刚地弓形虫排泄-分泌抗原和可溶性速殖子抗原免疫原性的观察

目的 观察刚地弓形虫速殖子排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠的免疫原性.方法 BALB/c小鼠随机分为3组,每组10只,分别用PBS 20μl/只、ESA和STAg各20μg/只鼻内...     

弓形虫速殖子分泌排泄抗原研究进展

弓形虫分泌排泄抗原具有重要功能。本综述了近年来速殖子棒状体，致密颗粒及微线体的主要分泌排泄抗原在分子生物学方面的研究进展。     

弓形虫速殖子分泌排泄抗原研究进展

弓形虫分泌排泄抗原具有重要功能。本文综述了近年来速殖子棒状体、致密颗粒及微线体的主要分泌排泄抗原在分子生物学方面的研究进展。     

弓形虫速殖子细胞质、细胞膜、排泄—分泌抗原蛋白分子测定及特异性免疫反应的试验分析

目的 研究弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分，主要蛋白分子的抗原性和用于血清学诊断的价值。方法 用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分和主要蛋白分子，用免疫印渍技术以弓形虫患者血清识别弓形虫各类抗原的免疫反应靶位。结果 弓形虫速殖子细胞质抗原、细胞膜抗原和分泌代谢抗原的主要蛋白分子分别为85、52、38ku；48、35、16、14ku和158、95、27、15、13ku及弓形虫患者特异性血清识别速殖子各类抗原的免疫反应靶位分别是32、40和27ku。结论 弓形虫速殖子各类抗原间存在各自独特的抗原决定簇和可被特异性记忆抗体识别的免疫反应受体。此对于提高弓形虫感染的免疫学诊断及免疫学预防均具有一定的实用价值。     

刚地弓形虫蛋白质组学研究进展

近10年,蛋白质组学技术广泛应用于刚地弓形虫研究中,研究结果为全面深入揭示该虫体的生命活动本质奠定了基础。目前,关于刚地弓形虫的整体蛋白质组学研究仅限于速殖子和卵囊阶段的蛋白质组学;亚蛋白质组学研究包括一些重要抗原,如可溶性速殖子抗原、糖蛋白和免疫蛋白质组学研究等;差异蛋白质组学研究着眼于阐明不同虫株或不同虫种的差异蛋白。本文综述了弓形虫蛋白质组学的研究现状,详细阐述了弓形虫整体蛋白质组学、亚蛋白质组学和差异蛋白质组学的主要研究进展。此外,本文还概述了弓形虫蛋白质组学的生物信息学平台,并对弓形虫蛋白质组学的应用前景进行了展望。     

刚地弓形虫速殖子表面抗原研究进展

刚地弓形虫是猫科动物的肠道球虫，由法国学者Nicolle及Manceaux在刚地梳趾鼠单核细胞内发现，虫体呈弓形。该虫呈世界性分布，人和许多动物均可感染，引起人畜共患弓形虫病。弓形虫属机会致病原虫，孕妇和免疫功能低下者感染弓形虫可造成严重危害。与其它原虫一样，弓形虫的表膜具有十分重要的作用，虫体能通过表膜与外界进行物质交换，宿主免疫系统对弓形虫的识别也主要在表膜蛋白。     

刚地弓形虫速殖子表面抗原的研究及应用

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫, 能感染包括人在内的所有温血动物。近年来弓形虫速殖子表面抗原已成 为候选的诊断和疫苗抗原, 主要包括P30、 P22、 P43、 P35和P23等, 本文就此做一综述。     

