人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞(摘要)

目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,最大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.     

人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞

目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,最大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.     

妊娠早期CD56brightCD16- NK细胞CD49d和CD11b的表达分析

目的  探讨早期妊娠和稽留流产患者外周血CD56brightCD16- NK细胞及蜕膜组织子宫自然杀伤(uNK)细胞中整合素α4（CD49d）和αm (CD11b)的表达。方法  采集18例早期妊娠妇女外周血（其中14例另取蜕膜组织）和9例稽留流产妇女外周血,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,流式细胞术检测样本CD56brightCD16- NK细胞中CD49d和CD11b表达。结果  CD49d和CD11b在早期妊娠蜕膜CD56brightCD16- NK细胞表达显著低于早期妊娠妇女外周血CD56brightCD16-NK细胞(P＜0.01);稽留流产患者外周血CD56brightCD16- NK细胞的表达较早期妊娠妇女显著降低(P＜0.05)。结论  CD49d和CD11b可能在妊娠早期uNK细胞的募集中起重要作用,同时也可能参与了正常妊娠的维持。     

种植窗期人子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4的表达

目的研究不同卵巢反应性的种植窗期子宫内膜组织中基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）及其受体CXCR4的表达。方法收集种植窗期子宫内膜组织（n=17）,根据卵巢反应性分为卵巢高反应组（n=6）、卵巢中等反应组（n=6）和正常对照组（n=5）。应用RT—PCR、Real-timePCR、免疫组织化学染色和Western blotting方法,检测并比较各组种植窗期子宫内膜组织SDF-1α／CXCR4mRNA和蛋白表达。结果免疫组织化学染色显示,CXCR4在种植窗期子宫内膜组织中高表达;SDF-1α在内膜腺体和腔上皮细胞中表达,而在间质细胞中不表达。各组子宫内膜组织SDF-1α／CXCR4mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高甾体激素对种植窗期子宫内膜趋化因子SDF-1α及其受体CXCR4的表达无明显影响。提示SDF-1α／CXCR4可能不参与甾体激素对种植窗期CD56^bright CD16-NK细胞募集的调控。     

正常妊娠不同孕期胎盘组织中CXCR4及SDF1的表达

目的:探讨CXCR4及SDF1在正常妊娠不同孕期胎盘组织中的表达情况及其在滋养层细胞侵蚀、孕卵着床等正常妊娠过程中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测45例正常孕妇(早孕10例、中孕15例、晚孕20例)胎盘组织中CXCR4/SDF1表达程度。结果:CXCR4/SDF1在早、中、晚孕组滋养细胞、基质细胞、蜕膜组织中均有阳性表达,其中早孕组呈阳性表达,中孕组呈强阳性表达,晚孕组呈弱阳性或者阴性表达,晚孕组与早、中孕组相比表达明显减弱,差异有极显著性(P<0.01)。结论:CXCR4/SDF1可能在滋养细胞侵蚀的调节、胎盘形成、子宫-胎儿血管系统的建立等过程中发挥重要作用。     

种植窗期人子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4的表达

目的 研究不同卵巢反应性的种植窗期子宫内膜组织中基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)及其受体CXCR4的表达.方法 收集种植窗期子宫内膜组织(n=17),根据卵巢反应性分为卵巢高反应组(n=6)、卵巢中等反应组(n=6)和正常对照组(n=5).应用RT-PCR、Real-time PCR、免疫组织化学染色和Western blotting方法 ,检测并比较各组种植窗期子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4 mRNA和蛋白表达.结果 免疫组织化学染色显示,CXCR4在种植窗期子宫内膜组织中高表达;SDF-1α在内膜腺体和腔上皮细胞中表达,而在问质细胞中不表达.各组子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4 mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 高甾体激素对种植窗期子宫内膜趋化因子SDF-1α及其受体CXCR4的表达无明显影响.提示SDF-1α/CXCR4可能不参与甾体激素对种植窗期CD56bright CDl6-NK细胞募集的调控.     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中诱导CD4＋T细胞募集的趋化因子的表达

