乳腺癌HER-2基因显色原位杂交与免疫组织化学检测对比研究

目的：对乳腺癌HER-2/neu/c-erbB-2（HER-2）显色原位杂交（chromogenicin situhybridization,CISH）检测和免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）表达两者之间进行对比研究。方法：选择乳腺癌的组织蜡块44例,经HER-2 IHC蛋白表达;阴性9例,（＋）9例,（艹）13例,（）13例。从中选取经HER-2 IHC表达阳性的乳腺癌22例[包括HER-2 IHC表达（＋）9例和HER-2 IHC表达（）13例]作回顾性CISH基因检测。结果：HER-2 IHC表达（＋）9例一组,经CISH基因检测9例均无基因扩增;HER-2 IHC表达（）13例一组,CISH无基因扩增2例（15.38%）,基因检测不理想1例（7.76%）,基因扩增10例,两种检测方法符合率76.92%,两者有高度一致性（P=0.001）。HER-2 IHC表达（）和CISH基因检测扩增与乳腺癌类型间有一定相关性（P〈0.05）。结论：CISH基因检测与IHC表达（）组,两者具有很高的一致性。IHC可作为乳腺癌HER-2筛选的首选方法,对于HER-2 IHC表达（ 卅）病例,经CISH基因检测,两者符合率高,CISH基因检测较IHC更准确,证实HER-2／neu扩增的患者可从采用抗HER-2单克隆抗体治疗中获益。     

CISH、IHC联合检测胃腺癌EGFR、HER2基因状态及其临床意义

目的 比较显色原位杂交(CISH)与免疫组织化学(IHC)检测胃腺癌表皮生长因子(EGFR)及表皮生长因子受体2(HER2)的基因状态.方法 CISH及IHC检测85例胃腺癌组织EGFR、HER2基因扩增及蛋白表达.结果 EGFR蛋白表达阳性29例,其中表达(3+)的4例中,4例基因扩增;表达(2+)的11例中,8例基因扩增;表达(1+)的14例中,1例基因扩增.HER2蛋白表达阳性13例,其中表达(3+)的4例中,4例基因扩增;表达(2+)的6例中,5例基因扩增;表达(1+)的3例中,无基因扩增.EGFR、HER2蛋白表达及基因扩增无相关性.结论 IHC检测蛋白表达仅(3+)与CISH检测基因扩增有较好一致性,CISH检测基因状态有较好特异性.     

显色原位杂交与免疫组织化学检测乳腺癌HER-2基因的比较研究

目的探讨显色原位杂交(CISH)在检测乳腺癌组织中HER-2基因扩增的作用,比较CISH与免疫组化(IHC)检测组织HER-2状态的差异性。方法采用SPOT-Light HER2 CISHTM试剂盒,以CISH方法对40例IHC EnVision法染色分别为( )、( )、( )的乳腺癌石蜡切片标本进行HER-2基因状态的检测。结果在15例经IHC检测HER-2水平表达为( )乳腺癌标本中14例为HER-2基因高扩增,1例无扩增;16例经IHC检测HER-2水平表达为( )乳腺癌标本中,11例为HER-2基因高扩增,5例无扩增;9例经IHC检测为( )的标本均无扩增。两种方法对乳腺癌组织HER-2状态的检测有一定的差异性(P<0.05)。结论IHC是HER-2表达初步筛查的首选方法,由于蛋白表达和基因扩增检测结果存在一定的差异性,建议IHC( ~ )患者进一步作CISH检测确诊。     

乳腺癌人表皮生长因子受体-2基因扩增的意义

目的分析人表皮生长因子受体-2(HER2)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)在乳腺癌组织中的表达,并用荧光免疫杂交法(FISH)检测乳腺癌组织中HER2基因扩增状态,评价其临床病理意义.方法应用FISH、IHC方法分析95例乳腺癌HER2基因扩增与临床病理特征的关系,比较两者之间的差异.结果 IHC法HER2蛋白表达(+++)12例中12例(100%)HER2基因扩增;HER2(++)50例中14例(28%)HER2基因扩增;HER2(+)21例中2例(9.52%) HER2基因扩增;84例浸润性导管癌中28例(33.3%)有HER2基因扩增,11例浸润性小叶癌中无HER2基因扩增;HER2基因扩增与ER和PR的IHC表达(+)或(-)间的差异有统计学意义(P<0.05);与肿瘤大小间的差异有统计学意义(P<0.05).结论免疫组化检测可作为HER2表达状态的初筛,在IHC法HER蛋白表达(+++)同时ER、PR阴性的浸润性导管癌HER2基因扩增率较高.     

