两种方法动态监测急性早幼粒细胞白血病微小残留病变的前瞻性比较研究简

本研究对比聚合酶链式反应（PCR）和多参数流式细胞术（FCM）在急性早幼粒细胞白血病（APL）患者微小残留病变（MRD）动态监测中的价值.2011年1月至2012年12月,在我院接受巩固治疗的APL患者,均于化疗前行骨髓穿刺,每例留取3份标本,同时行骨髓细胞形态学检查、融合基因PCR和FCM检查,并对结果进行统计分析.对48例入选患者共检查159例次,留取标本477份.结果表明：骨髓细胞形态学检查发现3份复发,余均为完全缓解;PCR检查中阳性7份,FCM检查中阳性19份（kappa检测,P＞0.05）.结论：FCM与PCR检查对APL治疗效果的评估价值相似.     

扩展流式细胞术的临床应用范围提高应用水平

随着多参数、高通量等分析技术的不断改进,FCM作为表型分析的重要技术平台已逐渐扩展到蛋白质功能分析,针吸活检细胞、脑脊髓液、循环肿瘤细胞以及微生物的检测等临床应用领域.目前,流式标本处理、仪器设置以及数据分析等是制约FCM在临床检验常规应用的主要问题,因此应制定规范统一的流式项目标准操作流程,并建立地区性的流式共享平台,使FCM更好地服务于临床检验.

Abstract：

With the improvement of the multi-parameter and high throughput technology,FCM has expanded its clinical application from cellular phenotying to other areas,such as protein function analysis,fine needle aspiration,cerebrospinal fluid determination,circulating tumor cell detection as well as clinical microbiology.Currently,lack of standards for the sample processing,equipment adjustment and data analysis remains the main obstacle for routine application of FCM.Therefore,it is recommended to establish consensus standard operation procedures as well as shared FCM platform regionally to provide better service of FCM in clinical laboratory.     

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的评价四种检测细胞凋亡的方法.方法以蟾蜍素(bufalin)诱导的白血病细胞株HL60细胞凋亡,选择流式细胞术(FCM)、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA电泳和电镜(EM)技术对比检测细胞凋亡.结果定性的EM和DNA电泳技术可靠,而TUNEL和FCM主要用于定量检测.结论EM、TUNEL和FCM检测细胞凋亡率具有显著相关性.     

流式细胞术DNA倍体分析在恶性胸腔积液中诊断的价值

目的 探讨流式细胞术(FCM)DNA倍体分析在恶性胸腔积液中的诊断价值。方法 以102例胸腔积液患者(其中恶性45例,良性57例)的胸水分别作流式细胞术DNA倍体分析,癌胚抗原(CEA)及脱落细胞学检测。比较三者之间的敏感性、特导性。结果 1.FCM、CEA、脱落细胞学检测在良、恶性胸腔积液中的阳性率分别为3.5％、82.2％、15.8％、71.1％、7.0％、46.7％,三种方法均有显著性差异(P值均<0.05)。2.FCM、CEA、脱落细胞学检测的敏感性分别为82.2％、71.1％、46.7％,FCM与CEA之间无显著性差异(P>0.05),FCM与脱落细胞学之间差异有显著性(P<0.05)。3.FCM、CEA、脱落细胞学检测的特异性分别为96.5％、84.2％、94.7％,FCM与CEA之间有显著性差异(P<0.05),FCM与脱落细胞学之间无显著性差异(P<0.05)。结论 流式细胞术DNA倍体分析在恶性胸腔积液中其敏感性优于脱落细胞学检测,特异性优于CEA检测,是鉴别良、恶性胸腔积液较理想的检测方法。     

