青蒿琥酯诱导白血病细胞凋亡及机理的实验研究

目的:研究中药青蒿提取物青蒿琥酯对诱导体外培养的U937细胞凋亡作用.方法:采用细胞体外培养,MTT显色法观察青蒿琥酯对U937细胞的生长抑制作用;通过细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量分析检测青蒿琥酯对U937细胞的凋亡诱导作用;上流式细胞仪检测经CD95标记的U937细胞在青蒿琥酯作用前后Fas表达的变化.结果:青蒿琥酯能抑制U937细胞生长,且呈时间和剂量依赖关系;经青蒿琥酯作用后的U937细胞出现凋亡细胞的特征;在青蒿琥酯作用后的U937细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带;DNA含量分析出现典型的凋亡峰.青蒿琥酯提高了U937细胞Fas的表达.结论:青蒿琥酯在体外能抑制U937细胞的增殖并诱导其发生凋亡.在一定浓度范围内,青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡随时间和浓度增加而增加.青蒿琥酯能增加U937细胞Fas的表达.     

转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用研究

目的 研究转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用,观察药物作用后细胞凋亡情况.方法 采用MTT法检测青蒿琥酯单用或与转铁蛋白合用对鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制作用,DAPI染色观察CNE2细胞凋亡,流式细胞术分析细胞凋亡率变化.结果 青蒿琥酯对CNE2细胞的IC50值为116 μg/mL,青蒿琥酯合用转铁蛋白后IC50值降为17.4μg/mL,DAPI染色显示青蒿琥酯合用转铁蛋白作用CNE2细胞24h后,细胞出现明显凋亡现象,流式细胞分析结果显示,与对照组相比,青蒿琥酯合用转铁蛋白组作用24h后,细胞出现明显凋亡现象,而平行进行的青蒿琥酯100μg/mL,组相同作用时间没有出现凋亡.结论 转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性有较强增效作用,转铁蛋白与青蒿琥酯合用加速了青蒿酯诱导的细胞凋亡,是转铁蛋白增强青蒿琥酯作用的重要机制之一.     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562胀亡和凋亡作用的研究

目的:探讨青蒿琥酯(Artesunate,ART)对人慢性粒细胞性白血病细胞株K562增殖抑制的影响.方法:采用MTT比色法检测青蒿琥酯对体外培养的K562细胞的生长抑制作用,光、电镜下观察青蒿琥酯作用后的K562细胞形态学变化特征,流式细胞仪检测在不同浓度、不同时间作用下青蒿琥酯诱导K562细胞的细胞胀亡率和凋亡率.结果:青蒿琥酯对K562细胞有明显的增殖抑制作用,24h、48h、72h的半数抑瘤浓度IC50(μg/ml)分别为65.17、31.63、10.51.青蒿琥酯主要引起K562细胞的胀亡和凋亡变化,但胀亡率与凋亡率尤明显差别.结论:青蒿琥酯主要通过胀亡和凋亡2种方式抑制K562细胞增殖,并呈明显量效时效关系.     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用.方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过Annexin V/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用.结果青蒿琥酯在1～8μg/ml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μg/ml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μg/ml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系.结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.     

青蒿琥酯对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的:观察青蒿琥酯对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的动物模型-胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞的影响,探讨其对RA的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠皮内注射Ⅱ型胶原,建立CIA大鼠模型,然后取其滑膜组织用胶原酶消化法进行原代培养。取3~5代的传代细胞,进行后续实验。流式细胞仪检测青蒿琥酯和甲氨喋呤对滑膜细胞凋亡率的影响,电镜观察青蒿琥酯作用下滑膜细胞的形态。结果:青蒿琥酯高、中浓度可导致滑膜细胞的凋亡率增加(P<0.05),电镜下可以观察到青蒿琥酯引起滑膜细胞凋亡。结论:青蒿琥酯对实验性RA的作用与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

