富营养预增菌液在肉制品沙门菌常规检测方法中替代效果研究

目的非选择性富营养肉汤（EB）预增菌检测肉制品沙门菌的方法建立。方法评估免疫磁珠分离（IMS）作为常规流程分离食品沙门菌的肉质控方法；比较样品经乳糖肉汤（LB）和EB两种预增液分步增菌后常规平板分离与IMS的分离效果；最终实样比较以EB为预增液的替代流程与IMS的检测敏感性。结果应用IMS检测100件用LB和134件EB分步增菌样品的阳性率没有差异（P〉0．05）；48件肉制品用EB预增的常规平板分离阳性率均高于LB，56件肉制品用EB预增液作常规平板分离的检测敏感性接近IMS（P〉0．05）。结论以EB为预增菌的肉制品沙门菌分步检测流程，节省了增菌时间。提高常规平板分离的检测敏感性。     

建立增菌PCR方法对痰涂片阴性肺结核早期诊断

目的 建立增菌PCR方法，以达到对涂片阴性痰标本中结核菌早期检定和确认活菌的目的。方法 采用7H12半流体培养和PCR扩增相结合的增菌PCR方法，对46份初治肺结核患者痰标本进行检测，并对杂交结果进行凝胶呈像灰度分析。结果 应用增菌PCR检测涂片阴性痰标本，其中86.21%的标本在增菌7d内得到阳性结果，于4周时得到最大阳性率，较培养法的阳性检出时间明显缩短（P＜0.01)，较普通痰标本PCR阳性率明显提高（P＜0．05）；有63．04％的标本增菌7d时的杂交结果凝胶灰度值与0d时相比＞1：并有62.07%的增菌PCR7d内得到阳性的标本得到同一样本7H12半流培养阳性结果的支持和活菌判定。结论 增菌PCR不是单纯的PCR，增菌7d后PCR阳性率明显增加，且有杂交结果凝胶灰比值的增加和随后的培养结果对其进行支持和活菌判断，会有助于临床诊断的准确性。     

农贸市场食品中ETEC污染情况调查

产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)是引起人类和动物腹泻的主要病原之一,从我国四省的腹泻病样品检测结果表明,ETEC在各种腹泻病原比例中占首位,现将本文调查结果报告如下。 一、材料与方法 (一)样品采集和菌株分离:肉类食品、水产食品和蔬菜瓜果类食品均采自本市火车站农贸市场。采集的标本立即接种营养肉汤增菌,按常规方法分离和鉴     

培养基对不同产酶铜绿假单胞生物膜菌敏感性的影响

目的研究不同培养基中产不同类型β-内酰胺酶的铜绿假单胞生物膜菌对抗菌药物的敏感性。方法①选取产超广谱β-内酰胺酶、头孢霉素酶和金属型β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌菌株，应用L-肉汤（LB）、胰酶大豆肉汤（MHB）、水解酪蛋白胨肉汤（TSB）三种培养基建立细菌生物膜模型；②选用环丙沙星、头孢他啶和亚胺培南，应用微量稀释法和MBECTM-Device测定最低抑菌浓度和最低生物膜菌清除浓度。结果①浮游状态下，铜绿假单胞菌在三种培养基中对同种药物的敏感性无统计学差异（P〉0．05）；②形成生物膜后，铜绿假单胞菌在三种培养基中对环丙沙星及亚胺培南的敏感性为LB〈MHB〈TSB，存在统计学差异（P均〈0．05）。结论不同环境可影响生物膜状态下铜绿假单胞菌对抗菌药物的敏感性。     

北京市顺义区零售生猪肉中小肠结肠炎耶尔森菌的检测与病原特征分析

目的 获得北京市顺义区零售市场生猪肉中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原特征。方法 采集样本,应用细菌增菌培养并同时对增菌液进行荧光PCR预筛查的方法检测小肠结肠炎耶尔森菌。对于鉴定阳性菌株应用传统PCR及多重荧光PCR方法分析5种毒力基因的分布特征。应用肉汤稀释法获得分离菌株的耐药特征并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株分子分型。结果 70份样本中19份增菌液foxA基因实时荧光PCR筛查阳性,阳性率为27.14%(19/70)。19份foxA筛查阳性标本培养获得小肠结肠炎耶尔森菌。19株菌对头孢唑啉、氨苄西林、头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦耐药率分别为97.74%、84.21%、47.39%和42.11%,其携带毒力基因特征均为ail-/ystA-/ystB+/yadA-/virF-。17株菌完成PFGE检测并被分为15种带型。结论 针对增菌液进行荧光PCR预筛查,可提高食品样本中小肠结肠炎耶尔森菌分离培养的检出率。菌株毒力基因的荧光PCR组合检测可快速获得分离菌株的毒力特征。本次研究中分离自本地区零售生猪肉中的小肠结肠炎耶尔森菌未发现显著遗传聚集性特征。     

