应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术筛选硝酸羟胺中毒小鼠血清差异蛋白

目的 应用蛋白质芯片及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,筛选硝酸羟胺(HAN)中毒小鼠血清差异蛋白,为研究其中毒损伤机制提供基础资料.方法 实验动物为ICR小鼠,雄性,体质量为19～23 g,随机分为对照组(n=8)和染毒组(n=8),对照组小鼠腹腔注射生理盐水,染毒组小鼠腹腔注射HAN(亚致死剂量LD20=158 mg/kg).染毒24 h后取血,采用弱阳离子蛋白质芯片CM10及SELDI-TOF-MS技术对血清样品进行蛋白质谱分析,得出差异蛋白分子量,用BioMarker Wizard软件进行统计,登录相关数据库搜索分子量接近的血清差异蛋白.结果 染毒后,动物出现流涎、紫绀、呼吸困难、肌肉颤动、屏息症状,提示缺氧缺血严重.经蛋白质谱仪分析,获得4种血清差异蛋白,并检索得到相关血清蛋白.结论 实验获得了HAN染毒小鼠血清差异蛋白,该差异蛋白有可能参与了HAN中毒损伤的发生和发展过程.     

孕中期血清差异蛋白变化在妊娠期高血压疾病的意义

目的 探讨血清差异表达蛋白质变化在孕中期妊娠期高血压疾病中的意义.方法 对接受产前检查及住院分娩的30例产妇采用蛋白芯片和表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术测定其血清蛋白质谱图.分别比较7例孕中期妊娠期高血压疾病患者（简称妊高症）和正常妊娠孕妇及8例晚孕期妊娠期高血压疾病患者和晚孕期正常妊娠孕妇血清蛋白质谱图的差异.结果 孕中期妊高症组血清蛋白质谱在1 000～20 000范围内有4个不同的蛋白质谱,质荷比为1 539、3 887、5 245、5 960,相对含量均低于正常妊娠组;孕晚期妊高症组有3个不同的蛋白质谱,质荷比1 539、3 887、5 960,相对含量均低于正常妊娠组,差异均有统计学意义;孕中期妊高症组血清中3个不同的蛋白质谱,两组质荷比为1 539、5 960的相对含量比较,差异有统计学意义;蛋白质谱3 887的相对含量比较,差异无统计学意义.结论 妊娠期高血压疾病患者与正常妊娠孕妇血清蛋白质谱有差异,存在差异的蛋白质有可能成为妊娠期高血压疾病早期筛查的血清标志物.     

双向电泳筛选矽肺模型大鼠肺组织差异蛋白

目的应用双向电泳技术筛选矽肺相关蛋白。方法对Wistar雄性大鼠气管灌注法染尘,于1、2、4、8周处死大鼠,观察矽肺模型情况,提取总蛋白进行双向电泳(2-DE)筛选差异蛋白,后通过表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)进行鉴定。结果至8周时肺组织中矽结节及纤维化明显,双向电泳共分离出45个差异点,质谱分析后得到Prx-1、alpha-enolase、macrophage-capping protein、GAPDH、S-100A8、actin 6个差异蛋白。结论双向电泳技术获得了矽肺模型大鼠的肺组织差异蛋白点,质谱分析得到差异蛋白。     

真菌MALDI-TOF-MS蛋白质谱分析技术研究

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)已成为生命科学领域广泛使用的分析工具.在真菌MALDI-TOF-MS蛋白质谱分析中,从复杂基质中蛋白质的提取、双向电泳,到MALDI-TOF-MS分析,每个步骤不同技术的选择是实验成功与否的关键.本文对真菌蛋白质谱分析研究中的关键技术进行综述,为国内开展真菌蛋白质组学研究提供思路.     