采用色素原位杂交法检测HER2蛋白弱阳性表达乳腺癌患者的基因扩增状态

目的应用色素原位杂交法(chromogenic in situ hybridization,CISH)检测HER2蛋白弱阳性表达乳腺癌患者的HER2基因扩增状态,为乳腺癌的临床诊治提供依据。方法收集HER2蛋白弱阳性()表达乳腺癌患者石蜡切片标本187例,采用Invitrogen公司的HER2CISHTM检测试剂盒,根据美国临床肿瘤学会/美国病理医师学会推荐标准,分析标本HER2基因状态及其与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的相关性。结果乳腺癌HER2蛋白弱阳性表达标本HER2基因扩增阳性率为53.48%(100/187),基因扩增阳性者ER、PR阳性表达率分别为44.00%、46.00%;HER2基因扩增阴性率为46.52%(87/187),基因扩增阴性者ER、PR阳性表达率分别为70.73%、78.05%。HER2基因扩增结果与性激素受体(ER、PR)表达明显负相关(P<0.01)。结论 HER2蛋白弱阳性表达乳腺癌患者有必要进一步明确其基因扩增状态,CISH可有效检测此类患者的HER2基因扩增状态。     

双色银原位杂交法检测乳腺癌HER2的表达

目的通过比较双色银染原位杂交法(DSISH)检测乳腺癌的HER2蛋白表达和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌的HER2基因扩增的一致性和差异性及其临床意义,探讨DSISH在临床检测乳腺癌HER2基因状态的应用价值。方法采用DSISH与免疫组织化学检测乳腺癌组织中的HER2基因扩增及蛋白表达状态。结果 156例乳腺癌组织经免疫组织化学检测HER2蛋白强阳性65例,阳性23例,弱阳性59例,无表达9例。HER2蛋白阳性表达率为56.4%(88/156)。156例乳腺癌组织HER2基因扩增107例,无扩增49例,HER2基因扩增率为68.6%(107/156)。结论 DSISH应用于乳腺癌HER2基因检测,并与免疫组织化学检测结果具有一致性,DSISH可靠性高,具有广泛的应用价值。     

荧光原位杂交技术在乳腺癌HER2的表达及其意义

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）-5免疫组织化学（IHC）检测乳腺癌人表皮生长因子受体2（HER2）基因状态中的相关性和差异性。方法对40例原发性乳腺癌组织做石腊切片,分别用兀SH和IHC检测HER2基因扩增和HER2蛋白表达,以FISH检测结果为标准,评价IHC检测的基因扩增比率。结果IHC检测HER2蛋白表达（3＋）的基因扩增比率为88．9％（8／9）,1例无扩增者为17号染色体多体;IHC（2＋）的基因扩增比例为71．4％（5／7）,2例无扩增者中有1例为17号染色体多体;IHC（1＋和0）的无基因扩增。结论IHC可以做为HER2基因状态检测的初筛;IHC（2＋）与IHC（3＋）存在假阳性,与17号染色体多体有关,故应该做FISH检测确诊。     

浸润性乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2表达的检测方法比较

目的:比较荧光原位杂交法(FISH)与免疫组化法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增和蛋白表达的异同。方法:应用4B5 IHC法与FISH法对51例女性新发乳腺癌行HER2蛋白表达及基因扩增的检测,对结果进行统计分析。结果:2种方法检测HER2阳性率存在显著性差异(P<0.05);IHC法检测HER2蛋白0～1+与3+之间,通过FISH法检测HER2基因扩增的一致性好(κ=0.9,P<0.05);IHC检测HER2蛋白2+与3+之间与FISH法检测HER2基因扩增一致性良好(κ=0.777,P<0.05)。结论:4B5 IHC法与FISH法呈现很好的一致性。新的免疫组化抗体4B5检测HER2蛋白具有良好的灵敏度和稳定性。     

