p16/p38 MAPK/p53/Wip1通路在乳腺癌发生、发展中的作用及其临床意义

目的 探讨p16/p38 MAPK/p53/Wip1通路在乳腺癌发生、发展中的作用及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测70例乳腺癌组织、癌旁组织、20例正常乳腺组织中Wip1、p53、p38 MAPK、p16蛋白的表达,并对Wip1蛋白高表达与p53、p38、p16蛋白表达进行相关分析.结果 3种组织中Wip1蛋白高表达率分别为62.9%(44/70)、2.9%(2/70)、0(0/20).乳腺癌组织比癌旁组织、正常乳腺组织明显升高(P＜0.01).Wip1蛋白高表达与p53、p38、p16蛋白表达呈负相关(P＜0.01,等级相关系数rs分别为-0.529、-0.626、-0.499).结论 p16/p38 MAPK/p53/Wip1是负反馈通路,它可能在乳腺癌发生发展中起重要作用.     

p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路在赤芍减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 评价p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路在赤芍减轻大鼠内毒素性急性肺损伤(AL1)中的作用.方法 健康清洁级雄性Wistar大鼠40只,随机分为5组(n=8):生理盐水对照组(C组)、内毒素组(L组)、赤芍组(R组)、赤芍预处理组(PR组)和SB203580组(S组).气管内滴注脂多糖(LPS)制备大鼠ALI模型.L组气管内滴注1 ml LPS溶液(2.5 mg/kg);C组滴注等容量生理盐水;R组、PR组分别于气管内滴注LPS后、滴注前2 h,经股静脉输注赤芍注射液15 mg·kg-1·h-1 2 h;S组于气管内滴注LPS前3 h,经股静脉输注SB203580溶液2.5 μmol·kg-1·h-1 3 h.于气管内滴注LPS后6 h时,经颈动脉采血样2 ml,行血气分析及测定血清NO浓度;颈动脉放血处死大鼠,测定支气管肺泡灌洗液蛋白浓度,计数中性粒细胞及细胞总数,检测肺组织MDA含量,p38MAPK、HO-1及iNOS的表达.观察肺组织病理学结果 .结果 与C组比较,其余各组肺组织p38MAPK、iNOS及HO-1表达上调,支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比、蛋白浓度、肺组织MDA含量及血清NO浓度升高.PaO2和HCO1浓度降低(P<0.01);与L组比较,R组、PR组和S组p38MAPK及iNOS表达下调,HO-1表达上调.支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比、蛋白浓度、肺组织MDA含量及血清NO浓度降低,PaO2和HCO3-升高(P<0.05);R组、PR组和S组肺组织损伤程度较L组减轻.结论 赤芍可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,可能与抑制p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路有关.     

阻断p38MAPK信号通路降低脑死亡大鼠肾脏免疫原性

目的 探讨降低脑死亡大鼠肾脏免疫原性的有效途径.方法 雄性Wistar大鼠30只,体质量180～200 g,随机均分3组,脑死亡+SB203580组:诱导大鼠脑死亡时,静脉注射SB203580(1 mg/100 g·Wt);脑死亡组:诱导大鼠脑死亡.脑死亡后机械呼吸6 h,如大鼠血压>80mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),取肾脏;对照组:正常大鼠麻醉后取肾脏.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾脏肿瘤坏死因子(TNF)-α仅和白细胞介素(IL)-1βmRNA表达,Western blot检测肾脏磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)以及TNF-α和IL-1β蛋白表达.结果 肾脏TNF-α和IL-1βmRNA和蛋白表达,以及磷酸化p38MAPK蛋白表达,脑死亡组比对照组显著增加(P<0.01);脑死亡+SB203580组比脑死亡组显著下降(P<0.05),但比对照组明显增加(P<0.01).结论 SB203580能阻断p38MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肾脏磷酸化p38MAPK和促炎细胞因子表达,可望成为降低其免疫原性的一条有效途径.     

