丹参酮II_A对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的调控

目的观察丹参酮IIA对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-β1基因启动子活性的作用。方法应用MTT法观察丹参酮IIA对大鼠系膜细胞增殖的作用;将不同长度的人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF 2.14,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的丹参酮IIA(1、5、10 mg/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果10 mg/L的丹参酮IIA对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。丹参酮IIA浓度为1、5 mg/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性无影响,当增大丹参酮IIA浓度为10 mg/L时对重组体phTGF2.14的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。结论丹参酮IIA能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10 mg/L时对人TGF-β1基因启动子活性也具有抑制作用。     

洛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1基因启动子活性的调控

目的:观察洛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-β1基因启动子活性的作用.方法:(1) 应用MTT法观察洛伐他汀(10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)对大鼠系膜细胞增殖的作用;(2)将不同长度的人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF2.14和phTGF1.12,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的洛伐他汀(10-7、10-5mol/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性.结果:(1)不同浓度洛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01).(2)洛伐他汀浓度为10-7mol/L时对重组体phTGF2.14及phTGF1.12的表达活性无影响,当增大洛伐他汀浓度为10-5mol/L时对重组体phTGF2.14及phTGF1.12的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01).结论:洛伐他汀能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10-5mol/L时对人TGF-β1基因启动子活性也具有抑制作用.     

肝细胞生长因子对系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的影响

目的观察肝细胞生长因子（HGF）对大鼠系膜细胞增殖及对TGF—β1启动子活性的作用。方法应用MTT法观察HGF（0、0．1、1．0、1,0和100．0ng／mL）对大鼠系膜细胞增殖的影响；构建含不同长度人TGF—β1基因启动子片段的重组体phTGF2．14、phTGF1、12，以氯霉素乙酰基转移酶（CAT）为报告基因，并利用脂质体法将其转染至大鼠系膜细胞中，ELISA方法检测报告基因CAT的活性，以观察不同浓度的HGF（1．0、10、0ng／mL）对TGF—β1启动子活性的作用。结果大鼠系膜细胞经不同浓度的HGF干预后，各实验组与对照组相比细胞增殖水平差异无显著性，P〉0.05。在系膜细胞中，HGF的浓度分剐为1．0和10、0ng／mL时对重组体phTGF2、14及phTGF1、12的表达活性无抑制作用。结论HGF不能直接抑制大鼠系膜细胞增殖。在系膜细胞中HGF对TGF—β1启动子的表达活性无作用，提示其桔抗TGF—β1生物学作用的靶点并不是发生在基因转录水平。     

三种抗纤维化细胞因子对HepG2细胞转化生长因子-β1基因启动子转录活性的影响

目的:观察抗肝纤维化细胞因子白介素10(IL-10)、肝细胞生长因子(HGF)和干扰素γ(IFN-γ)对含不同-509C＞T基因型的转化生长因子β1(TGF-β1)基因上游启动子转录活性的影响,探讨细胞因子可能的抗肝纤维化机制.方法:以TGF-β1基因上游5'侧翼区启动子(-1328 ～ 812)含有-509C＞T 位点的片段作为靶序列,将其与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF2.14C、phTGF2.14T,脂质体法转染至人肝癌细胞系HepG2,应用IL-10(4 ng/ml)、HGF(10 ng/ml)和IFN-γ(20 ng/ml)作用于转染后HepG2细胞,ELISA法测定报告基因的表达.结果:转染phTGF2.14C的HepG2细胞报告基因活性明显高于转染phTGF2.14T者(P＜0.01).IFN-γ对转染phTGF2.14C、phTGF2.14T的HepG2细胞TGF-β1启动子转录活性均具有明显的抑制作用(P＜0.05),HGF对转染phTGF2.14C HepG2细胞的TGF-β1启动子转录活性具有促进作用(P＜0.05),IL-10对两种情况下HepG2细胞TGF-β1启动子转录活性调控作用均不显著.结论:C等位基因可明显增强TGF-β1基因启动子转录活性;IFN-γ可能通过抑制TGF-β1基因启动子转录活性抑制肝纤维化,而HGF、IL-10的抗纤维化作用可能与此途径无关.     

