维生素C对A549细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Survivin表达的影响

背景与目的维生素C作为一种抗氧化剂,对多种肿瘤均有抑制作用,本研究旨在探讨维生素C对肺癌细胞株A549的增殖、凋亡的影响及其诱导A549细胞凋亡的可能机制。方法在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的维生素C,采用细胞生长曲线及克隆形成实验检测细胞生长情况;用流式细胞仪检测细胞周期的影响及凋亡率;用RT-PCR方法检测肺癌细胞株A549中Caspase-3、Survivin的表达差异。结果400μg/mL、4mg/mL浓度组维生素C明显抑制A549细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞被阻止在G0/G1期及S期,且随着时间的延长细胞凋亡逐渐增多,RT-PCR检测维生素C可以上调Caspase-3mRNA的表达,并且随着时间的延长Caspase-3mRNA的表达逐渐增强,对Survivin mRNA的表达无确切作用。结论维生素C呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,并使A549细胞阻止在G0/G1期及S期,并呈时间依赖性诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过上调Caspase-3的表达。     

隐丹参酮通过抑制帽子依赖的翻译促进人肺癌细胞A549的凋亡

目的 探索隐丹参酮对人肺癌细胞A549中帽子依赖翻译的影响及帽子依赖翻译在隐丹参酮促A549细胞凋亡中的作用。方法 免疫印迹实验检测隐丹参酮对A549细胞中mTOR及4EBP1磷酸化的影响,随后通过m7GTP pull down实验检测隐丹参酮对A549细胞中eIF4F蛋白复合物形成的影响,最终通过免疫印迹实验、Annexin V和CCK8法检测敲低4EBP1表达前后隐丹参酮对A549细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2表达、细胞凋亡和存活的影响。结果 隐丹参酮以剂量依赖的方式抑制A549细胞中mTOR及4EBP1的磷酸化、eIF4F蛋白复合物的形成和Bcl-2蛋白的表达。细胞凋亡分析发现,对照组中,隐丹参酮显著地诱导了A549细胞的凋亡[（4.68±0.77）% vs. （31.1±4.1）%, P<0.05],但敲低4EBP1的表达显著抑制了隐丹参酮的促凋亡作用[（31.1±4.1）% vs.（8.85±1.2）%, P<0.05]。CCK8法检测结果发现,隐丹参酮显著抑制了A549细胞的存活[（1±0.09）% vs.（0.43±0.05）%, P<0.05],但敲低4EBP1的表达拮抗了EMD638683的抑存活作用[（0.43±0.05）vs.（0.87±0.06）, P<0.05]。结论 隐丹参酮通过抑制mTOR激酶的活性抑制4EBP1磷酸化,从而抑制A549细胞中帽子依赖的翻译,进而抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱发人肺癌细胞A549的凋亡。     

Livin基因反义寡核苷酸诱导肺腺癌A549细胞的凋亡

目的探讨Livin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响.方法用阳离子脂质体介导Livin ASODN转染A549细胞后,MTT法检测对A549细胞增殖抑制率的影响;RT-PCR法和细胞免疫荧光化学检测Livin ASODN转染前后,A549细胞中Livin mRNA和蛋白表达的变化;吖啶橙/溴乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)复合染色检测A549细胞的凋亡率.结果在A549细胞中同时有Livin α和Livin β的表达,Livin蛋白在细胞质和细胞核中均有分布.Livin基因ASODN可显著抑制A549细胞的增殖(P＜0.01).且作用具有剂量依赖性.终浓度为400 nmol/L的Lip-ASODN转染后,A549细胞Livin mRNA和Livin蛋白的表达均被明显抑制,细胞凋亡率达(31.25 ±5.75)%,与对照组(3.23±1.98)%相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制A549细胞的增殖,并促进A549细胞凋亡.因此,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点.     

