端粒酶活性检测在子宫颈癌早期诊断中的初步探索

观察端粒酶活性在子宫颈癌中的阳性率 ,探讨子宫颈癌发生过程中端粒酶被激活的关键点及其在子宫颈癌早期诊断及预后中的诊断价值。方法 :用以 PCR为基础的端粒重复序列扩增 (TRAP)法测定 6 2例正常宫颈标本、6 8例宫颈上皮内瘤样变 (CIN) ,2 9例浸润性鳞状细胞癌中的端粒酶活性。结果 :它在正常宫颈标本中发现 5例有端粒酶的活性表达 (8.1% ) ,在 6 8例 CIN中发现 2 7例有端粒酶活性 (39.7% ) ,在浸润性宫颈鳞癌中有 2 8例端粒酶活性表达 (96 .6 % ) ,正常组和 CIN组比较 ,差异显著 (P<0 .0 0 1) ,CIN 和 CIN 组比较 ,差异显著 (P<0 .0 1) ,宫颈浸润性鳞细胞癌和 CIN 比较 ,差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :端粒酶活性随宫颈上皮内瘤样变的加重而阳性率增高 ,端粒酶的激活是宫颈癌发生过程中的早期事件 ,检测端粒酶活性对早期诊断宫颈癌有一定意义。     

卵巢上皮性肿瘤端粒酶活性原位检测与bcl-2和p53蛋白表达的相关性研究

目的探讨卵巢上皮性肿瘤端粒酶活性与bcl-2和p53蛋白表达的相关性及其与卵巢肿瘤发生的关系.方法对88例卵巢上皮性肿瘤组织,采用端粒酶活性原位检测法(ISLT法)检测端粒酶活性,S-P法免疫组化技术检测bcl-2和p53蛋白.结果 1.卵巢囊腺癌,交界性囊腺瘤,囊腺瘤及癌旁组织端粒酶检出率分别为92.3%,42.8%,0,0.囊腺癌组端粒酶阳性率与交界性囊腺瘤,囊腺瘤,囊腺癌癌旁组织间存在显著性差异(P＜0.01).端粒酶活性强度与囊腺癌分化程度无明显相关性(P＞0.05).2.卵巢囊腺癌,交界性囊腺瘤,囊腺瘤,囊腺癌癌旁组织中bcl-2的阳性表达率分别为65.38%,52.38%,26.66%,0.卵巢囊腺癌、交界性囊腺瘤与囊腺瘤、囊腺癌癌旁组织间存在显著性差异(P＜0.05),端粒酶活性程度随bcl-2蛋白表达增强而升高(γ=0.91,P＜0.01).3.卵巢囊腺癌,交界性囊腺瘤,囊腺瘤,囊腺癌癌旁组织中p53的阳性表达率分别为57.69%,14.28%,0,0.卵巢囊腺癌与交界性囊腺瘤、囊腺瘤、囊腺癌癌旁组织间存在显著性差异(P＜0.01).囊腺癌端粒酶活性程度与p53蛋白表达强度无明显相关性(γ=0.12,P＞0.05).结论 bcl-2蛋白的过度表达可能与端粒酶激活有关,bcl-2可能通过激活端粒酶使卵巢上皮细胞恶性转化导致卵巢囊腺癌发生,而p53基因突变似对端粒酶的激活无直接影响.     

