超高效液相色谱法同时测定知母中芒果苷等6种成分的含量

 目的 建立同时测定知母中新芒果苷,芒果苷,知母皂苷BⅡ,2,6,4′-三羟基-4-甲氧基苯甲酮,构树宁B,顺-扁柏树脂酚的UPLC方法。方法 采用ACQUITY UPLC, HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.8 μm),流动相为乙腈-0.03%的磷酸水溶液梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,检测波长采用210和192 nm。结果 新芒果苷,芒果苷,知母皂苷BⅡ,2,6,4′-三羟基-4-甲氧基苯甲酮,构树宁B,顺-扁柏树脂酚的质量浓度与峰面积分别在15.00～299.6 μg·mL^-1, 8.80～175.6 μg·mL^-1, 40.00～800.0 μg·mL^-1,2.300～45.60 μg·mL^-1, 0.420～8.50 μg·mL^-1, 0.400～9.00 μg·mL^-1内呈良好的线性关系。平均加样回收率（n=9）均在97.7%~100.6%之间,RSD均小于1.2%。结论 该方法快速、准确、简便,可作为同时测定知母中新芒果苷,芒果苷,知母皂苷BⅡ,2,6,4′-三羟基-4-甲氧基苯甲酮,构树宁B,顺-扁柏树脂酚的方法。     

活血止痛制剂质量标准研究

 目的 完善活血止痛散和活血止痛胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法同时鉴别当归、乳香和冰片。采用高效液相色谱法测定阿魏酸含量。结果 TLC鉴别方法分离良好、斑点清晰;HPLC含量测定方法阿魏酸在0.2～200 μg·mL^-1内线性关系良好,检出限为0.054 μg·mL^-1,回收率在95%～105%之间。结论 本方法专属性强、结果准确、操作简便,可更好地控制活血止痛制剂的质量。     

氟康唑原料药有关物质的研究

 目的 建立高效液相色谱梯度法测定氟康唑原料药的有关物质。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相A为0.01 mol·L^-1甲酸铵,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1, 检测波长为261 nm, 进样量为20 μL。结果 降解产物和杂质在该色谱条件分离良好, 氟康唑与杂质Ｂ～Ｄ在2.632～21.06、2.688～53.76、0.853 6～21.34、2.595～20.76 μg·mL^-1之间线性关系良好,检测限分别为0.20、0.005 2、0.007 3、0.13 μg·mL^-1,对来自9个厂家17批氟康唑原料药（含国外5批）进行了测定,各杂质能有效检出。结论 该方法简便、快速、灵敏、准确,可用于测定氟康唑原料药的有关物质。     

同位素内标-气相色谱串联质谱法测定中药材中多环芳烃残留量

 目的 建立GC-MS/MS测定中药材中16种多环芳烃的残留量,为评价中药质量安全提供有效分析手段。方法 采用同位素内标法,样品以乙酸乙酯提取后,经C₁₈固相萃取小柱净化。GC-MS/MS测定,加入分析保护剂校正基质效应,色谱柱为DB-5 ms(0.25 mm×30 m,0.25 μm),程序升温,MRM模式检测。结果 16种典型多环芳烃在1~100 ng·mL^-1内呈线性关系;在1~25 μg·kg^-1内的平均回收率为88.53%~119.03%,RSD为1.25%~14.70%(n=3);方法定量限为0.2~1 μg·kg^-1。结论 本方法专属性强、灵敏度高、测定结果准确,可用于中药材中16种典型多环芳烃的残留检测。     

高效液相色谱-紫外检测法测定大鼠血浆Copen浓度

 目的 建立测定大鼠血浆Copen浓度的HPLC-UV检测方法,用于Copen大鼠药动学研究。方法 血浆样品用蛋白沉淀法进行预处理。以Symmetry（4.6 mm×150 mm,5 μm）色谱柱为分析柱,流动相采用乙腈-0.1%磷酸水溶液(50∶50),流速为1.0 mL·min^-1,柱温为25 ℃,检测波长为318 nm。结果 内源性杂质不干扰测定,Copen在0.101~20.2 μg·mL^-1内线性良好,方法的最低定量限为0.101 μg·mL^-1 。萃取回收率在69.19%~77.19%之间,日内、日间精密度(RSD)均小于5.20%。结论 此方法快速、准确、灵敏,所需血浆量少,适用于药动学研究。     

