免疫酶法检测人的ANA

免疫酶法检测人的ＡＮＡ罗祝泉（广州军区广州总医院病理科，广州５１００１０）抗核抗体（ＡＮＡ）传统的方法是用间接免疫荧光法来检测，由于受设备条件限制，使一些单位不能开展．用免疫酶法来检测，亦能获得与间接免疫荧光法相同的效果．现介绍如下．１材料和方法１．...     

制备胶体金标记抗体的新方法

近年来免疫细胞化学方法发展迅速。其中应用胶体金标记抗体的免疫金染色法(IGS,用于电镜水平)和免疫金银染色法(IGSS,用于光镜水平),与目前我国较广泛应用的免疫荧光法或免疫酶法相比较,具有如下优越性:染色步骤简便,不需用有致癌性的显包底物:可同时应用于光镜和电镜;电镜下分辨率高,不影响原有超微结梅的观察;可进行双重或多重免疫标记;敏感性比免疫荧光法及免疫酶法高,是迄今最敏感的免疫细胞化学方法。国外商品化供应的胶体金标记抗体,制备过程中需用超速离心机离心,不仅成本高,售价昂贵,而且离心后的胶体金     

免疫电极的研究进展

免疫电极是生物传感器的一种,把免疫生物学与电极技术结合.利用抗原抗体间特异性反应,转换成电信号来定量测定抗原或抗体的含量。本文介绍了直接法和间接法免疫电极的基本原理、应用及存在问题,重声、以化学放大的酶免疫电极为中心,综述了各种间接测量方法,如不成膜法、简单竞争法、简单夹心法、抗原酶法、酶通道法、不需酶底物型、介体法、离子型等。     

用重组抗原检测鼻咽癌病人血清IgA／gp125抗体

用重组抗原检测鼻咽癌病人血清ＩｇＡ／ｇｐ１２５抗体薛绍礼１皮国华２谷淑燕２李平１抗Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）ＩｇＡ抗体，是鼻咽癌（ＮＰＣ）早期诊断的一个重要血清学指标。曾先后用免疫荧光法（ＩＦ）和免疫酶法（ＩＥ）进行检测［１...     

免疫荧光和免疫酶染色检查沙眼衣原体包涵体

用提纯的我国分离的沙眼衣原体TE55株抗原免疫动物,制备了抗沙眼衣原体的抗体。用免疫荧光和免疫酶染色可以确定感染细胞中沙眼衣原体的包涵体。免疫荧光法测定的抗体滴度要稍高于免疫酶法而且免疫荧光法可观察到不同形态的包涵体。     

免疫酶法与ELISA法检测EB病毒VCA-IgA的比较

为探讨免疫酶法与ELISA在鼻咽癌诊断中的临床价值,检测鼻咽癌组患者与健康对照组血清EB病毒壳抗原抗体,并对两种检测方法的结果进行分析。结果表明：177例鼻咽癌患者中,免疫酶法检测EB-VCA-IgA阳性率高92．1％（163／177）,而国产试剂和进口试剂ELISA法检测结果阳性率都较低,分别为65．0％（115／177）和67．2％（119／177）,有显著性差异（P〈0．005）;在90名对照组血清EB-VCA-IgA,免疫酶法的阴性率为100％（90／90）,ELISA法中的国产和进口试剂的阴性率分别为：98．9％（89／90）和95．6％（86／90）,无显著性差异（P〉0．05）。为此免疫酶法检测EB-VCA-IgA的灵敏度较高,更适合用于鼻咽癌的普查、协助诊断等,具有实际临床意义。     

呼吸道病毒抗原片在不同温度下保存时间的观察

呼吸道病毒抗原片在不同温度下保存时间的观察段佩若，赵华人类急性呼吸道感染中的９０％～９５％系病毒引起，其重要性远远超过细菌和其他微生物。因此，对它们的诊断引起国内外学者的重视。目前检测呼吸道病毒的免疫荧光法（ＩＦＡ），免疫酶法以及ＡＰＡＡＰ桥联法已在...     

胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用

免疫细胞化学系将细胞或组织中特异的抗原抗体反应以组织化学的方法显示出来,显示荧光反应的称为荧光抗体法,显色反应的如酶标抗体法和综合各种标记抗体法基础上产生的非标记抗体过氧化物酶—抗过氧化物酶法(unlabelled antibody peroxidase-antiperoxidase method)简称PAP法。免疫组织化学电镜(简称免疫电镜)即将免疫细胞化学应用到电镜水平。在八十年代的免疫细胞化学电镜领域内,胶体金标记法(简称金标法)或免疫金染色法(immunogold staining proced-     

生物素-亲合素ELISA法对ANEPⅢ寡核苷酸适配子亲和力的定量测定

目的： 定量分析SELEX（systematic evolution of ligands by exponential enrichment）筛选中寡核苷酸适配子的亲和力.方法： 利用生物素和亲合素放大系统（BA-辣根过氧化物酶复合物系统）应用于ELISA的实验策略, 对ANEPⅢ寡核苷酸适配子的亲合力进行测定.结果： 确定BA-ELISA方法定量分析测定寡核苷酸适配子的基本实验步骤.结论： BA-ELISA法可以替代IFMA（免疫荧光测定试验）或放射性荧光标记方法进行寡核苷酸适配子的亲和力的定量测定.     

