药用植物三尖杉内生真菌的分离鉴定及抗菌活性

目的：研究药用植物三尖杉Cephalotaxus fortunei内生真菌的分离鉴定及抗菌活性。方法：用组织培养方法从野生三尖杉的根、茎、叶中分离内生真菌,采用滤纸片扩散法对分离得到的内生真菌的代谢产物做抑菌活性研究。结果：分别从三尖杉根、茎、叶中共分离得到30株内生真菌;抑菌活性研究显示,有20株内生真菌的代谢产物至少对1种靶标菌有抑制活性,占总分离菌株的66.7%,其中菌株CFEF013对所有靶标菌均有抑制作用;经形态学和分子生物学鉴定,对7株具有较强抑菌活性的菌株分属镰孢菌属Fusarium 4株,壳囊孢属Cytospora 1株,拟盘多毛孢属Pestalotiopsis 1株,毛霉菌属Mucor 1株。结论：药用植物三尖杉内生真菌种类具有一定的多样性,内生真菌代谢产物抑菌活性良好。     

滇牡丹内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的 研究滇牡丹内生真菌的种群组成及其代谢产物的抑菌活性,获得抗菌活性较好的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法 采用内生菌常规分离法对健康滇牡丹植株的根、茎、叶进行内生真菌的分离鉴定。以11 种指示菌,采用纸片扩散法对分离获得的内生真菌进行抑菌活性实验。结果 从滇牡丹植物中分离到81株内生真菌,经形态鉴定,分属于19个属。抑菌实验表明,有46株内生真菌对至少1种指示菌有抑制作用,占分离总菌株的56.8%。 结论 滇牡丹内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质,可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

温莪术内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

 目的研究温莪术内生真菌的种群组成及其代谢产物抗菌活性。方法采用内生菌常规分离法对健康温莪术植株体内的内生真菌进行了分离鉴定。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌为测试菌种,对温莪术根、茎、叶中分离的56株内生真菌进行抗菌活性筛选。结果经初步鉴定,这些内生真菌为5目、6科、24属;抑菌实验表明,56株内生真菌中有39株对5种测试菌均有不同程度的抑制作用。结论温莪术植物含有丰富多样的内生真菌,且多数内生真菌都表现为较高的抑菌活性。     

荒漠植物牛心朴子内生真菌的分离与鉴定

目的:研究荒漠植物牛心朴子内生真菌类群在不同器官中分布的多样性及其与生态环境的关系,并初步筛选牛心朴子具有潜在生物活性的内生真菌.方法:采用PDA培养基,分别对陕西、宁夏野生牛心朴子内生真菌进行分离、纯化;根据菌落的形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定;采用稻瘟酶模型,初步筛选活性菌株..结果:从牛心朴子中共分离得到内生真菌94株,鉴定为6目9科13属9种,其中宁夏产地47株,根5株,茎14株,叶28株,鉴定为4目5科9属8种;陕西产地47株,其中根16株,茎18株,叶13株,鉴定为4目6科8属5种;18株真菌代谢产物能完全抑制稻瘟霉孢子萌发,其中N4和S17菌株的发酵液病原菌菌丝生长的抑制作用均比较强.结论:荒漠植物生心朴子内生真菌具有多样性,不同地理环境和组织类型对内生真菌的数量和种群组成存在显著差异;宁夏牛心朴子菌株分布于叶中较多,陕西牛心朴子菌株分布于茎、叶中较多;牛心朴子内生真菌具有显著的抗稻瘟菌活性.     

排风藤内生真菌的分离及抗菌活性的研究

目的对排风藤植物内生真菌进行分离并研究其内生真菌抗菌活性。方法先采用尖端菌丝挑取法分离纯化排风藤内生真菌,然后依据《微生物分类学》对分离的真菌进行鉴定,最后用牛津杯法对分离的内生真菌进行抗菌实验。结果从排风藤的果、叶、茎中分离得到18株内生真菌:即丝核菌属11种,青霉属2种,曲霉属2种,地霉属1种,枝孢属1种和根霉属1种。结论 18株内生真菌中有两个菌株的代谢产物的抗菌活性较强,为获得具有药效活性的化合物提供研究基础。     

博落回内生真菌的分离及产血根碱菌株的筛选

采用组织块法从皖西大别山野生博落回Macleaya cordata中分离内生真菌,根据形态学特征对其进行类型归类,采用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)鉴定其内生真菌次级代谢产物,运用形态学方法对活性菌株进行初步菌种鉴定。实验结果显示,分别从博落回根、茎、叶中分离出28,57,96株内生真菌。根据形态学特征,初步把其归类为26个类型。其中菌株BLH 51的发酵液中含有血根碱,经形态学初步鉴定为层出镰刀菌Fusarium proliferatum。表明药用植物博落回组织中含有较丰富的内生真菌,可以成为寻找生物活性代谢产物的一个新来源。     