反相高效液相色谱法测定兰索拉唑肠溶胶囊中3种邻苯二甲酸酯类增塑剂含量

 目的 建立兰索拉唑肠溶胶囊中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯及邻苯二甲酸二丁酯的检定方法。方法 基于RP-HPLC/UV,采用C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）进行分离,甲醇-水（75∶25）为流动相进行等度洗脱,检测波长230 nm。结果 测定4批兰索拉唑肠溶胶囊中邻苯二甲酸酯的含量。其中在1.4~14 μg·mL^-1内,邻苯二甲酸二甲酯线性方程为Y=48.848ρ-2.811 2（r=0.999 9）;在1.36~20.4 μg·mL^-1内,DEP的线性方程为Y=67.619ρ-30.754（r= 0.999 0）;在1.5~15.5 μg·mL^-1内,邻苯二甲酸二丁酯的线性方程为Y=36.759ρ-4.8507（r=0.999 9）。邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二丁酯加样回收率分别为91.3%、96.1%和94.7%,其RSD分别为2.9%、4.4%和4.7%。结论 本方法操作简单,灵敏度高,具有较强的抗干扰能力,可准确测定兰索拉唑肠溶胶囊中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二丁酯的含量。     

UPLC-MS/MS测定降压类中成药及保健品中30种化学药

 目的 建立一种测定降压类中成药及保健品中添加30种化学药的超高效液相-串联四级杆质谱方法。方法 多反应监测模式测定,以Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈柱进行分离,甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,流速：0.2 mL·min^-1。离子化模式：ESI⁺。结果 30种化学药测定的线性范围分别在10～1 000.0, 0～400.0, 2.0～400.0 μg·L^-1,r分别在0.990 3～0.999 8之间,检出浓度分别在0.01~0.83 μg·L^-1之间, 3个水平的回收率分别在72.2%～123.4%之间。结论 该方法快速、准确、灵敏,可用于降压类中成药及保健品中添加30种化学药的测定。     

红景天苷注射剂的制备及其在大鼠体内药动学研究

 目的 制备红景天苷注射剂并研究其在大鼠体内的药动学。方法 以高纯度红景天苷为原料,通过对活性炭用量以及灭菌条件的选择,确定了红景天苷注射剂的制备工艺。按照《中国药典》要求,对注射剂进行质量研究和稳定性考察。通过对大鼠尾静脉给药,用高效液相色谱法测定血药浓度,获得红景天苷的药-时曲线,并利用DAS 3.0计算其在大鼠体内的药动学参数。结果 注射剂工艺中活性炭用量为0.1% （1 000 mL注射液中含1 g活性炭）;灭菌温度为115 ℃,时间为30 min,该工艺制得的红景天苷注射剂为无色澄明液体,红景天苷含量在标示量的90%～110%内。稳定性结果显示,红景天苷注射剂在加速实验6个月内、长期实验12个月内稳定。建立了血药浓度的HPLC分析方法,其最低检测浓度为0.05 μg·mL^-1,最低定量浓度为0.2 μg·mL^-1。红景天苷血药浓度在0.5～400.0 μg·mL^-1内线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率大于95%;药动学结果显示,消除半衰期为7.6 min,表观分布容积为324.0 mL·kg^-1,清除率为32.0 mL·min^-1·kg^-1。结论 红景天苷注射剂的制备工艺可行,成品质量合格、稳定;红景天苷在大鼠体内半衰期短,清除率较大,适宜制成注射剂作为临床急救用药。     

2009~2010年浙江大学儿童医院肺炎链球菌耐药性和血清分型

 目的 研究2009年度和2010年度浙江大学儿童医院分离的肺炎链球菌的耐药性及其血清分型。方法 肺炎链球菌的鉴定采用奥普托欣试验和乳胶凝集试验,药物敏感试验采用纸片扩散法,其中对青霉素的药敏试验采用E-test法,血清分型采用荚膜肿胀试验,组间率的比较采用χ²检验。结果 2009年度分离肺炎链球菌118株,83.9%的菌株对青霉素敏感,12.7%中介,3.4%耐药,青霉素MIC₅₀和MIC₉₀分别为1.5和2.5 μg·mL^-1;2010年分离到156株,83.3%的菌株对青霉素敏感,14.1%中介,2.6%耐药,青霉素MIC₅₀为1.5 μg·mL^-1,MIC₉₀为3.0 μg·mL^-1,两者敏感率无显著性差异（χ²=0.14,P>0.05）。所有菌株对万古霉素敏感。菌株对红霉素的耐药率最高,在两个时期分别达95.8%和92.3%,2010年的菌株对甲氧苄啶-磺胺异NFDE6唑的敏感率为19.9%,高于2009年11.0%的敏感率（χ²=3.87,P<0.05）。2009年度分离的菌株最常见的血清型为19F,共57株,构成比53.8%,其次为19 A,共32株占30.2 %,常用7价疫苗的覆盖率仅59.4% 。结论 本地区分离的肺炎链球菌对青霉素的敏感率有下降趋势;血清型以19F和19A为主,现有7价疫苗的覆盖率低。     

