体外培养血管平滑肌细胞的同步方法

目的:探讨体外血管平滑肌细胞(VSMC)同步化的培养及意义.方法:采用组织块贴片法原代培养大鼠胸主动脉VSMC,利用双胸苷阻断和秋水仙素阻抑法使VSMC达到细胞周期同步化.结果:经鉴定培养的细胞为VSMC,采用血清饥饿法、双胸苷阻断法和秋水仙素阻抑法分别获得了处于不同细胞周期的同步化的VSMC:G0/G1期(89.22±3.54)%,G1/S交界期(66.74±7.16)%,S期(63.24±4.06)%,G2/M期(51.64±11.18)%.结论:同步了体外培养的VSMC,为研究冠状动脉粥样硬化的发病机制奠定了实验基础.     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期进程影响的实验研究

目的观察人巨细胞病毒（HCMV）感染对宿主细胞DNA合成及细胞周期蛋白（Cyclins）表达的影响。方法用HCMV感染同步化于G0／G1期的人胚肺成纤维细胞（HEL），分别于感染后0、3．6、12、24、48、72、96h终止培养。用流式细胞术测定HCMV感染后细胞周期进程及DNA含量。用免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测CyclinE、Cyclin A、Cyclin D1蛋白的表达。结果HCMV感染细胞后24h-96h，S期细胞明显增多，G2／M期细胞减少，至感染后96h，未发现有G2／M期细胞。感染后24h细胞保持2N DNA含量，全部感染细胞DNA含量在48h内开始升高，感染后72h多数细胞的DNA含量大于2N DNA含量。在正常对照细胞DNA含量没有增加。HCMV＋PAA组没有检测到DNA含量增加。HCMV感染接触抑制细胞12h时CyclinE蛋白被诱导，感染后24h出现Cyclin E峰值；HCMV不能诱导Cyclin A蛋白表达；CyclinD1在感染后24h开始下降。结论HCMV感染同步化于G0／G1期的细胞后，诱导CyclinE蛋白明显升高，激活CyclinE／Cdk2激酶，使细胞周期越过G1／S限制点，将细胞周期阻止于晚G1期。病毒感染未能激活细胞DNA合成，病毒感染后总DNA的增加由病毒DNA复制造成。     

Aβ25-35对PC12细胞周期及P21、CDK4、E2F1、BAX基因表达的影响

目的 观察β-淀粉样肽25-35（Aβ25-35）对体外血清饥饿培养PC12细胞周期及 P21、CDK4、E2F1和BAX基因表达的影响。方法 用终浓度为25?mol/L Aβ25-35诱导PC12细胞,流式细胞仪分析细胞周期的改变与凋亡的关系;RT-PCR 和Western blot检测P21、CDK4、E2F1和BAX基因mRNA和蛋白表达。结果 PC12细胞血清饥饿培养24h约90%停滞于G0/G1期;25?mol/L Aβ25-35诱导PC12细胞8、16和24h与对照组比较,S期细胞百分率增加(P<0.01),16h后细胞凋亡率增加(P<0.01),可见亚二倍体凋亡峰(Ap峰);25?mol/L Aβ25-35诱导PC12细胞0~20h, P21 mRNA和P21 蛋白的表达下降;CDK4、E2F1、BAX mRNA和CDK4、BAX蛋白表达增高。结论 Aβ25-35可诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期并随之出现凋亡,其机制可能与下调P21 mRNA和P21蛋白的表达,增加CDK4、E2F1、BAX mRNA和CDK4、BAX蛋白的表达有关。     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期蛋白表达影响的实验研究

目的观察人巨细胞病毒（HCMV）感染对宿主细胞周期蛋白（Cyclins）表达的影响。方法用HCMV感染同步化于G0/G1期的人胚肺成纤维细胞（HEL）,分别于感染后0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h终止培养。用免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测CyclinE、CyclinA、CyclinD1蛋白的表达。结果HCMV感染接触抑制细胞12 h时CyclinE蛋白被诱导,感染后24 h出现CyclinE峰值;HCMV不能诱导CyclinA蛋白表达;CyclinD1没有被诱导,且在感染后24 h开始下降。结论HCMV感染同步化于G0/G1期的细胞后,诱导CyclinE蛋白明显升高,激活CyclinE/Cdk2激酶,使细胞周期越过G1/S限制点,将细胞周期阻止于晚G1期。     