异丙酚对机械通气相关肺损伤大鼠肺组织p38MAPK信号通路的影响

目的 探讨异丙酚对机械通气相关肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响.方法 雄性清洁级Wistar大鼠30只,体重230～300 g,2～3月龄,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):对照组(C组)保留自主呼吸;机械通气组(V组)和异丙酚组(P组)行机械通气4h,P组在机械通气开始时静脉注射异丙酚5 mg/kg,机械通气期间以10mg·kg-1 ·h-1的速率静脉输注异丙酚.于机械通气15 min、1h、2h和4h时记录MAP,并采集股动脉血样,进行动脉血气分析,记录PaO2;机械通气结束时,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、TNF-α和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的浓度;取肺组织,测定湿干重比(W/D比)、MDA含量、SOD活性、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达水平,计算p-p38MAPK/p38MAPK,并观察病理学结果,进行肺损伤评分.结果 与C组比较,V组和P组肺损伤评分、W/D比、肺组织MDA含量、ICAM-1表达、BALF中总蛋白浓度、TNF-α和MIP-2浓度和肺组织p-p38MAPK蛋白表达水平和p-p38MAPK/p38MAPK升高,V组肺组织SOD活性降低(P＜0.05),P组SOD活性差异无统计学意义(P＞0.05);与V组比较,P组肺损伤评分、W/D比、肺组织MDA含量、ICAM-1表达、BALF中总蛋白浓度、TNF-α和MIP-2浓度和肺组织p-p38MAPK蛋白表达和p-p38MAPK/p38MAPK降低,肺组织SOD活性、MAP和PaO2升高(P＜0.05).三组肺组织p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可能通过抑制p38MAPK信号转导通路的活化减轻大鼠机械通气相关肺损伤.     

p38MAPK信号转导途径对缺血再灌注早期离体肝脏细胞因子表达的影响

目的 研究离体肝脏缺血再灌注早期丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,p38MAPK)信号转导途径对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA和细胞间黏附分子-1(inter-cellular adhesion molecule 1,ICAM1)mRNA表达的影响.方法 建立兔离体肝脏缺血再灌注模型,对照组(n=12):灌注液中不加特异性p38MAPK抑制剂SB202190;抑制组(n=12):灌注液中加入SB202190(浓度3/μmol/L).分别于肝脏离体前,冷保存末,再灌注10、30、60及120 min时获取肝组织标本.分别应用Western blot法及免疫沉淀法检测肝组织中p38MAPK蛋白的表达及活性;RT-PCR法检测肝组织中TNF-α mRNA的表达水平,原位杂交法检测肝组织中ICAM1 mRNA的表达水平.结果 2组动物肝组织中p38MAPK蛋白的表达水平各时相均无明显改变(P>0.05),且2组间其表达水平的差异也无统计学意义(P>0.05).对照组肝组织中p38MAPK的活性在冷保存末及再灌注10、30及60 min时均较离体前和再灌注120 min时明显升高(P<0.01),也明显高于同时相的抑制组(P<0.01);抑制组p38MAPK活性各时相的变化差异无统计学意义(P>0.05).离体前、冷保存末及再灌注10及30 min,2组的肝组织中均仅有少量TNF-α mRNA和ICAM1 mRNA表达,组间及组内比较差异均无统计学意义(P>0.05);至再灌注60及120 min,2组TNF-α mRNA和ICAM1 mRNA的表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),但抑制组相应时相的表达水平明显低于对照组(P<0.01).离体再灌注期间肝组织中p38MAPK的活性与TNF-α mRNA及ICAM1 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.996,P<0.01;r=0.985,P<0.01).结论 p38MAPK可能是在转录水平对TNF-α和ICAM1的生成发挥调节作用,p38MAPK信号转导途径对TNF-α mRNA和ICAM1 mRNA的调节可能是导致离体肝脏缺血再灌注损伤的重要机理之一.     

p38MAPK信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,8周龄,体重180～ 200g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):对照组(C组)、内毒素性休克组(LS组)、内毒素性休克+ p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(LSS组)和SB203580组(SB组).C组和SB组股静脉注射生理盐水0.5 ml;LS和LSS组股静脉注射LPS 10 mg/kg(溶于0.5ml生理盐水)；2h内MAP下降至基础值的75％时,C组和IS组股静脉输注10％二甲基亚砜0.1ml；LSS组和SB组股静脉输注SB203580 5 μmol/kg(溶于0.1 ml 10％二甲基亚砜),输注速率0.01 ml/min.给予LPS或生理盐水后6h时采集动脉血样,进行血气分析,计算氧合指数(PaO2/FiO2)；然后处死大鼠取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行病理学损伤评分,计算肺含水率,测定SOD活性、MDA含量、HO-1 mRNA及其蛋白、p38MAPK蛋白和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达.结果 与C组比较,IS组和LSS组氧合指数和SOD活性降低,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量升高,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白和p-p38MAPK蛋白的表达上调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义,SB组各指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与LS组比较,LSS组氧合指数和SOD活性升高,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量降低,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,p-p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制p38MAPK信号通路可导致内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调.     