生物膜形成相关的铜绿假单胞菌蛋白质组学研究

目的找出铜绿假单胞菌PAEO1野生型与PDO300、PAEO1 lasI rhlI基因缺陷型、PAEO1 lasRrhlR基因缺陷型菌株之间的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌生物膜形成的关系。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAEO1野生型与PDO300、PAEO1 lasI rhlI基因缺陷型、PAEO1 lasRrhlR基因缺陷型菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析,筛选差异蛋白质。结果PDO300菌株与PAEO1野生型菌株相比有10个蛋白质高表达(P0.01),相对分子质量分别为4074、3817、8923、8148、3332、4521、7621、11 594、7831、13 751;有6个蛋白质低表达(P0.01),相对分子质量分别为6199、6899、12 379、6115、6763、8576;PAEO1 lasI rhlI基因缺陷型菌株与PAEO1野生型菌株相比,有1个蛋白质低表达(P0.05),相对分子质量为6910,PAEO1 lasRrhlR基因缺陷型菌株与PAEO1野生型菌株相比,有2个蛋白质高表达(P0.05),相对分子质量分别为8924和8790;有2个蛋白质低表达(P0.05),相对分子质量分别为6735和6986。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对铜绿假单胞菌进行蛋白质组学研究,方法简便、敏感性高,可发现一系列低Mr或低丰度的差异蛋白质。     

DNA微阵列芯片与质谱技术快速鉴定非结核分枝杆菌的差异性分析

目的 比较基因芯片技术与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在非结核分枝杆菌(NTM)菌种鉴定上的差异,为临床快速诊断NTM病提供帮助。方法 应用BACTEC^TM MGIT 960仪器对保存的NTM菌株进行液体培养法复苏;分别使用基因芯片法、质谱法与16s rRNA测序对74株NTM进行菌种鉴定;以16s rRNA测序作为参考方法分析比较基因芯片法与质谱法两种方法鉴定结果的差异与优劣势。结果 通过测序,74株NTM鉴定结果为胞内分枝杆菌37株,脓肿分枝杆菌19株,M.marseillense/M.yongonense 7株,鸟分枝杆菌5株,堪萨斯/胃分枝杆菌2株,M.chimaera、哥伦比亚分枝杆菌、海分枝杆菌、猪分枝杆菌均1株。基因芯片法与测序法相比有12株结果不同,准确率为83.8%,鉴定到复合群准确率为95.9%; MALDI-TOF MS有2株无结果,与测序相比有7株结果不同,准确率为87.8%,鉴定到复合群准确率为97.3%。检测时间上,基因芯片法鉴定1个样本需要6 h,质谱法则仅需1 h。结论 与16s rRNA测序金标准相比...     

异烟肼敏感与耐药结核杆菌临床分离株培养滤液蛋白比较分析

目的寻找异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白。方法应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)捕获并应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对1株异烟肼单耐药结核杆菌和1株异烟肼敏感结核杆菌临床分离株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液蛋白进行比较,描述性分析其差异。结果在异烟肼敏感和异烟肼单耐药结核杆菌株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液中分别检测到164、175、133、147种蛋白质/多肽,其相对分子量(依质荷比m/z而得)范围分别为982⁹ 328、9979 328、997⁹ 327、1 0509 327、1 050⁸ 903、9 968 903、9 96⁹ 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为179 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为17² 100、212 100、21¹ 943、601 943、60⁵ 355、415 355、41³ 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 0833 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 083⁸ 812、1 0128 812、1 012⁹ 327之间,表达丰度在769 327之间,表达丰度在76¹ 811、251 811、25³ 010之间。结论异烟肼敏感结核杆菌和耐药结核杆菌液体培养早中期滤液蛋白质存在差异,但是否为异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白则有待进一步证实。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在快速鉴定真菌中的临床应用研究

目的总结基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)应用于临床真菌鉴定的特点,为评估其在真菌快速鉴定方面的重要性及临床应用价值。方法采用VITEK MS鉴定仪对2013年1月-2014年9月临床检出真菌进行鉴定,获取真菌全细胞蛋白(主要是核糖体蛋白)质谱,通过与数据库中已知菌质谱进行比较、分析,获得鉴定结果并对数据进行统计分析。结果共鉴定出真菌1 254株,质谱技术鉴定真菌共1 198株,占95.53%,未鉴定出真菌占4.47%;应用质谱技术鉴定的真菌中以假丝酵母菌属为主,共1 125株占93.91%。结论 MALDI-TOF MS技术鉴定真菌种类多,操作流程简单、快速,而且还具有很好的可重复性和准确性,是传统真菌鉴定方法的有力补充,为真菌鉴定提供了新的选择。     