香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549凋亡作用及其机制的研究

目的:研究香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549的凋亡诱导作用,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:将用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达并已鉴定的香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414作用于人肺癌细胞A549,用MTT法测定目的蛋白的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的诱导凋亡作用,用ELISA法测定目的蛋白对肿瘤细胞Caspase-3活性的影响,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用。结果:流式细胞术与MTT法检测结果显示,终浓度为7.5、15和30μg/mL的此蛋白对A549细胞凋亡作用与对照组比较差异有统计学意义。ELISA法检测结果显示以上浓度的此蛋白对A549细胞Caspase-3活性影响与对照组相比较差异也有显著性意义(7.5μg/mL组vs对照组:t=8.787,P=0.000;15μg/mL组vs对照组:t=13.429,P=0.000;30μg/mL组vs对照组:t=36.908,P=0.000)。同时此蛋白对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用。结论:香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用的同时对人肺癌细胞A549具有诱导凋亡作用,其凋亡途径可能通过Caspase-3通路。     

蟾蜍灵对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的蟾蜍灵是从中药蟾酥中提取出来的有效成分,其抗肿瘤作用已经在许多体外肿瘤细胞中得到证实,本研究旨在探讨蟾蜍灵对人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制.方法采用MTT法测定细胞活力,绘制细胞增殖抑制曲线;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞仪通过PI染色进行细胞周期分析及凋亡判定;Western blot法检测Livin及Caspase-3蛋白的表达.结果蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,48 h、72 h及96 h抑制细胞增殖50%的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L及(7.39±4.16)nmol/L;蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪榆测到的亚二倍体凋亡峰,凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01);蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Livin蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3蛋白.结论蟾蜍灵能够抑制肺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡;抑制凋亡抑制蛋白Livin的活性及活化Caspase-3可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞系A549、NCI-H1299细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:以不同浓度的Vacquinol-1作用于A549和NCI-H1299细胞,应用CCK-8法检测其对细胞增殖能力的影响;以半数致死浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）作用于细胞,流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;Western blotting法检查凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax表达的变化情况。结果:CCK-8结果显示Vacquinol-1能显著抑制A549、NCI-H1299细胞的增殖能力;并且流式细胞术检测结果显示Vacquinol-1能诱导A549、NCI-H1299细胞的凋亡;Western blotting结果显示Vacquinol-1促进A549、NCI-H1299细胞Caspase-3、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:Vacquinol-1能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,并且通过激活线粒体通路诱导细胞凋亡。     

培美曲塞对不同miR-21表达水平人肺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的 检测不同miR-21表达水平的人肺癌细胞对培美曲塞的药物敏感性,并探讨可能作用机制。方法 采用Annexin V-EGFP荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测培美曲塞对不同miR-21表达水平的A549人肺癌细胞凋亡诱导作用,级联酶底物显色法检测caspase-3的活化状态,蛋白免疫杂交法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、 Bax的表达水平变化。结果 20μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导高表达miR-21的A549人肺癌细胞（A549-21H0）和低表达miR-21的A549细胞（A549-21L0）的凋亡,且A549-21L0处于细胞凋亡晚期,而A549-21H0处于细胞凋亡早期。5μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导65.3％的A549-21L0 细胞早期凋亡,仅诱导2.8％的A549-21H0细胞早期凋亡。5μmol／L培美曲塞作用6h即可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应超过2倍（P＜0.01）;在9h时活化效应最强,活化效应超过7倍（P＜0.01）;18h后活化效应超过6倍（P＜0.01）;至24h时活化效应仍在5倍以上（P＜0.01）。同样条件下,5μmol／L培美曲塞作用18h才引起A549-21H0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应接近3倍（P＜0.01）,至24h活化效应在4倍以上（P＜0.01）。5μmol／L培美曲塞作用于A549-21L0细胞9h即可引起Bax表达水平显著性升高和Bcl-2表达水平明显下降。结论 A549-21L0人肺癌细胞对培美曲塞诱导的细胞凋亡具有更高的敏感性。培美曲塞可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,并可通过调控Bax和Bcl-2表达水平诱导凋亡,这种效应具有一定的时间-效应关系。     

Glypican-3过表达对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨glypican-3对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用glypican-3 cDNA瞬时转染A549细胞,Western blot方法检测转染前后glypican-3在A549细胞中的表达水平,分别采用MTT、流式和Transwell小室研究glypican-3 cDNA对A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用。结果转染后glypican-3在A549细胞中表达上调,细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低（均P〈0.05）。结论 A549细胞中glypican-3过表达促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,可能对A549细胞的生长和存活具有重要作用。     

