部分纯化抗原半定量检测幽门螺杆菌感染

鉴定并提取幽门螺杆菌特异性抗原，建立测定抗ＨＰ抗体的半定量免疫酶技术。方法：１０株ＨＰ可溶性蛋白用于十二烷在磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹分析，凝胶层析提取特异性抗原，方阵滴定建立免疫酶方法。纯化抗原与全菌抗原同批检测１３６例患者，以蛋白印迹分析作为金标准。     

纯化抗原半定量检测幽门螺杆菌感染

目的 :鉴定并提取幽门螺杆菌 ( Hp)特异性抗原 ,建立测定抗 Hp抗体的半定量免疫酶技术。　 方法 :10株 Hp可溶性蛋白用于十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析 ,凝胶层析提取特异性抗原 ,方阵滴定建立免疫酶方法。纯化抗原与全菌抗原同批检测 136例患者 ,以免疫印迹分析作为金标准。　 结果 :Hp主要特异性抗原分子量为 660 0 0 ,590 0 0 ,310 0 0和2 50 0 0 ,Sephadex G- 2 0 0柱层析第 1峰提取物含其中 3种抗原成分。纯化抗原 EL ISA测定抗 HpIg G,敏感性 98.9% ,特异性 92 .5% ,准确性 97.0 % ,优于应用全菌抗原的检测结果。　 结论 :本实验建立的检测抗 Hp Ig G方法 ,具有敏感、特异、半定量可靠、可目测定性及可用于微量检测等特点 ,值得推广应用     

Isolation and purification of guinea pig inner ear antigens by preparative polyacrylamide gel electrophoresis

目的　分离与纯化豚鼠内耳抗原 ,为寻找内耳特异性抗原打下基础。方法　采用冻融法提取豚鼠内耳抗原 ,制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化内耳抗原的亚组份 ,快速染色和脱色定位蛋白区带 ,将主要蛋白区带切下匀浆回收 ,并与分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳比较。结果　豚鼠内耳抗原的加样量为 3mg时 ,各亚组份仍能有效分离 ,三种主要亚组份 (31、4 2 - 4 5和 60kD)的相对含量分别为 2 5 99%、2 1 91%和 2 1 1%。结论　制备性PAGE可以用于纯化内耳抗原的主要亚组份。     

一种新的胃癌相关糖脂糖蛋白抗原的研究

报告一株鼠抗人胃癌单克隆抗体(单抗)MG7相应抗原的纯化及鉴定。单抗MG7经盐析沉淀,DEAE-52纤维素柱层析纯化后,与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联,制备免疫吸附剂,用免疫亲和层析的方法从胃癌组织可溶性抗原提取液中纯化出MG7相应抗原。经高效薄层色谱,TLC放射免疫自显影,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印渍等实验分析,证实MG7相应抗原含有中性糖脂和糖蛋白,抗原决定簇存在于糖链上,是一种新的胃癌相关抗原。     

癌胚抗原固相放射免疫分析法及其临床应用的初步研究 专业 核医学(放射免疫)

本文报告了癌胚抗原(CEA)固相放射免疫分析法(SP-RIA)的研究工作。采用高氯酸抽提法从原发性结肠癌的肝转移灶中提取CEA;从正常人肝脏、肺、血清及病人肿瘤(来源同 CEA)中分别提取三种不同来源的 CEA 非特异性交叉反应抗原(NCA);从新生儿初粪中提取非特异性抗原(NFA),并经凝胶过滤、DEAE-纤维素层析纯化。纯化后的抗原采用 Webster 紫外光谱吸收法、双向免疫扩散、琼脂凝胶免疫电泳及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对其浓度、免疫活性、纯度及分子量范围进行了检测鉴定。用纯化 CEA 抗原免疫新西兰纯种大白     