p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体蛋白在甲状腺肿瘤中的表达

目的探讨p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织(其中包括11例甲状腺滤泡癌(FTC)、12例乳头状癌(PTC)、4例髓样癌(MTC)以及1例未分化癌(UDTC)中p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达。结果p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中阳性率分别为90%、36%;15%、75%;90%、7%,这3种蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达在FTC与腺瘤之间,PTC与腺瘤之间有统计学意义(P<0.05),p53及FHIT的表达在MTC与腺瘤间差异有统计学意义(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达与甲状腺肿瘤的恶性进程有关,与患者年龄、性别以及淋巴结转移无关。另外p14ARF与FHIT蛋白的表达正相关,并且它们与p53均负相关。结论肿瘤抑制蛋白p14ARF和FHIT的缺失以及癌蛋白p53的高表达是甲状腺肿瘤发生的重要原因之一;联合检测p14ARF、p53及FHIT蛋白有助于区分甲状腺腺瘤和甲状腺滤泡癌。     

肝细胞癌中iNOS和P53蛋白的表达及其与肿瘤血管形成的关系

目的　研究诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和p5 3蛋白在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法　采用免疫组化和图像分析技术检测 5 9例肝细胞癌患者肿瘤组织中iNOS和p5 3蛋白的表达 ,CD34单克隆抗体免疫组化染色检测肿瘤组织微血管密度 (MVD)。结果　①iNOS和p5 3蛋白在肝细胞癌组织中表达阳性率分别为 81.4 % ( 4 8/ 5 9)和 6 4 .4 % ( 38/ 5 9) ,表达强度 (IOD值 )分别为 5 6 35± 12 87和 335 2± 873。②MVD为 32 .5± 2 .73,以肿瘤边缘和癌旁组织微血管较密集。③iNOS的表达与p5 3蛋白表达呈显著正相关 (r=0 .6 5 ,P<0 .0 5 ) ;iNOS的表达与MVD呈显著正相关 (r=0 .75 ,P<0 .0 5 ) ;p5 3蛋白的表达与MVD呈显著正相关 (r=0 .72 ,P<0 .0 5 )。结论　肝细胞癌组织中存在iNOS和p5 3蛋白的高表达 ;iNOS和p5 3可促进肝癌血管形成     

JNK、p38 MAPK在移植静脉血管重塑过程中的表达研究

目的　研究c Jun氨基末端激酶 (JNK)和p38蛋白激酶 (MAPK)在移植静脉血管重塑过程中的表达。方法　Wistar大鼠 80只 ,建立自体移植静脉模型 ,术后随机分为 6h ,1、3、7,1 4、2 8、4 2、5 6d等 8组 ,于相应时点取材 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测JNK和p38MAPK的mRNA表达 ,Western蛋白印迹检测JNK和p38的蛋白产物及磷酸化蛋白产物表达 ,原位杂交和免疫组化方法定位mRNA及蛋白产物表达 ,脱氧核苷酸转移酶末端标记法 (TUNEL)检测血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的变化。结果　移植静脉术后 6h ,JNK和p38的mRNA表达增强 ,在术后 1 4d达到高峰 ,表达值分别为(2 6± 1 0 ) %和 (5 9± 2 6 ) %,与各时点比较差异有统计学意义 (P <0. 0 1 )。JNK、p38的蛋白产物表达在1 4～ 2 8d达高峰 ,在 5 6d时仍维持一定表达量 (1 .4～ 1 . 2 )。原位杂交及免疫组化提示阳性表达多位于移植血管中层或增生内膜中的血管平滑肌细胞 (VSMC) ,p38与凋亡呈正相关 (r =0 . 892 2 ,P <0. 0 1 )。结论　JNK和p38MAPK通路的激活是移植静脉内膜增生以及血管重塑的关键环节 ,可能成为新的治疗靶点。     

