124例耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌相关基因的突变特征进行分析。方法对124例耐多药结核分枝杆菌以及50株敏感株的耐药相关基因(包括异烟肼inh A、kat G、oxyR-ahp C间隔区以及利福平rpo B)进行序列测定,分析其基因突变情况。结果异烟肼耐药inh A基因突变率为14.5%;kat G基因突变率为70.2%(87/124),主要位于315位;oxyR-ahp C间隔区突变率为15.3%;inh A、kat G两种基因同时突变率75.0%,三种基因同时突变率为89.5%。利福平rpo B基因突变的检出率高达95.2%,突变主要发生在531、526、516位点。结论我省耐多药菌异烟肼耐药相关基因最常见突变为kat G 315、inh A C-T(-15)、axyR-ahp C间隔区(-10)C-T,利福平为rpo B531、526、516。结合MDR-TB耐药相关基因的特征分析,可以建立一种快速、准确、特异的适合于我省的检测结核菌耐多药性的新方法。     

重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA与rrs基因突变特征分析

目的分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系。方法对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特征。结果89株MDR结核分枝杆菌中有50株对Ofx耐药,其中46株(92.00%,46/50)gyrA基因发生突变,突变位点包括74、89、90、91和94位密码子;22株耐Km菌株中,19株(86.36%,19/22)发生rrs基因突变,突变类型均为A1401G。Ofx、Km耐药株的gyrA、rrs基因突变率明显高于相应敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义(χ²=62.937,P<0.001;Fisher双侧P<0.001)。结论gyrA基因90、91、94位密码子突变是重庆市耐多药结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制;rrs基因A1401G突变则是Km耐药的主要原因。     

宁波地区耐多药结核分枝杆菌喹诺酮耐药gyr基因突变研究

目的 为阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis, MDR-TB)的gyr基因突变特征,深入研究MDR-TB对喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变特征的关系。方法 采用1%比例法对MDR-TB进行氧氟沙星药敏检测实验,通过 DNA直接测序法分析MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 120株MDR-TB临床分离株中有34株对喹诺酮耐药,总耐药率为28.33%(34/120)。34株耐喹诺酮菌株中,30株gyr基因发生突变,突变率为88.24%(30/34)。30株gyr基因发生突变的菌株中gyrA基因突变有29株,占96.67%(29/30),突变位点包括90、91和94位氨基酸;gyrB基因突变有2株,其中1株均合并gyrA基因突变,占6.67%(2/30),突变位点包括499和502位氨基酸。结论 宁波地区MDR-TB对喹诺酮类药物耐药形势较为严峻,gyrA基因突变与MDR-TB对喹诺酮类药物耐药相关。     

福建省46株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因突变特征分析

[目的] 阐明来源于福建省耐药性调查的46株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征,为福建省耐多药结核病快速诊断方法的建立提供一定的分子基础。[方法] 对福建省9个监测点进行耐药性调查,收集菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增包含rpoB热点突变区的基因片段,测序后比对分析。[结果] 15株全敏感株未检测到突变。42株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因检测到13种突变类型,涉及10个氨基酸,突变率为91.30%。突变均位于核心突变区内,包括9种点突变、 1个插入突变和3种联合突变,531位和526位密码子的点突变率之和达69.57%。[结论] 福建省耐多药结核分枝杆菌杆rpoB基因最常见的点突变位点为531位和526位。     