17-β-雌二醇对HMGB1过表达THP1细胞的细胞周期进程的影响

目的:研究17-β-雌二醇联合HMGB1的过表达对人单核细胞系THP1细胞细胞周期和NF-κB转录因子的影响。方法:血清饥饿法同步化细胞周期后,利用脂质体法将pFLAG-CMV-HMGB1转染THP1细胞;10-9mol/L17-β-雌二醇刺激同步化THP1细胞16、30小时后,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR检测Cyclin A、Cyclin D1的mRNA表达水平,免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性。结果:HMGB1过表达的THP1细胞中HMGB1蛋白的表达水平比正常THP1细胞要高3.7倍,血清饥饿法成功将THP1细胞周期同步化,同步化后G0/G1期细胞百分数由53%上升到78%;17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞30小时后出现Cyclin AmRNA表达上升为原来的7.9倍,而Cyclin D1 mRNA表达明显下降,G1期细胞百分比由53.11%下降为33.33%,S期细胞百分比由35.43%上升为53.91%,此改变在刺激后30小时达到最大值;NF-κB活性在17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞明显升高,且时间上提前于细胞周期动力学改变。结论:雌激素对THP1细胞周期调节依赖HMGB1,NF-κB可能参与其中。     

马桑内酯对星形胶质细胞细胞周期变化的影响

胶质细胞细胞周期的改变，会导致细胞自身功能的改变．从而引发一些疾病的形成。研究致痫时星形胶质细胞细胞周期的变化，可能对癫痫的形成机制提供新的思路。用马桑内酯（CL）刺激体外纯化培养的海马星形胶质细胞2、4、6、8h后．应用流式细胞技术测定越形胶喷细胞细胞周期各时期细胞的变化．结果显示：CL作用4h后，G1期细胞数较对照组和2h组明显下降（P〈0．05），S期和G2＋M期比对照组明显增高（P〈0．05）。同时细胞凋亡也随着时间的延长而增加（P〈0．05）。本实验结果提示致痫时星形胶质细胞细胞周期会发生改变．即细胞由G1／G0期向S和G2＋M期快速转化。     

两种不同染色法在流式细胞术中检测细胞周期的探讨

目的比较碘化丙啶（PI）和4,6-联脒-2苯基吲哚（DAPI）两种不同染色方法在流式细胞术中对细胞周期检测的影响。方法 A549细胞分别采用PI和DAPI染色法进行染色,于染色后0和24h进行流式细胞仪检测细胞G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较两种方法的测定结果,同时进行细胞计数,观察细胞浓度变化。结果PI和DAPI法染色后0h上机测定,结果分别为：CV值（7.72±0.19）、（5.92±0.09）,G0/G1期含量（69.63±1.16）%、（69.87±1.28）%,S期含量（24.53±0.47）%、（24.43±0.86）%,G2/M期含量（5.85±1.04）%、（5.72±0.65）%,两种方法检测细胞周期的结果基本一致（P〉0.05）;染色后24h重新测定,结果分别为：CV值（8.82±0.05）、（6.09±0.30）,G0/G1期含量（58.50±0.90）%、（70.47±0.81）%,S期含量（31.73±0.75）%、（23.67±0.45）%,G2/M期含量（9.51±0.47）%、（5.86±0.46）%,两种方法检测细胞周期的结果差异有统计学意义（P〈0.05）。DAPI法染色后0和24h测定结果基本一致（P〉0.05）,而PI法检测结果差异有统计学意义（P〈0.05）。细胞计数结果显示,放置24hPI法细胞损耗为63.14%,DAPI法细胞损耗为12.50%,两种方法结果差异有统计学意义（P〈0.05）。染色24h后PI法细胞开始崩解,镜下见较多的细胞碎片,而DAPI法细胞形态良好。结论应用流式细胞术检测细胞周期,DAPI染色法优于PI染色法。     