大黄酸及大黄素对人肾小管上皮细胞增殖及TGF—β1启动子活性的调控作用

目的：观察大黄酸和大黄素对人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖及对人转化生长因子-β1（TGF-β1）基因启动子活性的作用。方法：应用MTT法观察不同浓度大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml）对人肾小管上皮细胞增殖的作用;将人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因组成重组体phTGF2．14,采用脂质体法转染至人肾小管上皮细胞中,分别加入不同浓度的大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml和50μg/ml）进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果：大黄酸和大黄素各浓度组对人肾小管上皮细胞均具有明显的抑制HK-2细胞增殖的作用（P〈0．01）,且呈剂量依从性;大黄酸和大黄素浓度为lμg/ml和10μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性无影响,当增大其浓度为50μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性有抑制作用,其抑制率分别为38．0％和36．0％,与对照组比较均有显著差异（P〈0．01）。结论：大黄酸和大黄素能够抑制人肾小管上皮细胞增殖,当浓度为50μg/ml时对人TGF-β1基因启动子活性具有一定的抑制作用。     

丹参酮Ⅱ_A对心衰心室重构I型胶原基因启动子活性的影响

目的探讨心衰心室重构中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的调控作用和中药单体丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSN)药物干预的影响环节。方法将人α1(I)胶原基因上游-2.5 Kb长度的启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠心肌成纤维细胞和ELISA法测定CAT活性的方法,观察不同浓度TSN对pCOLH2.5活性及由AngⅡ诱导的pCOLH2.5活性的影响。结果AngⅡ可剂量依赖性地促进pCOLH2.5的活性,表现为其剂量增大时重组体CAT活性相对增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。TSN能抑制pCOLH2.5的活性,并随着药物浓度的增加,其抑制作用亦增强。与对照组、低浓度组比较,差异有显著性(P<0.05)。而且在与AngⅡ共同作用时,pCOLH2.5 CAT的升高幅度明显减少(P<0.01)。结论在心肌成纤维细胞中,AngⅡ具有促进人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的转录活性作用。TSN能下调人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用。     

丹参酮ⅡA对心衰心室重构Ⅰ型胶原基因启动子活性的影响

目的探讨心衰心室重构中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的调控作用和中药单体丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSN)药物干预的影响环节.方法将人α1(Ⅰ)胶原基因上游-2.5 Kb长度的启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠心肌成纤维细胞和ELISA法测定CAT活性的方法,观察不同浓度TSN对pCOLH2.5活性及由AngⅡ诱导的pCOLH2.5活性的影响.结果 AngⅡ可剂量依赖性地促进pCOLH2.5的活性,表现为其剂量增大时重组体CAT活性相对增加,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).TSN能抑制pCOLH2.5的活性,并随着药物浓度的增加,其抑制作用亦增强.与对照组、低浓度组比较,差异有显著性(P＜0.05).而且在与AngⅡ共同作用时,pCOLH2.5 CAT的升高幅度明显减少(P＜0.01).结论在心肌成纤维细胞中,AngⅡ具有促进人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的转录活性作用.TSN能下调人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用.     

促肝细胞生长素对大鼠肝星状细胞增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响

目的:探讨促肝细胞生长素(pHGF)对大鼠肝星状细胞HSC-T_6增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响。方法:(1)采用MTT法分析pHGF对HSC-T_6细胞增殖的影响。(2)构建含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列(启动子)与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体 pCOLH1.5,以脂质体法转染HSC-T_6细胞,ELISA法测定不同浓度pHGF作用24 h后,转染了重组体质粒的HSC-T_6细胞的CAT表达量。结果:(1)不同浓度pHGF对HSC-T_6细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。(2)pHGF在200 μg/ml时对转染重组体质粒pCOLH1.5的HSC-T_6细胞的CAT活性具有明显的抑制作用,与对照组相比差异显著(P<0.05);增加pHGF浓度至400μg/ml时,对CAT活性抑制更为明显,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。结论:pHGF对HSC-T_6细胞增殖具有明显的抑制作用;对α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性具有负性调控作用。     

PDGF-BB和SDZ RAD对血管平滑肌细胞p27基因启动子活性和p27 mRNA表达的影响

目的 探讨重组大鼠血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)和抗增殖剂SDZ RAD对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)p27基因启动子活性和p27 mRNA表达的影响.方法 构建含p27基因启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶(chloramphenicol acetyl transferase,CAT)报告基因的重组体pXp27,将这个重组体瞬时转染大鼠VSMC,加入PDGF-BB和SDZ RAD干预,测定CAT活性.用RT-PCR法测定其对p27 mRNA表达的影响.结果 10 ng/ml的PDGF-BB使转染后的重组体CAT活性降低,且使VSMC p27 mRNA表达量显著下降.10 ng/ml的SDZ RAD则使重组体CAT活性增高,并使VSMC p27 mRNA表达量显著增加.结论 PDGF-BB或SDZ RAD分别在基因转录水平或促进p27抑制基因启动子活性,进而减少或增加其mRNA的表达.     

