西双版纳地区铁皮石斛及齿瓣石斛品质的初步研究

目的 对比铁皮石斛与其常用替代品在品质方面的差异.方法 采用苯酚-硫酸法与重量法,研究对比了西双版纳地区不同来源铁皮石斛及齿瓣石斛多糖含量及折干率的差异.结果 铁皮石斛的多糖含量及折干率分别为20.29%,20.16%,齿瓣石斛为16.93%,18.92%.结论 不同栽培类型的铁皮石斛存在品质差异;齿瓣石斛的野生苗品质优于组培苗.     

鲜铁皮石斛多糖对Lewis肺癌小鼠免疫功能的影响

目的：观察鲜铁皮石斛多糖（XTPDT）对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响。方法：实验设XTPDT高、中、低剂量组、环磷酰胺（CTX）组及模型对照组5组,各组连续灌胃给药20天,给药结束后,计算各组小鼠抑瘤率（％）;另设XTPDT高、中、低剂量组、模型对照组及正常对照组,给药结束后,观察鲜铁皮石斛多糖对小鼠刀豆蛋白（ConA）诱导的脾淋巴细胞增殖、血清溶血素、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性的作用。结果：XTPDT对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率为8．5％～18．39／6,与模型对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;XTPDT高、中剂量组能明显提高Lewis肺癌小鼠脾淋巴细胞转化、溶血素水平,与模型对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;XTPDT高剂量组能显著提高Lewis肺癌小鼠碳廓清水平和NK细胞活性,与模型组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：鲜铁皮石斛多糖对Lewis肺癌小鼠有明显的免疫调节作用。     

铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响

铁皮石斛(Dendrobium Candidum Wall.ex Lindl.)为常用贵重药材,它具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效[1].其主要有效成分为石斛类多糖及生物碱,另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等.现代药理研究报导石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、降低血糖等作用,但对荷瘤动物免疫功能的作用报导甚少.本文以S180肉瘤小鼠为动物模型,探讨了铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠的免疫调节作用,现将结果报告如下.     

铁皮石斛多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛多糖DT2,DT3的化学结构。方法 运用糖组成分析、甲基化分析及NMR等方法确定多糖的结构。结果 DT2,DT3的数均分子量分别为7.4×10⁵,5.4×10⁵,主要含有葡萄糖、半乳糖、木糖及少量阿拉伯糖和甘露糖,摩尔比分别为5.9:1.0:1.0:0.8:0.5和7.9:1.3:1.0:0.5:0.7。结论 这两个多糖为首次从铁皮石斛中分离得到。     

铁皮石斛原球茎多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛原球茎多糖的理化性质。方法 经过水提醇沉、脱蛋白和透析等步骤获得铁皮石斛粗多糖（CDO）和原球茎粗多糖（CDOP）;CDOP经过纤维素DE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析获得6个均一多糖;用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定均一多糖的纯度及相对分子质量;用气相色谱法（GC）分析粗多糖和均一多糖的单糖组成;用高碘酸氧化-Smith降解反应研究均一多糖的一级结构。结果 CDO主要由甘露糖和葡萄糖组成,物质的量比为4.29∶1.00;CDOP主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比为2.80∶1.00∶0.61。从CDOP中获得了6个质量均一的多糖,分别为DOPW-1（78×103）、DOPW-2（37×103）、DOPS1-1（287×103）、DOPS1-2（351×103）、DOPS1-3（335×103）和DOPS1-4（171×103）;它们的单糖组成及物质的量比等特点与DOP的相同;各均一多糖分子中的1→3糖苷键均主要由半乳糖组成,还含有阿拉伯糖、葡萄糖和鼠李糖;除DOPS1-4外,各均一多糖的一级结构中均不存在1→4糖苷键。结论 这6个均一多糖为首次从铁皮石斛原球茎中得到。     

铁皮石斛对小鼠免疫功能的影响

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生草本植物.铁皮石斛为传统中药,应用历史悠久,药理功效显著.现代临床应用和药理研究证实,铁皮石斛具有滋阴润肺、养胃生津等功效[1],对慢性疲劳综合征、糖尿病、肾病有确切疗效和调理康复作用.还有增强机体免疫力、抗氧化、抗衰老的作用.对口干舌燥、年老体弱力衰阴虚等康复有特殊疗效[2].为探讨其在增强免疫力方面的功效,我们按《保健食品检验与评价技术规划》的相关要求,从体重、免疫器官脏器/体重比值、细胞免疫功能、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性等几方面进行研究,为其临床应用提供实验参考.     