新型抗凝血肝素铁纳米粒的制备及性质研究

 目的制备一种新型具有抗凝血活性的肝素铁纳米粒。方法通过Fe³⁺与肝素复合的方法制备出肝素铁纳米粒;通过激光粒度仪(DLS)、Zeta电位仪、扫描力显微镜(SFM)、傅立叶红外光谱(FT-IR)分析了肝素铁纳米粒的粒径分布、表面电位、粒子形态及偶联关系;通过甲苯胺蓝染色法测定了制备过程中剩余肝素浓度来计算肝素铁纳米粒中肝素含量;通过活化部分凝血激酶时间(APTT)的方法测定肝素铁纳米粒的抗凝血活性。结果Fe³⁺与肝素按不同比例复合可制备出粒径在(139.0～219.9)nm、Zeta电位在(-22.5～-36.5)mV的纳米粒;红外光谱显示,肝素的硫酸基团与铁离子发生了离子复合作用;Fe³⁺与肝素按不同比例复合制备出的纳米粒中肝素含量在29.5%～33.1%,抗凝血活性在43.2～46.5u·mg^-1。结论Fe³⁺与肝素复合的方法可制备出一种新型具有抗凝血活性的肝素铁纳米粒。     

冠脉宁片中樟脑的限量检查及冰片的含量测定研究

 目的 建立冠脉宁片中冰片的质量控制方法。方法 采用气相色谱法分别对龙脑、异龙脑进行含量测定,并对樟脑进行检查。FID检测器;色谱柱为HP-INNOWAX聚乙二醇毛细管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm);初始温度120 ℃,以每分钟20 ℃升至180 ℃,保持7 min。结果 龙脑、异龙脑和樟脑分别在3.980 μg·mL^-1~1.990 mg·mL^-1, 4.012 μg·mL^-1~2.051 mg·mL^-1, 4.170 μg·mL^-1~0.208 5 mg·mL^-1内呈良好的线性关系。平均回收率分别为100.10%(n=6,RSD=1.6%);98.21%(n=6,RSD=1.8%);101.00%(n=6,RSD=1.2%)。结论 所建立的方法简便,准确,快速,可用于冠脉宁片中冰片的质量控制。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中16种胆汁酸及在甘草减毒研究中的应用

目的建立测定大鼠血浆中16种胆汁酸浓度的LC-MS/MS法。方法鼠血浆样品经过甲醇沉淀蛋白后,上清液挥干,流动相复溶后,用XtimateTMC18柱分离,以甲醇-醋酸铵及甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 m L·min-1,进样5μL分析。结果 16种胆汁酸在0.005 6~3.800 0μmol·L-1内,线性关系良好,定量下限浓度为0.005 6μmol·L-1,低、中、高浓度的萃取回收率在70.3%~107.2%之间,日内、日间RSD均小于12.9%。结论该方法准确可靠,灵敏度高,处理简便,适用于血浆中胆汁酸浓度的测定,为临床血浆样品中胆汁酸含量测定提供参考。     

冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测定研究

目的建立冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测定方法。方法采用高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS/MS)对冠脉宁片中血竭药材可能存在的化工染料进行检查,并采用高效液相色谱法对其中的血竭素含量进行测定。化工染料检查使用色谱柱为:Agilent Zorbax-SB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.02 mol·L-1乙酸铵和乙腈的混合溶液,梯度洗脱,520 nm检测;质谱采用ESI+扫描,二级离子扫描方式。血竭素含量测定使用的色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(37∶63),检测波长440 nm。结果 56批次样品中共有7批样品可检出苏丹红Ⅰ、Ⅳ以及808猩红等化工染料。血竭素高氯酸盐在0.408~816.6μg·m L-1内有良好的线性关系,回归方程为y=1.746 1×107ρ+2 419.9,r=1.000 0;平均回收率为98.37%(RSD为1.2%,n=6)。56批次样品中血竭素含量在0.01~0.25 mg·片-1内。结论所建立的方法简便,准确,快速,可用于冠脉宁片中血竭药材的质量控制。     

微透析技术研究左氧氟沙星在大鼠脑和血中的药动学

 目的 研究左氧氟沙星静脉给药后游离型药物在大鼠血和脑中的药动学。方法 采用微透析技术对大鼠脑组织和血液进行同步取样,联合反相高效液相色谱法检测脑组织和血液中盐酸左氧氟沙星的浓度,用WinNonlin软件处理药动学参数。结果 大鼠血液中的游离左氧氟沙星浓度在给药后10 min时最高,脑组织在20 min到达峰浓度,然后持续下降;前4 h,血液中游离药物浓度高于脑组织中相应时间点药物浓度,之后两种组织中游离药物浓度水平相当。血液、脑组织的药时曲线下面积分别为（21.17±7.83）和（7.00±2.65） μg·h·mL^-1。结论 微透析技术联合反相高效液相色谱检测方法可以成功用于左氧氟沙星在脑组织和血液中的药动学研究。     