对氧磷和氧毒死蜱对大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响

目的研究有机磷类杀虫剂对氧磷（PO）和氧毒死蜱（CPO）对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响。方法制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体或β2-肾上腺素受体、G蛋白偶联受体激酶-2、[γ-p32]ATP与对氧磷（PO）、氧毒死蜱（CPO）共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果氧毒死蜱完全抑制大鼠脑M2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为（IC50）70μmol/L;对氧磷不抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化。结论氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径。     

从TE 671细胞株提取人乙酰胆碱受体

目的 ]分离提取具有活性的人乙酰胆碱受体 .[方法 ]用摇动培养瓶大量培养表达人乙酰胆碱受体的TE 671细胞株 ,细胞经裂解制备人乙酰胆碱受体提取液 .应用放射免疫测定法检测提取的人乙酰胆碱受体与抗人乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]提取的人乙酰胆碱受体能与抗人乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性很高 ,含量为 1 8× 10 10 个乙酰胆碱受体分子 / 10 0 μL提取液 .[结论 ]从TE 671细胞株提取的人乙酰胆碱受体具有与相应抗体结合的功能 ,可以作为抗原应用于重症肌无力的研究     

抗乙酰胆碱受体单链抗体的纯化

[目的 ]纯化抗乙酰胆碱受体单链抗体 ,为测定其特异性准备材料 .[方法 ]将大肠杆菌表达的单链抗体 (含有 6xHis及c myc标记肽 )经Ni nitrilotriaceticacid(Ni NTA)纯化 ,以十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳和应用鼠抗c myc单克隆抗体的免疫印迹试验鉴定纯化产物 ,并根据吸光度值测定表达产物的含量 .[结果 ]在纯化产物中发现大小约为 36KD的单链抗体 ,杂质蛋白带较少 ,表达量约为30 μg/L .[结论 ]用Ni NTA纯化带有 6xHis标记肽的单链抗体的方法简单、纯度高 ,以大肠杆菌表达抗乙酰胆碱受体单链抗体时产量低 .     

有机磷类杀虫剂存在其他作用靶分子

目的：研究有机磷类杀虫剂对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体磷酸化的影响,揭示有机磷类杀虫剂存在的其他作用靶分子或作用途径.方法：制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱m2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体或β-肾上腺素受体,G蛋白偶联受体激酶-2,[γ-p32]ATP与对氧磷（PO）、氧毒死蜱（CPO）共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测m2受体磷酸化结果.结果：氧毒死蜱完全抑制大鼠脑m2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为（IC50）70μmol/L;对氧磷不抑制m2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化.结论：氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑m2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径.     

用羟基磷灰石柱层析纯化抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体(简报)

本文比较了用羟基磷灰石柱层析和DEAE-52纤维素两种方法从小鼠腹水液中纯化抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的结果。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,紫外分光光度定量分析及放射免疫分析法检测抗体免疫活性的结果表明:(1)羟基磷灰石柱层析法得率高,未见有其它杂蛋白污染,纯化前后的免疫活     

抗树突状细胞单克隆抗体对小鼠实验性自身免疫重症肌无力的作用

用部分纯化的乙酰胆碱受体(AchR)加完全福氏佐剂注射给C57BL/6小鼠可发生实验性自身免疫重症肌无力(EAMG),出现肌力递减,AchR刺激脾淋巴细胞有增殖反应及机体产生抗AchR抗体。预先用抗树突状细胞单抗封闭,可阻止这一过程发生。     