我国近5年铁皮石斛多糖研究概况

铁皮石斛是我国传统的名贵中药,其药用价值备受历代医者推崇,享有救命仙草的美称.现代药理研究表明铁皮石斛多糖具有广泛的生物活性,故成为了现代的研究热点,近几年对其研究特别活跃,相关的研究成果报道也增加很快.查阅最近5年国内关于铁皮石斛多糖的文献资料,并对这些文献资料进行整理、分析和归纳,系统地总结了国内近5年关于铁皮...     

麦冬多糖的免疫活性研究

目的观察麦冬多糖对正常小鼠的免疫功能影响。方法根据实验要求，选择３类不同小鼠每类３０只均分为以下３组：（１）麦冬多糖组；（２）香菇多糖组；（３）生理盐水组；观察（１）胸腺、脾脏重量；（２）碳粒廓清作用；（３）血清溶血素抗体水平；结果麦冬多糖可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量，激活小鼠网状内皮系统（ＲＥＳ）的吞噬功能，提高血清溶血素抗体水平。结论麦冬多糖具有免疫活性     

铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响

目的研究铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响。方法采用水提醇沉法对铁皮石斛进行初步提取,体外培养小鼠胚胎干细胞,通过克隆形成率试验、MTT试验及实时定量PCR的方法研究铁皮石斛提取多糖对小鼠胚胎干细胞的增殖及多能性维持的作用。结果铁皮石斛多糖处理组细胞(50~200μg/m L)的克隆形成率、MTT吸光度值均高于空白对照组,同时其干性相关基因的表达量与对照组相比无显著差异。结论铁皮石斛多糖可以显著促进小鼠胚胎干细胞的增殖、提高其克隆形成率,同时又不影响其多潜能性的维持。     

超声法提取铁皮石斛多糖工艺的研究

目的:探索铁皮石斛多糖的超声波提取工艺条件.方法:考察提取温度、固液比、提取时间和超声频率4个因素对铁皮石斛多糖提取得率的影响.在单因素实验的基础上,通过正交试验优化提取工艺.结果:综合确定的优化提取工艺条件为:1∶ 30的料液比,50℃超声水浴,45 kHz超声频率,提取1.5 h,在此条件下铁皮石斛多糖的平均提取得率为15.3%,结论:超声提取法的多糖得率大于常规水提法,更加高效.     

菌根真菌诱导的铁皮石斛根差减cDNA文库构建

 目的 构建菌根真菌共生诱导的铁皮石斛根的差减cDNA文库,从中筛选出差异表达基因。方法 采用SMARTer PCR cDNA合成方法直接以总RNA为模板合成并富集稀少cDNA,再利用抑制消减杂交（SSH）方法构建受菌根真菌共生诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库。结果 成功构建了受菌根真菌诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库,共获得1 975个阳性克隆。经检测,90%以上克隆能扩增出有效产物,其插入片段大小在150~1 000 bp之间。随机挑取了20个克隆菌液测序并进行了比对分析,大部分为植物应对环境胁迫防御性基因。结论 该技术体系所构建的差减cDNA文库质量较好,操作方便,尤其适用于珍稀濒危的植物材料。     

铁皮石斛原球茎的化学成分研究

 目的 研究铁皮石斛原球茎的化学成分。方法 应用色谱技术分离铁皮石斛原球茎中的化学成分,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。 结果 从乙醇提取物的丙酮、三氯甲烷和95%乙醇三部分分离得到8个化合物,分别鉴定为：1-O- p-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅰ）,arillatose B（Ⅱ）,4-(β-D-吡喃葡萄糖基)苄醇（Ⅲ）,4-羟甲基-2,6-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅳ）,三十六烷酸（Ⅴ）,二十七烷醇（Ⅵ）,β-谷甾醇（Ⅶ）,3β,25-二羟基-23-烯-环菠萝蜜烷（Ⅷ）。结论 以上化合物均为首次从铁皮石斛原球茎中分得。其中,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ为首次从石斛属中分得。     