炎症性肠病肠道黏膜细菌谱的研究

目的以16S-rDNA基因序列测定方法研究日本炎症性肠病（inflammatoryboweldisease,1BD）患者与正常对照肠镜标本中细菌构成谱。方法纳入2010年11月-2011年6月在日本名古屋大学附属病院接受肠镜检查患者14例,其中4例活动期溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）患者（8个标本）,3例缓解期UC（5个标本）,2例活动期克罗恩病（Crohn’Sdisease,CD）（4个标本）,和正常对照5例（10个标本）,共收集肠镜27个标本。应用16S-rDNA基因序列测定方法检测肠道黏膜细菌谱。比较不同组间、不同部位标本的细菌构成差异。结果共取得796个细菌16S-rDNA基因序列。这些序列分属于5个门（phylum）：厚壁菌（Firmicutes）、拟杆菌（Bacteroidetes）、变形杆菌（Proteobacteria）、梭杆菌（Fusobacteria）和未分类细菌（unclassifiedBacteriao活动期UC组和活动期CD组中厚壁菌门细菌构成比低于缓解期UC组和正常对照组。CD组中细菌种类减少,CD组中变形杆菌门细菌高于UC组和对照组。结论本研究证实了IBD组肠道黏膜细菌构成谱不同于正常对照组,且有细菌种类减少趋势。     

贵州省首次从腹泻病例中检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的 从贵州省1例腹泻病例的粪便标本中分离鉴定O157肠出血性大肠杆菌并对其进行毒力基因检测。方法 收集腹泻病例的粪便标本,mEC肉汤增菌后,采用O157胶体金进行初筛,阳性者增菌液经免疫磁珠富集后进行肠出血性大肠杆菌的分离,对分离株进行系统生化鉴定,O157、H7诊断血清凝集,应用特异性PCR进行rfbE和fliC基因鉴定,以及stx1、stx2、eaeA和hlyA 4种毒力基因检测。结果 腹泻病例粪便标本经mEC肉汤增菌后,检测O157胶体金阳性;增菌液经免疫磁珠富集后培养出可疑菌落,经系统生化鉴定为大肠杆菌,血清型为O157∶H7;PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因均阳性;毒力基因eaeA、stx2和hly均阳性,stx1阴性。结论 分离株确诊为肠出血性大肠杆菌O157∶H7,为贵州省腹泻病例中首株该病原体。     

住院患者脓液及伤口分泌物的病原菌分析

目的分析住院患者脓液及伤口分泌物标本病原菌的分布及主要病原菌的耐药情况,为临床提供可靠的控制感染依据。方法对该院在2010-01～2012-12住院患者送检的1 111份脓液及3 348份伤口分泌物标本进行细菌培养,分离出的病原菌进行鉴定及药敏分析。结果分离出病原菌1 442份,细菌的分布情况为：革兰氏阳性球菌占33.9%（489/1442）,革兰氏阴性杆菌占58.3%（840/1442）,真菌占6.2%（90/1442）,检出的前几名病原菌分别为金黄色葡萄球菌占22.3%（322/1442）,大肠埃希菌占18.0%（259/1442）,铜绿假单胞菌占12.8%（185/1442）,变形杆菌占6.0%（87/1442）,不动杆菌属占6.6%（95/1442）,凝固酶阴性葡萄球菌占4.9%（70/1442）。结论该院住院患者的伤口化脓性感染主要以阴性杆菌为主,但金黄色葡萄球菌仍是感染的首要病原菌,其次是大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌,同时还分离出诺卡、艾肯和放线杆菌等罕见细菌。提示引起伤口化脓感染的病原菌呈现多样化,治疗应及时确定病原菌,并根据药敏结果合理用药。     