可溶性弓形虫速殖子抗原联合蜂胶和IFN-γ鼻内免疫小鼠诱导的细胞免疫应答

目的比较蜂胶、IFN-γ佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助STAg增强机体细胞免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法将5~6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组:20μg STAg组,20μg STAg+40μg蜂胶组,20μg STAg+1 000 U IFN-γ组和20μg STAg+40μg蜂胶+1 000 U IFN-γ组。将抗原和佐剂溶于20μl PBS中,双侧鼻孔(10μl/鼻孔)滴鼻免疫。免疫2次,间隔14 d,末次免疫后第10 d用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击。逐日观察小鼠存活情况。攻击后第43 d处死全部存活小鼠,免疫细胞化学(ICC)法检测小鼠PP结、IEL和脾T淋巴细胞亚群水平。结果与STAg组相比,各佐剂组小鼠T淋巴细胞亚群比例有升高的趋势,其中IFN-γ、蜂胶+IFN-γ佐剂组小鼠PP结CD4+、CD8+T淋巴细胞,IEL、脾CD8+T淋巴细胞数显著高于STAg组,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置。结论在抗弓形虫感染中,IFN-γ的佐剂作用优于蜂胶,有效激发机体细胞免疫应答,可用作鼻内免疫抗弓形虫感染的粘膜佐剂。IFN-γ+蜂胶佐剂鼻内免疫效果优于单独蜂胶、IFN-γ佐剂,应用联合佐剂是抗弓形虫感染免疫的一个新思路。     

弓形虫速殖子和缓殖子相互转换机制的研究进展

弓形虫在中间宿主内以速殖子和缓殖子两种滋养体形式存在。其机会性致病与速殖子和缓殖子之间的互相转换密切相关,揭示此转换机制将有助于寻找更有效的途径以控制弓形虫的急性和慢性感染。本文刈近年来有关这种转换机制的研究进展加以综述。     

小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答

目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原（excreted/secreted antigens,ESA）鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5～6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20μl/只PBS滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP（Peyer’s patches）个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞（intraepithelial lymphocyte,IEL）及肠系膜淋巴结细胞（mesenteric lymph node lympho-cyte,MLNL）并计数。眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA。结果72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势。各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组（P〈0.05）,72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组（P〈0.01）。免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组（P〈0.05）,72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组（P〈0.01）。结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果最好。     

弓形虫排泄/分泌抗原的免疫保护性研究进展

弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)是虫体在黏附、侵入宿主细胞及在纳虫泡中寄生过程中分泌、排泄的抗原物质。近期的研究主要通过体外培养法获取ESA,并对其进行分子生物学及免疫学特性研究。ESA中的多种成分具有较强的免疫原性,可诱导细胞及体液免疫应答并产生抗弓形虫感染的保护作用。研究ESA的免疫保护作用对揭示弓形虫带虫免疫及免疫逃避机制有重要意义,对弓形虫病的诊断及免疫预防、疫苗候选抗原的制备具有重要价值。     

刚地弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答

目的 观察刚地弓形虫排泄-分泌抗原（ESA）鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应。方法 用Vero细胞培养刚地弓形虫,提取ESA抗原;将5—6周龄BALB／c小鼠随机分为6组,每组10只,实验组分别用培养5、7、9、11和14d提取的ESA20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔为2周;对照组用无攻虫的细胞培养上清液滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。在末次免疫后第3周处死小鼠,分别分离派伊尔结（PP）、脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞（IEL）、肠系膜淋巴结淋巴细胞（MLNL）,并加以计数。收集粪便和眶血样本,ELISA检测粪内sIgA水平及血清IgG特异抗体。结果 实验期间小鼠健康状况良好,对照组和实验组小鼠体重均不同程度增加;末次免疫后第3周,实验组粪便sIgA、血清IgG、PP细胞、脾淋巴细胞、MLNL、IEL的数量均高于对照组,14d组（P〈0．01）的抗体滴度和各淋巴细胞计数最高。结论 用刚地弓形虫速殖子与Vero细胞共培养5—14d提取的ESA鼻内免疫小鼠均可诱导黏膜及系统特异性的免疫应答,共培养第14天提取的ESA免疫效果优于其他时间组。     

