射诱导的鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,采用免疫细胞化学法、免疫印迹(Western Blot)法检测细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药1基因(mdr1)的mRNA的改变。结果:氧化苦参碱作用于HNE-1(200)细胞24h后,免疫细胞化学方法和Western Blot显示:人鼻咽癌(P-gp)表达下调;RT-PCR显示:HNE-1、HNE-1(200)细胞的mdr1表达无差异。结论:氧化苦参碱能通过下调P-gp表达,在一定程度上逆转耐药,但是mRNA表达并无变化,说明鼻咽癌多药耐药引起P-gp表达上调受多种机制控制。     

GST-π、P-gp和Ts在结直肠癌中的表达及相关性分析

目的 检测结直肠癌患者组织中的胎盘型谷胱甘肽转移酶(GST-π)、P-糖蛋白(P-gp)以及胸苷酸合成酶(Ts)表达情况,并评价表达与肿瘤临床病理的关系,以求为临床选择化疗药物提供参考依据.方法 选取结直肠癌患者100例作为研究对象,病理标本常规固定、包埋、切片后用免疫组化染色检测GST-π、P-gp和Ts表达,光学显微镜下观察染色结果,根据结果计算GST-π、P-gp和Ts阳性率及耐药率,并与患者临床资料进行分析比较.结果 结直肠癌患者切片中GST-π检出阳性率为94.0%,耐药率为86.0%;P-gp检出阳性率为83.0%,耐药率为54.0%;Ts检出阳性率为88.0%,耐药率为52.0%;GST-π的阳性表达与年龄、性别、肿瘤直径等患者临床资料无关,差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移的患者P-gp检出阳性率显著高于无淋巴结转移患者;肿瘤直径<5cm的患者Ts检出阳性率显著高于直径≥5cm的患者;P-gp与GST-π 表达呈正相关,与Ts表达呈负相关(均P<0.05).结论 GST-π、P-gp及Ts均具有较高的阳性表达及耐药性,且有淋巴结转移的患者P-gp检出阳性率更高,肿瘤直径小的患者Ts的阳性表达水平也高于肿瘤直径大的患者,且P-gp与GST-π 表达呈正相关,与Ts表达呈负相关;说明联合检测GST-π、P-gp及Ts的表达有助于帮助患者确定化疗方案,及早筛查肿瘤转移情况,对患者预后具有一定的意义.     

硒化卡拉胶联合阿霉素对HepG-2/ADR细胞的协同抗肿瘤效应及其逆转机制研究

目的 探究硒化卡拉胶(KSC)联合阿霉素(ADR)对肝癌耐药细胞HepG-2/ADR的协同抗肿瘤效应及其逆转作用机制。方法 MTT法分别检测HepG-2/ADR耐药细胞对阿霉素、顺铂(DDP)、紫杉醇(TAX)3种化疗药物的多药耐药性,并判断KSC对HepG-2/ADR耐药细胞的逆转作用;流式细胞术检测KSC和ADR对HepG-2/ADR耐药细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot检测KSC和ADR对HepG-2/ADR细胞中耐药相关蛋白、细胞周期和细胞凋亡蛋白的影响。RT-qPCR进一步验证HepG-2/ADR细胞中耐药相关基因的表达。结果 MTT结果显示,HepG-2/ADR耐药细胞对ADR、TAX、DDP均具有耐药性,且KSC具有逆转肝癌HepG-2/ADR细胞多药耐药性的作用,两药联合表现为相加作用。流式细胞术表明KSC和ADR均可诱导HepG-2/ADR细胞发生凋亡和S期周期阻滞。Western blot结果显示,KSC和ADR显著下调耐药蛋白P-gp、MRP1、ABCG2以及细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin E、CDK2、Survivin和抑凋亡因子Bcl-2的表达(P<0.05或P<0.01),显著上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9、Cleaved-Caspase-3和Cleaved-Caspase-9的表达(P<0.05或P<0.01);联合组可协同促进或抑制细胞凋亡和细胞周期相关蛋白的表达。RT-qPCR表明KSC和ADR单独及联合均能显著下调P-gp1、MRP1和ABCG2耐药基因的表达。结论 KSC可有效逆转肝癌多药耐药性,协同提高HepG-2/ADR细胞对阿霉素的化疗敏感性,其机制可能与诱导细胞凋亡与细胞周期阻滞有关,通过下调多药耐药相关蛋白P-gp、MDR1和ABCG2的表达,进而逆转肝癌多药耐药性。     

Numb调控ITGB1促进胃癌细胞对多柔比星敏感性的机制研究

目的 探究细胞命运决定子Numb调控胃癌细胞对多柔比星(ADR)敏感性的作用，并明确Numb介导胃癌细胞化疗敏感性的分子机制。方法 将SGC-7901随机分为对照组、ADR组、pLVX-Numb组、pLVX-Numb+ADR组，经过对应的ADR处理与转染处理后，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法测定细胞内耐药蛋白(P-gp)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、Cleaved-caspase9的蛋白表达水平。再使用Numb过表达及其对照慢病毒感染SGC-7901细胞，qRT-PCR和Western blot检测细胞内ITGB1表达变化，免疫共沉淀实验分析细胞内源性Numb与ITGB1结合情况。结果 与ADR组比较，pLVX-Numb+ADR组细胞内浓缩、碎裂的蓝色凋亡体增多，细胞凋亡率升高，且细胞内P-gp和PARP蛋白相对表达量下调、Cleaved-caspase3和Cleaved-caspase9蛋白相对表达量上调(P<0.05)。此外，S...     

转录因子Snail促进结直肠癌细胞对奥沙利铂耐药的机制研究

目的 研究转录因子Snail促进结直肠癌细胞HCT116对奥沙利铂产生耐药性的分子机制.方法 采用MTT法分别检测过表达Snail蛋白和空载质粒的HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性差别,以及RNA敲除-糖蛋白(P-gp,编码基因ABCB1)蛋白的HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性的影响.实时定量PCR方法检测过表达Snail对耐药相关基因表达的影响.蛋白质免疫印迹技术Western blot检测过表达Snail对P-gp蛋白表达的影响.结果 过表达转录因子Snail可以明显促进结直肠癌细胞HCT116对奥沙利铂产生耐药性.实时定量PCR结果表明:过表达Snail明显提高了P-gp蛋白编码基因ABCB1的表达,而对其它耐药基因如ABCC1、ERCC1等没有明显影响.Western blot结果显示过表达Snail可以促进P-gp蛋白的表达.敲除P-gp蛋白可以明显提高HCT116细胞对于奥沙利铂的敏感性.结论 过表达Snail可以明显促进结直肠癌细胞HCT116对奥沙利铂的耐药性,其机制与Snail促进耐药蛋白P-gp的表达有关.     

姜黄素逆转人结肠癌细胞株HCT-8/VCR多药耐药的研究

目的探讨姜黄素对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR多药耐药性的逆转作用及可能机制。方法运用MTT法进行药敏试验,流式细胞仪检测细胞内罗丹明123(Rh123)的表达,RT-PCR法检测多药耐药基因mdr1 mR-NA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P糖蛋白(P-gp)表达水平的变化。结果经25μmol/L姜黄素处理后,增强了HCT-8/VCR细胞对VCR的敏感性,其逆转倍数为4.58倍,增加了细胞内Rh123的蓄积(P<0.05),明显抑制了多药耐药基因mdr1 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论本研究结果提示姜黄素能抑制耐药基因的表达及功能,提高细胞对化疗药物的敏感性,从而逆转结肠癌细胞的多药耐药性。     

Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用。方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变。结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P<0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84)μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用。