硫链丝菌肽下调FOXM1的表达对肺癌细胞生长及凋亡的影响

目的 探讨硫链丝菌肽（TST）对肺癌细胞A549增殖、凋亡及其对AG1478 （EGFR-TKI）药物敏感性的影响.方法 CCK-8法检测TST、AG1478单药及两药联用后A549细胞的增殖抑制率;Western blot检测TST对叉头转录因子M1（FOXM1）表达的影响;Caspase-3比色测定法检测TST对Caspase-3活化程度的影响;利用RNAi技术沉默A549细胞中FOXM1基因,检测FOXM1及增殖凋亡相关分子表达变化.结果 TST增加A549细胞对肺癌靶向药物AG1478的敏感性,其IC50值由（4.35±0.45） μmol/L降至（0.73±0.05） μmol/L（t=11.02,P＜0.05）;TST抑制FOXM1及下游c-Myc、Cyclin B1、Bel-2分子的表达,上调P21、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达的同时,呈时间及剂量依赖性诱导Caspase-3分子活化;沉默FOXM1后其下游分子c-Myc、Cyclin B1、Bcl-2、P21及Cleaved PARP的表达改变同TST作用后相似,细胞中Cleaved Caspase-3的荧光表达明显增多.结论 TST介导的FOXM1下调可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,并增加其对AG1478的药物敏感性.     

原花青素诱导人肺癌细胞A549凋亡作用研究

目的研究原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响并探讨其抗癌机制。方法以不同浓度的原花青素与人肺癌细胞株A549细胞共同培养,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258/PI染色荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特异性梯状DNA条带;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果原花青素可体外抑制肺癌A549细胞生长,抑制率呈浓度、时间依赖性,药物浓度达25 mg/L时作用48小时,A549细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型凋亡改变;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带;Western blot检测结果显示,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量与药物浓度的增加呈增加趋势,Bcl-2与药物浓度呈负相关。结论原花青素能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肺癌细胞增殖,其凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

肿瘤特异性Survivin、Livin共沉默RNAi载体的构建及其在前列腺癌细胞中的RNA干涉作用

目的:构建含Survivin基因启动子的、肿瘤特异性Survivin、Livin共沉默RNAi载体,研究该载体在前列腺癌细胞中的RNA沉默作用。方法:运用分子克隆技术,选取Survivin、Livin基因RNAi特异性序列,构建以Survivin、Livin基因为靶点的、含Survivin启动子的CGM30 miR-30 shRNA载体。经测序验证,用脂质体法转染PC-3细胞,RT-PCR、免疫印迹实验检测Survivin、Livin的表达变化,并用流式细胞术检测转染后PC-3细胞的凋亡变化。结果:构建的共沉默RNAi重组载体转染PC-3细胞后,Survivin、Livin基因在mRNA和蛋白水平上的表达均明显下调（P＜0.01）,且转染后的细胞凋亡增加了约15％,而正常前列腺上皮BPH-1细胞中则无此作用。结论:成功构建了含Survivin启动子、特异性沉默Survivin、Livin基因表达的RNAi共沉默载体CGM30-SP-svv-liv,转染该重组质粒后可促进肿瘤细胞的凋亡。     

成纤维细胞生长因子13通过ROS/Caspase-3通路调控非小细胞肺癌A549细胞的凋亡

目的:探讨成纤维细胞生长因子13(fibroblast growth factor 13,FGF13)对非小细胞肺癌A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成和凋亡的影响及其调控机制.方法:WB法检测FGF13在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549、H460细胞中的本底表...     

RNA干扰沉默DcR3对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性影响的实验研究

背景与目的：大部分胰腺癌具有高表达诱骗受体-3(decoy receptor 3,DcR3)的特征,而后者与FasL凋亡途径相关,可能导致胰腺癌对化疗耐药。该研究旨在探讨RNA干扰沉默DcR3基因对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及其可能机制。方法：构建带有DcR3-siRNA序列的稳定表达质粒,通过Lipofectamine^TM2000转染至人胰腺癌细胞AsPC-1细胞株,筛选出转染后稳定低表达DcR3的胰腺癌细胞,同时设未转染对照组(control组)和转染阴性质粒对照组(mock组)。应用ELISA和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测各组AsPC-1细胞中DcR3的蛋白表达;MTT实验检测各组AsPC-1细胞对吉西他滨的敏感性;流式细胞术检测各组AsPC-1细胞凋亡情况;Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测各组AsPC-1细胞中FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果：转染DcR3-siRNA后AsPC-1细胞中DcR3蛋白较其他对照组明显降低;转染DcR3-siRNA后AsPC-1细胞对吉西他滨的敏感性显著增加;沉默DcR3基因可以上调FasL、Caspase-8和Caspase-3的表达并促进吉西他滨诱导的细胞凋亡。结论：RNA干扰沉默DcR3基因可激活FasL/Caspase凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡,增加人胰腺癌AsPC-1细胞对化疗药物的敏感性。     

