不同还原性疏基氨基酸对人脐静脉内皮细胞的损伤作用研究

目的 探讨三种还原性疏基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法 将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性疏基氨基酸24小时后，测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果 ①同型半胱氨酸（Hcy）不仅促进脂质过氧化，而且可诱导细胞凋亡并可致细胞坏死。②谷胱甘肽（GSH）呈还原性，对细胞有全面的保护作用。③Hcy的氧化性最强，GSH则呈现出完全的还原性，半胱氨酸（Cys)可能处于二者之间。结论 同型半胱氨酸可能是通过特异的抑制谷光甘肽过氧化物酶并减弱了细胞内的还原缓冲能力等机制，发挥与Cys和GSH不同的生物学效应，从而导致内皮细胞出现坏死的凋亡等损伤性的改变。     

含巯基氨基酸促血管内皮细胞氧化的对照研究

目的:探讨不同含巯基氨基酸对人血管内皮细胞的氧化作用。方法:用含有1 000μmol/L的同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)、还原型谷胱甘肽(GSH)培养液培养细胞24h后,以分光光度比色法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物酶(SOD)活力的改变。结果:Hcy可促使细胞内MDA含量的增加和SOD活力的下降。Cys和GSH对细胞内MDA的含量无影响。Cys可促进细胞内SOD活力的升高。结论:Hcy通过氧化应激促进血管内皮细胞的损伤。     

晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸对内皮细胞的协同损伤作用

目的探讨两种尿毒症毒素晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGE）和同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）在致血管内皮细胞损伤的过程中是否具有协同作用。方法不同浓度的AGE修饰牛血清白蛋白（AGE-BSA）和Hcy单独或联合作用于人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞，检测各组上清液NO浓度和脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）含量及细胞凋亡百分率。结果AGE＋Hcy联合干预组的细胞凋亡率明显高于单独AGE和Hcy干预组（P〈0．01），MDA含量也显著高于AGE干预组（P〈0．05）和Hcy干预组（P〈0．01），联合组干预组NO浓度则明显低于单独干预组（P〈0．01）。结论AGE和Hey均参与了血管内皮细胞的损伤，两者具有协同效应，上述效应可能与氧化应激有关。推测终末期肾病（ESRD）患者AGE和Hcy的升高可能是加速该人群动脉粥样硬化发生发展的重要因素。     

同型半胱氨酸与血管内皮细胞功能的研究进展

同型半胱氨酸 (Homocysteine,Hcy)已被证实是动脉硬化 (Atherothrombosis,AS)的独立危险因素。目前已知Hcy是通过损害内皮功能 ,促进血小板激活 ,诱导平滑肌细胞增殖 ,促发脂质过氧化及增加肝细胞胆固醇合成等途径诱导AS的发生[1 ] 。通过近年来国内外关于Hcy致动脉硬化的研究提示 :Hcy影响血管内皮细胞损伤和功能失调导致动脉硬化的产生可能通过下列几点 :①Hcy可能通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死、凋亡等损伤改变 ,影响内皮细胞功能导致AS发生 ;②特异性抑制谷胱甘肽过氧化物酶 ,造成血管内皮损伤 ;③Hcy与金属离子、氧自由…     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸诱导内皮细胞内质网应激的抑制作用

目的： 观察阿托伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）诱导的人脐静脉内皮细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）以及凋亡的影响。方法: 不同浓度的Hcy或联合阿托伐他汀处理人脐静脉内皮细胞后,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR和蛋白质印迹法测定ERS相关分子BiP、CHOP及p-eIF2α、p- PERK的表达变化。结果: Hcy呈浓度依赖性地诱导内皮细胞ERS相关分子BiP、CHOP及p-eIF2α、p-PERK的表达,阿托伐他汀可明显抑制Hcy诱导的内皮细胞ERS相关分子的表达,减少内皮细胞凋亡。结论： 阿托伐他汀可通过下调ERS相关信号通路,抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