“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处AchR蛋白表达的影响

目的: 探讨"温阳补气"针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠腓肠肌神经肌肉接头(NMJ)处乙酰胆碱受体(AchR)蛋白表达水平的影响,阐明针灸治疗重症肌无力(MG)的作用机制。方法: 采用AchR α1129-145多肽片段免疫接种Lewis雌性大鼠,建立EAMG大鼠模型。在建模成功的EAMG大鼠中随机选取30只,分为模型对照组10只、药物对照组10只和针刺治疗组10只,并将同期购进的未建模的10只大鼠设为空白对照组。药物对照组大鼠予以18.5 mg·kg^-1·d^-1溴吡斯的明灌胃治疗;针刺治疗组大鼠予以"温阳补气"针法治疗;其余2组不予任何处置作为对照。记录治疗前后各组大鼠Lennon症状评分。治疗结束后,取4组大鼠腓肠肌NMJ处组织,采用Western blotting法检测各组大鼠NMJ处AchR蛋白表达水平。结果: 与空白对照组比较,建模成功后治疗前模型对照组、药物对照组和针刺治疗组大鼠Lennon症状评分明显升高(P<0.01);与模型对照组比较,经过2个疗程治疗后药物对照组和针刺治疗组大鼠Lennon症状评分均明显降低(P<0.01);与空白对照组比较,模型对照组大鼠腓肠肌NMJ处AchR蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与模型对照组比较,治疗后针刺治疗组和药物对照组EAMG大鼠腓肠肌NMJ处AchR蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论: "温阳补气"针法可以提高EAMG大鼠NMJ处AchR蛋白表达水平,发挥治疗EAMG的作用。     

“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠神经肌肉接头处 AchR mRNA 表达的影响

目的：探讨“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠神经肌肉接头处（NMJ）乙酰胆碱受体（AchR）mRNA表达的影响,阐明“温阳补气”针法对治疗EAMG的效应机制。方法：AchRα1 129-145多肽片段主动免疫60只SPF三级Lewis雌性大鼠,构建EAMG大鼠模型,模型制备成功后,随机选取30只大鼠分为模型对照组、针刺治疗组和药物对照组,每组10只,并将同批购进且相同条件下饲养的另外10只SPF三级Lewis大鼠设为空白对照组。空白对照组及模型对照组大鼠不予任何干预,针灸治疗组大鼠施以“温阳补气”针法治疗,药物对照组大鼠施以溴吡斯的明灌胃治疗。15d后,取实验大鼠腓肠肌NMJ处周围组织,采用RT-PCR法检测AchR mRNA表达水平,并定量分析各组之间的表达差异。结果：与空白对照组比较,针刺治疗组、药物对照组和模型对照组大鼠NMJ处γ-AchR和ε-AchR mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）;与模型对照组比较,针灸治疗组与药物对照组大鼠NMJ处γ-AchR和ε-AchR mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）。结论：“温阳补气”针法能够有效提高EAMG大鼠AchR mRNA表达水平,提示该方法可能是治疗重症肌无力的有效方法。     

实验性重症肌无力动物模型的建立

从牛骨骼肌中提取乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ），经用１２５Ｉ标记α银环蛇神经毒素（α Ｂｇｔ）鉴定受体活性良好。用ＡｃｈＲ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力（ＥＡＭＧ）模型。与对照组比较，小鼠在临床表现、肌电图衰减效应、血清中抗ＡｃｈＲ抗体和脾细胞对ＡｃｈＲ增殖反应检测中，均出现明显的阳性标志。ＥＡＭＧ动物模型的建立为进一步探索重症肌无力（ＭＧ）免疫发病机制和药物防治研究奠定基础     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

重症肌无力转基因小鼠模型的建立

[目的]建立人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．[方法]用电鳐电器官分离纯化的乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠，以肌肉收缩力判定病情，以放射免疫测定法测定动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度及动物全身肌肉乙酰胆碱受体浓度．[结果]实验动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度为6～296nmol，全身肌肉乙酰胆碱受体损失率最高达65％，部分动物出现肌肉收缩无力表现．[结论]成功地建立了人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．     

电鳐乙酰胆碱受体诱导转基因小鼠重症肌无力的机制

[目的]探讨电鳐乙酰胆碱受体诱导人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力的机制.[方法]将电鳐电器官分离并纯化的乙酰胆碱受体作为免疫原,免疫人免疫球蛋白转基因小鼠,以放射免疫方法测定小鼠血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度,以免疫荧光技术观察小鼠骨骼肌中抗乙酰胆碱受体抗体的结合性.[结果]小鼠血清中的抗乙酰胆碱受体抗体滴度为155~539 pmol,小鼠肌肉中具有人抗乙酰胆碱受体抗体.[结论]电鳐乙酰胆碱受体刺激人免疫球蛋白转基因小鼠产生的人抗乙酰胆碱受体抗体,可与肌肉组织中的乙酰胆碱受体结合,导致肌肉收缩无力,可诱导重症肌无力.     