金钗石斛中联苄类和酚酸类成分的抗氧化活性研究

 目的研究金钗石斛体积分数60%乙醇提取物中联苄类和酚酸类成分的抗氧化活性,探讨其抗氧化活性与结构的关系。方法综合运用现代色谱学和光谱学方法对金钗石斛体积分数60%乙醇提取物中的化学成分进行分离鉴定;采用1,1-苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除法和氧自由基清除能力法两种体外活性测试方法评价分得的16个化合物的抗氧化活性。结果从金钗石斛体积分数60%乙醇提取物中分离得到3个新的联苄类化合物和13个酚酸类化合物,将它们的结构鉴定为nobilinA(1),nobilinB(2),nobilinC(3),丁香酸(syringicacid)(4),2-羟基苯丙醇(2-hydroxyphenylpropanol)(5),香草醛(vanil-lin)(6),罗布麻宁(apocynin)(7),松柏醛(coniferylaldehyde)(8),丁香醛(syringaldehyde)(9),丁香乙酮(syringylethanone)(10),对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde)(11),3-羟基-4-甲氧基苯乙醇(3-hydroxy-4-methoxyphenylethanol)(12),α-羟基丁香丙酮(α-hydroxysyringylethanone)(13),二氢松柏醇(dihydroxyconiferylalcohol)(14),对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid)(15),对羟基苯丙酸(p-hydroxyphenylpropionicacid)(16)。1-二苯基-2-苄基苯肼(DPPH)法活性测试中,化合物4的活性明显强于维生素C(VitC),化合物1,2,12,14显示出弱于VitC但强于2,6-二羟丁基对甲酚(BHT)的活性,化合物3和8只显示很弱的活性;氧自由基清除能力法(ORAC)法测试结果表明,化合物2～4,7～10,15显示出强于VitC的活性,化合物12,14,16活性较弱。结论金钗石斛中的联苄类和酚酸类化合物大多具有不同程度的抗氧化活性,活性的强弱与分子结构之间存在一定的相关性。     

石斛多糖抗肿瘤作用的实验研究

 目的 观察石斛多糖（Dendrobium candidum polysaccharides, DP）对在体肿瘤和离体培养肿瘤细胞的抑制作用,探讨其抑制作用的可能机制。方法 以接种肉瘤( S180)的小鼠为模型,观察DP对接种肉瘤瘤体生长的抑制作用,分析荷瘤小鼠内脏指数的变化。ELISA法检测小鼠外周血中细胞因子白介素-2（IL-2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。以人肝肿瘤细胞(SMMC27721)为模型,采用cell counting kit-8(CCK-8)检测DP的体外抗肿瘤活性。结果 DP处理能够有效抑制小鼠肉瘤(S180)瘤体生长和离体肝肿瘤细胞生长（P＜0.05）;有效提高荷瘤小鼠胸腺指数和脾脏指数,提高外周血中IL-2和TNF-α含量（P＜0.05）。结论 DP具有显著的抗肿瘤效应,其抑瘤机制可能与DP促进免疫器官功能和提高细胞免疫能力有关。     

齿瓣石斛化学成分研究

 目的 研究齿瓣石斛的化学成分。方法 应用硅胶、凝胶和制备液相层析等方法分离得到单体化合物,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果 从齿瓣石斛体积分数95%乙醇提取物中分离得到25个化合物,分别鉴定为3-羟基-4′,5-二甲氧基联苄(1),3,4′,5-三羟基-3′-甲氧基联苄(2),3,4′,5-三羟基联苄(3),N-反式-香豆酰酪胺(4), N-反式-对羟基苯乙基咖啡酰胺(5), 对羟基苯丙酰酪胺(6),N-顺式-香豆酰酪胺(7), 2,5-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(8),2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲(9),柚皮素(10),二氢松柏醇乙酸酯(11),对羟基桂皮酸乙酯(12),对羟基桂皮酸(13),对羟基苯丙酸(14),对羟基苯甲酸(15),原儿茶酸(16),erigeside Ⅱ(17),枸橼苦素(18),二氢丁香苷(19),leonuriside A(20),腺苷(21),β-谷甾醇(22),胡萝卜苷(23),(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(24),蔗糖(25)。结论 化合物1~21,24~25均为首次从齿瓣石斛中分离得到,其中,化合物1为首次从石斛属植物中分得,化合物5、7、11、12、18为首次从兰科植物中分得。     