STK 15基因沉默导致胃癌细胞分裂停滞

目的探讨丝氨酸／苏氨酸激酶15（serine／threonine kinase15,STK15）基因在胃癌细胞有丝分裂中的作用。方法应用RNA干扰技术（RNAi）抑制胃癌细胞株MKN45细胞STK15基因表达;real-time定量PCR及Western blot检测干扰前后STK15 mRNA及蛋白质表达的变化;倒置显微镜观察MKN45细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;MTT法检测细胞增殖速度的变化;免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管及有丝分裂表型的改变。结果STK15基因沉默后。其mRNA及蛋白质表达明显下降,real-time PCR结果显示,转染后48h,STK15^-组STK15 mRNA水平较对照siRNA组的下降了89．54％;Western blot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平较对照siRNA组降低了57．18％。较多MKN45细胞呈圆形改变并呈现G2期细胞的DNA含量,STK15^-组3个时间点的圆形细胞占18．95％,而对照siRNA组为8．34％,差异有统计学意义（P〈0．05）;流式细胞仪检测结果显示,STK15。组G2期DNA含量细胞平均值为26．13％,而对照siRNA组G2期DNA含量细胞平均值12．46％（P〈0．05）。细胞增殖速度减慢（P〈0．05）。细胞有丝分裂表型发生改变（P〈0．05）。结论STK15基因在MKN45细胞有丝分裂过程中可能起着关键作用,阻断其表达可导致MKN45细胞有丝分裂停滞。     

氯通道在不同生长周期的鼻咽癌细胞迁移中的作用

目的：研究不同生长周期的鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）的迁移能力及氯通道在迁移过程中所起的作用。 方法： 运用血清饥饿法、化学药物双阻断法、有丝分裂药物阻断及摇落法分别将CNE-2Z细胞同步化至细胞周期的G1、S、M期，流式细胞仪检测其同步化效果。结合应用迁移小室和图像分析法，测定迁移率。台盼蓝活细胞染色法测定药物的细胞毒性。 结果： 不同生长周期的细胞迁移能力不同，G1期细胞迁移能力最强，随后是M期， S期迁移能力最弱。氯通道阻断剂（ATP、NPPB、tamoxifen）抑制CNE-2Z细胞迁移，但不同的氯通道阻断剂对不同生长周期CNE-2Z细胞迁移的阻滞效应不相同。 结论： CNE-2Z细胞的迁移能力与其所在的生长周期密切相关，氯通道在各期CNE-2Z细胞的迁移过程中起着重要作用。     

胸腺上皮肿瘤组织中基质金属蛋白酶-2活性与Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶 mRNA表达的相关性

目的探讨胸腺瘤和胸腺癌中基质金属蛋白酶（MMP）-2、Ⅰ型膜型（MT1）-MMP、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2mRNA的表达和MMP-2蛋白活性的关系。方法分别用real-time逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR,Taqman法）、明胶酶谱法和Filmin situ gelatin-Zymography（FIZ）对正常的胸腺组织（2例）、胸腺瘤（12例）和胸腺癌（2例）患者的新鲜肿瘤组织中MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2mRNA的表达,pro-MMP-2的活性率及活性蛋白的定位进行测定。结果MMP-2、MT1-MMP及TIMP-2mRNA在Ⅰ期与Ⅱ期和Ⅲ期与Ⅳ期中的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）,在Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期和胸腺癌3组中差异均有统计学意义（P〈0．01）。在AB、B1型（混合型和淋巴细胞为主型）与B2、B3型（皮质型和多角细胞为主型）以及胸腺癌3组中差异均有统计学意义（P〈0．05）。MMP-2的蛋白活性率（MMP-2／pro—MMP-2＋MMP-2）在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期和胸腺癌各组中差异有统计学意义（P〈0．05）,在AB、B1型与B2、B3型以及胸腺癌各组中的差异均具有统计学意义（P〈0．05）。胸腺瘤各期及各型中MT1-MMP、TIMP-2mRNA与MMP-2蛋白活性表达均呈正相关,且相关程度相似（r=0．7235、r=0．7647、P〈0．005）。MMP-9的蛋白表达在各组间差异均无统计学意义。结论MMP-2、MT1-MMP及TIMP-2的mRNA表达与胸腺瘤临床分期、病理分型相关,MMP-2的活性与MT1-MMP和TIMP-2的表达升高正相关。推测MT1-MMP通过TIMP-2对MMP-2的激活起促进作用。     