新疆维吾尔族宫颈癌蛋白质组图谱分析

目的:探讨筛选并建立新疆维吾尔族子宫颈癌血清蛋白质组图谱诊断模型可能的临床价值。方法:采用CM10蛋白芯片和SELDI-TOF-MS技术检测40例子宫颈鳞癌、30例宫颈上皮内瘤变Ⅲ级和15例健康人的血清蛋白质组图谱,ZUCI-蛋白芯片数据分析系统分析并建立维吾尔族子宫颈癌蛋白质组图谱诊断模型。结果:宫颈癌与宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者和健康人存在139种差异蛋白质质谱峰,有分类意义的蛋白质7种。其中质荷比为6 467.26、6 993.199在正常对照组、上皮内瘤变组和宫颈癌组中表达逐渐降低;1 081.275、1 083.193、1 122.849、8 929.189、15 939.86在正常对照组、上皮内瘤变组和宫颈癌组中表达逐渐增高。这7个质荷比峰建立了维吾尔族宫颈癌蛋白质组图谱诊断模型,其准确度85.00%,敏感度72.73%。结论:该组建立的诊断模型可以有效区分维吾尔族宫颈癌患者和正常妇女,为新疆维吾尔族宫颈癌癌的诊断与筛查提供了一条崭新途径。     

上海金山区宾馆淋浴水和公共浴室水中嗜肺军团菌MALDI-TOF MS快速检测及聚类分析

目的 研究上海市金山区宾馆及公共浴室水环境中嗜肺军团菌污染情况,并逐步建立本区嗜肺军团菌蛋白指纹图谱数据库。方法 2021年11月—12月对辖区8家宾馆和4家公共浴室采集淋浴水及相关环境样本,利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对嗜肺军团菌进行快速鉴定及聚类分析。结果 宾馆淋浴水、淋浴水相关环境、公共浴室水样中,嗜肺军团菌检出率分别为35.00%(7/20)、25.00%(5/20)、30.00%(6/20),差异无统计学意义(P>0.05),检出嗜肺军团菌以LP3型为主,宾馆和公共浴室水环境细菌谱差异较大,宾馆淋浴水样中以常见的单胞菌和肠杆菌为主,公共浴室水样中以不动杆菌为主。嗜肺军团菌蛋白图谱聚类分析发现分为2个明显的分支。结论 辖区内宾馆及公共浴室水环境中存在明显的嗜肺军团菌污染,并且血清型种类多样,存在同一场所多种血清型共存的情况,需要引起重视,建议对相关场所进行定期监测并指导消毒,预防呼吸道感染的发生。利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法检测嗜肺军团菌可以大大缩短检测周期,提高检测准确度,还能对其进行聚类分析,建立蛋白指纹图谱数据库,为溯源提供依据。     

建立MALDI-TOF MS鉴定的海洋致病性弧菌数据库样本前处理的适宜条件

目的探讨建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定海洋致病性弧菌数据库前样本处理的适宜条件,为完善MALDI-TOF MS鉴定该菌入数据库提供参考。 方法将32株海洋致病性弧菌培养至24、48、72 h时,分别用直接转移法、扩展的直接转移法、甲酸提取法得到上机样品,然后用MALDI-TOF MS进行采图鉴定,用SPSS20.0软件进行统计学分析,对样本不同培养时间及3种处理方法的鉴定结果进行比较评价。 结果培养24 h鉴定分数平均值为2.321,属水平鉴定正确率为96.88%,种水平鉴定正确率为90.63%;培养48 h鉴定分数平均值为2.315,属水平鉴定正确率为93.75%,种水平鉴定正确率为90.63%;培养72 h鉴定分数平均值为2.316,属水平鉴定正确率为93.75%,种水平鉴定正确率为87.50%,3种不同培养时间的前处理方法鉴定至属(P=0.129)、鉴定到种(P=0.078),差异均无统计学意义。直接转移法鉴定分数平均值为1.986,属水平鉴定正确率为78.13%,种水平鉴定分数为59.38%;扩展的直接转移法鉴定分数平均值为2.135,属水平鉴定正确率为90.63%,种水平鉴定正确率为78.13%;甲酸提取法鉴定分数平均值为2.306,属水平鉴定正确率为96.88%,种水平鉴定分数为90.63%,3种不同上机前样本处理方法鉴定到属时差异有统计学意义(P=0.006);鉴定到种时差异有统计学意义(χ²=8.691,P=0.013)。 结论建立MALDI-TOF MS海洋致病性弧菌数据库时,选择培养时间24 h的甲酸法提取菌体蛋白的前处理方法较适宜,可得到高质量的蛋白指纹图谱和鉴定正确率。     