重症急性胰腺炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶的表达与肺毛细血管内皮屏障损伤

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK）在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠肺组织中的表达情况,并初步探讨p38MAPK与SAP肺毛细血管内皮屏障损伤的关系。方法将40只健康雄性SD大鼠随机（随机数字表法）分为假手术（SO）组和SAP组,SAP组又再分为3、6、12及24 h 4个时间点组,共5组,每组8只。采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP大鼠模型。采用HE染色方法观察大鼠肺和胰腺组织的病理学改变;采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平;采用免疫组化染色方法检测肺组织中磷酸化p38（p-p38）蛋白和水通道蛋白1（AQP1）的表达水平;采用实时定量荧光PCR法（real-time PCR）检测肺组织中AQP1 mRNA的表达水平。结果 SAP各时间点组大鼠肺组织充血水肿,炎症细胞浸润;胰腺组织可见大片坏死,部分腺叶结构模糊甚至消失;血清TNF-α和IL-1β水平均较SO组高（P〈0.05）。SO组大鼠肺组织中p-p38蛋白仅有微量表达,而在SAP3 h组,p-p38蛋白的表达就明显上调,在6 h时达高峰,24 h时仍高于SO组（P〈0.05）。SAP各时间点组大鼠肺组织中AQP1 mRNA及其蛋白的表达水平均较SO组下降（P〈0.05）,并随着时间的推移而逐渐下降;SAP组大鼠AQP1 mRNA的表达与TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之间均存在负相关关系（r=-0.87,P〈0.05;r=-0.88,P〈0.05;r=-0.78,P〈0.05）。结论肺组织中AQP1蛋白表达的下调是SAP肺毛细血管内皮屏障损伤的重要原因之一,其可能与p38MAPK的激活及炎症因子的过度释放有关。     

甲状腺乳头状癌侵袭转移与生存素和p53蛋白表达的关系研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌（PTC）中生存素（survivin）和p53蛋白表达及其意义。方法 应用免疫组织化学方法检测46例PTC、20例甲状腺瘤（TA）、20例结节性甲状腺肿（NG）和15．例正常甲状腺组织（NT）中survivin和p53蛋白表达。结果 在PTC中,survivin和p53表达阳性率分别为69．6％（32／46）和65．2％（30／46）。PTC中survivin和p53阳性表达率显著高于TA、NG和NT（P〈0．05）。Survivin和p53表达与PTC的侵袭转移呈显著正相关（P〈0．05）。结论 Sur．vivin和p53阳性表达与PTC侵袭、转移密切相关,检测survivin和p53蛋白的表达可作为判断PTC生物学行为的参考指标。     

p44/p42-MAP kinase expression in papillary thyroid carcinomas.

BACKGROUND: Recent studies suggest that mitogen-activated protein (MAP) kinase contributes to the growth and tumorigenesis of human epithelial cancers. Furthermore, blockade of this pathway may inhibit the growth of epithelial cancers. To determine whether MAP kinase is activated in human papillary thyroid carcinomas (PTCs), we analyzed the presence of native MAP kinase (MAPK) and activated phosphorylated MAP kinase (pMAPK) in papillary thyroid cancers and thyroid carcinoma cell lines. METHODS: Protein from paired specimens of 10 patients with PTC was analyzed by immunoblot for MAPK and pMAPK. In addition, MAPK protein expression and cell growth were analyzed in 3 thyroid tumor cell lines treated with a mitogen extracellular kinase inhibitor, U0126. RESULTS: All 10 PTCs had equal expression of MAPK in the tumors and adjacent normal tissue. Six of the 10 tumors demonstrated increased expression of the pMAPK in the tumor specimen compared to the adjacent normal tissue. Interestingly, 3 of 4 patients without differential expression had multifocal PTC. The pMAPK was expressed constitutively in 3 thyroid cancer cell lines. The MAPK inhibitor treatment decreased pMAPK expression and decreased serum-induced growth in all 3 cell lines. CONCLUSIONS: MAP kinase activation is common in PTCs and may offer a potential target for growth inhibition of PTCs.     