无花果内生真菌分离鉴定及其活性研究

目的:分离和鉴定无花果Ficus carica植物内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌、小麦赤霉病菌、草莓枯萎病菌、青霉菌为测试菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从健康的无花果植物的根、茎、叶中分离共获得61株内生真菌。属于5纲,7目,12科,20属。抗菌活性试验表明有40株内生真菌具有抗菌活性,占总内生真菌的65.57%。结论:无花果植物内生真菌多样性丰富,具有很好的研究和应用价值。     

宁夏枸杞内生真菌的分离及抗氧化活性的测定

目的 分离和鉴定宁夏枸杞茎、叶和果实中的内生真菌,并检测其抗氧化活性.方法 以宁夏枸杞为试验材料,采用组织分离法从其茎、叶、果实中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定;随机选择4株内生真菌,采用Fenton反应清除测定羟自由基(·OH)活性.结果 从宁夏枸杞表面消毒的茎、叶和果组织块中,共分离出内生真菌104株,茎中分离出42株,占40.3%,叶中分离出36株,占34.6%,果实中分离出26株,占25%.对产孢的67株进行初步鉴定,分类为2纲3目5科7属,其中青霉属(Penicillium)12株,占17.9%;黑葱花霉属(Periconia)5株,占7.5%;链格孢属(Alternaria)26株,占38.8%;镰孢霉属(Fusarium)5株,占7.5%;曲霉属(Aspergillus)13株,占19.4%;枝梗茎点霉属(Dendrophoma)3株,占4.5%;根霉属(Rhizopus)3株,占4.5%;其中链格孢属(Alternaria)为优势菌群.4株枸杞内生真菌发酵产物都对·OH自由基有清除作用.结论 内生真菌普遍存在于宁夏枸杞组织内,是一大类具有抗氧化活性的生物资源.     

泰山黄精内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 研究泰山黄精内生真菌的分布及其多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌.方法 采用平板分离法分离黄精内生真菌,采用滤纸片扩散法测试黄精内生真菌培养物抗耐药菌活性,同时采用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行鉴定.结果 从泰山野生黄精的根、茎、叶和果实中共分离出32株内生真菌,分属于7个属,分布最广的类群是镰刀菌属Fusarium sp.,占总菌株的31.3％,其次是不产孢真菌Sterile mycelia (28.1％)和链格孢属Alternaria sp.(21.9％).各组织中内生真菌的分布存在一定的组织差异性,根中内生真菌的分离率最高,茎和叶中次之,果实中最少.共有来自5个属的14株内生真菌至少对1种供试菌株有抗菌活性,其中8株具有广谱抗耐药菌活性.对活性最强、抑菌谱最广的不产孢菌株HJG-10进行分子生物学鉴定,将其确定为裂褶菌Schizophyllum commune.结论 泰山黄精中蕴含着大量具有抑菌活性的内生真菌,为寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径.     

杜仲内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

目的从药用植物杜仲的根茎叶中分离内生真菌,并进行初步鉴定和抗菌活性筛选。方法经显微形态观察进行内生真菌的分离鉴定,采用菌饼法和纸片法进行抗菌活性筛选。结果从杜仲植物中分离获得62株内生真菌,有47个菌株至少对1种指示菌具有抗菌活性,40株的代谢产物至少对1种指示菌具有抗菌活性,青霉属(Penicinium)的抗菌活性高且抗菌谱广。结论杜仲植物内生真菌中广泛分布着有抗菌活性的菌株。     

基于代表性成分辨识的中药组分整体生物药剂学性质表征探讨

处方前研究是对原料药理化性质和制剂性质的深入分析,是开发出有效、稳定的药物制剂前提和保证,已广泛应用于化学药物制剂领域。然而中药制剂研究仍存在经验性和盲目性,作为最基本的中药制剂原料,中药组分的整体性质研究仍然处于探索阶段。中药组分是一个多成分复杂体系,将成分构成完全阐明清楚难度大,笔者尝试提出以代表性成分表征组分整体性质的研究思路。遵循组分中各成分量与量的关系,构建不同成分组合,以生物活性为导向,通过体内外药效实验,辨识与组分整体药效无统计学差异的N个成分,作为代表性成分;测定平衡溶解度、油水分配系数、渗透性等性质,并通过相似性、离散度分析研究亚组分划分;以质量分散或药效贡献等为权重系数,将各代表性成分的个体性质进行拟合,表征组分/亚组分的整体性质。     