SELDI技术预测FOLFIRI方案治疗结肠癌疗效敏感性的应用研究

目的：应用SELDI 技术发现预测FOLFIRI 方案治疗晚期结肠癌患者疗效敏感性的界定指纹,探索新的用药指征.方法：选择12例行FOLFIRI 方案化疗,并有可观察疗效的晚期结肠癌术后患者,应用表面增强飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS） 技术在化疗前对患者的血清样本进行检测,根据RECIST 实体肿瘤疗效评价标准将FOLFIRI 方案治疗1 疗程（3 周期） 后2 周~3 个月内的患者分成稳定组（SD） 和无效组（PD）.应用ProteinChip 3.2.0 和Biomarker Wizard 3.1 软件分析两组之间有显著差异的指纹（ 峰型及丰度） 并进行比较.结果：术后稳定组与无效组相比有3 个蛋白质峰有显著差异性,M/Z 分别为1372、1698、1865,与稳定组相比,无效组上调的峰M/Z 为1372 和1698,下调的峰M/Z 为1865.结论：应用SELDI 技术可以获得预测FOLFIRI 方案治疗结肠癌疗效敏感性的标识指纹,其M/Z 为：1372±50H＋、1698±50H＋、1865±50H＋.其中M/Z：1372±50H＋ 丰度〈10、1698±50H＋ 丰度〈5、1865±50H＋ 丰度〉10 为预计FOLFIRI 方案治疗结肠癌可获得稳定的标识指纹;其M/Z：1372±50H＋ 丰度≥ 10、1698±50H＋ 丰度≥ 5、1865±50H＋ 丰度≤ 10 为预计FOLFIRI 方案治疗结肠癌无效的标识指纹.     

耻垢分枝杆菌7天培养滤液与Middlebrook7H9培养液蛋白质组对比分析

目的初步了解耻垢分枝杆菌体外培养过程中对蛋白质的利用及其蛋白分泌活动状况,以进一步了解其生物特性。方法应用与弱阳离子交换蛋白质芯片（WCX2）联用的表面增强激光解吸一电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测Middlebrook7H9培养液和耻垢分枝杆菌7天培养滤液蛋白质／多肽,采用描述性分析其蛋白质／多肽谱并比较两者间的差异。结果在Middlebrook7H9培养液中检测到97种蛋白质／多肽,相对分子质量在1050～3940之间,丰度水平在86～7838相对强度值之间（相对强度值通过质谱峰面积计算）;在耻垢分枝杆菌7天培养滤液中检测到125种蛋白质／多肽,相对分子质量在1050～9330之间,丰度水平在111～9961相对强度值之间;相对Middlebrook7H9培养液,耻垢分枝杆菌7天培养滤液的蛋白质／多肽谱发生了下列变化：45种消失、20种丰度降低、3种未变化、30种丰度增大、71种新产生。结论耻垢分枝杆菌作为快速生长分枝杆菌菌种,在体外培养生长时有活跃的蛋白质利用和分泌活动,对于既无侵袭力又无毒素产生的耻垢分枝杆菌而言,这些活动可能与其致病性密切相关,值得人们深入研究。     

表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术在神经管缺陷胎儿母亲血清标志物筛查中的应用

目的:探讨表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在筛选神经管缺陷胎儿母亲血清蛋白质标志物中的应用。方法:经超声确诊为胎儿神经管缺陷的孕妇17例和正常孕妇14例,神经管缺陷包括脊柱裂7例、无脑儿4例、脑膨出6例。所有孕妇均于清晨空腹取外周静脉血5 ml,离心后取血清,然后用CM10芯片按照蛋白质芯片标准操作流程进行检测。采用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据,设定优化相对分子质量范围1000~30000 Da。统计分析使用Ci-phergen protein chip 3.1.1软件。结果:所有神经管畸形胎儿母亲血清标本共检测到55个差异蛋白峰,其中12个与正常组比较存在统计学意义,包括8种蛋白质/多肽高表达,质荷比(m/z)分别为4 105、4 297、4 188、6 650、8 583、3 282、2 750、3327;4种蛋白质/多肽低表达,m/z分别为5 497,28 078,9 155,9 434。建立决策分类树,得到了带有3个终结点的决策分类树,获得了2个标志性蛋白质,m/z分别为4 105、7 788。神经管缺陷诊断模型的灵敏度为88.2%,特异度为100%。结论:应用SELDI技术可以筛查出神经管缺陷的特异性蛋白质标志物,是神经管缺陷产前诊断的重要方法之一。     