基质金属蛋白酶与肺癌的侵袭和转移

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (m atrix m etalloproteinases,MMPs)、端粒酶与肺癌侵袭和转移的关系。方法 :运用酶谱法 (zym ography) ,TRAP(端粒末端重复扩增 )法定量分析肺癌和癌旁组织 MMP- 2、MMP- 9、端粒酶活性与肺癌侵袭和转移的关系。结果 :MMP- 9几乎见于所有肺癌组织 ,且活性较强 ,MMP- 2表达较弱 ,仅部分表现为阳性。癌组织平均 MMP- 9含量高于癌旁 ,但差异无显著性 (P=0 .5 98)。 2 7例肺癌中有 12例癌组织 MMP- 9含量高于癌旁 ,另外 15例低于癌旁 ,分别占 4 4 .4 %和 5 5 .6 % ,癌组织和癌旁组织 MMP- 9含量差异有显著性 (P=0 .0 4 5 )。结核瘤 MMP- 9含量明显高于癌旁 (P=0 .0 12 ) ,平均含量高于癌组织 ,但差异无显著性。不同组织类型的肺癌 MMP- 9活性不同 (P<0 .0 5 ) ,细支气管肺泡腺癌比腺癌和鳞癌 MMP- 9活性低。尚无证据表明 ,肺癌端粒酶与 MMP- 9活性、淋巴结转移显著相关。结论 :MMP-9不仅在预测肺癌病人预后、术后随访、判断复发等方面有重要意义 ,并且 ,随着各种 MMPs抑制剂研究的深入 ,以 MMPs为靶的抗肺癌转移和血管生成的抗癌策略有望进入临床应用阶段。在以 MMP- 9判断肺癌侵袭转移能力时 ,要注意与结核瘤鉴别     

端粒酶与p53、C—myc,K—ras在肺癌组织中的表达

目的研究端粒酶活性在肺癌及癌旁组织中的表达,并探讨端粒酶的表达与p53、C-myc、K-ras之间可能存在的关系.方法采用TRAP-SYBRGreen染色法检测36例肺癌和36例癌旁组织,20例肺部良性病变组织和20例正常肺组织及A549肺腺癌细胞株端粒酶活性的表达,并利用免疫组化技术检测肺癌组织p53、C-myc、K-ras表达水平.结果83.3%的肺癌组织25.0%的癌旁组织、15.0%肺部良性病变级织表达端粒酶活性,正常肺组织未检测到端粒酶活性.端粒酶活性的表达与肺癌组织的病理类型、肿瘤大小、临床分期无相关.在30例端粒酶活性阳性的肺癌组织中有24例(80%)表达p53蛋白,18例(60%)表达C-myc蛋白,22例(73%)表达K-ras蛋白.利用Spearman分析方法分析端粒酶活性与p53、C-myc、K-ras蛋白表达水平之间的相关关系,相关系数分别为r=0.60,P＜0.01r=0.335,P＜0.01;r=0.427,P＜0.01.结论端粒酶活性的定性检测可作为肺部恶性肿瘤诊断的辅助指标之一;肺癌组织的端粒酶活性与p53、C-myc、K-ras蛋白表达水平之间存在正相关关系.     

SYBR Green染色法检测肺癌及癌旁组织端粒酶活性

目的 研究TRAP－SYBR Green染色法定性检测端粒酶活性的方法及端粒酶活性在肺癌及癌旁组织中的表达，并探讨端粒酶的表达与P53之间可能的关系。方法 采用TRAP－SYBR Green染色法检测36例肺癌、36例癌旁组织、8例肺部良性病变组织和A549肺腺癌细胞株端粒酶活性的表达，并利用免疫组化技术检测肺癌组织P53蛋白表达水平。结果 TRAP－SYBR Green染色法可检测出5个A549肺腺癌细胞所表达端粒酶活性。83．3％（30／36）的肺癌组织，3／8肺部良性病变组织，19．4％（7／36）的癌旁组织表达端粒酶活性。端粒酶活性的表达与肺癌组织的病理类型、肿瘤大小、临床分期无相关性。在30例表达端粒酶活性的肺癌组织中P53呈现过度表达的占80％（24／30），端粒酶活性与P53蛋白表达水平之间具有相关关系。结论 TRAP－SYBR Green染色法是一种较为灵敏、快速、简便的定性检测端粒酶活性的方法；端粒酶活性的定性检测可作为肺部恶性肿瘤诊断的辅助指标之一；端粒酶P53之间的关系有待进一步阐明。     