丙型肝炎病毒核心蛋白转染HepG2细胞对其p53表达的影响

目的 研究丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV—core protein，HCV—C）对HepG2细胞周期、细胞凋亡和n53蛋白表达的影响。方法 表达HCV—C的真核表达质粒pcDNA3.1-core，通过Lipofectamine基因转染法转染HepG2细胞，经G418筛选获得稳定转染HepG2细胞，经Westem Blot证实HCV核心蛋白阳性表达。利用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法，平板克隆实验和流式细胞术，蛋白印迹和免疫细胞化学法检测HCV核心蛋白对细胞生长增殖率、细胞周期、细胞凋亡率和p53蛋白表达的影响。结果 HCV—C转染组细胞增殖率显著高于空白质粒转染组和未转染组；HCV—C转染组细胞S期所占百分率高于未转染组；HCV-C转染组细胞凋亡率显著低于未转染组；HCV—C转染组细胞突变型p53蛋白的表达高于空白质粒转染组和未转染组。结论 HCV核心蛋白可能通过促进突变型p53蛋白的表达，促进HepG2从G0／1期进入S期，促进细胞生长增殖，抑制细胞凋亡。     

干扰素诱导蛋白p204表达变化对大鼠血管平滑肌细胞增殖及p21表达的影响

目的: 观察干扰素诱导蛋白p204对鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及p21表达的影响,探讨p204在VSMCs增殖调控中的作用及可能机制。方法: 应用干扰素 α(IFN-α)处理和p204基因( Ifi204 )的小干扰RNA(siRNA)瞬时干预体外培养的VSMCs,用MTT法测定细胞活力反映细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,用半定量RT-PCR 法和Western blotting 分别检测p204和p21的mRNA和蛋白表达。结果: IFN-α可诱导鼠VSMCs p204 mRNA和蛋白表达上调,降低VSMCs细胞活力和细胞周期G₁/S转换,伴p21 mRNA和蛋白表达上调。转染 Ifi204 siRNA可抑制p204和p21表达,提高VSMCs细胞活力和促进细胞周期G₁/S转换。结论: p204表达可抑制鼠VSMCs的增殖,该效应可能与激活p21表达有关。     

干扰素诱导蛋白p204对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的: 研究干扰素诱导蛋白p204对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响并探讨其可能的机制。方法: 应用干扰素α(IFN-α)和p204基因(Ifi204)的小干扰RNA(siRNA)瞬时干预体外培养的VSMCs,用MTT法测定细胞活力反映细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,用实时 qRT-PCR法和Western blotting 分别检测mRNA和蛋白表达。结果: IFN-α可诱导大鼠VSMCs p204 mRNA和蛋白表达上调,抑制VSMCs细胞活力和细胞周期G₁/S转换,伴Ras蛋白表达减少,Raf和ERK磷酸化水平下降。转染Ifi204 siRNA可抑制p204表达,提高VSMCs细胞活力和促进细胞周期G₁/S转换,伴Ras蛋白表达增多,Raf和ERK磷酸化水平升高。结论: p204表达可抑制鼠VSMCs的增殖,该效应可能与p204抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的激活有关。     

11,12-EET对缺氧血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨11,12-环-二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法:采用贴块法体外培养大鼠主动脉VSMC,将细胞分为常氧对照组(Con组),缺氧模型组(H组),EET组(EET组)和EET-缺氧组(EET-H组),以MTT法测定VSMC的增殖率,以流式细胞术观察VSMC细胞周期及凋亡率,Western blot方法检测Bax的表达。结果:与Con组比较,H组VSMC增殖率升高(P<0.01),EET组VSMC存活率降低(P<0.01);EET-H组细胞增殖率低于H组(P<0.01)。与Con组相比,H组G0/G1期VSMC细胞比例减少(P<0.05),S期细胞比例增加(P<0.05);EET组较Con组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);与H组相比,EET-H组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.05)。EET-H组VSMC凋亡率高于H组(P<0.05)、Con组(P<0.05)及EET组(P<0.05)。EET组Bax的表达高于Con组(P<0.05);与H组比较,EET组及EET-H组Bax的表达均升高(P<0.01)。结论:外源性给予11,12-EET有抑制缺氧VSMC增殖和促进缺氧VSMC凋亡双重作用。11,12-EET可能通过对VSMC增殖和凋亡的调控,影响血管损伤后血管重构。     