金属硫蛋白对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤及脂质过氧化的影响

目的 观察金属硫蛋白（metallothionein，MT）拮抗同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）对血管内皮细胞损伤及脂质过氧化作用。方法培养人血管内皮细胞，台盼蓝排斥法计算细胞存活率，NADH氧化法测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出量，^109Cd血红素饱和法测细胞MT含量，硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛（MDA）含量，化学比色方法测超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果同型半胱氨酸降低血管内皮细胞存活率，增加细胞LDH漏出量，增加细胞MDA含量，降低细胞SOD、GSH-Px活力。外源性MT呈浓度依赖性地抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤及抗氧化酶活力降低；凝血酶诱导MT生成亦明显抑制Hcy引起的内皮细胞损伤和抗氧化酶损伤。结论Hey损伤血管内皮细胞，降低细胞抗氧化酶活力，外源性给予或内源性诱导MT生成均可拈抗Hcy的内皮细胞损伤及脂质过氧化作用。     

促红细胞生成素对同型半胱氨酸导致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对同型半胱氨酸(Hcy)导致的血管内皮细胞损伤是否具有保护作用.方法 采用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20 mmol/L)的Hcy处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察细胞的损伤情况,建立Hcv诱导的内皮细胞损伤模型,然后采用不同浓度(0.1、1、10、100 U/ml)的EPO进行预处理,观察细胞的损伤情况.通过MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测细胞上清IL-6含量,Hoechst33258染色检测细胞凋亡来评价细胞损伤情况.结果 Hcy对HUVEC有损伤作用,并且随浓度增加损伤作用更明显.EPO可增加细胞存活率,抑制Hcy诱导HUVEC IL-6的产生,抑制细胞凋亡.结论 EPO对Hcy导致的内皮细胞损伤具有一定的保护作用.     

同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡及对p53、Fas表达的影响

目的:通过血管内皮细胞的培养,了解同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞的损伤程度,初步探讨诱导血管内皮细胞凋亡的可能途径.方法:用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后,应用透射电子显微镜技术以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态,同时采用流式细胞仪检测细胞Fas以及p53的表达情况.结果:0.5 mmol/L和5 mmol/L的Hcy均能促进细胞凋亡,Hcy能促进细胞p53的表达,而且随着Hcy浓度的升高,其表达也逐步增强,不同浓度Hcy处理后各组细胞Fas蛋白的表达差异无显著性.结论:Hcy能诱导血管内皮细胞凋亡,这种作用可能与其促进p53表达有关.     

蜕皮甾酮对同型半胱氨酸诱导人血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨蜕皮甾酮对同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞株CRL-1730凋亡的影响.方法 体外常规培养人血管内皮细胞CRL-1730,细胞计数试剂盒法检测蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活力的影响;Hcy处理人血管内皮细胞CRL-1730建立损伤模型,分组为空白对照组、蜕皮甾酮高剂量组(Hcy+1.5μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮中剂量组(Hcy+1.0μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮低剂量组(Hcy+0.5μmol/L蜕皮甾酮)、Hcy组;流式细胞术检测CRL-1730细胞凋亡率,并利用荧光染色进行细胞凋亡形态学观察;RT-PCR法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2及Caspase-3基因的表达;采用Western blot法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白表达.结果 所选浓度蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活性无明显影响;流式细胞术结果显示经Hcy处理后的CRL-1730细胞凋亡率明显增高,但经过不同浓度的蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞凋亡率明显下降;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax和cleaved-Caspase-3的表达明显增高,Bcl-2的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy组比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞Bcl-2表达上调,Bax和cleaved-Caspase-3表达下调;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显增高,Bcl-2 mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,CRL-1730细胞Bcl-2 mRNA表达上调,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA表达下调.结论 蜕皮甾酮对Hcy诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730凋亡具有保护作用,这为其治疗心血管疾病提供了依据.     

