湖北省庙河地区钉螺细胞色素C氧化酶1基因差异的研究

目的　比较湖北省庙河沿岸地区钉螺CO1基因序列的差异 ,探讨光壳螺与肋壳螺差异的原因。方法　在该地区选 7个点 (上游 4个点 ,下游 3个点 )采集钉螺 ,用CTAB法提取钉螺基因组DNA ,PCR方法扩增CO1基因 ,纯化后测序 ,运用ESEE软件排序并比较变异位点 ,观察各点钉螺的CO1基因单倍体型 ,运用PHYLIP软件计算遗传距离 ,绘制基因进化树。结果　获得CO1基因大小为 638bp ,上游和下游累积变异位点数分别为 2 9和 46,两者差异具有显著性 ;各采集点内钉螺按变异位点多少可分为两组 ;各采集点间存在有相同的基因单倍体型 ;上游和下游螺群之间的遗传距离为 0 0 2 2 1± 0 0 10 5 ;在FITCH绘制的基因进化树上 ,上游和下游地区钉螺交错分布在同一亚种不同的两个分支中。结论　在不同的生态环境下 ,下游地区钉螺CO1基因的变异强度比上游大 ;庙河各采集点螺群间存在一定的基因流动 ;庙河地区螺群属湖北钉螺湖北亚种 (O h hupensis) ,可能存在着两种不同进化速率的螺群。     

不同地域株湖北钉螺CO1基因的差异研究

目的　研究中国大陆及台湾地区不同地域株湖北钉螺CO1基因的差异,为湖北钉螺种下分类提供依据。方法　收集13个地域株的湖北钉螺,高盐法抽提细胞内全部DNA ,PCR法扩增线粒体CO1基因,纯化并测序。将测序结果输入MEGA2程序,Kimura双参数法计算遗传距离,并分别用UPGMA法和最小进化法构建系统发生树。结果PCR扩增获得CO1基因大小约70 0bp(含两侧引物)。遗传距离显示:13个地域株明显被分为两组,其中四川株和云南株为一组,组内遗传距离为0 .0 35 ,其余为另一组,组内平均遗传距离为0 .0 14。而两组间的遗传距离为0 .12 9。两种方法构建的进化树拓扑结构基本一致。进化树分两大支,四川株和云南株位于一支,其它地域株位于另一支。结论13个自然隔离株湖北钉螺CO1基因总体差异不大,显示为一个种,其中四川、云南株与其它地域株差异显著,支持以往滇川亚种的结论,长江中下游各地域株CO1基因非常相近,支持指名(或湖北)亚种的分类方法。福建株、台湾株的分类地位有待进一步探讨。光壳和肋壳钉螺CO1基因无差异。     

长江下游3省湖北钉螺不同地理种群的群体遗传结构研究

目的 目的 对长江下游江西、 安徽和江苏3省湖北钉螺的不同地理种群进行群体遗传结构分析, 以探讨rDNA?ITS分 子标记在钉螺扩散路径监测中的应用价值。 方法 方法 采集3省9个种群的钉螺样本, 提取基因组DNA, PCR特异性扩增rD? NA?ITS基因并克隆测序, 统计分析群体间的遗传分化系数 （Fst ）、 遗传距离和种群遗传多样性等参数, 利用单倍型构建家系 网络图。结果 结果 9个种群共获得有效序列93条, 检测到78个单倍型, 平均单倍型多样性、 核苷酸多样性分别为0.988和 0.012 88, 表明钉螺种群的遗传多样性水平较高; 其遗传变异主要来自群体内, 种群间遗传距离为0.001 6～0.002 3, 显示钉 螺种群间遗传分化程度较高; 家系网络图显示所有单倍型虽可形成3个主要的家系分支, 但各地理种群在家系网络图中无 明显分化。结论 结论 长江下游江西、 安徽和江苏3省沿长江分布的湖北钉螺群体遗传多样性主要存在个体间, 群体间未形成 明显的遗传分化。rDNA?ITS分子标记在钉螺扩散路径监测中的应用价值值得进一步探讨。     