基于β-AS基因多态性的金铁锁核心种质构建

金铁锁是"云南白药"的重要组分,为我国西南地区的特有二级濒危保护植物。其野生资源已不能满足医药生产的需求,亟需通过对其种质资源进行研究,构建金铁锁核心种质。为金铁锁种质改良、分子育种等奠定基础。该研究采用了关键酶基因(β-AS)作为核基因标记对金铁锁进行了谱系地理学研究。研究结果显示,在所有居群中,总共检测到36个单倍型,单倍型多样性(Hd=0.905)较高,居群间存在一定的遗传分化(GST=0.280)。AMOVA结果显示,金铁锁居群内遗传多样性较低(22.57%),居群间的遗传变异占77.43%。单倍型分布结合网状进化分析结果显示,Hap1为普通单倍型,且位于网状图的中心位置,可判断为祖先单倍型。Hap2,Hap4,Hap15,Hap16共享单倍型,剩余的为居群特有单倍型。在此基础上,为了最大限度的保存金铁锁的遗传多样性,依据药用植物核心种质构建的标准提出了金铁锁核心种质的构建策略。     

高温促进黄花蒿中青蒿素生物合成的机制研究

黄花蒿Artemisia annua又名青蒿,是中国传统中药,其有效成分青蒿素是一种含过氧桥基团结构的倍半萜内酯类化合物,是一种能有效抗疟的药物。很多理化因子例如盐分、水分、光照、植物激素等均能诱导黄花蒿中次生代谢产物青蒿素的合成,温度作为一种重要的生长因素对青蒿素的合成也有极大地影响。该文旨在研究高温诱导对黄花蒿中青蒿素生物合成的影响。将黄花蒿幼苗放置在25,40℃条件下,分别在0,3,12,36 h后取样,利用液相色谱-质谱联用法测定各个样品中的青蒿素含量;提取样品的总RNA,进行转录组测序并且利用实时荧光定量PCR技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途经关键酶基因的表达。结果显示40℃处理3,12,36 h后,青蒿素质量分数分别提高20%,42%,68%;FDS,ALDH1,CYP71AV1和ADS的表达量分别上调4. 3,3. 3,2. 5,1. 9倍,SQS和BPS的表达量下调了37%和90%。综上,高温可以通过促进青蒿素合成途径合成酶基因表达量,并且抑制青蒿素竞争途径合成酶基因的表达量从而促进青蒿素的生物合成。     

海拔对贵州雷公山地区南方红豆杉种群遗传多样性的影响

目的:应用SSR标记研究海拔对贵州雷公山地区南方红豆杉遗传多样性的影响。方法:经梯度PCR扩增从红豆杉、白云杉、日本柳杉SSR引物中筛选获得了条带清晰的21对SSR引物用于群体研究。结果:21对引物共扩增出42条条带,其中多态性条带35条,多态性条带百分率为83.3%;物种水平上Nei's基因多样性为0.2587,Shannon指数为0.4719,多态位点百分率为85.71%,基因流为1.1453。聚类分析显示在阈值为0.71时,不同海拔南方红豆杉种群之间出现遗传分化。结论:海拔高度与南方红豆杉种群的遗传分化呈负相关。     

脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用

 目的 观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法 运用四甲基偶氮唑蓝、倒置显微镜、流式细胞仪、Western blot、荧光分光光度法等分别检测脱氢枞胺对氟苯甲醛对肝癌细胞增殖的抑制作用、观察凋亡细胞细胞核的形态变化、检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cyt-c的表达和caspase-3活性的影响。建立H22小鼠体内移植实体瘤模型,观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对瘤体质量的影响。结果 四甲基偶氮唑蓝法显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能显著抑制肝癌细胞株（SMMC-7721、HepG2和BEL-7402细胞）的增殖,IC₅₀值分别为SMMC-7721 (44.47±2.15)μmol·L^-1、HepG2（52.83±2.25）μmol·L^-1和BEL-7402 (48.64±1.76) μmol·L^-1。倒置显微镜下发生细胞皱缩变圆等变化,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2表达减少,Bax、p53 和Cyt c表达增加,caspase-3活力增加,且均具有浓度依赖性。小鼠 H22 肝癌模型中,脱氢枞胺对氟苯甲醛对肿瘤的生长也有一定的抑制作用。结论 体内外实验显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能明显抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能是通过凋亡线粒体信号通路而实现的。     

夏枯草中胰脂肪酶抑制剂的筛选、鉴定与活性评价

该实验首先采用羧基磁珠固定化胰脂肪酶筛选出夏枯草中可能的胰脂肪酶抑制剂,然后通过LC-MS/MS鉴定,标准品比对确认,最后采用对硝基苯酚法测定抑酶活性及抑制类型。结果:从夏枯草中共筛选出4个胰脂肪酶抑制剂,并经过了LC-MS/MS鉴定和混合对照品确认,其IC50和抑制类型分别为咖啡酸[(252.3±3.6) mg·L^-1,反竞争性抑制]、芦丁[(91.2±1.6) mg·L^-1,竞争性抑制]、橙皮苷[(31.5±4.4) mg·L^-1,竞争性抑制]、熊果酸[(41.3±2.2) mg·L^-1,竞争性抑制]。4抑制剂抑制类型与抑酶活性与其分子空间大小、疏水性和氢键数目,特别是与PL三联体形成氢键数目相关。     

