小柴胡汤对糖皮质激素受体及其mRNA的调节作用

目的和方法:给予健康雄性小鼠(Balb/C)小柴胡汤(TSS),糖皮质激素(GC),应用受体放射配体结合分析法测定小鼠脾细胞糖皮质激素受体(GR)位点数,同时用定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法测定脾细胞内GRmRNA水平,以期从分子受体水平和基因水平探讨TSS对GR及GRmRNA的调节作用。结果和结论:(1)应用TSS后GR位点数及GRmRNA水平明显少于正常对照组,说明TSS对GR的降调是通过调节GRmRNA水平实现的;(2)TSS与GC合用时GR位点数及GRmRNA水平明显高于单独应用GC组,说明TSS可明显减弱GC对GR的降调作用。     

糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α转录激活功能的影响

目的:通过研究糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α转录激活功能的影响,探讨糖皮质激素受体β存在的生物学意义。方法:将糖皮质激素受体α的报告基因CAT和糖皮质激素受体β共转染入人骨肉瘤细胞系HOS-8603,激素处理后,用ELISA方法检测CAT活性;用定量RT-PCR方法检测糖皮质激素受体β的稳定过度表达对糖皮质激素诱导p21mRNA表达的影响。结果:糖皮质激素受体β抑制报告基因CAT的表达,随着糖皮质激素受体β转染量的增加,抑制效果越明显;糖皮质激素受体β同样可以抑制糖皮质激素对糖皮质激素受体α内源性靶基因p21mRNA的诱导。结论:糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α的转录激活功能有抑制作用,糖皮质激素受体β可能是糖皮质激素受体α的内源性抑制因子。     

人参皂甙单体Rb1对人急性早幼粒白血病细胞系增殖及糖皮质激素受体α表达的影响

目的:观察人参皂甙(GS)Rb1对人急性早幼粒白血病细胞(HL60)糖皮质激素受体α(GRα)mRNA及受体蛋白表达的调节作用和对细胞生长的影响。方法:以四唑盐比色法(MTT法)观察细胞生长,用蛋白印迹法(Western blot)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析G-Rb1对细胞的GR蛋白和GRα mRNA的改变。结果:G-Rb1能够抑制HL60细胞的生长,呈时间和剂量依赖性;经G-Rb1作用后RT-PCR和Western blot分析,细胞内GRα mRNA以及GR蛋白表达增加。结论:G-Rb1可上调HL60细胞GRα mRNA及GR蛋白的表达并抑制细胞生长。     

系统性红斑狼疮病人环孢素A受体mRNA的表达

目的 探讨静止期、活动期系统性红斑狼疮病人（SLE）外周血单个核细胞（PBMC）环孢素A受体（CyP）mRNA表达及糖皮质激素对其表达的影响,为临床应用环孢素A辅助治疗该病提供理论依据。方法 采用逆转录PCR方法,经凝胶图像半定量分析,检测患者外周血单个核细胞CyP mRNA的表达。结果 SLE病人外周血单个核细胞存在有CyPmRNA的表达,静止期较正常人差异无显著性（P＞0．05）意义,但在活动期CyPmRNA的表达较正常人和静止期病人明显降低（P＜0．01）,地塞米松处理后,活动期病人CyPmRNA的表达水平显著上升（P＜0．01）。结论 SLE病人有CyPmRNA的表达,但活动期明显下降,糖皮质激素可改善CyP mRNA的表达。     

C-Jun蛋白对糖皮质激素受体表达及转录激活能力的影响

目的观察促进与抑制c-Jun蛋白表达对糖皮质激素受体(GR)表达和转录激活能力的影响，探索c-Jun与GR功能的相互关系。方法采用基因重组技术，构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒，电穿孔法分别转染U937细胞c-Jun蛋白表达真核载体与：PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒，观察c-Jun表达对GR表达和转录激活能力的影响。结果成功构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒，转化U937细胞后GR的表达和转录激活活性有增强，而转染c-Jun表达载体pCMV-c JunGR的表达和转录激活活性有所减弱。结论c-Jun蛋白表达水平对GR的表达和转录激活活性有影响，抑制c-Jun蛋白表达，一定程度上可促进GR表达并增强其转录激活功能。     