目的 检测大鼠心肌缺血再灌注中诱导CD4+ T细胞趋化的趋化因子的表达.方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验动物模型,冠状动脉左前降支结扎45 min后恢复再灌,在不同的再灌注时间点0、2、6、9、12 h获取心脏组织(每组4只),相应时间点的假手术组作为对照.RT-PCR检测趋化CD4+ T细胞的趋化因子的表达;免疫荧光检测趋化因子诱导的CD4+ T细胞的募集;组织学评价心肌细胞的损伤.结果诱导CD4+ T细胞募集的趋化因子的表达在再灌注2 h即迅速增高,随后出现下降.其中,CXCL-10(IP-10)的表达高峰出现在2 h,与其共用同一受体CXCR3的其它两个趋化因子CXCL9(Mig)和CXCL11(I-TAC)的表达,分别在再灌注12 h和9 h出现另一高峰.受趋化因子的诱导,组织中浸润的CD4+ T细胞逐渐增多;心肌的缺血再灌注损伤也随之不断加重.结论诱导CD4+ T细胞募集的趋化因子,通过CD4+ T细胞介导的免疫损伤作用,最终导致了心肌的梗死.     

SDF-1α及其受体CXCR4在类风湿关节炎患者外周血中的表达

目的 探讨基质细胞衍生因子SDF 1α及其受体CXCR4在类风湿关节炎（RA）发生、发展中的作用及意义。方法 用流式细胞术对50例RA患者和25例健康志愿者外周血CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞表面CXCR4的表达水平进行检测,用ELISA法检测SDF 1α、IL 6在上述两组外周血中的表达情况。结果 RA患者组外周血中CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞表面CXCR4表达水平和SDF 1α、IL-6的表达均明显高于健康对照组（P＜0.05）。直线相关性分析显示,外周血CXCR4及SDF-1α表达水平与IL-6均存在正相关性（P＜0.05）。结论 SDF-1α/CXCR4轴及IL-6在RA患者的发病过程中可能起到了重要作用,并且二者有协同作用。     

激活人胶质瘤细胞CXCR4受体对血管内皮生长因子表达的影响

近年的研究发现,趋化因子基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor1,SDF1)受体CXCR4在胶质瘤细胞中有表达,但其具体作用和机制及其治疗学意义尚不清楚。本研究旨在通过检测3种胶质瘤细胞系的CXCR4表达及其介导的胶质瘤细胞趋化运动、胞内游离Ca^2 流动和调节血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达,从而探讨CXCR4的功能活性及其在血管生成中的作用。     

卵巢癌趋化因子受体CXCR4的表达及意义

目的　探讨趋化因子受体及配体CXCR4 /CXCL12 (SDF - 1)在上皮性卵巢癌细胞中的表达及在肿瘤转移中的作用。方法　采用RT -PCR和WesternB1ot对 15例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞系CAOV3中CXCR4和腹膜后淋巴结组织中SDF - 1在mRNA和蛋白水平的表达进行检测 ,并比较趋化因子作用前后CXCR4的变化。ELISA检测上皮性卵巢癌腹水中趋化因子CXCL12的含量。以Boyden小室检测重组人SDF - 1、上皮性卵巢癌腹水对卵巢癌细胞的趋化活性。结果　 (1)在上皮性卵巢癌组织及CAOV3细胞中CXCR4在mRNA及蛋白水平显著表达 ,趋化因子作用后CXCR4的含量明显减少 ,差异有显著性 (P<0 0 5 )。 (2 )卵巢癌性腹水及腹膜后腔淋巴结组织均含较高水平的CXCL12。 (3)重组人CXCL12、卵巢癌性腹水均可诱导上皮性卵巢癌细胞的迁移 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　CXCR4 /CX CL12受体配体系统可通过诱导癌细胞的迁移在上皮性卵巢癌的转移中起重要作用。     