湖北钉螺广西地理株基因变异及种群变迁

目的分析湖北钉螺广西地理株与云南、四川、湖南及湖北等地的钉螺的基因遗传变异特点及系统发生关系,初步探讨广西地理株种群变迁情况。方法采集广西靖西、云南洱源和湖南岳阳三地钉螺,分别提取钉螺基因组DNA,PCR扩增线粒体DNA(mtDNA)的细胞色素C氧化酶1(CO1)的基因并测序。同时从GenBank中搜索湖北汉阳、云南大理及四川绵阳钉螺相应序列,并应用邻接法(N-J)、非加权组平均法(UPGMA)方法构建系统发生树。综合分析钉螺表型、孳生地及基因的遗传变异特征并探讨其原因,分析系统发生关系。结果广西靖西与湖南岳阳、湖北汉阳的钉螺同源性较近,遗传距离较小,而与云南洱源、云南大理及四川绵阳的钉螺的同源性较远,遗传距离较大。基因变异以转换碱基数较多见,转换与颠换率为1.3,主要发生在第3碱基位点。结论广西、云南和四川虽然同属山地钉螺,湖南、湖北的钉螺为湖沼钉螺,但广西、湖南、湖北地理株亲缘性更近,而云南和四川地理株则高度同源。钉螺亲缘关系的远近及种群变迁,不能仅从外形及孳生地距离远近及地理纬度等来衡量和探讨。     

中国大陆不同地区光壳钉螺遗传多样性的RAPD分析

目的 用随机扩增多态性技术(RAPD)对中国大陆5省不同地区的光壳钉螺进行分析，研究光壳钉螺群问的遗传多样性。方法 提取钉螺头足部的基因组DNA，用随机引物进行扩增，扩增产物经8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳，0．6％硝酸银染色，判别结果进行分析。结果 9个螺群的平均遗传相似性为0．7214，平均百分匹配数为0．6809，聚类结果表明可分为3个分类群，云南大理和四川普格的钉螺为第一分类群，福建福清和江苏东台的钉螺为第二分类群，安徽的4个螺群和江苏官兴的钉螺为第三分类群。结论 在我国各地的光壳钉螺螺群间存在一定的亲缘关系的同时，已发生了较大的遗传变异，聚类结果中螺群的聚类地位和其地理分布基本上一致，但江苏东台光壳螺群的聚类地位有待进一步分析和研究。     

湖北钉螺数量性状研究Ⅲ种群间形态性状变异及其空间相关分析

目的 探讨湖北钉螺种群间形态性状变异及其空间相关性。方法 采集10个省的27个现场螺点的钉螺种群标本,分别测量螺壳的形态学指标及钉螺采集点之间的地理距离,分析钉 螺种群间形态性状变异及其与地理距离的相关性。结果20个指名亚种（包括1个广西钉螺种群）钉螺种群间欧氏距离的中位数为3. 24（95% CI:2. 88～3.81）;不包括广西钉螺种群时,中位数为 3.15 (95% CI: 2.86～3.76)。6个滇川亚种钉螺种群间欧氏距离的中位数为1.69 (95% CI：1.33～ 2. 27)。无论指名亚种是否包括广西钉螺种群,滇川亚种钉螺种群间的欧氏距离均明显低于指 名亚种种群(P<;0.05)。16个肋壳钉螺种群间欧氏距离的中位数为2. 86(95% CI：2.56～3, 23);11 个光壳钉螺种群间欧氏距离的中位数为2. 24（95% CI：2.00～2.43）,明显低于肋壳钉螺种群间的 欧氏距离(P<0.05)。指名亚种包括广西钉螺种群时γ为0. 265 5 (P<0. 01),不包括时γ为0．256 7(P<0.01),肋壳钉螺种群的γ为0．312 1(P<0．01)。结论 湖北钉螺指名亚种种群间的形态性状变异大于滇川亚种,肋壳钉螺种群间的形态性状变异大于光壳钉螺。我国大陆分布的肋壳钉螺种群间的表型变异具有明显的空问结构。     