系统性红斑狼疮病人环孢素A受体mRNA的表达

目的探讨静止期、活动期系统性红斑狼疮病人(SLE)外周血单个核细胞(PBMC)环孢素A受体(CyP) mRNA表达及糖皮质激素对其表达的影响,为临床应用环孢素A辅助治疗该病提供理论依据.方法采用逆转录PCR方法,经凝胶图像半定量分析,检测患者外周血单个核细胞CyP mRNA的表达.结果 SLE病人外周血单个核细胞存在有CyP mRNA的表达,静止期较正常人差异无显著性(p>0.05)意义,但在活动期CyP mRNA的表达较正常人和静止期病人明显降低(p<0.01),地塞米松处理后,活动期病人CyP mRNA的表达水平显著上升(p<0.01).结论 SLE病人有CyP mRNA的表达,但活动期明显下降,糖皮质激素可改善CyP mRNA的表达.     

C-Jun蛋白对糖皮质激素受体表达及转录激活能力的影响

目的观察促进与抑制c-Jun蛋白表达对糖皮质激素受体(GR)表达和转录激活能力的影响,探索c-Jun与GR功能的相互关系.方法采用基因重组技术,构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,电穿孔法分别转染U937细胞c-Jun蛋白表达真核载体与PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,观察c-Jun表达对GR表达和转录激活能力的影响.结果成功构建PAVU6-c JunsiRNA干涉质粒,转化U937细胞后GR的表达和转录激活活性有增强,而转染c-Jun表达载体pCMV-c JunGR的表达和转录激活活性有所减弱.结论c-Jun蛋白表达水平对GR的表达和转录激活活性有影响,抑制c-Jun蛋白表达,一定程度上可促进GR表达并增强其转录激活功能.     

乙型肝炎患者糖皮质激素受体亚型mRNA表达水平的研究

目的研究乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）的糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）亚型含量变化与乙型肝炎临床分型的相关性。方法应用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测正常对照组（20例）、慢性肝炎组（31例）、肝硬化组（25例）、重型肝炎组（29例）PBMC内GR-α与GR-β亚型mRNA的表达水平。结果慢性肝炎患者GR-αmRNA相对含量为（22.9±2.8）×10-2、GR-βmRNA相对含量为（2.8±0.8）×10-4;重症肝炎患者GR-αmR-NA相对含量为（36.6±3.9）×10-2、GR-βmRNA相对含量为（2.6±0.5）×10-4;肝硬化炎患者GR-αmRNA相对含量为（7.2±1.5）×10-2、GR-βmRNA相对含量为（3.6±1.3）×10-4;健康对照组GR-αmRNA相对含量为（5.6±0.5）×10-2、GR-βmRNA相对含量为（3.0±0.9）×10-4。慢性肝炎组和重症肝炎组患者GR-αmRNA表达水平与正常对照组比较均明显增高,差异有显著性（t=19.71,P〈0.001;t=23.73,P〈0.001）,各组患者GR-β表达水平与正常对照组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论乙型肝炎患者PBMC的GR-αmRNA含量变化与乙型肝炎临床分型相关。     

糖皮质激素受体α调节剂高通量筛选模型的建立及应用

目的建立不同分子作用机制的糖皮质激素受体α(GRα)调节剂高通量筛选模型,筛选新型糖皮质激素受体调节剂。方法克隆GRα的配体结合域LBD和全长基因,构建哺乳动物细胞表达载体pBIND-GAL4-GRαLBD、pTARGETGRα,分别与已构建的含GAL4响应元件5×UAS的荧光素酶报告质粒p5×UAS-luc和含有4×GRE的报告质粒pGRE-luc共转染HeLa细胞,建立两种不同机制的报告基因细胞筛选方法,通过报告基因的表达检测化合物对GRα受体转录调控功能的调节剂作用;利用实时定量PCR方法进一步验证化合物对糖皮质激素受体靶基因mRNA水平的调控作用。结果经过分别共转染表达质粒和报告质粒,GRα激动剂地塞米松可剂量依赖地诱导5×UAS-luc和4×GRE-luc两个模型的荧光素酶的表达,在5×UAS-luc模型中,最大上调倍数可达(9.0±0.2)倍,EC50值为(0.28±0.07)mmol/L,Z’因子为0.52。在4×GRE-luc模型中,最大上调倍数可达(3.2±0.3)倍,EC50值为(1.81±0.13)mmol/L,Z’因子为0.49。利用模型pBIND-GAL4-GRαLBD/p5×UAS-luc从2000多个微生物和植物来源的天然以及合成化合物中筛选得到1个微生物来源的天然产物黑麦酮酸D,黑麦酮酸D对GRα具有2~3倍的激动活性。进一步的定量PCR的结果说明黑麦酮酸D能有效上调多个GRα调控的靶基因的表达。结论两种报告基因筛选方法灵敏、稳定,可以用于GRα调节剂的高通量筛选。     