基质细胞衍生因子-1/CXCR4轴介导非霍奇金淋巴瘤肿瘤浸润的实验研究

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其受体CXCR4在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表达及其与NHL肿瘤浸润的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测淋巴结和骨髓基质细胞中SDF-1α的表达,采用流式细胞术检测淋巴结和骨髓中淋巴瘤细胞CXCR4受体的表达,并采用Tranawell微孔隔离室实验检测淋巴瘤细胞在体外向重组人SDF-1α（rhSDF-1α）的趋化反应。结果侵犯骨髓的NHL患者骨髓淋巴瘤细胞和未侵犯骨髓的NHL患者骨髓单个核细胞表面CXCR4受体的表达均明显高于正常骨髓（84．10±12．12,72．76±8．73和33．20±7．73,P〈0．01）,而NHL患者来源于淋巴结的淋巴瘤细胞CXCR4的表达亦显著高于反应性增生淋巴结炎患者（101．04±21．89V834．81±9．90,P〈0．01）。此外,被淋巴瘤侵犯的骨髓基质细胞高表达SDF-1α,而未被淋巴瘤侵犯的骨髓及正常骨髓基质细胞表达SDF-1α低下,二者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;且NHL患者淋巴结基质细胞SDF-la的表达高于反应性增生淋巴结炎患者（P〈0．01）。趋化实验发现三种不同来源的NHL患者淋巴结和骨髓的单个核细胞均能向rhSDF-1α发生趋化反应,且抗CXCR4单抗可明显抑制上述细胞的迁移。结论SDF-1／CXCR4生物学轴是介导NHL肿瘤侵袭的重要机制,CXCR4在淋巴瘤细胞表面以及SDF-1在淋巴瘤转移部位的同时高表达与NHL瘤细胞的转移和浸润密切相关。     

CD56bright自然杀伤细胞亚群在人免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒共感染中的研究进展

CD56bright自然杀伤(natural killer,NK)细胞是CD56表达水平较高的NK细胞亚群,以分泌细胞因子和免疫调节功能为主,具有抗肝纤维化的能力,提示这群细胞在减缓人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)/丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)共感染肝损伤、提高病毒清除率方面具有重要作用。文中就CD56bright NK细胞在HIV、HCV单纯感染以及HIV/HCV共感染中的研究作一综述,以进一步了解该细胞亚群在HIV/HCV共感染中的作用,为揭示HIV/HCV共感染的免疫病理机制及可能的免疫治疗理论提供借鉴。     

CXCR7在SDF-1介导内皮细胞参与血管形成中的作用

目的探讨CXCR7在SDF-1诱导内皮细胞参与血管生成中的作用。方法用Western blot和流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中CXCR7和CXCR4的表达;利用小分子拮抗剂分别阻断CXCR4或CXCR7,然后通过MTT、Transwell小室法及三维基质胶血管样结构形成实验分别考察CXCR7和CXCR4对SDF-1诱导HUVECs增殖、迁移及管样结构形成能力的影响。结果 HUVECs细胞中同时高表达CXCR4和CXCR7;CXCR7的拮抗剂显著抑制SDF-1诱导HUVECs的增殖(P<0.01);而SDF-1诱导HUVECs迁移却被CXCR4的拮抗剂阻止(P<0.01);CXCR7和CXCR4的拮抗剂均显著阻止SDF-1诱导HUVECs形成血管样结构(P<0.01)。结论 CXCR7和CXCR4在SDF-1诱导HUVECs参与血管生成的过程中均起着不可或缺却又不尽一致的作用,SDF-1诱导HUVECs的增殖主要通过CXCR7发挥作用,而CXCR4主要参与SDF-1诱导HUVECs的迁移,两者共同参与SDF-1诱导HUVECs形成管样结构的调节。     