Src/Stat3通路在高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖及迁移中的作用

目的:探讨Src酪氨酸激酶(Src)/信号转导子和转录激活子3(Stat3)在高糖(HG)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用。方法:首先将VSMC细胞株A7R5与HG(10~40 mmol/L)共同孵育24h,MTT法及EdU染色检测VSMCs增殖,Transwell小室检测VSMCs迁移,Western blot检测p-Src、Src、p-Stat3和Stat3的蛋白水平。q PCR检测Stat3靶基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Myc、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。为了进一步证实Src在高糖诱导VSMCs增殖和迁移中的作用,将HG与Src抑制剂saracatinib(100 nmol/L)共同孵育24 h,观察Src对HG诱导VSMCs增殖、迁移及Stat3激活的影响。结果:HG能浓度依赖性地促进VSMCs的增殖及迁移并激活Src和Stat3,上调Stat3靶基因cyclin D1、Myc、MMP2及MMP9的表达。抑制Src激活可抑制HG诱导的VSMCs增殖及Stat3的激活,同时下调cyclin D1及Myc的表达。结论:Src/Stat3通路可能在HG诱导的VSMCs增殖及迁移中发挥重要作用。     

中药益气通络丹含药血清对大鼠血管平滑肌细胞周期的影响

目的 :观察益气通络丹 (YQTLD)含药血清对培养SD大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)细胞周期的影响 ,探讨该药抗冠心病、脑血栓等心脑血管疾病的作用机制。方法 :用血清药理学方法制备含药血清 ,用流式细胞术 (FCM )测定作用2 4h后含药血清对VSMC细胞周期的影响情况。结果 :益气通络丹含药血清能使SD大鼠VSMC的G1期细胞所占百分数增加 ,细胞增殖率 (PI)值降低 ,与空白血清对照组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :益气通络丹含药血清能阻滞细胞停留在G0G1期 ,抑制细胞进入S期 ,有抗VSMC的增殖作用 ,这可能是其临床上抗冠心病、脑血栓的作用机制之一。     

胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞TGF β及其受体的调节作用

目的:从细胞增生、转化生长因子β₁和受体表达等方面,探讨胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR VSMC)和正常血压Wista-Kyoto大鼠血管平滑肌细胞(WKY VSMC)的影响异同。方法:采用组织移植法培养SHR和WKY大鼠胸主动脉VSMC|用细胞计数仪和流式细胞仪分别检测细胞增生情况|TGF β及其受体的mRNA水平利用定量RT-PCR技术进行检测。结果:(1)胰岛素加强SHR VSMC的增生,而不影响WKY VSMC的增生。胰岛素加强SHR VSMC的增生,且呈剂量依赖方式(2)以20%小牛血清培养基培养VSMC, SHR VSMC的S期百分率为31.44%,而WKY VSMC的S期百分率仅为19.86%|以2%小牛血清培养基培养VSMC,SHR VSMC的G₀／G₁和S期百分率分别为73.23%和9.35%,加入胰岛素后,SHR VSMC的G₀／G₁降低为67.58%,S期百分率则增加到15.64%。但是,加入胰岛素前后,WKY VSMC各期百分率无明显变化|(3)RT-PCR分析结果表明,生长静止的SHR VSMC和WKY VSMC均有TGF β₁、Ⅰ型和Ⅱ型TGF β受体的表达,但SHR VSMC的TGFβ₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量高于WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量,胰岛素加强了WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达(P＜0.01和P＜0.05),而削弱了SHR VSMC相应分子的表达(P＜0.01和P＜0.05),胰岛素不影响二株系大鼠VSMC Ⅱ型TGF β受体的表达(P＜0.05)。结论:胰岛素对SHR VSMC和WKY VSMC的TGF β和它的受体表达具有不同的调节作用,这种异常调节作用可能和胰岛素加强SHR VSMC的增生密切相关。     