免疫酶法检测人外周血T淋巴细胞亚群的初步探讨

用抗人淋巴细胞单克隆抗体检测外周血淋巴细胞亚群的主要方法很多。本文采用免疫酶法检测了人外周血T淋巴细胞亚群,并与间接免疫荧光法进行了对比,现将结果报道如下。 材 料 和 方 法 一、免疫酶法检测人外周血T淋巴细胞亚群(0KT_3ODT_OKT_3)试剂盒由中国科学院武汉病毒研究所供给。荧光法单克隆抗体(OKT_3OKT_4OKT_3)由卫生部武汉生物制品研究所提供。 二、外周血淋巴细胞的分离:取正常人外周血3ml,加肝素抗凝。按常规方法分     

鼻咽癌血清学检测方法的改进

目的 改进现有鼻咽癌血清学早期诊断方法,提高检测灵敏度.方法 用链霉亲和素.生物素放大免疫酶法与既有常规免疫酶法对鼻咽癌防治示范基地所取294份普查血清IgA/VCA,IgA/EA抗体进行血清学检测,并用SPSS统计软件对检测结果进行χ2检验和t检验.结果 共检测30岁以上294份普查人群血清,其中鼻咽癌患者血清106份,健康人血清188份.改进的链霉亲和素一生物素放大免疫酶法与既往已有的免疫酶法相比,血清IgA/VCA、IgA/EA抗体的检测阳性率增加;检测血清抗体的几何平均数明显提高.结论 改进方法可以提高血清学检测的灵敏度,同时保证了检测结果的特异性,提高了鼻咽癌的检出率,可以应用于鼻咽癌早期筛查工作.     

神经肽Y、P物质在扬子鳄泄殖腔器内的分布

目的：观察含神经肽Y（NPY）、P物质（SP）神经在扬子鳄泄殖腔壁内的分布情况。方法：免疫组织化学ABC法及免疫荧光法。结果：扬子鳄泄殖腔壁内SP免疫反应（SP－IR）阳性神经纤维多见于肌层,也见于外膜、呈细线状或点线状,肌层内的SP－IR神经纤维与平滑肌纤维平行走行或构成网络状;NPY免疫反应（NPY－IR）神经纤维呈细线状,密度较稀,主要见于肌层,也近似与平滑肌纤维平行走行,免疫荧光法还证实,肌层内有散在分布的、多呈椭圆形的NPY－IR阳性神经元胞体,并见有突起与周围的神经纤维形成联系。结论：扬子鳄的泄殖腔壁也存在有SP、NPY能神经分布。     

用小鼠艾氏腹水癌细胞检测抗核抗体

<正> 常用检测抗核抗体(ANA)的方法为免疫荧光法和免疫酶法,其所用抗原片多为小鼠肝匀浆片或传代细胞(HEP-2细胞系),因来源困难在基层实验室难以开展。我们试用小鼠艾氏(Ehrlich)腹水癌细胞为ANA抗原片,并与其他抗原片比较,发现其灵敏度高,结果清晰,适于大量制备。     

应用蛋白质A-琼脂糖-4B亲和层析柱纯化兔血清免疫球蛋白G制备羊抗兔IgG血清

近年来在不少免疫学科研实验中,需要高纯度和高效价羊抗兔IgG免疫血清作为第二抗体,应用于多种免疫学实验方法中,如放射免疫分析法,免疫荧光法,免疫酶法及ABC法等。本实验采用蛋白质A—琼脂糖—4B亲和层析柱,从兔血清中一步提纯免疫球蛋白G,用     

NDVLaSota株P、NP蛋白基因表达载体的构建及鉴定

目的 构建新城疫病毒LaSota株NP、P基因的真核表达载体,为研究NP、P蛋白机理及反向遗传操作系统奠定基础.方法 利用RT-PCR法扩增出新城疫病毒LaSota株的NP、P基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中,并再次亚克隆到真核载体pcDNA3.1（＋）上,得到重组质粒pcDNA3.1（＋）-NP、pcDNA3.1（＋）-P,瞬时转染到293、BHK-21 细胞中,免疫酶法及Western Blot法检测表达情况.结果 经免疫酶法及Western Blot法分别检测到了P、NP蛋白在两种细胞的表达.结论 构建的两个重组质粒pcDNA3.1（＋）-NP、pcDNA3.1（＋）-P 在293、BHK-21两种细胞中均可稳定表达,为即将进行的NDV反向遗传操作系统奠定基础.     