多发性骨髓瘤糖皮质激素受体研究进展

糖皮质激素是多发性骨髓瘤联合化疗的主要药物，通过与糖皮质激素受体持异结合抑制骨髓瘤细胞增殖，对糖皮质激素耐药的骨髓瘤细胞不仅糖皮质激素受体数量减少，而且功能异常。     

PMA对U937细胞CD18mRNA表达的诱导作用及其机制

目的:研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果:PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用,这种作用能分别被PKC、NF-κB抑制剂所抑制,但不能被转录因子AP-1抑制剂所抑制。结论:PMA能激活细胞的PKC,进而通过其后的信号转导通路促进CD18mRNA的表达,转录因子NF-κB为PMA刺激下的U937细胞CD18基因转录所必需,而AP-1则相反。     

小柴胡汤对大鼠肝脏胞液糖皮质激素受体的调节作用

应用放射配体结合法检测了４０只ＳＤ雄性大鼠肝胞液的糖皮质激素受体（ＧＣＲ）。发现单纯使用糖皮质激素（ＧＣ）组和单纯使用小柴胡汤组大鼠ＧＣＲ数目均明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），而小柴胡汤与ＧＣ合用组ＧＣＲ数目明显高于单纯使用ＧＣ组（Ｐ＜０．０１）。各组Ｋｄ值无显著差异。提示小柴胡汤既具有ＧＣ样作用，又能使ＧＣ引起的ＧＣＲ降调作用明显减弱。     

CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk mRNA表达的调节作用

目的　检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节蛋白激酶信使RNA(ErkmRNA)的表达,探讨降钙素 基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织的保护作用。　方法　采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺 血再灌注模型,采用原位杂交及显微图像分析方法检测海马及皮质内Erk的表达。　结果　大鼠缺血再灌注海马 及皮质内ErkmRNA较正常组增多(P<0.05),而注射CGRP或NGF后ErkmRNA明显高于缺血再灌注组(P< 0.01),两者联合应用效果更加显著(P<0.05)。　结论　CGRP及NGF可能参与缺血神经元ErkmRNA的调节,两 者对缺血神经元有协同修复作用。     

胰岛淀粉样多肽对阿尔茨海默病小鼠脑组织中LncRNA和mRNA表达谱的影响

目的:探讨胰岛淀粉样多肽（IAPP）对阿尔茨海默病（AD）小鼠脑组织中长链非编码RNA（LncRNA）和信使RNA（mRNA）表达谱的影响。方法:选取7月龄雄性APP/PS1转基因AD模型小鼠10只,体质量20～30 g。将AD模型小鼠按数字表法随机分为IAPP干预组和对照组,每组5只。IAPP干预组小鼠腹腔内注射0....     

免疫反应对糖皮质激素受体的影响和意义

本文采用绵羊红细胞腹腔注入C_(57)BL小鼠产生抗绵羊红细胞的免疫反应。观察小鼠在免疫反应过程中,其脾脏淋巴细胞糖皮质激素受体(GCR)数的变化。发现在绵羊红细胞致敏后第五天小鼠脾淋巴细胞GCR数明显高于对照组(P<0.005),第七天达高峰,第十一天恢复至正常。用Dex抑制由植物血凝素(PHA)诱导的小鼠脾脏淋巴细胞的转化探讨致敏鼠脾淋巴细胞GCR变化的意义。结果提示Dex对淋转抑制程度可能与淋巴细胞GCR数有关。本文还用上述方法研究了妊娠小鼠,发现妊娠母体内脾淋巴细胞GCR数明显高于未孕小鼠(P<0.005),这在调节母胎免疫反应中有一定意义。     