基于系统虚拟药理学复方丹参滴丸抗血小板聚集药效物质基础研究

目的:基于系统虚拟药理学研究复方丹参滴丸抗血小板聚集药效物质基础,对该复方作用效应在分子网络层面上进行探析。方法:选择了16个血小板聚集相关靶点,构建该组方化学成分分子数据库,探讨数据库分子与血小板聚集靶点间相互作用关系。结果:该组方与16个血小板聚集靶点均有一定的潜在协同效应;并应用药理学实验对部分数据进行了验证。结论:本实验从分子层次上阐释了复方丹参滴丸抗血小板聚集系统药效物质基础,为该组方的临床应用提供了科学依据;同时,也为寻找血小板聚集药物提供一定的参考和借鉴。     

尼泊尔酸模根的化学成分研究

目的:研究尼泊尔酸模根的化学成分。方法:采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20、反相柱层析、半制备高效液相色谱法等各种色谱方法对尼泊尔酸模的干燥根进行分离纯化,并利用现代波谱分析方法对化合物进行结构鉴定。结果:从尼泊尔酸模根中分离鉴定得到12个化合物,其中9个蒽醌类化合物和3个酚性化合物,分别鉴定为:大黄素(1)、大黄素甲醚(2)、大黄酚(3)、大黄酸(4)、martianine(5)、rumejaposide E(6)、rumejaposide F(7)、atientoside A(8)、atientoside B(9)、torachrysone-8-O-β-D-glucopyranoside(10)、patientoside A(11)、白藜芦醇(12)。结论:其中,化合物5～12为首次从该植物中分离得到。     

大皂角不同形态特征及总皂苷、刺囊酸的比较分析

目的:比较皂荚同一遗传群体内4种不同分化类型大皂角形态特征及总皂苷、刺囊酸的差异。方法:采用游标卡尺、直尺和天平测量比较4种不同类型大皂角及种子的形态指标,利用称重法及HPLC测定分析其总皂苷和刺囊酸含量。结果:4种不同类型大皂角形态差异显著、颜色差异较小;种子形态差异小,颜色差异大;种子千粒重大刀形与镰刀形、直板形和弯曲形差异极显著,直板形与弯曲形无显著差异;出籽率直板形与镰刀形、大刀形和弯曲形差异极显著,大刀形与弯曲形无显著差异。镰刀形、大刀形、直板形、弯曲形总皂苷含量分别为20.43%、15.27%、17.21%、19.13%,镰刀形与弯曲形差异显著,后三者之间差异极显著;刺囊酸含量分别为0.25%、0.08%、0.18%、0.10%,镰刀形与后三者差异极显著,直板形与大刀形和弯曲形差异显著,大刀形与弯曲形无显著差异。主成分分析法对大皂角的综合评价表明,镰刀形第1,直板形第2,大刀形第3,弯曲形第4。结论:研究结果可为建立皂荚资源评价指标体系和新品种选育提供理论技术依据。     

基于热分析技术的甘草制甘遂的炮制机制研究

运用热分析技术,以模拟空气(N2-O2 4∶1)为载气,选取10℃·min-1的升温速率,体积流量为60 mL·min-1,分别对甘遂生品、甘遂醇提物、石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及其甘草汁拌制品进行热解特性分析。结果发现,由于萃取溶剂极性的不同,各极性部位所含化学成分的种类及数量发生变化,且随着甘草汁固体粉末加入量的增加,最大热失重速率峰均提前,石油醚、氯仿、乙酸乙酯部位分别提前(157.40±1.06),3.50,(25.83±1.66)℃,但是热失重率除氯仿部位增加(2.62±5.19)℃外,石油醚、乙酸乙酯部位却分别减少(33.90±1.72),(19.28±1.11)℃。可见甘草汁的加入,使得甘遂的毒性部位石油醚部位及氯仿部位的热解速率增加,最大热失重速率峰的温度点降低,同时药效部位乙酸乙酯部位虽然在升温过程中亦有所下降,但是整体失重率及失重速率相对较小,达到保留药效成分的作用,证明了甘草制甘遂炮制后减毒的机制以及甘草制甘遂的科学性及合理性。同时,随着加入甘草汁比例的增大,石油醚、氯仿、乙酸乙酯部位的最大热失重速率峰均提前,峰温降低,易于热解。其中石油醚、氯仿部位10∶1混合物的热失重速率相对较大,峰温较低,而乙酸乙酯则正好相反。此结论对于甘遂与甘草的比例具有一定的指导意义。