云南香格里拉的带绦虫rDNA-ITS1序列测定及分析

目的利用分子生物学技术鉴定产于云南香格里拉带绦虫的种类,以明确当地是否存在亚洲带绦虫。方法从云南香格里拉采集带绦虫标本株成虫节片,抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS1区段,克隆此片段后做序列测定;结合GenBank中已知的亚洲带绦虫、牛带绦虫、猪带绦虫rDNA-ITS1序列,经DNAMAN软件处理后计算遗传距离并构建系统发育树状图。结果香格里拉的带绦虫标本与GenBank中已知的亚洲带绦虫序列同源性为99%;与牛带绦虫同源性98%;与猪带绦虫同源性92%。系统发育树显示:香格里拉标本与亚洲带绦虫标本遗传距离最近,距牛带绦虫标本较远,与猪带绦虫则更远。结论云南香格里拉存在亚洲带绦虫。     

分子分类结合形态学方法对云南大理带绦虫的鉴定

目的 鉴定云南大理洱源(E1-E2)、鹤庆(H1-H2)、双廊(SL)、挖色(WS)带绦虫的种.方法 首先对大理分离株带绦虫成虫进行形态学鉴定,从成虫节片中抽提DNA,PCR扩增线粒体DNA细胞色素B(mtDNA-Cyth)的部分序列并测序;结合GenBank中已知猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫mtDNA-Cytb序列,经DNAMAN软件处理后构建系统发育树状图.结果大理带绦虫E1的形态和牛带绦虫相似,系统发育树显示大理分离株E1、E2、SL、WS带绦虫标本与亚洲带绦虫的遗传距离最接近,距牛带绦虫较远,与猪带绦虫则更远.大理分离株H1、H2带绦虫标本与猪带绦虫的遗传距离最近,距牛带绦虫和亚洲带绦虫则较远.结论 经形态学和分子生物学鉴定,云南大理分离株E1、E2、SL、WS带绦虫标本属于亚洲带绦虫,而H1、H2株带绦虫标本属于猪带绦虫.     

云南大理白族带绦虫mtDNA-Cytb序列测定及分析

目的利用分子遗传标记对采自云南大理白族地区人体带绦虫标本进行生物多态性的研究。方法从云南大理采集人体带绦虫标本株成虫节片,抽提虫体基因组DNA,PCR扩增线粒体DNA细胞色素B(mtDNA-Cytb)序列部分片段,测序;结合GenBank中已知猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫mtDNA-Cytb序列,经DNAMAN软件处理后计算遗传距离并构建系统发育树状图。结果大理白族带绦虫标本系统发育树显示大理(B1,B2,B5,B6)株带绦虫标本与亚洲带绦虫的遗传距离最接近,距牛带绦虫标本较远,与猪带绦虫则更远。大理(B3,B4)株带绦虫标本与猪带绦虫的遗传距离最接近,距牛带绦虫和亚洲带绦虫标本远。结论云南大理(B1,B2,B5,B6)株带绦虫标本属于亚洲带绦虫,而(B3,B4)株带绦虫标本属于猪带绦虫;mtDNA-Cytb序列分析可以用于带绦虫生物多态性研究。     

云南西部三地带绦虫生物多态性分子遗传学标记的研究

目的利用分子遗传学标记对采自云南西部楚雄、大理和怒江三地带绦虫进行生物多态性研究。方法取云南楚雄株、大理株、怒江株和贵州从江株成虫节片,抽提线粒体DNA,PCR扩增线粒体DNA细胞色素B（mtDNA-Cytb）序列部分区段,并测序;结合GenBank中已知猪带绦虫和亚洲带绦虫mtDNA-Cytb序列,构建系统发育树。结果序列分析显示云南大理和怒江带绦虫mtDNA-Cytb序列部分区段完全一致,同源性为100%;云南楚雄和贵州从江带绦虫mtDNA-Cytb序列部分区段基本一致,同源性为99%。系统发育树显示云南怒江和大理带绦虫与台湾亚洲带绦虫的遗传距离较近,距云南楚雄、贵州从江牛带绦虫较远,与猪带绦虫则更远。结论云南大理和怒江带绦虫属于亚洲带绦虫,云南楚雄带绦虫属于牛带绦虫。mtDNA-Cytb序列分析可以用于带绦虫生物多态性研究。     