FISH检测乳腺癌HER2基因扩增及临床病理关系的研究

目的：探讨荧光原位杂交（FISH）检测原发性乳腺癌组织中HER2基因扩增与临床病理的关系。方法：收集2007年11月至2009年8月手术切除的乳腺癌组织标本105例,采用FISH方法检测HER2基因扩增情况,分析其与临床病理的关系,同时比较FISH与免疫组化（IHC）检测结果的相关性。结果：105例乳腺癌中共有39例HER2基因扩增,阳性率为37.1%（39/105）,其扩增与HER2蛋白过表达、组织学分级、雌激素和孕激素受体（均P〈0.05）状态有关;FISH与IHC两种方法检测HER2结果密切相关（rs=0.680,P〈0.05）。结论：HER2基因扩增与乳腺癌发生发展及临床预后密切相关,可作为乳腺癌治疗的理想靶点。     

全自动银增强原位杂交检测乳腺癌患者人表皮生长因子受体2基因状态

目的 评价银增强原位杂交(SISH)用于乳腺癌患者人表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增状态检测的可行性.方法 研究对象为2009年5-11月在中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院行手术治疗的63例乳腺浸润性导管癌患者(年龄32～64岁),术前均未行放疗和化疗.取手术切除乳腺癌标本行全自动免疫组织化学染色检测HER2蛋白表达、SISH检测HER2基因状态,其中43例同时行荧光原位杂交(FISH)检测HER2基因状态.根据2007年美国临床肿瘤协会/美国病理家协会制定的标准评估检测结果,比较不同检测方法之间的符合率.结果 61例患者SISH检测结果满意,其中HER2蛋白表达阳性(3+)的30例中SISH检测29例(97%)为HER2基因扩增;蛋白表达不确定(2+)的11例中SISH检测2例(18%)为基因扩增,2例(18%)为基因扩增不确定;蛋白表达阴性(1+/0)的20例SISH检测均为基因无扩增.43例行FISH检测者,HER2蛋白表达阳性(3+)的21例中20例(95%)FISH检测为HER2基因扩增;蛋白表达不确定(2+)的10例中1例FISH检测为基因扩增,3例为不确定;蛋白表达阴性(1+/0)的12例FISH检测均为基因无扩增.43例患者的FISH与SISH检测结果比较,42例相符(基因扩增21例,基因扩增不确定2例,基因无扩增19例),1例FISH检测为HER2基因扩增不确定而SISH检测为基因无扩增,总体符合率为98%.结论 SISH技术用于乳腺癌HER2基因状态检测结果与FISH相当,具有可行性和实际使用价值.     

基因重组人葡萄糖激酶及其激活剂体外筛选方法的建立

目的:利用真核表达系统所获得的重组葡萄糖激酶蛋白建立葡萄糖激酶激活剂体外筛选方法.方法:将人源肝脏葡萄糖激酶基因插入到真核表达载体pPIC9K中,重组质粒经酶切和测序鉴定无误后转化毕赤酵母,用甲醇诱导表达.表达的蛋白进行SDS-PAGE鉴定,并对表达的蛋门进行活性测定,建立葡萄糖激酶激活剂体外筛选方法.利用该方法对大量化合物进行了筛选,并发现一先导化合物.结果:利用体外重组技术得到具有活性的葡萄糖激酶蛋白,并用于体外激活剂筛选方法的建立.结论:成功建立了葡萄糖激酶激活剂体外筛选方法.     

胎儿皮肤发育中成纤维细胞生长因子受体-2表达的免疫组织化学研究

目的 研究不同发育时期胎儿皮肤中成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)的表达及分布,探索FGFR2在皮肤发生、发育中的作用.方法 对不同发育时期胎儿皮肤取材、固定,制成石蜡切片,S-P法检测FGFR2的表达.结果 胚胎发育期FGFR2在表皮细胞表达较弱,甚至呈阴性表达.表皮分层期时,表皮层开始增厚,并可见毛囊的初级原基;FGFR2在表皮层和毛囊初级原基内呈弱阳性表达.毛囊形成期时,毛囊的结构初步形成,体积细小,形态幼稚;FGFR2主要在毛母质细胞内表达,并且随着胎龄增加,表达范围逐渐扩大,表达量逐渐增多.毛囊发育成熟期后,毛囊的结构发育相对成熟,FGFR2则在表皮层、毛细血管内皮细胞及皮脂腺的导管部均有表达,尤其在毛母质细胞呈强阳性表达.结论 FGFR2在胎儿皮肤中的表达与分布与毛囊的发生、发育密切相关.FGFR2的表达上调可能促进毛囊干细胞的增殖,并诱导其定向分化形成终末组织功能细胞.     