青蒿琥酯通过上调神经酰胺抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡

目的: 探讨神经酰胺与青蒿琥酯抗肝纤维化作用的关系。 方法:将培养的肝星状细胞分为实验组和对照组,实验组为不同浓度的青蒿琥酯处理组及神经酰胺处理组。以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测肝星状细胞（HSC）增殖率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞调亡, Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,HPLC－FLD法测定青蒿琥酯处理后HSC培养上清中的神经酰胺（C2）的含量,均数比较采用单因素方差分析,两样本均数比较采用独立样本t检验。 结果: 不同浓度青蒿琥酯及神经酰胺对肝星状细胞均有明显抑制作用,且呈剂量-效应关系和时间-效应关系（P<0.01）,青蒿琥酯及神经酰胺均能诱导肝星状细胞的凋亡,青蒿琥酯能够上调细胞培养上清液中神经酰胺的含量。 结论: 青蒿琥酯可能通过上调神经酰胺抑制肝星状细胞的增殖并诱导其凋亡。     

青蒿琥酯和TRAIL对前列腺癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的探讨青蒿琥酯和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞(PC-3、LNCaP)凋亡的诱导作用。方法培养前列腺癌PC-3、LNCaP细胞,分别加入不同浓度的青蒿琥酯和TRAIL,随机分为7个组:对照组、青蒿琥酯Ⅰ组(低剂量组)、青蒿琥酯Ⅱ组(高剂量组)、TRAILⅠ组(低剂量组)、TRAILⅡ组(高剂量组)、TRAIL(1 ng/mL)加青蒿琥酯(1mmol/L)Ⅰ组及TRAIL(1 ng/mL)加青蒿琥酯(5 mmol/L)Ⅱ组。流式细胞仪检测青蒿琥酯和TRAIL诱导前列腺癌细胞凋亡的凋亡率。结果青蒿琥酯和TRAIL均可增加前列腺癌细胞凋亡的凋亡率,二者联合使用诱导的前列腺癌细胞的凋亡率明显高于两种药物单独使用。结论青蒿琥酯与TRAIL联合使用对前列腺癌存在诱导凋亡的协同作用。青蒿琥酯能诱导提高前列腺癌细胞对TRAIL的敏感性,加强TRAIL的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

青蒿琥酯对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 研究青蒿琥酯对HeLa细胞生长抑制作用。方法 MTT法测定青蒿琥酯对HeLa细胞增殖抑制；用透射电镜观察青蒿琥酯对肿瘤细胞形态学影响；用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡率；用免疫组化法观察肿瘤细胞端粒酶活性。结果 MTT实验表明青蒿琥酯作用HeLa细胞72h后，细胞存活率明显下降，而且随着药物浓度的增加，抑制作用增强；流式细胞仪检测青蒿琥酯可引起HeLa细胞阻滞于G1期，细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度呈正比；透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征；免疫组化检测细胞端粒酶活性降低。结论 青蒿琥酯可抑制HeLa细胞生长，诱导细胞发生凋亡，可降低细胞端粒酶活性。     

青蒿琥酯协同5-氟尿嘧啶杀伤胰腺癌细胞及机制研究

目的 探讨中药活性成分青蒿琥酯对胰腺癌5-氟尿嘧啶化疗的辅助治疗作用并研究其机制。方法: MTT法检测青蒿琥酯和5-氟尿嘧啶对胰腺癌细胞系Capan-2的杀伤活性。Western blot实验检测Capan-2细胞中survivin的表达水平和细胞色素c、凋亡诱导因子从线粒体中的释放水平。流式细胞术检测Capan-2细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果: 青蒿琥酯对5-氟尿嘧啶有协同作用,青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶组Capan-2的细胞活力抑制率(68.5±5.9)%和凋亡率(37.9±3.2)%显著高于5-氟尿嘧啶单处理组Capan-2的细胞活力抑制率(20.7±2.1)%(P<0.05)和凋亡率(11.3±1.5)%(P<0.05)。青蒿琥酯处理显著抑制Capan-2细胞中survivin的表达。青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶组Capan-2细胞的线粒体膜电位明显低于5-氟尿嘧啶单处理组。青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶组Capan-2细胞的细胞色素和凋亡诱导因子释放水平均明显高于5-氟尿嘧啶单处理组。青蒿琥酯发挥对5-氟尿嘧啶的协同作用依赖于survivin的抑制,青蒿琥酯+5-氟尿嘧啶+survivin质粒组Capan-2的细胞活力抑制率(26.8±2.5)%和凋亡率(14.5±1.7)%显著低于青蒿琥酯+5-氟尿嘧啶组Capan-2的细胞活力抑制率(68.5±5.9)%(P<0.05)和凋亡率(37.9±3.2)%(P<0.05)。结论: 青蒿琥酯抑制survivin的表达发挥对5-氟尿嘧啶的协同抗胰腺癌活性。     