PAVU6-cJun siRNA干涉质粒的构建及对糖皮质激素受体表达与转录激活能力的影响

采用RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术将合成的两段有回文结构的c-Jun互补cDNA序列插入PAVU6siRNA表达载体,构建PAVU6-cJunsiRNA干涉质粒,电转化U937细胞,观察沉默c-Jun的基因表达对GR蛋白表达和转录激活能力的影响,探讨c-Jun与GR功能的相互关系。PAVU6-cJunsiRNA转化U937细胞后GR的表达和转录激活活性均有所增强。提示抑制U937细胞c-Jun蛋白表达,在一定程度上可促进GR表达及增强其转录激活功能。     

不同雌激素对大鼠海马和脑皮质区域雌激素受体α和β表达的差异性调节研究

目的:探讨不同种类雌激素药物对雌性去势大鼠海马和脑皮质区域雌激素受体(estrogenreceptor,ER)的调节差异。方法:雌性去势大鼠分别给予倍美力或补加乐持续灌胃3个生理周期,采用半定量RT-PCR法检测雌激素受体ERα、ERβ的mRNA表达,免疫组化法检测ERα、ERβ蛋白的分布及表达。结果:倍美力组海马和脑皮质ERαmRNA表达均显著低于去势对照组,ERα蛋白在海马中相对表达量也低于对照组,但在脑皮质中表达无改变;该组上述两个区域中ERβmRNA以及脑皮质ERβ蛋白的表达无显著改变,仅海马ERβ蛋白表达升高。补加乐组脑皮质和海马ERβmRNA和蛋白表达均显著高于去势对照组,海马ERαmRNA表达也高于对照组,但脑皮质ERαmRNA及脑皮质和海马ERα蛋白的表达水平均无显著改变。结论:两种不同种类雌激素药物对雌性去势大鼠认知区域中ERα、ERβ表达的调节水平存在显著差异,这可能是选用不同的雌激素药物进行激素替代治疗产生的保护认知疗效存在差别的机制之一。     

细菌超抗原SEB对皮炎局部糖皮质激素受体β表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对于皮炎局部糖皮质激素受体β(GRβ)的影响。方法 1%DNCB重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建特应性皮炎动物模型,以未经处理的模型小鼠为对照组,并分别用SEB、SEB+地塞米松、地塞米松处理该动物模型。通过HE染色观察组织病理变化,计数真皮内炎性细胞数量来反映不同处理组皮炎的变化情况,采用q RT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测糖皮质激素受体β(GRβ)的m RNA和蛋白表达。结果在利用DNCB构建的Balb/c小鼠特应性皮炎动物模型中,真皮内炎性细胞数量明显增加;与未经处理的皮炎组相比,SEB处理后炎性细胞显著增加,地塞米松处理后炎性细胞显著减少,但SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;此外,在SEB处理的皮炎组以及SEB+地塞米松处理的皮炎组,GRβm RNA和蛋白的表达均显著上调,但SEB单独处理的皮炎组GRβm RNA和蛋白的表达上调情况更为显著。结论细菌超抗原(SEB)在皮炎局部诱导了GRβ的表达升高,在外用糖皮质激素快速减敏过程中起到了重要的作用。     

原发性癫痫患者糖皮质激素和糖皮质激素受体改变的研究

用放射配体结合分析，测定了４１例（男１６例，女２５例）原发性癫痫患者外周血白细胞糖皮质激素受体（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＧＲ），同时用放射免疫分析测定了患者血浆皮质醇（Ｆ），即糖皮质激素（ｇｌｕｃｏｃｒｔｉｃｏｉｄＧＣ），并与正常对照组比较。结果表明，无论年龄、性别及服用何种抗痫药物，原发性癫痫患者的ＧＣ都明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）；ＧＲ都明显低于对照组，（Ｐ〈０．０     

糖皮质激素对小G蛋白RhoB的调节作用及其可能机制

目的 :小G蛋白Rho家族介导的信号途径在维持细胞的形态 ,促进细胞的运动迁移 ,调节肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡以及侵袭中具有重要作用。糖皮质激素受体 (glucocorticoid ,GR)作为配体依赖性的转录因子 ,在与配体结合后可以通过调节靶基因的转录 ,调节多种不同组织来源的肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡。鉴于此 ,我们推测糖皮质激素对细胞增殖分化和凋亡的调控可能部分是通过调节小G蛋白Rho的表达而实现的。本研究的目的是利用表达有内源性GR的人卵巢癌细胞系HO -8910为模型 ,观察糖皮质激素对小G蛋白Rho表达的调节作用 ,并探讨其可能的作…