兔VX2肝癌模型接种方法的改进及螺旋CT观察

目的:改进经典的兔VX2肝癌模型瘤组织接种法,比较改良的瘤组织接种法与经典方法的差异. 方法:将30只新西兰白兔随机分为2组,分别采用经典的瘤组织块接种法(A组)及改良的瘤组织注射接种法(B组).于接种后第8、15、22、29d进行螺旋CT扫描,观察CT表现、计算肿瘤大小,最后予病理确认. 结果:A组和B组的接种时间分别为(9.47±2.85)min和(5.85±1.62)min,差异有统计学意义(P=0.003);2组的成功率分别为53.3%和86.7%,差异无统计学意义(P=0.109).2组肿瘤生长情况的差异无统计学意义(P=0.667).结论:改良的瘤组织块接种法操作简便,成瘤率高,优于经典的瘤组织块直接接种法.     

利用寡核苷酸芯片诊断α-地中海贫血无创方法的探讨

目的 通过比较地中海贫血脐血与正常脐血和外周血的全基因组表达差异,进一步探讨早期诊断地中海贫血的无创方法.方法 利用含有人约22 000条Oligo DNA的人类全基因长寡核苷酸芯片,对1例α地中海贫血患儿脐血与1例正常脐血及1例外周血分别配对检测差异基因表达,并用real-time PCR验证差异基因HBA2在脐血和外周血中的差异性.采用分层聚类分析等显著性检验方法发现统计学意义上差异表达的基因.结果 两组芯片结果显示,检测到的基因共4 205条,其中两者差异的基因共822条(ratio≥2或≤0.5);通过间接比较两组差异率为19.5%,即重复率为81.5%.实时定量PCR(RT-PCR)的Ct(threshold cycle)值结果亦显示HBA2在脐血和外周血中表达无差异.结论 高通量的基因芯片技术能够筛选出大量的地中海贫血差异表达基因,直接与α-地中海贫血相关的HBA2蛋白在脐血和外周血中的表达无差异.预示着利用微阵列分析法对地中海贫血进行早期诊断时,可以采用无创技术制备芯片样本.     

抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性评价方法的建立

目的:建立抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的评价方法.方法:利用HER2表达阳性的人乳腺癌细胞系BT-474建立抗HER2单抗体内外活性评价方法,对上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗的体外生物学活性、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性、对BT-474荷瘤裸鼠的治疗作用及荷瘤裸鼠瘤体组织H-E染色及免疫组化检测rhHER2-mAb的分布与Herceptin进行了比较研究.结果:建立了完整的该人源化单抗的体内外活性评价方法,测评结果显示,上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗在体外有效抑制BT-474细胞增殖,与Herceptin体外生物学活性相似,EC50分别为148.3和145.9 ng/ml;可通过ADCC效应杀伤BT-474细胞,与Herceptin的EC50值一致,分别为185.0和183.9 ng/ml;抑制BT-474裸鼠异种移植模型肿瘤的生长,与无关抗体治疗组或PBS治疗组相比具有统计学差别(P<0.05),与Herceptin抑制能力接近,4 mg/kg剂量组相比没有统计学差别;免疫组织化学检测显示抗体集中分布于肿瘤组织.结论:建立的评价方法可对抗HER2单抗的抗肿瘤活性进行客观准确的评价,国内研制的抗HER2人源化单克隆抗体与进口同种抗体相比具有相同的体内外活性.     