食管鳞状上皮不典型增生中端粒酶逆转录酶的表达

目的　探讨端粒酶逆转录酶 (hTRT)与食管黏膜鳞状上皮不典型增生恶性转化的关系及其作用。方法　应用端粒末端重复序列扩增技术 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)和原位杂交技术检测 47例食管黏膜鳞状上皮不典型增生患者组织、2 9例食管鳞癌患者组织及 11例正常组织标本中端粒酶活性及其hTRTmRMA的表达。结果　正常组织标本均未检测出端粒酶活性 ,食管黏膜鳞状上皮不典型增生组端粒酶活性检出率为 44.7% ( 2 1 47) ,显著高于正常组 ( χ2 =5.89,P <0 .0 5) ;食管鳞癌组端粒酶活性检出率为 86.2 % ( 2 5 2 9) ,显著高于不典型增生组 ( χ2 =11.3 5,P <0 .0 1)。正常组织hTRTmRMA无表达 ,不典型增生组阳性表达率为 48.9% ( 2 3 47) ,显著高于正常组( χ2 =6.99,P <0 .0 1) ;食管鳞癌组阳性表达率为 82 .8% ( 2 4 2 9) ,显著高于不典型增生组 ( χ2 =7.3 2 ,P <0 .0 1)。hTRTmRMA表达与端粒酶活性显著相关 ( χ2 =57.91,P <0 .0 0 1)。结论　hTRTmRNA表达与端粒酶活性呈高度一致性 ,提示hTRT在端粒酶活性调节中可能起关键性作用 ,并与食管黏膜鳞状上皮不典型增生细胞恶性转化密切相关 ,hTRT有望成为食管鳞癌的新的、有价值的生物标志物。     

成人肺癌切除组织和支气管切缘p53基因突变及端粒酶活性表达的研究

目的探讨肺癌切除组织和支气管p53基因突变及端粒酶活性表达,并对肺癌切除后的效果进行了评价.方法用PCR-SSCP方法,检测60例肺癌和10例肺良性肿瘤手术切除标本的支气管切缘(切缘病理切片无癌细胞残留)的p53基因突变及端粒酶活性的表达.结果在60例肺癌中有16例(26.7%)肺癌支气管切缘和30例(50.0%)肺癌组织存在p53基因突变及端粒酶活性阳性表达.肺癌切除组织基因突变及端粒酶活性表达为小细胞癌(100%)最高,次为鳞癌(70%)、腺鳞癌(60%)、腺癌(40%).p53基因突变及端粒酶活性表达与TNM分期有关.Ⅲ期(72.7%)最高,其次为Ⅱ期(58.3%),Ⅰ期(25.5%).术后随访3～8个月支气管切缘p53基因突变及端粒酶活性表达,10例(62.5%)发生支气管残端复发转移.而p53及端粒酶阴性者术后无残端癌复发.肺癌组织p53及端粒酶阳者中有20例(66.7%)在随访中发现癌复发转移,而p53及端粒酶阴性者中未发现癌复发转移.结论检测支气管切缘p53基因突变及端粒酶活性表达,作为肺癌切除后的"分子边界",可作为早期预测肺癌术后残端复发重要依据.     