Experimental Study on Induction of Tolerance to Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis by Immature Dendritic Cells

To investigate the effect of immature dendritic cells (iDCs) on experimental autoimmune myasthenia gravis (MG), iDCs were generated in low dose of GM-CSF, and then they were pulsed with acetylcholine receptor (AchR) and transferred to allogeneic rats. After 3 weeks, all rats were immunized with AchR and complete Freund‘s adjuvant (CFA) and observed for the corresponding indices of MG for 7 weeks. Our results showed that compared with mature DCs (mDCs) generated at high dose of GM-CSF plus additional stimulation by lipopolysaccharide, iDCs expressed significantly lower levels of MHC-Ⅱ , CD80 and CD86, and their ability to uptake FITC-Dextran was stronger but the ability of stimulating proliferation of allogeneic T cells were weaker. Like controls, after immunization, all rats transferred with iDCs, mDCs and AchR-pulsed mDCs showed typical symptoms in 4 to 7 weeks. The amplitude of electromyogram wave dropped obviously, the level of serum AchRab increased and neuromuscular junction showed typical damage of MG. In contrast, no conspicuous changes were noted in rats transferred with AchR-pulsed iDCs. The results suggest that iDCs could be generated by inducing bone marrow precursors in low dose of GM-CSF, AchRpulsed iDCs could induce tolerance of EAMG. The dysfunction of DCs may play an important role in the initiation and maintenance of normal immune response in MG.     

功能矫形对大鼠翼外肌细胞膜乙酰胆碱受体最大结合容量影响的研究

目的：观察功能矫形前伸青春期大鼠下颌后，翼外肌细胞膜乙酰胆受（n-AchR)最大结合容量（Bmax)的变化，探讨功能矫形的神经肌肉调控机理。方法：选用20只5周龄Sprague-Dawley雄性大白鼠，随机分为实验组和对照组各10只，实验组大鼠截自制上颌功能矫治器，引导下颌前伸。采用放射受体分析法测定两组大鼠翼外肌肌细胞膜上乙酰胆碱受体的最大结合容量，结果：实验组大鼠翼外肌细胞膜上乙酰胆碱受体最大结合容量（Bmax=285.573fmol/mgpro）明显＞对照组（Bmax=214.662fmol/mg,Pro），其差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：功能矫形可增加翼外肌细胞膜上乙酰胆碱受体与乙酰胆碱的结合量。     

重症肌无力中枢损害脾脏改变及细胞凋亡相关蛋白表达

目的 :探讨在重症肌无力 (MG)中枢损害模型中脾脏变化和细胞凋亡相关蛋白改变及其意义 .方法 :分别将自MG患者血中提取的IgG和健康人血中提取的IgG注入大鼠脑室系统 ,建立大鼠MG模型和健康对照组模型 ,一组大鼠不予任何处理作为空白对照组 .脾常规HE染色 ,并用免疫细胞化学方法观察FasL和Bag 1在脾脏中的表达 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型样症状 .在MG组脾脏淋巴细胞增生明显 ,淋巴小结及生发中心数目增多 ,Bag 1抗原阳性细胞弥漫分布于白、红髓区 ,FasL仅偶见或无 .在健康对照组脾脏中可散见Bag 1和FasL表达 (P <0 .0 5 ) ,两种对照模型镜下改变相似 .结论 :脑室注射抗神经肌接头 (NMJ)处的AchRab能够同中枢神经系统的AchR结合 ,引起外周免疫的变化 ,脾淋巴细胞增生 ,Bag 1表达增加 ,Fas/FasL表达受抑制 .这些可能导致EAMG脾脏中激活免疫细胞的正常凋亡过程抑制 ,并参与MG病变进展