重型再生障碍性贫血患者外周血自然杀伤细胞亚群百分比及功能变化

目的 分析重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)前、后外周血自然杀伤(NK)细胞亚群占淋巴细胞百分比、功能变化及其与造血功能相关性,探讨NK细胞在SAA发病机制中的作用.方法 用流式细胞术检测2010年4月至2010年12月天津医科大学总医院收治的12例初治(初治组)、30例IST后恢复(恢复组)的SAA患者的外周血NK细胞(CD3-CD56+/CD16+)及其亚群[CD3-CD56brightCD16-(CD56bright)、CD3-CD56dimCD16+(CD56dim)、CD3-CD56-CD16+]占淋巴细胞百分比、活化性受体(NKG2D和NKp46)、穿孔素、颗粒酶β表达,并与13名健康对照(对照组)比较;分析上述变化与外周血中性粒细胞比例(ANC%)、淋巴细胞比例、网织红细胞计数及骨髓造血功能(增生程度、粒系百分比、红系百分比、巨核细胞数量、淋系百分比)的相关性.结果 (1)初治组NK细胞、CD56bright细胞百分比(10.30%±6.08%、0.11%)均显著低于恢复组(16.47%±8.29%、0.68%,P＜0.05)和对照组(19.45%±6.88%、0.53%,均P＜0.05);初治组CD56dim细胞百分比(9.62%±6.04%)明显低于对照组(18.21%±7.16%,P＜0.05);恢复组CD3-CD56-CD16+细胞百分比(0.79%)显著高于初治组及对照组(0.37%、0.41%,均P＜0.05).(2)初治组与恢复组NK细胞NKp46、穿孔素表达[初治组(88.23%、64.97%±21.61%),恢复组(82.97%、66.14%±20.73%)]显著高于对照组(40.99%、42.11%±27.25%,均P＜0.05).(3)NK、CD56bright及CD3-CD56-CD16+细胞的百分比与SAA患者ANC%呈正相关(r分别为0.423、0.609、0.468,均P＜0.05),与骨髓粒系百分比呈正相关(r分别为0.357、0.517、0.434,均P＜0.05);NK、CD56bright、CD56dim和CD3-CD56-CD16+细胞的百分比与SAA患者骨髓增生程度呈正相关(r分别为0.455、0.412、0.404、0.451,均P＜0.05),与骨髓淋系百分比呈负相关(r分别为-0.522、-0.435、-0.411、-0.547,均P＜0.05);NK细胞NKG2D、NKp46、穿孔素、颗粒酶β表达与各造血指标无相关性(均P＞0.05).结论 SAA患者外周血NK细胞、CD56bright、CD56dim亚群占淋巴细胞百分比降低及穿孔素途径增强可能引起免疫耐受被破坏、T细胞功能亢进而导致造血功能衰竭.

Abstract：

Objective To analyze the percentage and functional changes of natural killer(NK)cell subsets in peripheral blood of severe aplastic anemia(SAA)patients before and after immunosuppressive therapy(IST)so as to evaluate the relationships between these changes and hematopoietic functions and explore the role of NK cells in the pathogenesis of SAA.Methods By flow cytometry,the percentages of NK cells(CD3-CD56+/CD16+)and its subsets[CD3-CD56brightCD16-(CD56bright),CD3-CD56dimCD16+(CD56dim),CD3-CD56-CD16+]in peripheral blood lymphocytes were detected in 12 untreated patients,30 recovered patients and 13 normal controls respectively from April 2010 to December 2010 in our hospital.NK cells activating receptors(NKG2D and NKp46),pofforin and granzyme-β of patients and normal controls were also detected.The correlation between these changes and hematopoietic functions,including the percentages of neutrophil granulocyte(ANC%),lymphocyte and reticulocyte absolute value in peripheral blood,and hyperplasia degree,percentage of granulocytes,erythrocytes,lymphocytes and megakaryocytes absolute value in bone marrow were evaluated.Results (1)The percentages of NK cells (10.30% ± 6.08%)and CD56 bright cells(0.11%)in untreated patients were significantly lower than those of recovered patients(16.47% ± 8.29%,0.68%,both P ＜0.05)or normal controls(19.45% ±6.88%,0.53%,both P ＜0.05).The percentage of CD56dim cells in untreated patients was significantly lower than that of normal controls(9.62% ±6.04% vs 18.21% ±7.16%,P ＜0.05).The percentage of CD3 CD56 CD16 + cells was significantly higher in recovered patients than that of untreated patients or normal controls(0.79% vs 0.37%,0.41%,both P＜0.05).(2)The expression of NKp46 and pefforin of NK cells in untreated(88.23%,64.97% ± 21.61%)and recovered patients(82.97%,66.14% ±20.73%)were significantly higher than those of healthy controls(40.99%,42.11% ±27.25%,all P ＜0.05).(3)The percentage of NK CD56bright and CD3-CD56-CD16+ cells of patients was positively correlated with ANC%(r=0.423,0.609,0.468 respectively,all P＜0.05)and the percentage of granulocytes in bone marrow(r=0.357,0.517,0.434 respectively,all P＜0.05).The percentages of NK,CD56bight,CD56dim and CD3-CD56-CD16+ cells were positively correlated with the hyperplasic degree of bone marrow(r=0.455,0.412,0.404,0.451 respectively,all P＜0.05),but they were negatively correlated with the percentage of lymphocytes in bone marrow(r =-0.522,-0.435,-0.411,-0.547 respectively,all P ＜0.05).The expression of NKG2D,NKp46,pefforin and granzyme-β of NK cells had no correlation with hematopoiesis(all P＞0.05).Conclusion The lowered percentage of NK CD56bright,CD56dim cells and a higher expression of pefforin may cause the over-function of T lymphocytes and thus lead to hematopoietic failure in SAA.     