铁皮石斛种子接菌共生萌发抑制差减杂交文库的构建及序列分析

 目的 研究铁皮石斛（Dendrobium officinale）种子接菌共生萌发差异基因表达谱特征。方法 采用抑制差减杂交（SSH）技术,分别以接菌及未接菌培养5周的铁皮石斛种子cDNA作为检测子与驱赶子,构建铁皮石斛种子接菌共生萌发抑制性消减cDNA文库。结果 对部分克隆产物测序,经GenBank中BLASTx同源比较后,进行基因功能注释,得到100个具有植物同源性的表达序列标签（EST）,主要涉及细胞与染色体结构、RNA合成、信号转导、能量与代谢、蛋白质合成与降解及细胞防御等。随机挑选5个目标基因,实时荧光定量PCR分析发现这5个基因在共生萌发的种子中均上调表达。结论 铁皮石斛种子接菌共生萌发涉及多种途径相关基因表达调控,本实验为兰科植物种子萌发分子机制研究奠定基础。     

金钗石斛和铁皮石斛软腐病原菌的分离和鉴定

 目的 确定引起金钗石斛和铁皮石斛软腐病的病原菌,为制定高效、安全的防治措施提供依据。方法 采用普查和定点观察相结合对软腐病发病情况进行田间观察,采集两种石斛典型病株样本,按照柯赫氏法则对其病原菌进行分离、纯化、菌株鉴定及致病性测定。结果 在树皮为基质的苗床上软腐病在不同苗龄上均可发生,病原菌主要侵染幼嫩多汁的嫩芽和新枝,引起幼嫩茎叶的腐烂、萎焉和坏死等症状。通过对病原菌形态学观察,以及核糖体rDNA ITS序列分析,侵染石斛植株的2个分离菌株被鉴定为终极腐霉Pythium ultimum。致病性实验证明,这两个菌株为石斛软腐病的致病菌株。结论 金钗石斛和铁皮石斛是终极腐霉菌的自然寄主。     

重组降血压肽乳酸-羟基乙酸共聚物缓释微球的制备与体外释放研究

 目的 制备重组降血压肽（rAHP,氨基酸序列为VLPVPR）缓释微球。方法 以不同单体比和相对分子质量的乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为缓释材料,利用正交设计优化微球制备的最佳工艺条件,并考察微球的体外释药特性。结果 乳酸-羟基乙酸共聚物相对分子质量越小,微球粒径越小（P<0.05）,孔隙率越高;乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸比例越大,微球粒径越大（P<0.05）;微球制备的最优工艺为：油相中乳酸-羟基乙酸共聚物质量浓度ρ_PLGA为12 g·100 mL^-1、初乳搅拌速度V_stir为1 000 r·min^-1、内水相与油相体积比R_w/o为1∶7.5,外水相聚乙烯醇124（PVA）质量浓度ρ_PVA为4 g·100 mL^-1,按此工艺制得的重组降血压肽乳酸-羟基乙酸共聚物微球包封率在90%以上,载药量11%以上,微球粒径70~90 μm;载药微球在PBS缓冲液中2 h内的累积释药量在40%以内,乳酸-羟基乙酸共聚物相对分子质量越小,释药速度越快（P<0.05）,羟基乙酸含量越高释药速度也越快（P<0.05）,释药曲线符合Higuchi方程,表明微球通过扩散机制进行缓释。结论 该微球制备工艺成熟,包封率高,具有缓释能力。     

菟丝子拟雌激素活性的谱效相关性研究

 目的 探求不同产地菟丝子指纹图谱的雌激素样作用,为建立“指纹图谱与药效关系”的中药质量标准控制提供依据。方法 HPLC建立菟丝子不同产地的指纹图谱,子宫增重法和MTT实验筛选出菟丝子雌激素样作用的有效成分,采用双变量相关分析谱效关系。结果 建立了菟丝子药材的指纹图谱,确立26个色谱峰为共有峰。与空白组和阳性对照组比较,20号产地对小鼠子宫增重和MCF-7细胞增殖作用显著。其雌激素作用为多种化学成分共同作用的结果。结论 菟丝子不同产地的指纹图谱与其雌激素作用有一定的对应关系。