抗BrdU单克隆抗体在凋亡细胞检测中的应用研究

目的 探讨将自制的抗BrdU单克隆抗体（mAb）用于TUNEL法检测凋亡细胞的可能性。方法 分别用TUNEL免疫荧光法和免疫组化技术，检测地塞米松诱导的凋亡胸腺细胞和射线照射的大鼠皮肤组织中的凋亡细胞。结果 用TUNEL免疫荧光法和TUNEL免疫且化法法检测发现，凋亡细胞的细胞核分别呈明显的荧光或酶底物着色，而非凋亡细胞不显示荧光或无酶底物着色。结论 该抗BrdU mAb用于TUNEL法，能够检测单个细胞标本或组织切片中的凋亡细胞，为国内开展凋亡细胞的检测，提供了一种新的方法。     

OKT单克隆抗体检测人T淋巴细胞的免疫酶法

应用OKTMcAb检测人T淋巴细胞通常采用间接免疫荧光法(IFA),除需要配备贵重的荧光显微镜外,又因荧光较弱而易退减,判断结果常带有一些主观性。为此,我们研究建立了免疫酶法。     

丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定

目的探索丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３抗原在正常人群及各类临床病人血清及肝组织中分布状况。方法用人工合成的ＨＣＶ核心抗原Ｃ３３肽（含３３个氨基酸）与小鼠血清白蛋白,经异型双功能交联剂ＳＰＤＰ连接后免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,制成２株Ｃ３３肽单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,分别用作包被抗体和酶标抗体,建立检测血清中Ｃ３３肽抗原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,共检测了１２３６例各类病人。并用免疫荧光及固相免疫酶法检测肝活检组织中的ＨＣＶＣ３３肽抗原。结果急性丙型肝炎（ＨＣ）患者,Ｃ３３肽的阳性检出率为１４．０％（６／４３）;仅抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性患者Ｃ３３肽的阳性检出率为８．８％（３５／３９６）;慢性丙型肝炎患者为６．５％（４／６２）;白血病患者为４．３％（１／２３）;血透病人为３．３％（１９／５７６）;普通住院病人为１．５％（２／１３６）;正常供血员为１．４％（６／４３８）。肝活检免疫荧光、固相免疫酶检测显示ＨＣＶＣ３３肽在细胞核、细胞质、细胞膜上均有表达,在胞质中或集中于全胞质一侧或弥散分布于胞质中。结论ＨＣＶＣ３３抗原测定,可以作为ＨＣＶ感染的标志物之一。     

抗双链DNA抗体四种检测方法的比较及临床应用

目的比较短膜虫间接免疫荧光法（CLIFT）、酶免疫印迹法（LIA）、胶体金快速斑点法（DIGFA）、酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗双链DNA（ds-DNA）抗体的敏感度和特异度,探讨4种方法在检测抗双链DNA抗体的临床应用价值,寻找对临床最有价值的检测方法。方法用4种方法检测59例系统性红斑狼疮（SLE）患者,50例健康体检者血清中抗ds-DNA抗体,比较各种检测方法的敏感度、特异度和符合率。结果 CLIFT法、胶体金快速斑点法在SLE中的检出率分别为52.5%、44.1%、66.1%、57.6%,均明显高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）;CLIFT法与其他三种方法之间没有显著的统计学差异（P〉0.05）,仅是方法学上的差异。结论 4种方法检测抗ds-DNA抗体均具有很高特异度,但敏感度略有差异,胶体金快速斑点法敏感度最高,检测方法操作方便适用于临床快速筛查,免疫荧光法的特异度高,可以用于临床确认试验方法。     

成人和大鼠阴茎包皮及包皮系带内降钙素基因相关肽免疫阳性神经末梢的分布及来源

目的探讨人和大鼠阴茎包皮和包皮系带内降钙素基因相关肽（CGRP）免疫阳性神经末梢的分布和起源。方法采用免疫组织化学法观察成人阴茎包皮和包皮系带内CGRP免疫阳性神经末梢的分布,通过荧光金（FG）逆行标记和CGRP免疫荧光标记相结合法研究大鼠包皮系带内CGRP免疫阳性神经末梢的起源。结果成人阴茎包皮及包皮系带内均有CGRP免疫阳性神经末梢存在,主要位于表皮基底层和棘细胞层内,呈树枝状或念珠状分布,大多成束走行。阴茎系带处CGRP免疫阳性神经末梢的分布密度明显大于阴茎包皮处。大鼠的阴茎包皮和包皮系带内也有类似的CGRP免疫阳性神经末梢分布,结合FG逆行标记法研究发现,神经末梢起源于第6腰髓对应的背根神经节（L6-DRG）和第1骶髓对应的背根神经节（S1-DRG）的神经元。CGRP免疫荧光标记细胞大多为中小型,呈深绿色,沿神经束成行排列或散在分布。FG／CGRP双标阳性细胞均为中小型,其数量占FG逆标阳性细胞总数的二分之一。结论人和大鼠阴茎包皮及包皮系带内存在着大量的CGRP免疫阳性神经末梢;大鼠实验表明,这些末梢来源于L6-DRG和S1-DRG,提示CGRP可能参与阴茎包皮及包皮系带感觉信息的传递。