比较BMA和流式细胞术在NHL患者骨髓侵犯诊断中的价值

目的:探讨骨髓细胞形态学(BMA)和流式细胞术(FCM)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓侵犯诊断中的价值。方法:回顾性分析我院2015年3月~2016年3月收治的160例NHL患者的BMA和FCM检测结果,分析两种不同检测方法在淋巴瘤骨髓侵犯诊断中的价值。结果:采用BMA和FCM联合检测的骨髓侵犯阳性率为27.50%;单用BMA和FCM检测的骨髓侵犯阳性率分别为17.50%和22.50%;检测结果均呈阳性的患者20例,主要症状为高比例瘤细胞骨髓浸润;检测结果不一致的患者27例,主要症状为轻度瘤细胞骨髓浸润。结论:FCM检测轻度异形细胞淋巴瘤骨髓侵犯的敏感性高于BMA;BMA检测高度异形细胞淋巴瘤骨髓侵犯的敏感性高于FCM;采用BMA和FCM联合检测可提高NHL患者骨髓侵犯诊断中的敏感性与准确性。     

人工智能辅助流式细胞术疾病诊断的研究进展

随着高通量流式细胞术(FCM)的发展,传统的数据分析方法和分析工具越来越难以应对成倍增加的FCM的检测参数和数据量,尤其是人工分析的主观性和劳动密集性与FCM对客观性和准确性要求形成了日益凸显的矛盾,数据可视化和数据分析的新算法和新工具的开发成为临床应用的迫切需求.近些年来,人工智能辅助诊断FCM进行疾病诊断和细胞分群...     

脑脊液流式细胞学在鉴别诊断小儿急性淋巴细胞白血病并中枢神经系统白血病中价值

目的观察脑脊液流式细胞学检查(Flow cytometry,FCM)在鉴别诊断小儿急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia,ALL)并中枢神经系统白血病中价值。方法选取2013年6月30日至2018年6月30日收治的98例ALL患儿,患儿均接受脑脊液检查,取脑脊液标本进行FCM和脑脊液细胞学(Cerebrospinal fluid cytology,CC)检查。观察两种检查方法对ALL并中枢神经系统白血病的诊断价值。结果患儿年龄(6.5±2.1)岁,中位随访时间32个月,死亡14例,复发8例。共4例患儿确诊为中枢神经系统白血病,其中3例FCM阳性且CC阳性,1例FCM阴性且CC阴性。FCM对异形细胞检出率(24.5%)高于CC(11.2%),差异有统计学意义(P0.05)。在脑脊液蛋白质阳性、脑压升高、脑脊液血糖增高患儿中,FCM对异形细胞的检出率均高于CC患儿,差异有统计学意义(P0.05)。两种检查方法在脑脊液蛋白质阴性、脑压正常、脑脊液血糖正常患儿中对异形细胞的检出率差异无统计学意义(P0.05)。FCM和CC阳性患者CNS状态及危险度分布差异无统计学意义(P0.05),但FCM对CNS-1、中度患者检出率高于CC,差异有统计学意义(P0.05)。结论 FCM在鉴别诊断小儿ALL并中枢神经系统白血病中价值优于CC,尤其是脑脊液蛋白质阳性、脑压升高、脑脊液血糖增高患儿,且对CNS状态及危险度的敏感性高。     

超声心动图诊断胎儿心肌病

目的 探讨胎儿超声心动图诊断胎儿心肌病(FCM)及其并发症的价值.方法 对11 360胎胎儿进行超声心动图检查;对其中诊断为胎儿心肌病或可疑心肌原发病变者进行分析,并与大体病理结果及出生后超声心动图表现进行对照分析.结果 11 360胎中检出FCM 19胎,检出率为0.167%(19/11 360).其中扩张型心肌病10胎(累及双心室4胎、右心室4胎、左心室1胎、右心房1胎)、肥厚型心肌病2胎(累及双心室1胎,室间隔1胎)、心内膜弹力纤维增生症4胎(原发型1胎、继发型3胎)、心肌致密化不全3胎(累及双心室2胎、右心室1胎),FCM累及心室中以双心室为著.结论 胎儿超声心动图可对FCM做出诊断及分型,且可评估胎儿心脏功能及血流动力学的变化,并判断FCM的预后.     