徐州市耐多药结核耐药分析及分枝杆菌基因突变特征研究

目的 研究徐州市耐多药结核(MDR-TB)耐药表型、耐INH或RFP相关基因突变情况,分析耐药表型与基因突变间关系,为耐多药结核疾病的诊断提供科学依据。方法 采取随机方法抽取徐州市115例MDR-TB菌株和66株全敏感菌株进行耐药情况分析,使用基因芯片检测技术对耐INH相关基因katG、 inhA和aphC以及耐RFP相关基因rpoB突变位点进行检测,对结果进行t检验分析。结果 徐州市MDR-TB菌株耐药表型有9种组合,主要是以耐INH+RFP组合为主,比例为47.83%,其次为耐INH+RFP+SM组合,比例为20.00%。与耐INH的相关基因突变率87.83%,基因突变类型分别为单基因katG(64.35%)和inhA(3.48%),双基因katG+inhA(12.17%)和katG+aphC(12.17%)。耐多药株(115例)和敏感株(66例)总体变异率均数比较(t=107.56,P<0.05), 其中katG基因突变率比较(P<0.05),二者差异均有统计学意义。与耐RFP相关rpoB基因总突变率86.09%,耐RFP相关rpoB基因突变类型分别为单531(45.22%)、516(8.70%) 和526位点,双(531+516)(13.91%)、(531+513)(12.17%)和516+533突变位点, 531+516+513(3.48%)三位点突变。耐多药株和敏感株总体和单个位点突变率均数比较(t=94.92,P<0.05), 531(P<0.05)、516(P<0.05)、533(P<0.05),二者差异均有统计学意义。结论 研究发现了徐州市MDR-TB耐药表型特征。徐州市MDR-TB菌株与耐INH和RFP相关基因突变客观存在,并表现出多态性和地区性。与耐INH相关katG基因、与耐RFP的相关rpoB基因531、516、533位点突变相对稳定,有临床应用价值,可作为徐州市耐药结核菌株快速诊断的指标。     

北京地区耐多药结核分枝杆菌抗性相关基因突变频率的评价

目的探讨北京地区耐多药结核分枝杆菌(MDRMTB)中与异烟肼(INH)和利福平(RFP)抗性相关基因突变的分布和频率。方法对173株MDR-MTB菌株中和INH耐药相关的基因katG、inhA和inhA启动子区,和RFP耐药相关基因rpoB进行测序分析;并对全部MDR-MTB菌株进行基因分型,对不同基因型菌株中抗性相关基因突变的比例进行分析。     

耐多药结核分枝杆菌对喹诺酮类药物的耐药性与gyr基因突变的初步研究

目的分析耐多药结核分枝杆菌（Multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB）临床分离株的gyr基因突变特点,探讨MDR-TB对喹诺酮类药物耐药产生与gyr基因突变的关系。方法采用比例法对耐多药结核临床分离菌株进行氧氟沙星的药物敏感性检测,应用DNA直接测序法检测MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 125株MDR-TB临床分离株中,50株对喹诺酮类耐药,耐药率为40%。50株耐药菌株中,40株gyr基因发生突变：其中39株gyrA基因突变,突变率为78%,突变位点包括90,91和94位氨基酸;5株gyrB基因突变,其中4株合并gyrA基因突变,gyrB基因突变位点为500,506,534和539位氨基酸。结论 MDR-TB中的喹诺酮类药物耐药态势比较严峻,其对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA基因突变有关。     

耐多药肺结核患者抗二线结核药的耐药分析

目的了解耐多药肺结核患者对二线抗结核药物的耐药情况。方法对我院住院的341例耐多药肺结核患者二线抗结核药物的耐药情况进行分析。结果 341例MDR-TB对左氧氟沙星、丙硫异烟胺、力克肺疾、对氨基水杨酸、丁胺卡那霉素、卷曲霉素的总耐药率依次为49.9%、26.4%、24.9%、23.4%、18.5%、15.8%。复治组对二线抗结核药物的耐多药率明显高于初治组,不合理治疗是形成MDR-TB或XDRTB的主要原因。结论耐多药肺结核患者对二线抗结核药物耐药情况严重,要引起重视。     

福建省耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与gyrA基因突变特征分析

目的 了解福建省耐多药(Multi-drug resistant, MDR)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQs)的gyrA基因突变特征,为FQs耐药菌株的快速分子药敏检测提供基础科学数据。方法 收集来自福建省2010-2011年和2008-2009年耐药监测点的所有MDR Mtb临床菌株,采用常规比例法进行FQs敏感性试验。PCR扩增包含gyrA耐药决定区的基因片段,测序后比对分析。结果 共收集到MDR结核分枝杆菌临床菌株119株,经常规药敏试验,氧氟沙星(Ofloxacin,Ofx)的耐药率为26.89%,左氧氟沙星(Levofloxacin,Lfx)耐药率为25.21%,莫西沙星(Moxifloxacin,Mfx)耐药率为11.76%。FQs敏感株gyrA基因未检测到突变。gyrA基因在Ofx耐药菌株的突变率为84.38%(27/32),Lfx耐药菌株的突变率为83.33%(25/30), Mfx耐药菌株的突变率为92.86%(13/14)。gyrA基因突变为点突变,共发现有5种突变类型,以Asp94Gly,Asp94Asn和Ala90Val为主。结论 福建省MDR-Mtb对FQs耐药的主要原因是gyrA基因突变,最常见的突变位于第94位,第90位和第91位密码子。     