飞行时间质谱技术在HIV诊断应用性研究

[目的]用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI TOF MS）技术分析HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱，建立HIV血清多肽指纹图谱诊断模型并探究其临床价值。[方法]选取的血清样本经Zip Tip C18层析预分离，运用MALDI TOF MS分析检测，获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱，用SPSS13．0软件对数据进行分析，建立诊断模型。[结果]在分子量为800—4000Da范围内，共发现500个多肽峰，其中11个多肽峰在HIV感染组、正常对照组中表达均有显著差异（P〈0．05），5个在HIV感染组中表达上调（m／z1418．67，1465．67，1777．82，1864．82和2080．23），6个在HIV感染组中表达下调（m／z904．71，920．73，1076．73，1521．79，1552．75和2080．78）；（m／z2080．78＋2080．23＋1777．82＋1465．67）组合的P〈0．05，回归系数、相对危险度都比较理想，其ROC曲线下面积是1．0，以此建立了HIV血清多肽指纹图谱诊断模型。[结论]本研究建立的诊断模型可以有效区分HIV感染者和健康人，为HIV的诊断与筛查提供了一条崭新途径。     

蛋白质芯片定量检测乙肝表面抗原系统的建立

目的：建立以蛋白质芯片检测乙肝表面抗原的方法,以期对乙肝患者血清中HBsAg进行定量检测,帮助动态分析病情和评估疗效。方法：用点样仪将一种抗-HBsAg单抗点到硝酸纤维素膜（NC膜）上制成芯片,HRP标记另一种抗-HBsAg单抗,以双抗夹心法捕获血清中HBsAg,建立HBsAg浓度与检测点灰度间关系的标准曲线并通过芯片阅读仪进行定量分析。结果：建立的蛋白质芯片检测系统能快速准确地对血清中HBsAg进行定性和定量检测,系统的定量检测范围是1-10000 ng/ml。结论：蛋白质芯片检测系统具有微型化和自动化的优点,与PCR HBV-DNA相比其操作更简便,所需时间更短,可以代替传统的ELISA方法,是更为科学的疗效评估方法。     

葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片技术研究

目的:建立用于葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片技术方法。方法:采用双抗体夹心法原理进行免疫芯片的技术研究,对影响免疫芯片检测结果的实验条件进行了优化。结果:实现了在同一张芯片上同时检测葡萄球菌肠毒素A、B,按优化后的条件检测SEA、SEB,最低检测限均为1 ng/m l。结论:对葡萄球菌肠毒素A、B进行了免疫芯片的制作,可以实现待测物的测定。     

应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析宫颈鳞癌早期浸润蛋白质

目的探讨基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization ti me of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对宫颈鳞癌(squamous carcinoma of thecervix,SCC)组织切片直接分析,获取宫颈鳞癌早期浸润的分子标志物的有效性。方法利用超微量点样枪将化学基质直接点样到宫颈鳞癌组织切片上,然后利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱直接扫描宫颈鳞癌组织切片,分析宫颈鳞癌组织蛋白质分子。结果获得的25种蛋白质质谱峰强度比较,差异有显著意义(P<0.05)。其中7种差异蛋白质有分类意义,其质/核(M/Z)分别为:m/z3433,m/z4786,m/z10092,m/z10835,m/z15114,m/z15854和m/z16345。差异蛋白质m/z3433,m/z15114,m/z15854在宫颈鳞癌鳞状上皮组织高度表达,可作为宫颈鳞癌早期诊断的标志蛋白;差异蛋白质m/z16345在宫颈鳞癌的间质组织高度表达,可作为宫颈鳞癌早期间质浸润和扩散诊断的标志蛋白。结论利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术成功获取一组差异蛋白质。该差异蛋白组可望作为宫颈鳞癌早期诊断的标志蛋白。     

典型天然雌激素MCF-7细胞增殖实验的条件优化研究

目的 研究不同试验条件对MCF-7增殖实验检测雌激素效应的影响.方法 选用两种来源(ATCC和某肿瘤医院)的MCF-7细胞,研究不同浓度、不同培养时间、不同溶剂、不同培养液条件下MCF-7细胞对17B-雌二醇(E2)、乙炔雌二醇(EE2)、雌三醇(E3)、雌酮(E1)的反应,以优化MCF-7增殖实验条件.结果 不同E2...