云南4个少数民族带绦虫分子鉴定研究

目的 利用分子遗传标志对采自云南西部彝族(楚雄)、傈僳族(怒江)、普米族(怒江)、白族(大理)等4个少数民族带绦虫标本作生物多态性的研究. 方法取云南彝族分离株、傈僳分离株、普米分离株、白族分离株和贵州从江分离株带绦虫成虫节片,提取线粒体DNA,PCR扩增线粒体DNA细胞色素B(mtDNA-Cytb)序列部分片段测序;结合GenBank中已知猪带绦虫、牛带绦虫和牛带绦虫亚洲亚种 mtDNA-Cytb序列,使用PHYLIP软件包运用最大似然法和最大简约法构建系统发育树.结果系统发育树显示云南傈僳族、普米族和白族带绦虫标本与台湾牛带绦虫业洲业种的遗传距离最接近,距云南彝族、贵州从江牛带绦虫标本较远,与猪带绦虫则更远. 结论云南傈僳族(怒江)、普米族(怒江)和白族(大理)带绦虫标本属于牛带绦虫亚洲弧种,云南彝族(楚雄)带绦虫标本属于牛带绦虫;mtDNA-Cytb 序列分析可以用于带绦虫生物多态性研究.     

我国4省区5地牛带绦虫rDNA-ITS2序列分析

目的采用PCR克隆测序方法对贵州都匀、从江,云南大理及新疆乌什4地牛带绦虫标本进行研究,与台湾桃园牛带绦虫亚洲亚种地理株作比较,为贵州株、云南株和新疆株的鉴别提供分子生物学证据,并进一步探讨牛带绦虫亚洲亚种的分类学地位。方法取贵州都匀株(DY1)、贵州从江株(CJ1),云南大理株(DL1),新疆乌什株(XJ1)和台湾桃园株(TW1)成虫节片,分别抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS2区段,克隆rDNA-ITS2区段后作序列分析,构建不同地理株系统发育树。结果根据ITS2序列构建的系统发育树显示:系统发育树分为3支,XJ1占据上方1支;CJ1占据中间1支;而TW1、DY1和DL1组成下方1支。结论1.DY1、DL1与TW1属于牛带绦虫亚洲亚种,CJ1、XJ1属于传统牛带绦虫;2.rDNA-ITS2序列分析可用于牛带绦虫亚洲亚种与传统带绦虫分类学之研究。     

云南保山、普洱带绦虫mtDNA ND1基因序列测定及分析

目的对云南保山、普洱地区带绦虫标本进行鉴定。方法选取带绦虫成虫节片,抽提虫体基因组DNA ,PCR扩增mtDNA ND1基因序列,并测序;结合GenBank中已知的亚洲带绦虫、牛带绦虫、猪带绦虫mtDNA ND1基因序列,经DNA MAN软件处理后构建系统发育树状图与同源树状图。结果带绦虫系统发育树与同源 树状图显示P1、P2、B3、B6、B7、ND与N2的同源性最近。B1、B2、B4、B5、YZ与Y1的同源性最近。ZD与Z3 的同源性最近。结论云南保山存在亚洲带绦虫与牛带绦虫;普洱存在牛带绦虫。mtDNA ND1基因序列可用 于三种带绦虫的分类鉴定。     

云南6地域带绦虫mtCOXⅠ片段序列测定分析

目的利用mtCOXⅠ片段的PCR和序列测定鉴定云南6地域（怒江、大理、迪庆、西双版纳、临沧、楚雄）带绦虫的虫种,并构建系统发育树。方法从6地域采集带绦虫成虫,抽提DNA,PCR扩增mtCOXⅠ片段,并做序列测定;结合GenBank中已知的猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫mtCOXⅠ序列,经DNA MAN软件处理后计算遗传距离并构建系统发育树状图。结果遗传距离矩阵表显示：NJ4、NJ1和DQ2的遗传距离为99.8%,DL4和NJ3的遗传距离为99.5%,NJ2和DQ3的遗传距离为98.8%,DL3与BZ3的遗传距离为98.3%,而与BZ2的遗传距离为96.0%;系统发育树显示：NJ1～4、DL2～3及DQ1～3共10个标本株与BZ3聚为一支.BN1、CX1、LC1与BZ2聚为一支,两支交汇后再与由DL1和BZ1聚合的一支汇合。结论怒江和迪庆各株为亚洲带绦虫,西双版纳、临沧和楚雄株为牛带绦虫,大理株为亚洲带绦虫和猪带绦虫。同虫种不存在地理区域的差异。mtCOXⅠ片段的序列测定可用于带绦虫分类鉴定。     