流式细胞术与不同类型聚合酶链式反应技术用于儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病监测的比较

[目的]比较流式细胞术(FCM)与多种聚合酶链式反应(PCR)技术在儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病(MRD)监测中的应用价值。[方法]选择2016年1月至2018年12月本院收治的170例急性淋巴细胞白血病患儿,且均接受SCCLG-ALL-2016方案治疗。在初诊时通过FCM行免疫分型检测以及通过PCR技术检测急性淋巴细胞白血病融合基因和免疫球蛋白(Ig)及T细胞表面受体(TCR)基因重排;治疗dus通过FCM及不同类型PCR技术(RT-qPCR、巢式RT-PCR、多重PCR)进行MRD监测。分析FCM与不同类型PCR技术对MRD监测结果有无差异。[结果]FCM检测MRD阳性率较RT-qPCR和巢式RT-PCR高,但差异无统计学意义(P>0.05)。FCM检测MRD阳性率较多重PCR高,且其差异具有统计学意义(χ^(2)=34.03,P<0.05)。RT-qPCR、巢式RT-PCR及FCM技术检测MRD阳性患者均较阴性患者OS低,但其差异无统计学意义(P>0.05)。多重PCR技术检测MRD阳性患者较阴性患者OS低,差异有统计学意义(P<0.005)。[结论]FCM方法与RT-qPCR或巢式RT-PCR技术检测白血病特异性融合基因均适用于急性淋巴细胞白血病患儿MRD监测,灵敏度高,特异性强;多重PCR方法检测IG或TCR基因重排进行MRD监测,特异性强,但灵敏度较低。     

流式细胞术对非霍奇金氏淋巴瘤的诊断价值

目的评价流式细胞术（FCM）对非霍奇金淋巴瘤（NHL）诊断的临床效能。方法采用病理形态学检查、免疫组织化学染色及FCM检测32例NHL及30例非NHL患者。结果 32例NHL患者中,病理形态学检查、免疫组织化学染色及FCM诊断的敏感性分别为78.1%、46.9%及84.4%。30例非NHL患者中,病理形态学检查、免疫组织化学染色及FCM诊断的特异性分别为100.0%、80.0%及83.3%。结论 FCM提高了淋巴结活检样本的淋巴瘤诊断准确率。     

流式细胞术检测表达FoxP3的CD4+CD25+调节性T细胞

目的 探讨转录因子FoxP3在外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)内的表达特性.方法 取正常人外周血单个核细胞(PBMC),经固定/透膜处理进行细胞内染色,用流式细胞术(FCM)检测T细胞内FoxP3.以抗人CD3/CD28诱导T细胞活化,再用定量PCR及FCM术分别检测FoxP3 mRNA及蛋白质表达水平.结果 FoxP3主要表达于CD4 T细胞,尤其是CD25高表达的CD4 T细胞,达97%左右;中等程度表达CD25的细胞中也含有少量FoxP3阳性细胞.T细胞活化后,表达FoxP3的CD4 CD25 T细胞比例显著增高,FCM检测结果与定量PCR结果一致.结论 FoxP3不仅参与维持Treg细胞的功能,也与T细胞的活化有关.FCM检测细胞核内表达的FoxP3分子为研究Treg细胞提供了一种快速、简便的方法.     

流式细胞仪法用于血小板相关抗体检测和血小板交叉试验

目的 应用流式细胞仪(FCM)进行血小板相关抗体检测和血小板交叉试验。方法 利用血小板抗体阳性、阴性血清探寻FCM法实验条件,血小板经血清致敏,洗涤后,加入荧光标记鼠抗人IgG反应,由FCM获取和分析。52人次正常人血清经FCM法检测后,统计界定正常值范围。1份阳性血清经9个稀释度倍比稀释,分别用FCM法和固相ELISA抗体筛选法检测。31名临床血小板输注无效患者分别用FCM法和抗原捕获酶免分析法(MACE)进行102人次血小板交叉配合试验。结果 FCM法检测正常值为荧光强度比值R<1.156,9个稀释度的阳性血清检测表明,FCM法最高可检稀释度为86.67,固相ELISA法最高可检稀释度为56.34(抗-HPA)和67.25(抗-HLA)。102人次血小板交叉结果显示,FCM法和MACE法无显著性差异(P>0.05)。结论 FCM法可用于血小板相关抗体检测和血小板交叉配血,是一种快速、灵敏的新方法。     