弓形虫STAg不同途径免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答动态变化

目的动态观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻和皮下免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答。方法6周龄BALB/c小鼠90只随机分为3组,分别以20μg STAg滴鼻或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理。末次免疫后1、2、3、4和5周,每组随机处死6只小鼠。ELISA法测定小肠冲洗液sI-gA和血清IgG,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)和脾淋巴细胞。结果对照组小鼠小肠冲洗液sIgA水平和IEL数及血清IgG水平和脾淋巴细胞数均维持在较低水平。滴鼻免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(FsIgA=10.074,FIEL=14.747,P0.01),其中第5周sIgA水平、第2~5周IEL数量与皮下免疫组比较差异有统计学意义(FsIgA=7.862,FIEL=9.807,P0.05)。皮下免疫组小鼠血清IgG水平和脾淋巴细胞数均升高,与对照组比较差异有统计学意义(FIgG=8.207,F脾细胞=11.209,P0.05),第5周脾淋巴细胞数与滴鼻组比较差异有统计学意义(F=6.826,P0.05)。结论20μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答水平优于同剂量的皮下免疫,同时也诱导了较高水平的系统免疫应答。皮下免疫可诱导较高水平的系统免疫应答,但其诱导的黏膜免疫应答较弱。     

Induction of a protective antibody-dependent response against toxoplasmosis by in vitro excreted/secreted antigens from tachyzoites of Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii is a worldwide protozoan parasite which causes severe disease in congenitally infected children and in immunocompromised patients. Besides the well-defined cytoplasmic and membrane antigens of tachyzoites, we felt that excreted/secreted antigens could play a major role in the immune response. We first report the development of a well-controlled procedure for obtaining tachyzoite excreted/secreted antigens (E/SA) in cell-free incubation media. The E/SA immunogenic in human, rat and mouse toxoplasmosis were then characterized. The major E/SA recognized by human sera from the chronic phase of toxoplasmosis had molecular weights of 108, 97, 86, 69, 60, 57, 42, 39, 28.5, 27 and 26 kD. When injected into +/+ Fischer rats, E/SA elicited high antibody titres. In addition, passive transfer of these sera to highly susceptible nu/nu littermates induced a significant degree of protection towards the virulent RH strain of T. gondii. This work, which demonstrates the key role played by E/SA in the protective immune response, suggests that these antigens should be of value both for diagnostic purposes and for the development of new strategies for immunization against toxoplasmosis.     

弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen,STAg）联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后不同黏膜部位抗体水平及其持续时间,为黏膜疫苗研制提供实验依据。方法 84只5~6周龄BALB/c小鼠随机分为免疫组和对照组,每组42只。免疫组以STAg（20μg/只）为抗原加IFN-γ（1 000 U/只）为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS 20μl滴鼻。共滴鼻2次,间隔2周。首次免疫后第0、2、4、6、8、10、12周每组处死6只小鼠,ELISA法测定鼻咽、肺和小肠冲洗液sIgA、IgG水平。结果小鼠用弓形虫STAg联合IFN-γ首次免疫后鼻咽冲洗液sIgA和IgG水平均增高,其中第2、4、6、8周sIgA水平显著高于对照组（P〈0.05）,第2、4、6周IgG水平高于对照组（P〈0.05）;首次免疫后第6、8周小鼠肺冲洗液sIgA水平显著高于对照组（P〈0.05）,第4、6、8周IgG水平高于对照组（P〈0.05）;首次免疫后第2、4、6周小肠冲洗液sIgA水平高于对照组（P〈0.05）,第2、4、6、8周IgG水平高于对照组（P〈0.05）。免疫后不同黏膜部位抗体均以sIgA为主,且以肠道冲洗液最高。结论 STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可诱导鼻咽、肺和小肠黏膜部位产生高水平sIgA和IgG抗体应答,并可持续6~8周。表明滴鼻免疫是弓形虫疫苗的适宜接种途径。     