云南、贵州两省38条人体带绦虫的分子鉴别

目的对采自云南、贵州两省的38条人体带绦虫进行分子鉴别,了解当地猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫的分布状况。方法对云南大理和贵州都匀及从江地区有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,虫体经形态学初步鉴别后,以组织DNA提取试剂盒提取虫体基因组DNA,分别采用亚洲带绦虫、牛带绦虫和猪带绦虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1基因(cox1)片段的特异性引物对各DNA样品进行常规PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测;PCR阴性样品采用带绦虫cox1片段PCR通用引物进行扩增,并选择1份亚洲带绦虫特异性PCR阳性的样品作为对照。从3种带绦虫PCR阳性的扩增产物中各选择1份进行核酸序列测定,并用NCBIBlast将各核酸序列与GenBank数据库中带绦虫的cox1进行比对分析。结果采自大理的4条带绦虫(DL1～4)的猪带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约980bp;其余25条大理带绦虫(DL5～29)和5条都匀带绦虫(DY1～5)的亚洲带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约260bp;各样品的牛带绦虫cox1片段PCR均为阴性。DL2PCR产物的核酸序列与GenBank中猪带绦虫cox1的同源性为99%～100%,DY1PCR产物的核酸序列与亚洲带绦虫cox1的同源性为100%。特异性PCR均阴性的4条从江带绦虫(CJ1～4)和亚洲带绦虫特异性PCR阳性的DL7以带绦虫cox1片段通用引物的PCR扩增出约1kb的产物。测序表明,CJ1片段的核酸序列与牛带绦虫cox1的同源性为99%,DL7与亚洲带绦虫cox1的同源性为99%～100%。结论cox1片段PCR扩增和核酸测序分析表明,采集的云南大理人体带绦虫为猪带绦虫和亚洲带绦虫,贵州都匀和从江人体带绦虫分别为亚洲带绦虫和牛带绦虫。     

用mtCO技术测定云南及贵州四地区的牛带绦虫

目的　用mtCO技术鉴定云南省大理及贵州省都匀、从江等地所发现的是牛带绦虫或牛带绦虫亚洲亚种。　方法　采集成虫样本,抽提DNA,PCR扩增线粒体细胞色素C氧化酶(mtCO)部分基因片段并测序,经PHYLIP软件包处理,计算遗传距离并构建系统发育树状图。　结果　云南省兰坪、大理和贵州省都匀的标本mtCO基因片段序列与已知牛带绦虫亚洲亚种的序列相同。贵州从江的标本mtCO基因片段序列与已知牛带绦虫的序列相同。两组基因片段的同源性达97.44%,氨基酸序列同源性达99.16%。系统发育树状图显示,牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫最为接近,远离猪带绦虫及其他绦虫。　结论　云南省兰坪、大理及贵州省都匀存在牛带绦虫亚洲亚种,贵州省从江发现的虫种为牛带绦虫。     

云南保山和普洱地区带绦虫线粒体DNA基因编码核糖体RNA小亚基基因序列分析

目的 利用线粒体DNA基因编码核糖体RNA小亚基(mtDNA-12S rRNA)基因序列分析对采自云南保山、普洱地区的带绦虫标本进行鉴定.方法 选取保山(7条,BS1-BS7)、普洱(2条,PE1～PE2)带绦虫成虫节片,抽提基因组DNA,PCR扩增mtDNA-12S rRNA基因序列,并测序;结合GenBank中已知的猪带绦虫(ZD)、牛带绦虫(ND)、亚洲带绦虫(YZ)mtDNA-12S rRNA基因序列,经DNA MAN软件处理后构建同源树状图与系统发育树状图.结果 带绦虫同源树与系统发育树状图显示,BS1、BS2、BS4、BS5与YZ的同源性最近(99%).BS3、BS6、BS7、PE1、PE2与ND的同源性最近(99%).结论 云南保山存在牛带绦虫与亚洲带绦虫,普洱存在牛带绦虫,mtDNA-12S rRNA基因序列可用于三种带绦虫的分类研究.