流式细胞术测定血小板的实验评价

目的探讨流式细胞术(FCM)计数血小板的临床应用价值.方法用FCM的红细胞与血小板比值法(RBC/PLT-R法)计数血小板并与参考方法(手工法)及电阻法进行比较.结果 3种方法计数血小板均有相关性(P<0.001),血小板计数在(1～805)×109/L范围时相关系数>0.97;血小板计数在(1～89)×109/L范围时相关系数>0.84.与参考方法比较,血小板计数>89×109/L时2种方法的相关系数分别为>0.99、>0.95;血小板<89×109/L时,相关系数为>0.97、>0.84.但是对部分病例标本,FCM与电阻法存在较大的误差.结论 FCM法计数血小板优于电阻法,特别对血小板减少症的患者.     

流式细胞术在精液检测中的应用

流式细胞术(FCM)是20世纪70年代发展起来的一种单细胞快速分析技术,已广泛应用于细胞生物学和医学的各个领域.精子质量检测是诊断男性不育的重要手段,由于检测精子数低及主观因素影响,常规的精液检查只能反映精子的形态特征和有限的功能,不能为生育力提供准确评估的依据.将FCM用于精液检查,可把定性的描述过渡到定量的研究,并可进行数据统计,大大提高了实验结果的科学性,而且可对精液进行高通量、多参数分析.因而FCM为客观地评价男性生育能力提供了有利的条件,有着广泛的应用前景.本文对流式细胞术在精液检测中的应用进行综述.     

流式细胞仪检测HLA-B_(27)抗原初探

目的　建立一种快速、准确的HLA B2 7检测技术。方法　利用流式细胞仪 (FCM)检测HLA B2 7抗原 ,并将结果与基因定型法比较 ,74例临床样本分别用FCM法、PCR ASP基因定型法检测HLA B2 7抗原和基因。结果　FCM法有 2 2例HLA B2 7阳性 ,5 2例阴性 ,与PCR ASP法结果比较 ,阳性符合率 88% ,阴性符合率 10 0 % ,总观察一致率 95 .9% ,二种检测方法无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　可以认为 ,FCM法检测HLA B2 7具有快速灵敏、多参数检测等优点 ,针对不同的样本来源和临床要求 ,与PCR ASP法配合使用 ,能在临床强直性脊椎炎等疾病诊断中发挥重要作用     

定量HLA-B27检测在强直性脊柱炎中的诊断价值

目的通过流式细胞术(FCM)定量测定T细胞上人类白细胞抗原(HLA)B27荧光强度,研究其对强直性脊柱炎(AS)的诊断价值.方法利用流式细胞仪(FCM)检测63例AS患者,38例背痛及腰腿痛患者及47例健康体检者T细胞上的HLA-B27的结果,并进行比较.结果FCM测得57例(90.4%)AS患者阳性,4例(10.5%)背痛及腰腿痛患者阳性.3例(6.3%)健康人群阳性.结论AS患者组的HLA-B27阳性率明显增高,因此应用流式细胞仪检测B27有进一步提高对强直性脊柱炎疾病诊断的价值.     