浙江省产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌流行情况及耐药性

目的 调查浙江省产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs)的大肠埃希菌（E.coli）和肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae）的流行情况及耐药性。方法 收集各地区临床分离的E.coli和K.pneumoniae共362株,经抑制剂增强的肉汤稀释法筛选出产ESBLs细菌,并用浓度梯度法（E-test）检测其对9种抗菌药物的耐药性。结果 浙江省E.coli和K.pneumoniae中ESBLs检出率分别为37.9%和41.2%,总检出率为39.2%。产ESBLs细菌对头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）、头孢西丁（FOX）、头孢吡肟（FEP）、头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SUL）、哌拉西林/他唑巴坦（PZP/TAE）、阿米卡星（AMC）、环丙沙星（CIP）的耐药率比不产酶株都有不同程度地增加,所有菌株对亚胺培南（IMP）都敏感。结论 浙江各地区ESBLs在E.coli和K.pneumoniae中的检出率高。产ESBLs菌对所测试的8种抗菌药物的耐药程度比不产酶株为高,但所有菌株对亚胺培南均敏感。     

PMIC-92和NMIC-413对分离自住院患者标本的细菌药敏检测性能

目的 评估革兰阳性细菌药敏板PMIC-92和革兰阴性细菌药敏板NMIC-413对临床常见细菌的药敏检测性能。方法 选取从临床送检标本中分离的菌株40株（革兰阳性菌17株、革兰阴性菌23株）及实验室保存的标准株4株（大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853、金黄色葡萄球菌ATCC29213、粪肠球菌ATCC29212）,分别采用PMIC-92（革兰阳性菌）和NMIC-413（革兰阴性菌）药敏板进行药敏测定,测定结果与实验室现有的VITEK2 Compact AST-GP639（革兰阳性球菌）、AST-GN13（肠杆菌科细菌）、AST-GN335（非发酵菌）检测结果进行比较,部分Vitek 2 Compact无法检测的药物则与K-B纸片扩散法结果进行对照,临床菌株每株检测1次,标准菌株每日检测3次,连续5 d,各测15次。结果 PMIC-92药敏板共比对了14种抗菌药物,总分类一致性（CA）为99.08%,小误差（MIE）率为0.37%,重大差异（MD）率为0.55%,无极重大差异（VMD）;NMIC-413药敏板共比对了17种抗菌药物,总CA为97.65%,MIE率为...     

老年人大肠镜检查前肠道准备的优化

目的观察老年人在大肠镜检查前不同的肠道准备方法及肠道准备时添加肠内营养制剂,对肠道清洁度、肠道准备的安全性的影响,以期建立更适用于老年患者的肠道准备方法。方法将120例老年患者随机分为4组,每组各30例,分别在肠道准备时给予A组：聚乙二醇（PEG）电解质,B组：PEG＋肠内营养液,C组：硫酸镁,D组：硫酸镁＋肠内营养液,记录肠道清洁度、肠道准备后体质量、血压、血糖变化及心脑血管事件发生率,并作相互比较。结果4种方法进行肠道准备后,清洁肠道的总有效率均在80％以上,4组清洁肠道有效率相似（P〉0．05）;4组病例在肠道准备前后均发生体质量、心率、收缩压、舒张压及空腹血糖改变,服用营养液的B、D两组变化幅度小于不加营养液的A、C组（P〈0．05）;加用营养液的B、D组无低血糖、休克、头晕、心绞痛及呕吐发生,无病例需要静脉补充液体,明显好于不补充营养液的A、C组。结论老年患者肠镜前行肠道准备时加服肠内营养液降低不良事件的发生、不影响肠道清洁度,是适用于老年患者肠道准备的安全方法。     

益气活血解毒法对溃疡性结肠炎复发患者血浆及结肠组织P－选择素的影响

[目的]探讨益气活血解毒法对溃疡性结肠炎（UC）复发患者血浆及结肠组织P-选择素的影响。[方法]90例UC复发患者随机分为2组,各45例,治疗组给予益气活血解毒法的中药汤剂,对照组给予柳氮磺胺吡啶治疗,治疗前后分别检测血浆及结肠组织P-选择素。[结果]治疗前UC患者血浆及结肠组织P-选择素水平明显高于正常（P〈0．01）;治疗组治疗后及随访时血浆及结肠组织P-选择素水平明显低于对照组（P〈0．01）;复发者水平明显高于未复发者（P〈O．01）。[结论]以益气活血解毒法的中药抗UC复发方,与西药柳氮磺胺吡啶比较,可有效降低血浆及结肠组织P-选择素水平,从而阻抑血小板活化,可能是抗UC复发作用机制之一。     

Comparison of different sampling techniques and of different culture methods for detection of group B streptococcus carriage in pregnant women

Background  

Streptococcus agalactiae (group B streptococcus; GBS) is a significant cause of perinatal and neonatal infections worldwide. To detect GBS colonization in pregnant women, the CDC recommends isolation of the bacterium from vaginal and anorectal swab samples by growth in a selective enrichment medium, such as Lim broth (Todd-Hewitt broth supplemented with selective antibiotics), followed by subculture on sheep blood agar. However, this procedure may require 48 h to complete. We compared different sampling and culture techniques for the detection of GBS.     