广西、湖南、云南三地钉螺Cytb基因序列变异和系统进化研究

目的分析广西钉螺与云南、湖南钉螺Cytb基因的遗传多态性和系统进化关系。方法收集广西靖西、云南洱源和湖南岳阳三地钉螺,提取其基因组DNA,PCR法扩增线粒体Cytb基因并测序。用Clustal W（1.82）软件对所测得的Cytb基因序列进行排序,用MEGA3.1计算其碱基组成、转换及颠换;用Kimura双参数法计算遗传距离,用非加权组平均法（UPGMA）和最大简约法（MP）构建系统发生树,同时结合三地钉螺分布和孳生地等资料进行分析。结果PCR扩增获得Cytb基因大小为580 bp。三地钉螺Cytb基因序列富含碱基A和T,A＋T平均含量为61.2%,表现出较强的碱基组成偏倚。三地钉螺Cytb基因578 bp的同源序列中检测到165个变异位点,约占核苷酸总数的28.5%。其中广西钉螺与湖南钉螺Cytb基因序列的变异位点为17个,约占2.94%;广西钉螺与云南钉螺Cytb基因序列的变异位点为160个,约占27.7%。广西钉螺与湖南、云南钉螺Cytb基因的遗传距离分别为0.031、0.405。采用两种方法构建的系统进化树均显示广西钉螺与湖南钉螺同属一个支系,云南钉螺单独形成另一支系。结论广西钉螺与云南钉螺存在较大基因差异,进化速率较大,保守性较小,遗传距离较大,亲缘关系较远;广西钉螺与湖南钉螺基因差异较小,相对保守,进化速率不太大,遗传距离较小,亲缘关系较近。     

SSR-PCR技术研究9种拟钉螺的遗传变异

目的对9种拟钉螺进行遗传变异研究,为拟钉螺从基因水平分类提供依据。方法采用微卫星锚定PCR（SSR-PCR）技术对海峡两岸4省7地的拟钉螺基因组DNA进行PCR扩增,根据扩增产物按Nei的方法计算遗传距离,并应用SPSS构建系统进化树。结果各地拟钉螺标本的PCR产物呈多态性,其中台湾邱氏拟钉螺与中国大陆拟钉螺地域株遗传距离为0.7391～0.9130;向氏拟钉螺和秉氏拟钉螺间扩增产物相似性最大,遗传距离为0.2174;神农架拟钉螺与向氏拟钉螺、秉氏拟钉螺的遗传距离为0.3333～0.3913;十堰拟钉螺和洪山拟钉螺之间的遗传距离为0.5556;福建拟钉螺与湖北拟钉螺地域株的遗传距离为0.3913～0.7000;武鸣拟钉螺与湖北拟钉螺地域株的遗传距离为0.6667～0.8889。结论9种拟钉螺在基因水平上至少可以分为4类：1）向氏拟钉螺、秉氏拟钉螺和神农架拟钉螺为一类;2）洪山拟钉螺和十堰拟钉螺为一类;3）武鸣拟钉螺为一类;4）福建拟钉螺为一类。台湾邱氏拟钉螺应为钉螺。     