肺腺癌组织中RGC32基因的表达及其对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

 目的　检测RGC32基因在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法　实时荧光定量PCR检测36例肺腺癌及相应癌旁组织中RGC32基因的表达;应用RNA干扰技术抑制A549细胞中RGC32基因的表达,实时荧光定量PCR检测抑制效果,MTT法测定A549细胞生长抑制率,流式细胞术检测A549细胞凋亡。结果　RGC32基因在肺腺癌组织中表达明显上调,为癌旁组织表达量的2.2736倍（t＝-29.185,P＝0.001）。RNA干扰能够显著抑制A549细胞中RGC32基因的表达。RGC32基因表达降低后,A549细胞的凋亡率由（2.47±0.17）%提高至（4.65±0.26）%（t＝-202.868,P＝0.000）,生长抑制率由2.9 %提高至45.4 %（t＝-37.915,P＝0.001）,细胞增殖活力明显降低。结论　RGC32基因在肺腺癌组织中的表达明显上调,RGC32基因表达降低能够促进A549细胞的凋亡并抑制细胞增殖。     

桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞株的诱导凋亡作用及其分子机制

目的 探讨桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞诱导凋亡作用及分子机制。方法 HE染色和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化;流式细胞学技术检测细胞凋亡率的变化;Western blot法检测凋亡通路相关蛋白的表达变化;PCR法检测p53、Bcl-2、Bax mRNA表达;免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 通过HE染色和电子显微镜观察桔梗皂苷D组5637细胞,可见凋亡细胞,凋亡指数明显高于对照组（P<0.01）;与对照组细胞相比,桔梗皂苷D组5637细胞Survivin、Livin表达量明显下降（P<0.05）;Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c表达量与对照组比较,明显增加（P<0.05）;p53、Bax mRNA水平明显升高,Bcl-2 mRNA表达下降（P<0.01）; Bax、Caspase-9、Caspase-8以及Caspase-3表达较对照组增多,而Bcl-2表达则明显下降（P<0.01）。结论 桔梗皂苷D能诱导人移行细胞癌5637细胞凋亡,其作用机制可能与上调Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c、p53和下调Bcl-2表达、激活线粒体途径和死亡受体途径有关。     

慢病毒载体介导RNA干扰抑制Livin对人大肠癌HT-29细胞生物学行为的影响

  目的  探讨慢病毒载体介导RNA干扰(RNAi)抑制大肠癌细胞系HT-29细胞Livin基因表达对其生物学行为的影响。  方法  设计、合成靶向Livin的siRNA, 构建pGCSIL-GFP慢病毒载体, 采用Real-time PCR和Western blot方法观察对人大肠癌HT-29细胞Livin mRNA及蛋白质表达的抑制; 并通过台盼蓝拒染法、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术及Matrigel穿膜侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及细胞侵袭性的变化。  结果  重组慢病毒Livin-RNAi-LV1能够有效抑制Livin的表达, 使Livin mRNA和蛋白表达水平明显降低(P < 0.01);Livin沉默能抑制HT-29细胞增殖(P < 0.05), 细胞凋亡增加(P < 0.01), 细胞周期重新分布, G₀/G₁期细胞比例升高(P < 0.05), S期细胞比例降低(P < 0.05), G₂/M期细胞比例降低(P < 0.05) HT-29细胞体外侵袭能力也明显减弱(P < 0.01)。  结论  利用慢病毒载体介导RNA干扰技术沉默Livin基因的表达可以抑制大肠癌HT-29细胞增殖, 促进细胞凋亡, 使细胞侵袭性减弱。      