MTBDRplus技术快速检测结核分枝杆菌耐多药的临床应用评价

目的 评价线性探针杂交技术(简称MTBDRplus技术)对福州地区耐药结核杆菌的检测效果,并了解该地区耐药结核分枝杆菌的耐药基因特征方法 选取246株临床结核分枝杆菌分离株,以传统罗氏药敏试验为金标准,评价MTBDRplus技术在临床上应用的检测效果,分析耐药基因突变分布频率结果 与传统罗氏药敏试验相比较,MTBDRplus检测利福平(RIF)和异烟肼(INH)耐药性灵敏度分别为91.7%(11/12)和83.3%(15/18),MTBDRplus检测RIF和INH耐药性特异度分别为99.6%(233/234)和95.2%(217/228)。12例rpoB基因存在突变的结核分枝杆菌中,58.3%rpoB基因S531L突变;26例katG和inhA基因存在突变的结核分枝杆菌中,57.7%(15/26)katG基因315突变;存在C15T位点突变的菌株仅9.1%(1/11)为INH耐药菌株结论 MTBDRplus技术是一个敏感、特异的快速诊断耐多药结核病的有效方法,该技术在福州地区具有较好的应用前景。福州市耐药结核分枝杆菌以rpoB S531L和katG S315T突变型为主。建议谨慎判断结核分枝杆菌inhA基因C15T位点突变引起的INH耐药。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征的初步探讨

目的 了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征.方法 对65株临床分离菌株rpoB基因509-631位点分别进行PCR-SSCP检测和DNA序列测定,观察不同耐药株rpoB基因突变的规律.结果 耐利福平分离株96.4%（27/28）存在rpoB基因突变,其中526位突变率64.3%（18/28）,513位突变率21.4%（6/28）,531位突变率7.1%（2/28）,529位突变率3.6%（1/28）;耐其他抗结核药18.5%（5/27）存在rpoB基因突变,突变位点具有随机性.所有敏感菌株均无突变.结论 rpoB基因突变与利福平耐药密切相关,浙江省rpoB基因突变主要以526位突变为主,其次为513位,两者占总数的86%（24/28）,而耐其他抗结核药菌株也存在rpoB基因的突变,但没有明显规律,且均对利福平敏感.     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征的初步探讨

目的了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征。方法对65株临床分离菌株rpoB基因509-631位点分别进行PCR-SSCP检测和DNA序列测定,观察不同耐药株rpoB基因突变的规律。结果耐利福平分离株96.4%(27/28)存在rpoB基因突变,其中526位突变率64.3%(18/28),513位突变率21.4%(6/28),531位突变率7.1%(2/28),529位突变率3.6%(1/28);耐其他抗结核药18.5%(5/27)存在rpoB基因突变,突变位点具有随机性。所有敏感菌株均无突变。结论rpoB基因突变与利福平耐药密切相关,浙江省rpoB基因突变主要以526位突变为主,其次为513位,两者占总数的86%(24/28),而耐其他抗结核药菌株也存在rpoB基因的突变,但没有明显规律,且均对利福平敏感。     

125株耐多药结核分枝杆菌的吡嗪酰胺耐药及pncA基因突变分析

目的 了解125株耐多药结核分枝杆菌对吡嗪酰胺(PZA)的耐药水平和pncA基因的突变特征,为PZA耐药的快速诊断提供依据。方法 通过简单随机抽样方法选取2010—2019年福建省9个耐药监测点的125株耐多药菌株,采用BACTEC MGIT 960液体培养进行PZA药物敏感性试验(简称“药敏试验”),通过PCR扩增pncA目的基因,分析耐多药菌株对PZA的耐药性及pncA基因突变情况。结果 50株耐多药菌株对PZA耐药,PZA耐药率为40.0%(50/125)。男性患者PZA耐药率为39.0%(37/95),女性患者PZA耐药率为43.3%(13/30),差异无统计学意义(χ²=0.183,P=0.669);15~25岁、26~45岁、46~60岁、61~80岁患者PZA耐药率分别为58.3%(7/12)、 32.7%(16/49)、39.5%(17/43)、 47.6%(10/21),PZA耐药率在年龄组之间的差异无统计学意义(χ²=3.294,P=0.348);初治患者PZA耐药率为41.5%(21/65),复治患者PZA耐药率为38.3%(23/60),差异无统计学意义(χ²=0.134,P=0.715)。30株PZA耐药菌株检出pncA基因突变,突变类型22种,突变检出率为60.0%(30/50);PZA耐药株的pncA基因突变检出率[60.0%(30/50)]高于PZA敏感株的pncA基因突变检出率[5.3%(4/75)],差异有统计学意义(χ²=45.276,P=0.000)。结论 福建省耐多药结核分枝杆菌的PZA耐药率较高,且 pncA基因突变检出率较高,临床上应关注PZA的耐药问题。     