广西、湖南、云南三地钉螺Cytb基因序列变异和系统进化研究

目的 分析广西钉螺与云南、湖南钉螺Cytb基因的遗传多态性和系统进化关系.方法 收集广西靖西、云南洱源和湖南岳阳三地钉螺,提取其基因组DNA, PCR法扩增线粒体Cytb基因并测序.用Clustal W(1.82)软件对所测得的Cytb基因序列进行排序,用MEGA3.1计算其碱基组成、转换及颠换;用Kimura双参数法计算遗传距离,用非加权组平均法(UPGMA)和最大简约法(MP)构建系统发生树,同时结合三地钉螺分布和孳生地等资料进行分析.结果 PCR扩增获得Cytb基因大小为580bp.三地钉螺Cytb基因序列富含碱基A和T,A T平均含量为61.2%,表现出较强的碱基组成偏倚.三地钉螺Cytb基因578bp的同源序列中检测到165个变异位点,约占核苷酸总数的28.5%.其中广西钉螺与湖南钉螺Cytb基因序列的变异位点为17个,约占2.94%;广西钉螺与云南钉螺Cytb基因序列的变异位点为160个,约占27.7%.广西钉螺与湖南、云南钉螺Cytb基因的遗传距离分别为0.031、0.405.采用两种方法构建的系统进化树均显示广西钉螺与湖南钉螺同属一个支系,云南钉螺单独形成另一支系.结论 广西钉螺与云南钉螺存在较大基因差异,进化速率较大,保守性较小,遗传距离较大,亲缘关系较远;广西钉螺与湖南钉螺基因差异较小,相对保守,进化速率不太大,遗传距离较小,亲缘关系较近.     

湖沼型林业血防工程区钉螺细胞色素氧化酶I基因差异分析

目的 分析安徽省湖沼型血吸虫病流行区林业血防工程区钉螺细胞色素氧化酶Ⅰ （COⅠ） 基因的差异性, 探讨林业血防工程中不同生态环境对钉螺生态的影响。方法 采集长江安徽段上游安庆、 中游铜陵、 下游无为等3地林业血防工程区和草滩对照点钉螺, 提取DNA, PCR扩增COⅠ基因并测序。采用blast对COⅠ基因比较相似性。采用微小钉螺、 双脐螺COⅠ基因序列作为外群参照序列, Kimura双参数法计算遗传距离, MEGA 3.1软件非加权组平均法 （UPGMA） 和邻近法（NJ） 构建系统发生树。结果 PCR扩增获得的COⅠ基因约为700 bp （含两端引物）。各地林业工程区之间, 各林业工程区与其草滩对照点之间的COⅠ基因相似性均较高, 均≥98%; 安庆、 铜陵、 无为等3地林业工程区之间遗传距离为0.003～ 0.012, 3地林业工程区与草滩对照点的遗传距离分别为0.003、 0.019、 0.007。2种方法构建的进化树拓扑结构基本一致。进化树分2大分支, 双脐螺独立成一大支, 其他的成一大支 （在这大支中微小钉螺又成一支）, 3地的林业工程区与对照草滩钉螺基因差异比较小。 结论 长江安徽段上、 中、 下游林业血防工程区钉螺COⅠ基因在不同的生态环境下可能已存在一定程度的遗传分化, 但分化程度较低。     

Oncomelania hupensis (Gastropoda: rissooidea) in eastern China: molecular phylogeny, population structure, and ecology

The rissooidean snail genus Oncomelania is of medical interest as various taxa are hosts for the human blood fluke Schistosoma and the lung fluke Paragonimus; because of close co-evolved host-parasite-relationships, snail diversity may reflect parasite diversity. There is a considerable amount of confusion regarding the identity of smooth- and ribbed-shelled populations of Oncomelania hupensis in eastern China. We therefore studied the genetic variation, population structure, phylogenetic relationships and ecology of five smooth- and five ribbed-shelled populations in Hubei, Hunan, Anhui, Zhejiang, and Jiangsu provinces. Based on sequencing data of a fragment of the mitochondrial gene for cytochrome oxidase I from 80 individuals, we found little genetic variability within the ingroup-individuals studied here (average pi=0.01922). Moreover, within the ingroup, smooth-shelled individuals cluster together with ribbed-shelled individuals. We therefore consider all smooth- and ribbed-shelled populations of Oncomelania throughout the lower Yangtze River basin to belong to the subspecies O. hupensis hupensis. Our data indicate that ribbing in O. h. hupensis is associated with the annual floods of the Yangtze River. The greatest haplotype (d(H)) and nucleotide diversities (pi) are found in aggregates of ribbed-shelled snails along areas of the Yangtze River drainage subject to flooding. In areas not affected by flooding, the shells are smooth and genetic diversity decreases significantly.     