斯钙素1的表达对肺癌细胞A549细胞周期及凋亡的影响

背景与目的：斯钙素1(stanniocalcin l,STC1)在多种癌组织中表达上调,且与癌组织的恶性程度相关,但STC1在肺癌细胞中的分子作用机制尚不明确。本研究旨在探讨STC1的表达对肺癌细胞A549细胞周期及凋亡的影响。方法：构建STC1基因RNA干扰的肺癌细胞株A549-STC1-siRNA和对照细胞株A549-Vector,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测A549-Vector及A549-STC1-siRNA细胞株的细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB1、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4,凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl及凋亡诱导基因Caspase-3、Bax、Bak、Bid的表达水平,用流式细胞术检测STC1基因对A549细胞周期的影响,用原位末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling,TUNEL)检测STC1基因对A549细胞凋亡的影响。结果：与A549-Vector细胞相比,A549-STC1-siRNA的细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB1、CyclinD1、CyclinE、CDK2和CDK4在转录和蛋白表达水平上均显著减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例降低(P<0.05),细胞周期受阻;A549-STC1-siRNA的凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-xl表达下调(P<0.05),而凋亡诱导基因Caspase-3、Bax、Bak及Bid显著上调(P<0.05);TUNEL实验表明,A549-STC1-siRNA细胞的凋亡率明显增加。结论：STC1基因的低表达可阻滞肺癌细胞A549的细胞周期,抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡。     

沉默YAP通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌BGC823细胞的凋亡

目的 本研究探讨Yes相关蛋白（YAP）对胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法 BGC823细胞中转染YAP小干扰RNA（YAP siRNA1、YAP siRNA2）,用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞中YAP表达,筛选干扰效果较好的YAP siRNA1做后续实验。MTT测定细胞增殖,平板克隆实验测定克隆形成能力,流式细胞术测定凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9活性,蛋白质印迹法检测β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白水平。用Wnt/β-catenin的激活剂处理下调YAP后的BGC823细胞,按照上述方法测定细胞增殖凋亡和克隆形成能力。结果 YAP siRNA1、YAP siRNA2下调BGC823细胞中YAP的转录和表达,YAP siRNA1对YAP表达的干扰效率较好。敲低YAP后的细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡率由（6.32±0.58）%升高至（32.71±2.64）%,Caspase-3、Caspase-9活性升高,β-catenin、c-myc、cyclinD1蛋白表达减少,与正常培养的BGC823细胞相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Wnt/β-catenin的激活剂处理可以部分逆转敲低YAP对BGC823细胞的凋亡、增殖、克隆形成能力和细胞中Caspase-3、Caspase-9活性的影响。结论 YAP敲低诱导胃癌细胞凋亡,且作用机制与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

绿原酸对人胶质瘤细胞U251的抗肿瘤活性及其促凋亡机制

 目的 研究绿原酸对人胶质瘤细胞U251细胞株增殖、凋亡的作用及其机制。方法 培养人胶质瘤U251细胞，不同浓度绿原酸处理细胞48 h后，CCK-8法检测细胞生长抑制率，观察细胞形态学变化；Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡，RT-PCR及Western blot检测p53、Livin、Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达，Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果 不同浓度绿原酸干预U251细胞48 h后显著抑制细胞的增殖活性，促进细胞凋亡，并且能够上调p53和Bax基因，下调Livin、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达，促进Caspase-3蛋白的表达。结论 绿原酸可能是通过上调p53和Bax的表达，下调Livin和Bcl-2的表达，激活Caspase-3蛋白，最终诱导U251细胞凋亡。     

siRNA directed against Livin inhibits tumor growth and induces apoptosis in human glioma cells

Livin, a novel member of the human inhibitors of apoptosis protein family, plays an important role in tumor progression and occurrence by inhibiting cell apoptosis. It is selectively expressed in the most common human neoplasms and appears to be involved in tumor cell resistance to chemotherapeutic agents. The present study was designed to investigate the potential of using RNA interference (RNAi) technique to downregulate Livin expression, and the subsequent effect on human glioma cells. The results showed that knockdown of Livin expression by short interfering RNA (siRNA) significantly inhibited glioma cell proliferation and increased cell apoptosis through cell arrest in the G₁/G₀ phase of cell cycle in vitro. Furthermore, Livin siRNA significantly suppressed tumor growth in nude mice. Together, these findings suggest that RNAi-mediated downregulation of Livin expression could lead to potent antitumor activity in glioma cells and might serve as a novel therapeutic strategy in clinic.