流式细胞术诊断疟疾的初步应用

目的利用流式细胞术检测疟原虫感染患者的血液红细胞,建立疟疾诊断的辅助方法。方法采集镜检确诊的疟疾患者血样,同时设正常人血样为阴性对照,通过DRAQ5单染色,利用流式细胞仪进行检测。结果正常人全血、加有DRAQ5荧光染料的正常人全血、未加DRAQ5染料的疟疾患者血样的SSC/FL3-H散点图中未发现有染料标记的红细胞;而在疟原虫感染的患者血样中,有染料DRAQ5标记的细胞被检出。结论流式细胞术可以作为一种新的疟疾辅助诊断技术。     

液基集菌制片技术检测抗酸杆菌的临床应用研究

目的 探讨液基集菌制片技术在检测抗酸杆菌中的应用价值。方法152例临床标本包括100例痰标本、23例支气管灌洗液标本、7例脑脊液标本、22例胸腔穿刺液标本,均来自本院住院、门诊及急诊患者,标本根据医嘱留取,每例标本同时采用液基集菌制片技术和直接涂片法抗酸染色进行抗酸杆菌平行检测,并将其结果进行比较分析。结果液基集菌制片技术检测抗酸杆菌的总体阳性率为15.8%,与直接涂片法总体阳性率6.6%相比有明显提高(χ²=50.51,P<0.01)。直接涂片法检测为阳性的标本经液基集菌制片技术检测均为阳性,且所有液基集菌制片技术检测为阳性的标本均来源于结核病患者或者结核病疑似患者,与患者临床表现符合。液基集菌制片技术中抗酸杆菌分布均匀,检出菌量与直接涂片法相比显著增多(u=2.1467,P<0.05),且制片效果清晰。结论液基集菌制片技术检测抗酸杆菌较直接涂片法检测阳性率有显著提高,且杂质去除较干净,片中抗酸杆菌分布均匀,菌量增多,染色效果清晰,结果鲜明,操作安全简便,为抗酸杆菌的检测提供了一项新的方法。     

干血斑样本用于HIV-1基因型耐药性检测的研究

目的研究干血斑（Dried blood spots,DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）耐药性检测的可行性。方法采集受检者外周静脉抗凝血,制备干血斑样本,提取病毒RNA,逆转录套式聚合酶链反应（RT-nestedPCR）扩增HIV pol区基因序列,应用Bioedit软件分析整理后,提交theStanfordsoftware进行耐药序列分析及亚型分析。用Bayer 340bDNA核酸定量分析仪测定血浆病毒载量（VL）。结果血浆VL〉1000拷贝／ml的16例DBS和血浆（PLA）样本,扩增阳性率均为100％;血浆VL〈1000拷贝／ml的8例治疗病人的PLA样本,扩增阳性率为25％（2／8）;而DBS样本扩增阳性率为0（0／8）。DBS和PLA样本用于亚型分析结果-致,11例样本均为AE亚型。耐药性分析结果,除了极个别其它突变位点有差异外,所有的蛋白酶抑制剂主要及次要耐药相关突变,以及核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）耐药突变和非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）耐药突变完全相同。7例治疗病人中,对NRTI（6／7）和NNRTI（5／7）耐药率高,而且为多重耐药。结论干血斑作为-种易采集、保存条件低、便于运输的血样本,可以替代静脉采血,用于在-些实验设备条件略差的偏远地区,以及难采血病人的耐药性监测和亚型分析。     