小RNA技术干扰p21联合环磷酰胺对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小RNA干扰p21表达联合环磷酰胺对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的siRNA序列转染至HepG2细胞,将HepG2细胞分为5组：空白对照组、阴性对照组、RNA抑制组、环磷酰胺组、联合组（RNA抑制＋环磷酰胺）。采用Mrrr比色法、流式细胞术和分光光度法分别检测HepG：细胞增殖、细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员caspase-9、caspase．3和caspase-6的活化程度。结果p21 siRNA转染后,相对于环磷酰胺单独处理组,联合处理组HepG,细胞增殖率显著降低,而细胞凋亡率则率明显升高（P〈0．01）;caspase-9、caspase-3和caspase-6的活化程度显著升高（P〈0．01）。结论p21靶向RNA抑制作用联合环磷酰胺处理显著促进了HepG2细胞凋亡,p21可作为肝癌基因治疗的后选新靶点。     

SiRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅对胶质瘤细胞U87增殖的影响

目的：探讨小分子干扰RNA（siRNA）靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅（FAP-α）表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响。方法：实验分为空白对照组（Blank组）、阴性对照组（NC组）和siRNA组,通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87,使用Westernblot法检测FAP-α基因的蛋白水平,同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化,使用Real-timePCR法检测FAP-α和增殖核抗原（PCNA）的mRNA水平,CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力。结果：①转染48h后,siRNA组细胞FAP-α mRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组,差异有统计学意义（P〈0．01）,siRNA组较Nc组caspase-3蛋白表达增加（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达明显降低（P〈0．01）,siRNA组较NC组PCNAmRNA表达明显下降（P〈0．01）。②转染后48、72和96hsiRNA组U87细胞吸光度值低于NC组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：应用siRNA沉默FAP-α基因的表达,可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖,诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

古抑菌素A对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响

目的：探讨去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A（trichostatin A,TSA）对人肝癌HepG2细胞生长的作用以及FHIT表达的影响。方法：体外培养人肝癌细胞株HepG2,分为对照组和不同浓度（5、50、250、500、1000nmol/L）TSA组,作用24h和48h后在倒置显微镜下观察细胞形态改变,CCK-8法检测TSA对HepG2细胞增殖的影响,实时荧光定量RT-PCR法检测FHIT基因的表达。结果：倒置显微镜下,经TSA处理的细胞增殖速度显著减慢,出现凋亡早期改变,与对照组相比,TSA可明显抑制HepG2的增殖,且呈时效和剂量依赖关系（P〈0.01）,荧光定量PCR结果显示TSA可以使FHIT表达上调（P〈0.01）。结论：TSA对肝癌HepG2细胞体外生长有明显抑制作用,可能与促进FHIT表达有一定关系。     

补肾方含药血清对人肝癌SK-HEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清;培养并建立VEGF诱导的SK-HEP-1细胞模型,分别予药物血清干预。以MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达。结果:与空白血清组和VEGF组比较,补肾组含药血清可明显抑制SK-HEP-1细胞增殖(P0.01),提高SK-HEP-1细胞G1期的细胞比率(P0.05)以及细胞的早期凋亡率(P0.05)和总凋亡率(P0.05),上调bax mRNA基因表达(P0.05)和下调bcl-2 mRNA基因表达(P0.01),且补肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;其作用机制可能与阻滞细胞由G1期进入S期和G2期,以及上调bax和下调bcl-2基因表达,促进SK-HEP-1细胞的凋亡有关。     