结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关基因研究进展

吡嗪酰胺是治疗结核病的重要抗结核药物之一,特别是用于耐多药结核病的治疗。近年来结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药逐渐增多,其耐药机制尚未明确。本文针对结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药及其与基因变异之间的关系研究进展进行综述,以供研究者参考。     

31株结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因检测及序列分析

目的了解贵阳地区分离的结核分枝杆菌katG基因、inhA启动子和oxyR-aphc间隔区基因突变特征。方法对31株结核分枝杆菌临床分离株（异烟肼耐药株17株,异烟肼敏感株14株）的katG基因、inhA启动子和oxyRaphc间隔区进行DNA片段的PCR扩增,并进行测序分析。结果 17株异烟肼耐药菌株中有16株检出katG基因突变,其中70.5%（12/17）为315位密码子变异,且变异类型均为AGC→ACC,敏感株未发现315位点突变。11株敏感菌和4株耐药菌在463位密码子发生变异,变异类型均为CGG→TGG,变异率分别为78.6%（11/14）和23.5%（4/17）,差异无统计学意义。有12株耐药株的变异类型为katG基因双重位点突变,其中10株为katG315（AGC→ACC）和463（CGG→TGG）位变异,463（CGG→TGG）和299（GGC→AGC）变异及463（CGG→TGG）和419（GAC→CAC）位变异各1株。2株异烟肼耐药菌检出oxyR-aphC启动区G32A突变,其中1株为联合katG463和299位突变。结论贵阳株结核杆菌菌株异烟肼耐药基因突变具有多态性,主要的变异类型为katG315位点突变。     

rpoB基因点突变与结核分枝杆菌对利福平耐药相关性的研究

目的了解浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株对利福平（RFP）的耐药率及该菌rpoB基因点突变与RFP耐药性的关系。方法从浙江地区肺结核病人的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定结核分枝杆菌72株。采用K-B纸片法和E-试验法检测上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP的耐药性。采用PCR检测上述结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因携带率。通过对RFP敏感或耐药各10株结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因T-A克隆后测序，了解该基因氨基酸序列第516、526和531位点突变情况及其与RFP耐药性的关系。结果38．9％（28／72）结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药。所有结核分枝杆菌临床菌株均携带rpoB基因。1株RFP敏感的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变。5株RFP耐药的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变，另5株发生H531D点突变，但均未发现516位氨基酸突变或526和531位氨基酸联合突变。结论浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株有较高的RFP耐药频率。上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药性与rpoB基因氨基酸序列526或531位点突变密切相关。     

结核分枝杆菌临床分离株耐药性与耐药基因突变关系的研究

目的分析临床分离结核分枝杆菌耐药性与耐药基因突变的关系。方法用绝对浓度法和基因测序技术检测临床分离的22株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFLX)、对氨基水杨酸(PAS)耐药性和相应耐药基因kat G、rpo B、rpsl、rrs、gyr A、thy A的突变。结果 22株结核分枝杆菌中耐药菌株占45.5%。INH耐药率为18.2%,RFP耐药率为27.3%,SM耐药率9.1%,KM耐药率为18.2%,OFLX的耐药率为13.6%,PAS耐药率为4.5%。敏感菌株中均未检测到耐药基因突变。耐药菌株中除2株外均检测到相应耐药基因突变。结论结核分枝杆菌对抗结核药物耐药性与相关耐药基因突变密切相关。     