LC-MS-MS测定黄连解毒汤中3种生物碱在大鼠血清的含量及其药代动力学研究

目的:建立灵敏、特异、准确、可靠的药根碱、巴马汀、小檗碱在大鼠血清中液质联用(LC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中3种生物碱在正常大鼠体内药代动力学研究.方法:优化药根碱、巴马汀、小檗碱及内标延胡索乙素质谱检测条件,确定相关条件并开展方法学考察.正常大鼠灌胃给予黄连解毒汤,经时取血,样品经处理后将该方法用于3种成分的测定.DAS药代动力学软件拟合房室模型,计算药动参数.结果:在ESI(+)离子化条件下采用MRM工作模式,用,m/z 338～322,351.9～308,336-319.8来分别检测药根碱、巴马汀、小檗碱,同时以m/z 356.1～192.1来检测内标延胡索乙素.药根碱在0.2～25μg·L~(-1)、巴马汀、小檗碱在O.4～50μg·L~(-1)呈良好线性关系.3种生物碱在高、中、低3个浓度的准确度、精密度、稳定性等均符合要求.药根碱、巴马汀、小檗碱在正常大鼠体内药动学过程符合一室开放模型.结论:应用LC-Ms-s技术建立了测定药根碱、巴马汀、小檗碱血药浓度的方法,并成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究,为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法.     

高效液相色谱串联质谱法测定唾液中氨磷汀浓度

 目的 建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)直接检测唾液中氨磷汀(amifostine,AMI)的方法。方法 收集6位健康成年志愿者唾液为基质,石杉碱甲（huperzine-A,HupA）为内标,采用蛋白沉淀法,用高效液相色谱串联质谱测定唾液中的氨磷汀。色谱柱为ZIC-HILIC亲水色谱分析柱（2.1 mm×100 mm,3.5 μm）,质谱分析采用多反应监测扫描模式（MRM）,离子源为电喷雾离子源（ESI）。结果 氨磷汀在唾液中检测到的线性范围为0.938～30 mg·L^-1 ,线性关系良好,典型代表方程为：y=0.072x-0.005 26 (r=0.999 1) (n=6),定量下限为0.938 mg·L^-1(S/N>10)。唾液样品的低、中、高3个质控浓度（1.0、5.0和25 mg·L^-1）批内、批间精密度(RSD)均小于15%,其方法回收率均大于85%。结论 本实验所建立的氨磷汀检测方法直接、快捷、简便、灵敏度高及定性好,适用于唾液中氨磷汀的测定及科学研究。     

高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体酶孵育体系中伊立替康及其代谢产物的浓度

 目的 建立大鼠肝微粒体酶孵育体系中伊立替康（CPT-11）及其活性代谢产物7-乙基-10羟基喜树碱（SN-38）的HPLC检测方法,并对体外孵育条件进行优化。方法 采用HPLC测定微粒体酶孵育体系中伊立替康及其代谢产物的浓度,用单因素法对各孵育条件进行优化,采用Lineweaver-Burk双倒数法研究羧酸酯酶(CES)的酶促动力学。结果 伊立替康、7-乙基-10羟基喜树碱分别在20~4 000、2~400 ng·mL^-1内线性关系良好。体外酶孵育条件为：伊立替康 10 μmol·L^-1,肝微粒体蛋白含量0.02 mg,孵育时间为15 min。结论 本实验建立的HPLC的方法快捷、灵敏,适用于伊立替康及其代谢产物的测定。体外酶孵育条件的优化,同时也为研究其他多种经羧酸酯酶代谢的药物对伊立替康代谢影响及相互作用的体外研究奠定了基础。     

毛细管区带电泳法测定麻黄及麻杏石甘汤中麻黄碱和伪麻黄碱的含量

目的:采用毛细管区带电泳法测定麻黄及麻杏石甘汤中麻黄碱和伪麻黄碱.方法:电泳缓冲液为50 mmol·L~(-1)硼砂/20 mmol·L~(-1)苏氨酸缓冲溶液(1 mol·L~(-1) NaOH溶液调pH至9.27);紫外检测波长210 nm,分离电压15 kV;以苯巴比妥为内标物,采用压力进样(10 cm×20 s),柱温室温.结果:麻黄碱与伪麻黄碱的线性范围分别为21.3～213,8.4～84 mg·L~(-1),相关系数分别为0.999 6,0.999 5,检测限分别为1.45,1.48 mg·L~(-1),定量限分别为4.81,4.93 mg·L~(-1).将该法用于麻黄中麻黄碱与伪麻黄碱的含量测定,平均回收率分别为97.5,98.6%.结论:本法操作简便、快速、经济、灵敏度高,麻黄及麻杏石甘汤中麻黄碱及伪麻黄碱可获得满意的分离,可作为麻黄和麻杏石甘汤中麻黄碱和伪麻黄碱的含量测定方法.