实时PCR检测卵巢癌石蜡块组织中Her-2/neu的新方法

目的探索检测卵巢癌石蜡块组织中Her-2/neu状态的新方法.方法选取69例卵巢癌组织蜡块,用实时PCR检验卵巢癌组织中的Her-2/neu基因的扩增情况,用免疫组化检测其蛋白表达情况,将两者结果进行比较,并用FISH试验来验证其结果.结果肿瘤组织中Her-2/neu的扩增如果以相对基因拷贝数(肿瘤细胞内基因拷贝数与正常二倍体卵巢组织细胞基因拷贝数的比率)≥1.5或≥2为截取值,本组卵巢癌组织中Her-2/neu的扩增率分别为26.1%(18/69)、15.9%(11/69);本组卵巢癌组织中Her-2/neu免疫组化为 ～ 者为28.99%(20/69);两种检测方法的结果具有很高的一致性.结论实时PCR简便、客观、高效,可望成为卵巢癌石蜡组织中除免疫组化外检测Her-2/neu变化的一种备选方法.     

吸光系数法测定二氯二茂钛原料药的含量

采用吸光系数法对二氯二茂钛原料药进行含量测定。３９１ｎｍ处测得Ｅ１％１ｃｍ＝９８．３２,平均回收率为９８．７７％～１０１．７４％。相对标准差ＲＳＤ＝０．１２％～０．６６％。测定不同温度,湿度下放置不同时间原料药的含量。与工作曲线法相比。两者之间无显著性差异。     

卡托普利缓释片衍生化紫外分光光度法

目的 :测定卡托普利缓释片的含量。方法 :采用 2 ,2′—二硫二吡啶 (2_PDS)作衍生化试剂 ,于 34 3nm波长处测定吸收度 ,与对照品比较求得含量。结果 :回归方程为C(μg/ml) =1 0 85 8+32 2 2 13A ,r =0 9999(n =8) ,卡托普利浓度在 5 4～ 2 3 7(μg/ml)范围内 ,A与C呈线性。平均回收率为 10 0 7% ,RSD为 1 7%。 结论 :该方法准确 ,简便 ,稳定 ,重现性好 ,能准确控制本品含量     

大鼠心肌细胞H9C2活性氧水平检测方法探究

目的比较3 种细胞内活性氧（ROS）的检测方法,分析优缺点,筛选1 种合适、准确的检测大鼠心肌细胞H9C2 缺氧/复氧（H/R）模型中细胞内活性氧的方法。方法培养H9C2 细胞,选择密度合适（80%～90%）的H9C2 细胞进行铺板,加入2,7- 双乙酸二氯荧光素（DCFH-DA）荧光探针孵育,应用荧光显微镜、流式细胞仪及荧光酶标仪3 种方法检测对照组（正常含氧量培养条件,CON）和实验组（缺氧复氧处理,H/R6h）心肌细胞的荧光强度,从而反映大鼠心肌细胞内活性氧水平,并利用数据分析软件进行统计分析。结果流式细胞仪检测分析结果：对照组（152 690±34 104）FU/μg,实验组（325 669±12 755）FU/μg;荧光酶标仪检测分析结果：对照组（282.3±12.57）FU/μg,实验组（1 274±37.05）FU/μg。实验组的ROS 水平与对照组的ROS 水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,实验组高于对照组,而荧光显微镜观察法无法定量地分析出实验结果。结论3 种ROS检测方法中,荧光酶标仪检测方法能更好地判断大鼠心肌细胞H9C2 活性氧水平。     

补血活血法对口腔扁平苔藓IL-2及sIL-2R水平调节作用研究

目的 :探讨补血活血中药对口腔扁平苔藓患者 IL - 2及 s IL - 2 R水平调节作用 ,为临床用药提供依据。方法 :5 0例 OL P患者随机分为 2组 ,分别给予补血活血中药和雷公藤总苷片进行治疗 ,采用放射免疫分析法和双抗体夹心法检测治疗前后 IL- 2及 s IL- 2 R水平的变化。结果 :治疗两个月后补血活血中药对口腔扁平苔藓患者的黏膜斑纹改善和 IL- 2及 s IL- 2 R水平调节作用明显优于雷公藤总苷片 ;还显示 IL- 2水平与患者黏膜充血及白色斑纹程度呈负相关 ,而与 s IL- 2 R的水平呈正相关。结论 :口腔扁平苔藓患者因病情不同而免疫平衡失调的严重程度也不同 ;补血活血中药是治疗 OL P有效的并具有调节免疫功能的药物