肺肿瘤刷检脱落细胞端粒酶检测对30例中心型肺癌的诊断

目的通过对肺癌刷检脱落细胞中端粒酶活性的检测,对30例中心型肺癌进行诊断,对比检测肺癌刷检脱落细胞中端粒酶活性、肺癌活检病理学检测、肺癌刷检涂片检查癌细胞3种方法对肺癌诊断阳性率的差异,为肺癌的早期诊断提供依据.方法30例中心型肺癌行肿瘤活检进行病理学检查、刷检以检测其脱落细胞端粒酶活性及刷检涂片癌细胞检查.端粒酶PCR-ELISA试剂盒进行端粒酶活性半定量测定.资料统计分析采用χ2检验.结果30例患者肿瘤刷检脱落细胞端粒酶阳性率为86.7%(26/30),肿瘤组织刷检涂片查癌细胞及活检组织病理切片阳性率分别为90%(27/30)及80%(24/30),3者联合使用,肺癌诊断阳性率提高至100%.结论肿瘤刷检脱落细胞端粒酶检测、肿瘤组织刷检涂片查癌细胞及活检组织病理切片,3种检测方法结果无显著性差异(P>0.05).但肿瘤刷检脱落细胞端粒酶检测可作为肿瘤活检及刷检结果的补充,为中心型肺癌的一种有效的辅助检测手段,以提高其诊断的阳性率.     

端粒酶活性检测在滋养细胞肿瘤早期诊断中的探讨

目的 :观察端粒酶活性在滋养细胞肿瘤中的阳性率 ,探讨其在滋养细胞肿瘤早期诊断中的价值。方法 :用端粒重复扩增 -聚合酶链反应 (PCR+ TRAP)法测定 3 1例绒毛膜癌标本、 3 7例侵蚀性葡萄胎中的端粒酶活性。结果在 3 1例绒癌标本中发现 3 1例有端粒酶的活性表达 (10 0 % ) ,在 3 7例侵蚀性葡萄胎中发现 3 5例有端粒酶活性 (95% ) ,在 62例正常对照标本中发现有 2例端粒酶的活性表达 (3 % ) ,滋养细胞肿瘤组和正常对照组比较 ,差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :端粒酶活化是滋养细胞肿瘤中的普遍现象 ,检测端粒酶活性对早期诊断滋养细胞肿瘤有一定意义     

子宫颈病变中端粒酶活性及P63表达的研究

目的探讨宫颈病变中端粒酶活性、P63的表达水平及二者之间的关系。方法用免疫组化法检测11例慢性宫颈炎,65例各级宫颈上皮内瘤样变(ClN)及38浸润性宫颈癌组织中端粒酶活性及P63的表达,并进行对比分析。结果端粒酶活性在慢性宫颈炎中无表达,在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级中,阳性表达逐渐增强,在宫颈癌中高表达,阳性率为81.6%(31/38)。结果表明,端粒酶活性在宫颈癌、CIN中及慢性宫颈炎这3组间差异具有显著性(P<0.05)。P63表达与鳞癌组织学分级呈正相关,且其关联具有显著性(P<0.05)。结论①端粒酶活性的表达出现在宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌中,与宫颈癌的发生发展相关。②P63与鳞癌的组织学分级有关,其表达水平不仅提示鳞癌组织的恶性程度。又可作为鳞状细胞癌较可靠的诊断标记物。③在宫颈鳞癌的形成和发展中,端粒酶与P63的表达可能具有协同作用。④免疫组化检测端粒酶活性及P63,方法简便易行,对宫颈癌的病理诊断有一定意义。     

线阵CCD声带振动波形采集系统取景器的设计

为了使用线阵ＣＣＤ高速采集系统直接记录声带振动影像,通过设计取景器克服线阵ＣＣＤ成像无法实时观察这一困难。线阵ＣＣＤ高速采集系统通过取景器和喉镜相连接即可记录声带振动的波形。     

人子宫颈病变组织中P53表达及其与端粒酶hTR mRNA的关系

目的:探讨人子宫颈病变组织中P53的表达及其与端粒酶hTR mRNA表达的相关关系。方法:51例宫颈病变组织中,包括宫颈炎10例,LSIL10例,HSIL20例,SCC11例,分别利用免疫组化S-P法和原位杂交法检测病变组织中P53蛋白、端粒酶hTRmRNA的表达活性。结果:P53表达在宫颈炎组与LSIL组无差别,但显著低于HSIL和SCC组;hTR基因在HSIL/SCC中的阳性表达与CC/LSIL组以及在LSIL和HSIL/SCC之间差异有统计学意义(P<0.05);P53蛋白表达与端粒酶hTRmRNA基因表达之间具有显著相关性(P=0.042,P<0.05)。结论:端粒酶hTR和P53蛋白表达及相关性对于人子宫颈癌的早期病理诊断有较好地应用价值。同时,对该肿瘤的发生、发展规律提供一定的客观依据。     