青蒿琥酯对胃癌细胞系 HGC27 细胞增殖、凋亡的影响及其机 制简

目的 探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外培养HGC27细胞,采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Western blot法检RUNX-3蛋白表达情况.结果 青蒿琥酯（浓度10～100 mg/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态.青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,而对照组凋亡率仅为2.2％;处理后Casepase-3相对活性分别为（0.19±0.02）、（0.25±0.04）和（0.31±0.03）,对照组为（0.11±0.02）,Casepase-9相对活性分别为（0.18±0.02）、（0.23±0.03）和（0.30±0.04）,对照组为（0.10±0.02）,与对照组比较,青蒿琥酯处理组Casepase-3、Caspase-9相对活性显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;RUNX-3蛋白表达上调,呈剂量依赖性.结论 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3、Caspase-9活性、上调RUNX-3蛋白的表达有关.青蒿琥酯是一种前景广阔的抗肿瘤药物.     

DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响.方法：采用MTT、细胞计数检测DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;应用流式细胞仪检测DADS对HepG2细胞周期和细胞凋亡率的影响.结果：DADS使细胞增殖明显受抑制且抑制率呈药物浓度时间依赖性（P＜0.05）,DADS组细胞的倍增时间延长（P＜0.05）.与对照组比较DADS处理组G2/M期细胞比例显著增加,而G0/G1期细胞比例则明显下降,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）.结论;DADS对人肝癌细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关.DADS能阻滞细胞周期在G2/M期,并诱导细胞凋亡.     

补肾健脾中药联合5-FU对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的血清药理学研究

目的：观察补肾健脾中药联合5-FU对人肝癌细胞株HepG2的抑制增殖和促进凋亡作用。方法：运用血清药理学和体外细胞培养方法,分别观察补肾健脾中药血清、5-FU药物血清及二者合用药物血清,对肝癌细胞HepG2的抑制增殖和促进凋亡作用。结果：补肾健脾中药血清、5-FU药物血清对HepG2细胞具有抑制增殖、促进凋亡、使细胞周期停滞在G0/G1期的作用,当二者合用时作用可明显增强。结论：补肾健脾中药联合5-FU可明显增强对肝癌细胞HepG2的抑制增殖和促进凋亡作用,体现一定的增效作用。     

桦褐孔菌醇对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的：研究桦褐孔菌醇（Inotodi01）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：以不同浓度的Inotodiol处理HeLa细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,透射电镜观察细胞超微结构变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测caspase-3蛋白的表达。结果：Inotodiol能抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系（P〈0．05,P〈0．01）;超微结构观察可见细胞体积缩小、核固缩、核内异染色质增多并边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;TUNEL法显示,经50μg/ml的lnotodiol处理48h,HeLa细胞发生凋亡;免疫细胞化学结果表明,与对照组相比,Inotodiol组HeLa细胞中caspase-3蛋白表达上调（P〈0．01）。结论：在一定浓度范围内,Inotodiol可在体外抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调easpase-3蛋白的表达有关。     

大黄素联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷对人肝癌HepG2细胞增殖的协同抑制作用

目的观察大黄素联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷（AZT）对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响。方法采用四唑蓝比色试验（MTT）检测大黄素、AZT及二者固定浓度比例联合在不同作用时间对HepG2细胞增殖的影响,应用Calcusyn 2.0软件计算药物半数抑制浓度（IC50）及联合用药指数（CI）;流式细胞术（FCM）测定给药后细胞凋亡情况。结果大黄素与AZT联合作用比两药单用能显著抑制HepG2细胞的增殖,不同浓度的联合在不同作用时间联合指数（CI值）均小于1。联合用药组细胞凋亡率显著高于对照组和单一用药组（P〈0.05）。结论大黄素/AZT联合用药具有比单用大黄素或AZT能更显著地在体外抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,表现出明显的协同效应。