抗α1-肾上腺素能受体抗体对培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察抗α1-肾上腺素能受体自身抗体对培养平滑肌细胞增殖的影响，并探讨其可能机制。 方法： 用酶消化法培养大鼠平滑肌细胞及用亲和层析的方法纯化抗α1-肾上腺素能受体抗体，用BrdU掺入法检测平滑肌细胞的增殖率，用RT-PCR及Western blotting法检测c-jun、c-fos的表达。 结果： 抗α1-肾上腺素能受体抗体可以显著增加VSMC的增殖，并随时间的延长及抗体滴度的增加而增强，并可增加c-jun mRNA和蛋白的表达，其作用与NE相似，均显著高于正常对照IgG，并均可被α1-肾上腺素能受体阻滞剂prazosin阻断；而该抗体对c-fos的表达无显著增加。 结论： 抗α1-肾上腺素能受体抗体可以显著增加培养大鼠平滑肌细胞的增殖，并可增加c-jun的表达，在高血压血管重塑中可能发挥一定作用。     

脂多糖介导的血管平滑肌细胞血红素

目的:研究脂多糖(LPS)作用下的血管平滑肌细胞血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,并探讨HO/一氧化碳(CO)调节通路在内毒素性血管调节功能障碍中的作用。方法:10mg/L、30mg/L及50mg/L的LPS与培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)共同孵育6h,以及10mg/LLPS与VSMC共同孵育9h和18h。分别观察细胞丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性、台盼蓝染色法记录VSMC蓝染率的变化;Northern杂交测HO-1mRNA表达。结果:VSMCHO-1mRNA表达随LPS浓度的增大而增加,LPS50mg/L时HO-1mRNA表达比对照高176.7%;低剂量LPS(10mg/L)诱导VSMCHO-1mRNA的表达量随诱导时间的延长而增加,18h组HO-1mRNA的表达量比对照高195.6%。只有当LPS浓度增加至50mg/L及10mg/L孵育18h时,细胞台盼蓝摄取率、MDA含量与LDH活性明显增加、细胞出现损伤。结论:LPS可诱导VSMCHO-1mRNA的表达且具有浓度依赖性和时间依赖性,HO/CO可能为介导内毒素性血管平滑肌功能调节障碍的重要通路。     

Mechanism of hydrogen peroxide-induced cell cycle arrest in vascular smooth muscle

Reactive oxygen species such as hydrogen peroxide (H(2)O(2)) can positively and negatively modulate vascular smooth muscle cell (VSMC) growth. To investigate these paradoxical effects of H(2)O(2), we examined its effect on apoptosis, cell cycle progression, and cell cycle proteins. High concentrations of H(2)O(2) (500 microM to 1 mM) induced apoptosis, whereas moderate concentrations (100 microM) caused cell cycle arrest in G1. H(2)O(2) (100 microM) blocked serum-stimulated cyclin-dependent kinase-2 (CDK2) activity, but not CDK4 activity, suggesting that cell cycle arrest occurred in part by inhibiting CDK2 activity. The serum-induced increase in cyclin A mRNA was also completely suppressed by H(2)O(2), whereas cyclin D1 mRNA was not affected. In addition, H(2)O(2) caused a dramatic increase in expression of the cell cycle inhibitor p21 mRNA (9.67 +/- 0.94-fold at 2 h) and protein (8.75 +/- 0.08-fold at 8 h), but no change in p27 protein. Finally, H(2)O(2 )transiently increased p53 protein levels (3.16 +/- 1.2-fold at 2 h). Thus, whereas high levels of H(2)O(2) induce apoptosis, moderate concentrations of H(2)O(2) coordinate a set of molecular events leading to arrest of VSMCs at the G1/S checkpoint of the cell cycle. These results provide insight into the mechanisms underlying positive and negative regulation of VSMC growth by H(2)O(2) in vascular disease.