流式细胞术在免疫性血小板减少症诊断中的应用

目的　用流式细胞术 (FCM)检测血小板自身抗体 ,评价FCM在免疫性血小板减少症诊断中的应用价值。方法　采用FCM和竞争性ELISA方法 ,检测了 81例血小板减少症患者及 3 1名正常志愿者血小板表面的血小板相关免疫球蛋白G(PAIgG) ,并将两种方法的结果作了比较。结果　以FCM检测PAIgG ,5 1例特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者的血小板阳性百分率 ( 4 4.5± 2 7.7) %和相对平均荧光强度 (相对MFI) 9.3 5± 12 .2 2均明显高于正常对照组 [血小板阳性百分率 ( 16.6± 8.4 ) %(P <0 .0 1) ,相对MFI 2 .16± 0 .76(P <0 .0 1) ],亦高于再障、阵发性睡眠性血红蛋白尿患者 [血小板阳性百分率 ( 18.4± 9.5 ) % (P <0 .0 1) ,相对MFI 2 .64± 1.74 (P <0 .0 5 ) ];16例系统性红斑狼疮 (SLE)、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和急性粒细胞白血病患者的结果 [血小板阳性百分率 ( 3 7.5± 2 2 .6) % (P <0 .0 1) ,相对MFI 6.2 0± 6.66(P <0 .0 5 ) ]也明显高于正常对照组 ;此外 ,13 /5 1例ITP和 2 /11例SLE患者的荧光直方图中出现显著的峰形改变。FCM检测ITP的阳性率 ( 86.3 % )比ELISA法 ( 82 4 % )略高 (P >0 0 5 )。结论　FCM用于免疫性血小板减少症患者PAIgG的检测 ,具有灵敏、快速、简单和客观的特点 ,是适用于临床诊断的     

磁珠酶联免疫分析和流式细胞仪检测强直性脊柱炎患者HLA-B27比较

目的 探讨磁珠酶联免疫分析(immunomagnetic separation and enzyme-linked immunosorbent assay,IMS-ELISA)法检测人类白细胞抗原B27(human leukocyte antigen B27,HLA-B27)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)临床诊断中的应用价值.方法 同时用IMS-ELISA法和流式细胞仪(flow cytometry,FCM),对2007年5月～2011年2月在孝感市中心医院就诊的320例AS疑似患者进行HLA-B27检测,根据临床确诊结果和检测结果计算两种方法的结果符合率、敏感度、特异度及阴性预测值、阳性预测值.结果 临床确诊AS患者178例,非AS患者142位.IMS-ELISA法和FCM检测结果符合率为98.4%.两法的敏感度、特异度及阴性预测值、阳性预测值分别为0.972,0.989(χ2＝0.13,P=0.085);0.951,0.965(χ2＝0.02,P=0.098);0.964,0.986(χ2＝0.03,P=0.079);0.961,0.972(χ2＝0.00,P=0.102),两两比较其差异均无统计学意义(P>0.05).结论 IMS-ELISA法和FCM在检测HLA-B27上比较,结果符合率高,敏感度和特异度也较高,临床适用性相接近,适宜在基层医院推广应用.     

流式细胞术检测网织红细胞的多参数分析及方法评价

目的观察流式细胞术(FCM)检测网织红细胞(RET)与传统方法的优势及其检测信息与临床的联系。方法以噻唑橙作为RNA的荧光染料标记RET,采用FCM测定RET和网织血小板(RP)的百分数、RNA残留荧光强度;传统RET测定以煌焦油蓝染色、显微镜计数观察。结果 FCM法与传统方法比较,其重复性和准确性差异无统计学意义(P0.05),但FCM的变异系数小于传统方法 .300例研究对象间各贫血组RET%和平均荧光强度与健康对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。100例血小板减少患者其RP%和平均荧光强度与健康对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 FCM测定RET与传统方法相比具有准确性高、重复性好等特点,在检测RET%时能同时检测到RET的平均荧光强度和RP,平均荧光强度可反映RET和RP的成熟情况。     

流式细胞术表型分析的质量控制

FCM表型分析已经从外周血淋巴细胞的双参数定量测定发展到当今对血液细胞病理学包括骨髓、淋巴结分析的5个或更多参数的定性测定,其中白血病和淋巴瘤的免疫表型分析在血液淋巴系统恶性疾病诊断、分类及病情监测上都是对形态学检验的一种重要补充.FCM 5个或更多参数分析的复杂性以及数据的解释依赖于仪器、试剂、程序的标准化及校准.此...