广西两地理株钉螺COⅠ基因分析及其与邻近四省钉螺亲缘关系的比较

目的 了解广西两地理株钉螺细胞色素氧化酶Ⅰ(cytochrome oxidase Ⅰ,CO Ⅰ)基因的差异性,探讨广西钉螺与周边邻近4省钉螺的亲缘关系.方法 采集广西靖西有肋、横县光壳钉螺,提取DNA,PCR扩增CO Ⅰ基因并测序.登录GenBank检索出云南大理、四川绵竹、湖南岳阳、湖北汉阳4地钉螺的CO Ⅰ基因序列...     

三地钉螺线粒体DNA两个分子的遗传变异研究

目的 分析广西、云南、湖南三地钉螺线粒体DNA细胞色素C氧化酶Ⅰ(CO1)基因和细胞色素氧化酶b(Cytb)基因的遗传变异。 方法 收集广西靖西、云南洱源和湖南岳阳三地钉螺，提取其基因组DNA，PCR法扩增线粒体CO1和Cytb基因并测序。用Clustal W(1.82)软件对所测基因序列排序，用MEGA(3.1)计算其碱基组成、转换及颠换；用Kimura双参数法计算遗传距离，用非加权组平均法(UPGMA)和最大简约法(MP)构建系统发生树。 结果 PCR扩增获得CO1和Cytb基因大小分别约为700及600 bp(含两侧引物)。三地钉螺CO1基因中共检测到106个多态性位点，约占核苷酸总数的15.9%，Cytb基因中多态性位点为165个，约占核苷酸总数的28.5%。广西靖西与湖南岳阳、广西靖西与云南洱源的钉螺CO1基因和Cytb基因的遗传距离分别为0.051、0.158和0.031、0.405。根据CO1和Cytb的基因序列，用上述两种方法构建的系统发生树结果均一致。广西靖西与湖南岳阳的钉螺同属一个支系，云南洱源钉螺单独形成另一支系。 结论 广西、湖南和云南的钉螺CO1和Cytb基因总体上具有相对丰富的多态性。     

合溪水库主要水系钉螺分布与扩散监测

目的 目的 了解合溪水库主要水系钉螺分布与扩散情况, 评价合溪水库血防工程控制钉螺的效果。方法 方法 采用草 帘诱螺法在合溪水库主要水系不同区域水体诱捕钉螺, 在水库网捞法打捞漂浮物查找钉螺, 分析合溪水库主要水系水体 螺情变化情况。结果 结果 投放草帘1 800条, 在南溪源头诱获37只钉螺, 其余区域未诱获钉螺。水库库区打捞漂浮物 5 870 kg, 未发现钉螺。结论 结论 合溪水库血防项目有效阻止了钉螺扩散, 但上游仍有钉螺孳生, 需加强水库区域的钉螺监 测与控制。     

合溪水库血防工程对钉螺控制的效果评价

目的 目的 评价合溪水库血防工程对钉螺控制的效果。方法 方法 在水库库尾区、 消落带、 上游集雨区、 坝址及下游等， 分别实施水渠硬化工程+主要水系拓宽+溢流坝工程、 填高复垦+库岸硬化护坡工程、 环境改造灭螺工程和综合治理。监测 水库血防工程建设前后螺情消长情况， 分析该工程对合溪水库不同区域的钉螺控制效果。结果 结果 水库建成蓄水并采取血 防工程措施后， 库底区、 坝址区域、 库区消落带、 库尾区及坝址下游等地原有钉螺全部消除， 已连续3年监测未发现钉螺； 上 游集雨区钉螺密度由2009年的0.620 4只/0.1 m2 降至2013年的0.113 2只/0.1 m2 ， 但钉螺面积下降不明显。结论 结论 合溪水 库血防工程有效地防止了上游集雨区钉螺向库区扩散， 控制钉螺效果明显。