p27、C-myc蛋白在肺鳞癌、腺癌中的表达

目的 研究p27、C-myc蛋白在肺鳞癌、腺癌中的表达与肺鳞癌、腺癌临床病理特征的关系,及二者的相关性.方法 应用免疫组织化学方法检测35例手术切除肺鳞癌、腺癌组织中p27及C-myc蛋白的表达,与10例癌旁正常肺组织比较.结果 35例肺鳞癌、腺癌组织p27蛋白阳性率为17.1%(6/35),癌旁正常肺组织的阳性率为90.0%(9/10),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);在高-中、低分化肿瘤中的阳性率比较差异有统计学意义(P=0.005);p27蛋白阳性率在不同肿瘤大小、组织学类型及有无淋巴结转移中比较差异无统计学意义(P>0.05).35例肺鳞癌、腺癌组织C-myc蛋白阳性率为85.7%(30/35),癌旁正常肺组织无表达,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).C-myc蛋白阳性率在有无淋巴结转移中比较差异有统计学意义(P=0.013);在不同肿瘤大小、分化程度及组织学类型中比较差异均无统计学意义(P>0.05);在肺鳞癌、腺癌中p27蛋白与C-myc蛋白的表达呈负相关.结论 p27蛋白在正常肺组织中表达阳性,在肺鳞癌、腺癌组织中表达明显降低,其表达与肿瘤的分化程度相关,随肿瘤分化变差而降低.C-myc蛋白在正常肺组织中无表达,在鳞癌、腺癌组织中表达明显,在淋巴结转移的肿瘤表达明显升高.提示C-myc蛋白可作为评价肿瘤预后的指标之一.

Abstract：

Objective To investigate the clinical pathology characteristics of the p27 and C-myc protein expression in lung squamous cell carcinoma and adenecarcinoma as well as the correlation between the expressions of them. Method The expressions of p27 and C-mye protein in tumor tissue of 35 cases excised during pulmonectomy for lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma patients were examined using immunochemical method,and compared with 10 cases of normal lung tissue. Results The total positive rate of p27 protein was 17.1%(6/35 ) in 35 eases of tumor tissue, but 90.0%(9/10) in normal lung tissue, and there was significant difference (P< 0.05 ). Between high-moderate and low differentiated tissue,the positive rate had significant difference (P = 0.005). There was no significant difference of p27 protein expression in patients with different tumor size and histology types, as well as with or without lymph nodes metastasis (P > 0.05 ). The total positive rate of C-myc protein was 85.7% (30/35) in tumor tissue, but no expression existed in normal lung tissue (P < 0.05). There was significant difference of C-myc expressions between the tissue with and without lymph nodes metastasis (P =0.013),but there was no significant difference in various tumor size, differentiated degree, as well as histology type(P> 0.05). The expression of p27 and C-myc in lung squamous cell carcinoma and adenecareinoma showed negative correlation.Conclusions The expression of p27 protein is positive in normal lung tissue, but shows outstanding decrease in lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma tissue. Its expression correlates with the differentiated degree. The expression of C-myc is negative in normal lung tissue but shows significant increase in lung squamous cell carcinoma and adenocareinoma tissue and its expression correlates with lymph nodes metastasis. C-myc may be a valuable marker in evaluating prognosis.     