创面分泌液对表皮干细胞体外趋化作用的实验研究

目的 观察创面分泌液对体外培养表皮干细胞(ESCs)的趋化作用,并初步探索其作用机制.方法 细胞免疫荧光化学、流式细胞仪技术检测表皮干细胞表达趋化因子受体CXCR4的情况;采用Transwell 培养体系,观察创面分泌液对ESCs的趋化作用.结果 细胞免疫荧光化学结果显示,表皮干细胞胞膜及胞浆内FITC染色呈阳性表达;流式细胞仪检测结果,表皮干细胞表达CXCR4阳性率为43%;体外趋化试验结果显示, 创面分泌液组从Transwell 培养体系微孔膜上层迁移至下层的细胞数约为87±9.12,明显多于受体拮抗组21±2.71和K-SFM对照组15±3.28(P＜0.05);受体拮抗组迁移细胞数虽稍多于K-SFM对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本实验通过Transwell培养体系初步验证了人创面分泌液对体外培养的表皮干细胞具有趋化作用,检测到人表皮干细胞表达趋化因子受体CXCR4,因此推测创面分泌液中可能含有CXCR4的惟一配体SDF-1,并通过SDF-1/CXCR4介导完成对表皮干细胞的趋化效应.     

自身免疫性肝炎患者血NK细胞频率及表型特征分析

目的探讨自身免疫性肝炎（AIH）中NK细胞在外周血中频率及表型特点。方法选择15例自身免疫性肝炎患者,采集入选对象外周抗凝血5ml,分离外周血单核细胞（PBMC）,进行CD56-PE、CD3-APC、CD16-FITC、HLA-DR-PERCP单克隆抗体4色染色,采用流式细胞技术进行检测。结果 AIH组与正常对照组NK细胞中CD56bright比例分别为19.42%±7.36%,6.06%±2.63%,AIH组显著高于正常对照组（P〈0.001）。AIH组与正常对照组,CD56bright细胞群中活化指标HLA-DR＋比例分别为6.13%±5.67%和2.10%±1.24%,AIH组显著高于对照组（P=0.017）。对CD56bright表达频率与自身免疫性肝炎患者肝功生化指标之间进行相关性分析,尚未发现两者之间的相关关系。结论 AIH患者外周血中CD56bright及其中活化细胞的比例均有增高,提示NK细胞可能通过活化的CD56bright分泌细胞因子途径在发病过程中发挥作用。     

不明原因早期复发性自然流产患者蜕膜组织CD158受体的表达

目的 探讨不明原因早期复发性自然流产(RSA)患者和正常对照组早孕子宫蜕膜组织中杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)CD158表达的特征。方法 选择2009年1月至2010年6月就诊的RSA患者和同期计划生育门诊因计划外孕行人工流产术者各30例,并根据孕周分组,流式细胞术检测蜕膜组织细胞表面标记,比较RSA患者和对照者CD56、CD16、CD158a(KIR2DL1/S1)、CD158b(KIR2DL2/S2)表达的变化规律。结果 ① RSA患者CD56+细胞数显著少于对照者(P=0.007),CD56+/CD16-细胞较对照组降低(P＜0.05);② RSA患者CD158a在CD56+/CD16-细胞表面的表达显著降低(P=0.026);③ 按孕周分组分析显示,孕7~10周患者CD56+/CD16-细胞表面表达CD158a较同期对照者显著降低(P=0.010);④ 正常早孕蜕膜组织CD158a、CD158b与CD56表达呈显著正相关(P＜0.01)。结论 早孕蜕膜组织CD56+/CD16-细胞减少可能为不明原因自然流产的发病机制之一。 CD56+/CD16-细胞表面CD158a表达下降与不明原因自然流产有关,且其变化与早孕孕周相关。