Abstract：

Objective To identify Taenia cestodes specimens collected from Baoshan and Puer regions of Yunnan Province by analyzing mitochondrial DNA gene encoding ribosomal RNA small subunit (mtDNA-12S rRNA) gene sequence. Methods The adult Taenia cestode samples were collected from Baoshan and Puer regions of Yunnan Province. The genomic DNA was extracted and mtDNA-12S rRAN gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR), then sequenced.Combined with the known mtDNA-12S rRNA gene sequence of Taenia solium, Taenia saginata,Taenia asiatica in GenBank, homology tree and phylogenetic tree were constructed by DNA MAN software. Results Taenia cestode homology tree and phylogenetic tree showed that gene sequences of BS1, BS2, BS4 and BS5 were most close to YZ with identity of 99% and those of BS3, BS6, BST,PE1 and PE2 were most close to ND with identity of 99%. Conclusions Taenia saginata and Taenia asiatica can be found in Baoshan area, while Taenia saginata can be found in Puer area. The gene sequence of mtDNA-12S rRNA can be used for clarifying the three types of Taenia cestode.     

广西4地带绦虫分离株COX1序列分析

目的 分析广西4地带绦虫分离株COX1序列, 了解亚洲绦虫在广西的分布。方法 对鹿寨、 融水、 田东、 三江等 4县现症病人进行驱虫, 收集绦虫成虫。绦虫成虫经反复洗涤后, 各取孕节一节, 研碎后提取基因组DNA; 同时设计特异性引物, PCR扩增各分离株COX1片段, 对扩增产物进行T?A克隆测序; 应用相关软件分析序列的同源性、 遗传距离, 同时构建系统发生树。同时, 从GenBank检索亚洲绦虫、 猪带绦虫和牛带绦虫COX1基因序列, 并与4地分离株基因序列进行比较。结果 广西4地5个带绦虫分离株的COX1碱基序列长度均为444 bp。鹿寨株与亚洲绦虫之间基因差异为5个位点（1.11%）, 同源性为98.87%, 遗传距离为0.011, 其在邻接法和简约法构建的系统发生树中位于同一分枝。融水A株与猪带绦虫同源性达100%, B株与牛带绦虫和亚洲绦虫的同源性分别达98.20%和96.17%; 田东和三江分离株与猪带绦虫的同源性分别为99.55%和96.40%, 遗传距离分别为0.005和0.037; 鹿寨株与牛带绦虫的同源性达96.40%。结论 广西鹿寨县存在亚洲绦虫流行, 融水县存在牛带绦虫和猪带绦虫混合流行。     

我国4省9株牛带绦虫RAPD分子鉴别分析

目的 分别对4省9株牛带绦虫标本进行分子鉴别。方法 分别取台湾桃园株（TW1），贵州都匀株（DY1、DY2）、贵州从江株（CJ1、CJ2、CJ3、CJ4）、云南大理株（DL1）和新疆乌什株（XJ1）成虫节片，提取DNA，以13条随机引物进行PCR扩增，用随机扩增多态性DNA（RAPD）分析，并构建不同地理株系统发育树。 结果 13条引物共扩增RAPD片段331个（以相同bp数为依据）。单条引物扩增的RAPD片段数在3～28个之间，13条引物平均扩增RAPD片段在6.11～24.56个，平均14.15个；9个不同地理株牛带绦虫平均RAPD片段在9.85～16.62，平均14.08个。系统发育树显示：9个不同地理株牛带绦虫分为两支，DY1、DY2、DL1和TW1聚为一支，属于牛带绦虫亚洲亚种；CJ1、CJ2、CJ3、CJ4和XJ1聚为另一支，属牛带绦虫指名亚种。 结论 我国4省9株牛带绦虫分别属于牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫指名亚种。RAPD分析可用于区分牛带绦虫亚洲亚种与牛带绦虫指名亚种的分类学参考。