食管癌端粒酶表达与其活性关系

目的探讨食管癌端粒酶亚基因表达及其与端粒酶活性的关系。方法采用端粒末端重复序列扩增技术检测29例食管鳞癌组织及其相应癌旁正常组织、47例食管鳞状上皮不典型增生组织的端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应技术检测端粒酶各亚单位基因mRNA的表达。结果端粒酶活性阳性检出率、亚单位基因端粒酶逆转录酶(mTERT)mRNA表达在食管癌、不典型增生组织和癌旁正常组织之间差异有统计学意义(P<0.001);而端粒酶亚单位基因hTR或TP1mRNA在3种食管组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。在105例食管癌组织、癌旁正常组织和不典型增生组织中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关(P<0.001);而hTR或TP1mRNA表达与端粒酶活性无明显相关(P>0.05)。结论端粒酶在食管癌的发生发展过程中可能起关键性作用:hTERT与端粒酶活性密切相关;端粒酶有望成为食管癌的生物标志物。     

四项肿瘤标志物联合检测在卵巢肿瘤诊断中的应用

目的探讨端粒酶活性与三种血清肿瘤标志物即糖类抗原(CA125)、铁蛋白(SF)、人白细胞介素2受体(SIL-2R)联合检测在卵巢肿瘤诊断中的应用价值。方法对65例恶性卵巢肿瘤患者、48例良性卵巢肿瘤患者及31例正常卵巢组织进行组织中端粒酶活性及其血清中肿瘤标志物CA125、SF、SIL-2R的水平检测。结果端粒酶活性与三种血清肿瘤标志物诊断卵巢恶性肿瘤的敏感性依次为端粒酶>CA125>SF>SIL-2R;特异性依次为端粒酶>SIL-2R>SF>CA125;四种肿瘤标志物进行平行试验的敏感性大幅提高(100%),进行系列试验的特异性显著提高(97.9%);其四种肿瘤标志物阳性检出率与病理分期明显相关(P<0.05)。结论端粒酶活性与三种血清肿瘤标志物联合检测对卵巢恶性肿瘤的早期诊断、高危人群的肿瘤筛查、病理分期及临床确诊有重要意义。     

端粒酶活性、HPV 16/18感染及致癌基因与宫颈癌的关系

目的:探讨端粒酶活性、HPV 16/18感染及致癌基因与宫颈癌的相关性。方法:对40例浸润型宫颈癌,110例宫颈上皮内瘤变(C INⅢ32例、C INⅡ40例、C INⅠ38例)及30例正常者的宫颈新鲜组织,用TRAP—PCR检测端粒酶活性、用FQ—PCR检测HPV l6/18DNA、用PCR方法对HPV 16/18 DNA阳性组织作HPV 16型致癌基因E 6、E 7检测。结果:宫颈癌组中端粒酶阳性38例(95.00%)(HPV 16/18+39例,17例有E 6、E 7表达),端粒酶阴性2例(HPV 16/18+1例,无E 6、E 7表达):C INⅢ级中端粒酶阳性28例(87.5%)(HPV 16/18+30例,22例有E 6、E 7表达),端粒酶阴性4例(2例HPV16/18+);C INⅡ级中端粒酶阳性12例(30%)(HPV 16/18+16例,4例有E 6、E 7表达),端粒酶阴性28例(4例HPV 16/18+);C INⅠ级中端粒酶阳性3例(7.89%)(HPV 16/18+5例,无E 6、E 7表达):而30例正常宫颈组织仅有2例(6.67%)端粒酶活性表达,1例HPV也为阳性而无E 6、E 7表达。宫颈癌和癌前病变(C INⅢ)组织端粒酶活性表达频率(P<0.01)和HPV 16/18感染率(P<0.01)及其致癌基因表达(P<0.01)显著高于良性病变(C INⅠ和C INⅡ)和正常对照。结论:端粒酶活性在宫颈癌发生中可能起到重要作用,在子宫颈损伤中端粒酶激活与HPV感染及其致癌基因的表达密切相关;对于探讨宫颈病变的进展和宫颈癌的发生发展具有重要意义。