p53 and mitogen‐activated protein kinase pathway protein profiles in fresh and frozen spermatozoa

Sperm or testicular tissue cryopreservation is performed in cases of male infertility as a treatment for the preservation of fertility. When these sperm cells are used in assisted reproductive techniques, fertilisation rates, developmental and implantation potential of embryos decrease and the abortion rates increase. In the present work, differences of both phosphorylation and expression levels of p53 and Mitogen‐activated protein kinases (MAPK) proteins were analysed in 61 individual sperm samples before and after cryopreservation. We observed that p53 protein residue at Ser 15 was phosphorylated after cryopreservation. Because MAPK pathway activations may be involved in p53 phosphorylation, MAPK/ERK, Stress‐activated protein kinases (SAPK)/JNK and p38MAPK proteins were also investigated. Analysis showed that p38MAPK phosphorylations increased significantly. However, ERK and JNK expressions and phosphorylations decreased, although the differences were not statistically significant. According to our results, it may be suggested that cryopreservation process activates p53 via p38 MAPK pathway that subsequently causes apoptosis, which may be related to sperm parameters.     

Blockade of p38 mitogen-activated protein kinase and TGF-beta1/Smad signaling pathways rescues bone marrow-derived peritubular capillary endothelial cells in adriamycin-induced nephrosis

The peritubular capillary (PTC) network is a component of the tubulointerstitium of the kidney with important roles in renal function and hemodynamics. Bone marrow (BM)-derived cells can contribute to repair of the renal PTC network after ischemic injury. However, the cell fate and the regulation of renal BM-derived cell engraftment in comparison with somatic cells during disease progression are unclear. This study characterized the time course and regulation of PTC endothelial cell injury in adriamycin (ADR)-induced nephropathy in mice, a model of chronic, irreversible, progressive renal disease. Enhanced green fluorescence protein-positive BM cells that coexpressed two endothelial cell markers, von Willebrand factor and CD31, were found to engraft into the PTC of chimeric ADR-injected mice in a time-dependent manner. The number of BM-derived PTC endothelial cells peaked 2 wk after ADR injection, then declined dramatically thereafter. In these mice, apoptosis was evident in BM-derived PTC endothelial cells, and the p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) and TGF-beta1/Smad signaling pathways were activated. Blocking both the p38 MAPK and TGF-beta1/Smad signaling pathways by administration of a p38 MAPK inhibitor (SB203580) and a TGF-beta receptor 1 inhibitor (ALK5I) to ADR-injected mice rescued BM-derived PTC endothelial cells from apoptosis, reduced the loss of PTC, and restored kidney function. Investigation into the signaling pathways that regulate the differentiation and survival of BM-derived cells that engraft into the kidney in the proinflammatory setting of progressive renal disease is vital for the successful development of cell-based therapies to promote renal regeneration and repair.     

p38在乳腺肿瘤中的表达及术前化疗对其的影响

目的探讨人乳腺良恶性肿瘤中有丝分裂原激活蛋白激酶p38的表达及其意义 ,以及术前化疗对其表达的影响。方法应用固定化蛋白质印迹法 (Westernblot)与免疫组织化学法检测5 0例乳腺癌和 14例乳腺纤维瘤的肿瘤组织与相应正常乳腺组织中p38蛋白表达情况 ,其中 15例乳腺癌患者术前接受了CAF(环磷酰胺 ,表阿霉素加氟尿嘧啶 )或TA(泰素 ,表阿霉素 )化疗 2周期。结果乳腺癌组织中p38蛋白表达水平明显高于正常组织 ,为正常组织的 4 73倍 (t =7 76 2 ,P <0 0 1) ;淋巴结阳性的患者p38蛋白表达高于阴性患者 (t=3 977,P <0 0 1) ;术前行化疗后乳腺癌组织中p38蛋白表达水平有所下降 ,其肿瘤组织p38蛋白表达水平为正常组织的 3.5 1倍 ;乳腺纤维瘤组织中p38蛋白表达水平与正常乳腺差异无显著意义 (t=1 82 9,P >0 0 1) ;p38蛋白在乳腺癌组织与良性纤维瘤之间表达水平差异有显著意义 (t=1.771,P <0 0 1)。结论p38蛋白的过表达可能在乳腺癌的发生及转移中起重要作用