丹参酮ⅡA对前列腺成纤维细胞增殖及胶原表达的影响

目的研究丹参酮ⅡA对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的前列腺成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,初步探讨丹参酮ⅡA是否具有治疗前列腺组织纤维化的潜力。方法通过消化法原代培养和差速贴壁法纯化获得PrF,分别用5 ng/mL的TGF-β1和不同质量浓度的丹参酮ⅡA(25、2.5、0.25mg/L)对其进行处理,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达。结果 5 ng/mL TGF-β1可明显诱导PrF的增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达(P<0.01)。25、2.5、0.25 mg/L质量浓度的丹参酮ⅡA均能显著抑制TGFβ1诱导的细胞异常增殖(P<0.05或P<0.01),且呈良好的量效关系。25 mg/L的丹参酮ⅡA对Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达有抑制作用(P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可抑制TGF-β1诱导的PrF异常增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达,具有抗前列腺纤维化的潜力。     

维拉帕米阻断TGF-β1诱导的α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活

目的：探讨维拉帕米对α1(Ⅰ）胶原基因启动子活性的影响。方法：将人α1(Ⅰ）胶原基因启动子重组体pCOLH1.5、pCOLH2.5转染至大鼠肾小球纱膜细胞，分别经不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1）和纺拉帕米处理后，ELISA法测定细胞CAT表达水平。结果：TGF－β1作用后，pCOLH1.5和pCOLH2.5的CAT活性明显增加，分别为对照组的1.498和1.551倍；维拉帕米对两上重组体的CAT表达均有抑制作用，与单纯TGF－β1组比较，维拉帕米加TGF－β1组pCOLH2.5的CAT活性明显降低（维拉帕米低浓度组P＜0.05，高浓度组P＜0.01）。结论：维拉帕米不仅直接抑制启动子的活性，而且还部分阻断TGF－β1诱导的α1(Ⅰ）胶原基因启动子激活。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

丹参酮ⅡA对大鼠肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导大鼠肺成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA干预肺纤维化的机制。方法体外培养大鼠肺成纤维细胞(HFL-1),选取生长状态良好的对数期细胞分为正常组、TGF-β1组及丹参酮ⅡA低(L)、中(M)、高(H)剂量组。除正常组外,余四组予以10ng/m L TGF-β1诱导HFL-1纤维化24h,同时丹参酮ⅡA低、中、高剂量组分别予2μmol/L、5μmol/L和10μmol/L丹参酮ⅡA处理24h,ELISA法测定各组细胞中TGF-β1受体表达,荧光定量PCR法及免疫印迹法检测Smad2、Smad7表达情况。结果与正常组比较,HLF-1细胞经10ng/m L TGF-β1诱导后细胞TGF-β1受体和Smad2表达量增加[(0.19±0.23)比(1.41±0.12)、(1.00±0.12)比(1.90±0.12),P<0.01],Smad7表达量降低[(1.00±0.15)比(0.57±0.09),P<0.01];与TGF-β1组比较,10μmol/L丹参酮ⅡA处理后TGF-β1受体和Smad2的表达量均有下降趋势[(1.90±0.23)比(1.53±0.12),(1.90±0.12)比(1.38±0.06),P<0.01],Smad7表达量升高[(0.57±0.08)比(0.74±0.11),P<0.01]。结论丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad2及TGF-β1受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达,从而发挥抑制肺纤维化的作用。     

丹参酮ⅡA对肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导大鼠肺成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响,阐明丹参酮ⅡA干预肺纤维化的机制。方法：体外培养大鼠肺成纤维细胞,经TGF-β1、TGF-β1/丹参酮ⅡA处理24h,用ELISA法测定细胞中TGF-β1受体表达情况,荧光定量PCR法及免疫印迹法检测Smad2、Smad7表达情况。 结果：TGF-β1处理后TGF-β1受体和Smad2表达量增加,Smad7表达量降低,丹参酮ⅡA处理后TGF-β1受体和Smad2的表达量均有下降趋势,Smad7表达量升高。结论：丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad2及TGF-β1受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达,从而发挥抑制肺纤维化的作用。     

转化生长因子β1启动子质粒重组体的构建及活性研究

目的:探讨调控TGFβ1基因高水平转录的启动片段.方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF-β1基因转录起始位点上游5'端-1328～ 812 bp的片段中不同长度的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒pCAT3-enhancer重组成5个重组体,并将其转染至大鼠肝里状细胞株中,测定细胞的CAT的表达水平并比较各重组体的启动子活性.结果:-308～ 812 bp序列具有较强的启动活性,-611～ 812 bp次之,其他几个重组体的启动活性从高到低的排序依次为1328～ 812 bp、-867～ 812 bp、 227～ 812 bp.结论:TGF-β1基因启动子片段中,-308～ 812 bp、-611～ 812 bp、1328～ 812 bp重组体具有较强的启动活性,是进一步研究人TGF-β1基因转录调控的重要靶序列.     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及人I型胶原α2(I)基因启动子活性的影响

目的:通过研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的调控,了解AngⅡ在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用.方法:①SD大鼠胸主动脉VSMC体外培养,分别在24、48和72h采用MTT法检测不同浓度的AngⅡ(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)对VSMCs增殖的影响.②构建含人α2(Ⅰ)前胶原基因5'侧翼序列-2.4kb和-1.6kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体,用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞,CAT-ELISA测定AngⅡ10-7mol/L对重组体的作用.结果: ①AngⅡ剂量依赖性促进VSMC增殖.②AngⅡ组的相对CAT表达量明显增高,有统计学意义.结论:AngⅡ可促进VSMC增殖,并可以在转录水平上调人α2(Ⅰ)前胶原基因表达,从而促进动脉粥样硬化的形成和发展.     