2005年和2015年结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药水平的变化

目的 探讨2005年和2015年结核分枝杆菌对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药水平和突变位点的变化情况以及不同突变类型与EMB耐药水平的关系。方法 选取63株2005年、76株2015年的临床分离的耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)为研究对象,采用微孔板阿尔玛蓝显色法(micro plate alamar blue assay, MABA)检测菌株对乙胺丁醇的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)。然后提取核酸并扩增embB基因全序列,对扩增产物进行测序并分析其突变位点。结果 2005年和2015年MDR对EMB的耐药率无统计学差异(χ²=0.105,P=0.745),embB突变类型变化也无明显差别(χ²=9.410,P=0.124)。2005年选取的菌株中,对EMB耐药的有57株,耐药率为90.48%。2015年选取的菌株中对EMB耐药的有71株,耐药率为93.42%。139株MDR中发现embB基因序列上有9个不同位点突变形式,embB突变型合计99株,占所有MDR的71.22%,野生型40株,占所有MDR的28.78%。突变型对EMB的耐药率为99%,野生型对EMB耐药率为75%。结论 embB基因和embB306基因对检测EMB耐药有一定的参考价值。     

宁波地区流动人口耐多药肺结核二线抗结核药物耐药状况及耐药基因突变特征分析

目的 了解宁波地区流动人口耐多药肺结核(multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)患者临床分离菌株二线抗结核药物耐药状况及耐药基因突变特征。方法 以2017—2019年浙江省宁波地区结核病耐药监测收集的133例MDR-TB患者作为研究对象(流动人口占42.11%,56/133;户籍人口占57.89%,77/133),采用1%比例法对患者临床分离菌株进行卡那霉素(kanamycin,KAN)、阿米卡星(amikacin,AMK)、卷曲霉素(capreomycin,CAP)、氧氟沙星(ofloxacin,OFX)、左氧氟沙星(levofloxacin, LVX)5种二线抗结核药物的耐药检测。同时采用PCR DNA直接测序法检测rrs、tlyA、eis、gidB、gyrA、gyrB 6个二线抗结核药物耐药相关基因的突变特征。结果 56株流动人口MDR-TB 患者临床分离菌株KAN 耐药率(7.14%,4/56),AMK耐药率(5.36%,3/56),CAP耐药率(1.79%,1/56),OFX耐药率(28.57%,16/56),LVX耐药率(33.93%,19/56)与77株户籍人口患者临床分离菌株KAN 耐药率(7.79%,6/77),AMK耐药率(6.49%,5/77),CAP耐药率(3.90%,3/77),OFX耐药率(31.37%,24/77),LVX耐药率(25.97%,20/77)比较差异无统计学意义(X²_KAN=0.020,P=0.888; X²_AMK =0.074,P=0.786; X²_CAP =0.036,P=0.850; X²_OFX =0.104,P=0.747; X²_XLV =0.990,P=0.320)。56株流动人口MDR-TB 患者临床分离菌株准广泛耐药率(Pre-XDR)(33.93%,19/56),广泛耐药率(XDR-TB)(3.57%,2/56)与77株户籍人口患者临床分离菌株准广泛耐药率(Pre-XDR)(24.68%,19/77),广泛耐药率(XDR-TB)(7.79%,6/77)比较差异无统计学意义(X²_Pre-XDR=1.360,P=0.243;X²_XDR-TB=0.411,P=0.521)。56株流动人口MDR-TB患者临床分离菌株rrs突变率(8.93%,5/56)、tlyA突变率(1.79%,1/56)、eis突变率(3.57%,2/56)、gidB突变率(5.36%,3/56)、gyrA突变率(39.29%,22/56)和gyrB突变率(3.57%,2/56)与77例户籍人口患者临床分离菌株rrs突变率(5.19%,4/77)、tlyA突变率(11.69%,9/77)、eis突变率(0.00%,0/77)、gidB突变率(2.60%,2/77)、gyrA突变率(31.17%,24/77)和gyrB突变率(2.60%,2/77)比较差异无统计学意义(X²_rrs=0.247、X²_tlyA=3.259、X²_eis=0.901、X²_gidB=0.133、X²_gyrA=0.944、X²_gyrB=0.000,均P>0.05)。6个基因的突变类型中,rrs 2种、tlyA 1种、eis 2种、gidB 2种,gyrA 5种、gyrB 4种,均以点突变为主。结论 尽管本地区流动人口MDR-TB患者临床分离菌株二线抗结核药物耐药形势较为严峻,但流动人口可能不是MDR-TB二线抗结核药物耐药防控的重点人群。