Murine Th1 clone defines a 60 kD tachyzoite antigen of Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii -specific murine CD4⁺ T cell clone 3Tx9 belongs to the Th1 subtype by virtue of secreting high levels of interleukin(IL)-2, interferon-γ and tumor necrosis factor without producing IL4 and IL10. To characterize the clonal antigen, Toxoplasma lysate was separated by SDS-PAGE and probed in T cell blot analysis with 3Tx9 T cells, revealing a fraction of about 60 kD molecular weight. This fraction proved highly stimulatory also for CD4⁺ splenocytes isolated from infected mice. The expression pattern of the relevant 60 kD antigen was determined by challenge of clone 3Tx9 with T. gondii strains from all three intraspecies subgroups and tachyzoites versus bradyzoites isolated from two strains as a source of antigen. While the T cell clone reacted with tachyzoites of all strains tested, bradyzoites lacked antigenic activity. Parallel T cell blot and ELISA confirmed co-migration of the T cell-stimulatory antigen p60 and rhoptry proteins ROP1, ROP2,3,4, and ROP5 among which ROP1 is a molecule of similar size and has only been shown on tachyzoites. However, a ROP1 knock-out Toxoplasma mutant still had antigen activity for 3Tx9 T cells. Since the two known tachyzoite-specific proteins, surface antigens SAG1/p30 and SAG2/p22, have a much lower molecular weight, we suggest that p60 represents a new T. gondii tachyzoite marker which is defined by clone 3Tx9.     

弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的Peyer’s patches持续性细胞免疫应答

目的以可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen，STAg）和霍乱毒素（choleratoxin，CT）佐剂制备的弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠，观察肠粘膜诱导部位Peyer’s patches（PP）的细胞免疫应答及持续时间，探讨其免疫机制。方法BALB／c小鼠96只，随机分为实验组和对照组，实验组以STAg（20μg／只）为抗原，CT（1／μg／只）为佐剂滴鼻免疫，对照组PBS滴鼻。滴鼻2次（间隔2周）后，每组6只小鼠分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死。计数PP个数，制备PP淋巴细胞悬液，计数并涂片；免疫细胞化学法检测CD4^＋、CD8^＋T细胞亚群。结果实验期间两组小鼠PP数目均无明显变化；实验组免疫后PP淋巴细胞数量明显增生，第2周达高峰，第1、2、3周显著高于对照组（P〈0.05），其中以CD4^＋T细胞增生为主，第1周～第8周高于对照组（P〈0.01），CD8^＋T细胞第1周～第4周显著增高（P〈0.01），CD4^＋／CD8^＋比值无显著变化（P〉0．05）。结论弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫BALB／c小鼠可有效诱导肠PP部位持续性的免疫应答，从而激活肠粘膜效应部位淋巴细胞的抗弓形虫感染作用。     

重组人IL-2联合STAg鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答

目的观察重组人白细胞介素-2（rhuIL-2）联合弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答,探讨rhuIL-2的佐剂效应及适宜剂量。方法5～6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为6组,每组10只。实验组以STAg20μg或分别加rhuIL-2250、500、1000、2000 IU滴鼻免疫,抗原与佐剂溶于20μlPBS中,对照组以PBS滴鼻,免疫2次,间隔2周。末次免疫后30d,颈椎脱臼处死全部小鼠,ELISA法检测血清IgG和粪便sIgA水平;分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞（iIEL）,并计数。结果与PBS组相比,各佐剂组血清IgG水平都有增高,其中STAg＋500 IU IL-2组IgG水平增高最显著（P〈0.01）;STAg＋500 IU IL-2组和STAg＋1000 IU IL-2组粪便sIgA抗体水平显著高于PBS组和STAg组（P〈0.05）。联合IL-2佐剂免疫小鼠脾淋巴细胞和产生了增殖性应答,其中STAg＋500 IU IL-2组和STAg＋1000 IU IL-2组脾淋巴细胞数显著高于PBS组和STAg组（P〈0.05）;TAg＋500 IU IL-2组iIEL高于PBS组（P〈0.05）。结论rhuIL-2作为佐剂联合STAg鼻内免疫小鼠可有效诱导粘膜免疫、系统的细胞免疫和体液免疫应答;500 IU IL-2为鼻内免疫小鼠的适宜剂量。