检测内毒素与C反应蛋白在诊断肺结核合并革兰阴性菌感染中的意义

目的 研究肺结核合并革兰阴性菌（Gram negative bacilli,G^－）感染的患者检测血浆内毒素及C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）含量的临床意义。 方法 采用回顾性调查研究,根据240例肺结核患者全血细菌培养及痰细菌培养的G^－菌生长情况,将患者分为G^－菌生长组、革兰阳性菌（G^＋菌）（包括真菌）生长组及无细菌生长组。比较分析各组患者的血浆内毒素及CRP定量水平差异。 结果G^－菌生长组内毒素（317.34 pg/ml）、CRP水平(65.43 mg/L)高于G^＋菌（包括真菌）生长组（内毒素为34.78 pg/ml,CRP水平35.33 mg/L）,差异有统计学意义（Z=－1.793,Z=－1.106,P值均<0.05）;G^－菌生长组内毒素、CRP水平高于无细菌生长组（内毒素为20.06 pg/ml,CRP水平15.34 mg/L）,差异有显著统计学意义（Z=－2.397,Z=－1.950;P值均<0.01）。G^－菌生长组内毒素变化与CRP的升高具有相关性（r=0.458,P<0.05）。 结论 检测血浆内毒素及CRP含量有助于快速判断肺结核患者是否合并革兰阴性菌感染,有利于临床合理用药、及时对症治疗。     

观察改良的药物敏感性检测法对检出耐药结核分枝杆菌的影响

目的利用经改良的最低抑菌浓度法（IMIC）检测结核分枝杆菌临床分离株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素和氧氟沙星的药物敏感性,观察其对耐药结核分枝杆菌检出的影响。方法利用改良的最低抑菌浓度法检测135株临床分离株对INH、RFP、EMB、SM及OFLX的敏感性。结果在相同的药物浓度中,与接种1×10^5/ml菌量的试验管相比135株接种1×10^7/ml活菌数的试管中有68.89%的结果与之相同,有31.1%的结果与之不相同。判断结果由阴性转阳性的标本共有20株,（其中耐RFP的1株、耐INH的3株、耐OFLX的3株、耐EMB的5株以及耐SM的8株）约占135株受试菌株总数的14.8%。结论利用改良的最低抑菌浓度法可发现潜在的耐药结核病患者,提高耐药菌的检出率。     

Role of ionic strength in salt antagonism of aminoglycoside action on Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa.

Studies were designed to determine whether ionic strength (mu) is a significant factor in salt inhibition of aminoglycoside action against Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. In both nutrient broth (a low mu medium) and Mueller-Hinton broth (a relatively high mu medium), protection of E. coli from dihydrostreptomycin or gentamicin action by MgCl2, NaCl, or Na2SO4 was attributed to ionic strength alone. The percentage of protection increased with ionic strength and was independent of the particular salt used. Antagonism of aminoglycoside action against P. aeruginosa appeared to involve both a specific, divalent caption-dependent mechanism, revealed in Mueller-Hinton broth, and a nonspecific, ionic strength effect, elicited by sodium salts in nutrient broth. With media of relatively low salt content, variation in ionic strength itself over a range of mu of 0.02-0.14 significantly influences the effectiveness of aminoglycoside antibiotics against E. coli and P. aeruginosa.     

枣花蜜对无水乙醇诱导小鼠胃黏膜损伤的影响

目的探讨枣花蜜对无水乙醇诱导小鼠胃黏膜损伤可能存在的预防及治疗作用,并探究其可能存在的抗氧化机制。方法 50只昆明小鼠随机分为空白对照组(C)、蜂蜜预防组(P1)、预防对照组(P2)、蜂蜜治疗组(T1)和治疗对照组(T2)。P1组以0.1ml/d枣花蜜、P2组以等量生理盐水(NS)灌胃9 d,第10天予0.1 ml无水乙醇灌胃;T1组、T2组予0.1 ml无水乙醇灌胃后第2日起分别予0.1 ml/d枣花蜜和等量NS灌胃9 d;C组予等量NS灌胃10 d。各组于第11天眼球采血检测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量变化;处死后取全胃剖开测定溃疡指数,并行HE染色,光镜观察。结果与P1组相比,P2组在枣花蜜处理后胃溃疡指数明显降低(P0.05),溃疡抑制率为85.41%;与T1组比较,T2组溃疡指数有降低趋势,但差异无统计学意义(P0.05),溃疡抑制率为0.09%。P1组的血浆SOD活性比P2组显著升高,MDA含量显著下降(P0.05)。与C组比较,P1组、T1组的血浆SOD活性和MDA含量差异无统计学意义(P0.05)。结论枣花蜜对无水乙醇诱导的小鼠胃黏膜损害有预防作用,可能通过影响SOD活性、清除活性氧物质而发挥其抗氧化作用。