转化生长因子β1对胰腺星状细胞中结缔组织生长因子基因的调控作用

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子活性的调控作用。方法 将大鼠CTGF基因启动子片段与荧光素酶报告基因组成重组体pcTGF-luc。采用脂质体转染方法将该质粒转至原代分离并培养的2～5代大鼠胰腺星状细胞(PSCs)中,24h后分别在不同时间和不同浓度的体外CTGF-β1刺激下用Dual-luciferase报告系统检测相应荧光素酶的活性。结果 TGF-β1表现为以剂量和时间依赖的方式上调PSCs中CTGF基因启动子活性,TGF-β1在短时间内即可使CTGF基因启动子活性明显增高,并达到高峰,且能有效地保持至36h左右。结论 在PSCs中,TGF-β1主要在转录水平调节CTGF表达,较小浓度和较短时间即可使CTGF启动子活性增强。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及人Ⅰ型胶原α2（Ⅰ）基因启动子活性的影响

目的：通过研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的调控，了解AngⅡ在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用。方法：①SD大鼠胸主动脉VSMC体外培养，分别在24、48和72h采用MTF法检测不同浓度的AngⅡ(10^-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L)对VSMCs增殖的影响。②构建含人α2(Ⅰ)前胶原基因5侧翼序列-2．4kb和-1．6kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体，用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞，CAT—ELISA测定AngⅡ10^-7mol／L对重组体的作用。结果：①AngⅡ剂量依赖性促进VSMC增殖。②AngⅡ组的相对CAT表达量明显增高，有统计学意义。结论：AngⅡ可促进VSMC增殖，并可以在转录水平上调人α2(Ⅰ)前胶原基因表达，从而促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对乳腺癌细胞株的作用及其机制研究

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠对雌激素受体(ER)、表皮生长因子受体-2(HER-2)表达不同的人乳腺癌细胞株(MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231)的作用,并探讨其作用机制。方法:以0.025~0.8μg/ml不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠处理MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231细胞,MTT法测定不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠对三种乳腺癌细胞株细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠处理后,MCF-7细胞增殖活性降低,凋亡指数升高,细胞周期分布改变,G0/G1期细胞数增加,S期和G2/M期细胞数减少;SKBR-3和MDA-MB-231细胞增殖活性、细胞凋亡及细胞周期无明显改变。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠对ER阳性乳腺癌细胞具有生长抑制作用,其作用机制可能与凋亡诱导、细胞周期阻滞有关;丹参酮ⅡA磺酸钠对ER阴性、HER-2阳性和ER阴性、HER-2阴性乳腺癌细胞无明显生长抑制作用。     

洛伐他汀对多囊肾囊肿衬里上皮细胞α1(Ⅰ)胶原启动子活性的影响

目的观察洛伐他汀对人常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞COLⅠα1基因启动子活性的影响。方法用FuGENE转染法将pCOLH0.27或pCOLH2.5重组体瞬时转染至ADPKD囊肿衬里上皮细胞,用不同浓度的洛伐他汀和香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)处理转染细胞,24h后,用ELISA法测定细胞报告基因CAT表达量。以未加入药物孔的CAT值为1,计算出实验孔CAT的相对表达量。结果瞬时转染pCOLH0.27或pCOLH2.5的ADPKD囊肿衬里上皮细胞,经10或50μmol/L洛伐他汀处理24h后,pCOLH0.27与pCOLH2.5的活性均受明显抑制。10μmol/L洛伐他汀使pCOLH0.27与pCOLH2.5活性分别下降22%和26%(P<0.05),50μmol/L洛伐他汀使pCOLH0.27与pCOLH2.5活性分别下降37%和39%(P<0.01)。洛伐他汀对pCOLH0.27与pCOLH2.5活性的抑制水平相近。GGPP可逆转这一作用(P<0.01)。结论洛伐他汀对ADPKD囊肿衬里上皮细胞COLⅠα1基因启动子活性有明显抑制作用。洛伐他汀的这一作用可能与其抑制GGPP产生,从而阻断促纤维化细胞因子信号转导有关。