同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究

目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响.方法 原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响.结果 内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),且以50或100μM Hcy组最明显.结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制.     

N-乙酰-L-半胱氨酸对H2O2引起的血管内皮细胞损伤的拮抗效应

目的 观察N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC，痰易净)对H2O2引起的血管内皮细胞损伤的影响。方法 通过测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率和脂质过氧化物(LPO)值，MTT法测定细胞增殖活性，流式细胞术测细胞凋亡率，研究体外培养的人脐静脉内皮细胞在不同浓度H2O2作用下的细胞损伤及凋亡，以及NAC对抗细胞损伤及凋亡的效应。结果 随着H2O2浓度增加，细胞凋亡率明显增高，细胞增殖活力降低，细胞脂质过氧化物生成增加，LDH释放率增加，并在一定范围内呈剂量-效应关系。在H2O2中同时加入0．5mmol／L NAC，可使细胞活力增强，凋亡率降低，细胞脂质过氧化物生成显减少，LDH释放率降低。结论 NAC可以对抗H2O2引起的血管内皮细胞损伤。     

同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制研究

目的通过观察不同浓度同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)干预对人脐静脉血管内皮细胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)和氧化应激的影响,探讨其在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)中的作用。方法体外培养HUVEC,将其分为正常对照组(Hcy 0μmol·L-1)、Hcy干预组(浓度分别为50、100、200、500μmol·L-1)、100μM Hcy+叶酸+VitB12治疗组,每个浓度组再分为24、48、72h三个时间组。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,测定各浓度Hcy干预HUVEC 72h的氧化应激损伤指标。结果各浓度Hcy干预组随着Hcy浓度增高及干预时间延长HUVEC的细胞增殖抑制率增加,500μM Hcy 72h干预组最明显(P<0.05)。HUVEC内H2O2和MDA含量随Hcy浓度的增加而增加,Hcy100～500μM组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Hcy100～500μM组HUVEC内SOD活性和T-AOC活性均较对照组降低(P<0.01),并且Hcy的浓度越高降低程度越明显。100μM Hcy+叶酸+VitB12治疗组与对照组比较上述各指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Hcy抑制HUVEC增殖的作用呈剂量依赖关系,病理水平Hcy可以增强氧化应激损伤反应,而叶酸和VitB12对Hcy所致氧化应激损伤有一定的拮抗作用。     

Effects of fluoride on lipid peroxidation, DNA damage and apoptosis in human embryo hepatocytes

Objective To investigate the effects of fluoride on lipid peroxidation, DNA damage and apoptosis in hnman embryo hepatocyte L-02 cells. Methods Lipid peroxide (LPO) level, reduced glutathione (GSH) content, DNA damage, apoptosis, and cell cycle analysis were measured after in vitro cultured L-02 cells were exposed to sodium fluoride at different doses (40μg/mL, 80μg/mL,and 160μg/mL) for 24 hours. Results Fluoride caused an increase of LPO levels and a decrease of GSH content in L-02 cells. There appeared to be an obvious dose-effect relationship between the fluoride concentration and the observed changes. Fluoride also caused DNA damage and apoptosis and increased the cell number in S phase of cell cycle in the cells tested. There was a statistically significant difference in DNA damage and apoptosis when comparing the high dose of fluoride treated cells with the low dose of fluoride treated cells. Condusion Fluoride can cause lipid peroxidation, DNA damage, and apoptosis in the L-02 cell experimental model and there is a significant positive correlation between fluoride concentration and these pathological changes.     

仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用

目的探讨仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用及机制。方法体外培养大鼠原代心肌细胞,将其分为空白对照组、DMSO溶剂对照组（0.1%）、H2O2氧化损伤组（200μmol/L）、槲皮素干预组（槲皮素30μmol/L＋H2O2200μmol/L）、低浓度仙茅苷干预组（仙茅苷0.5μmol/L＋H2O2200μmol/L）、中浓度仙茅苷干预组（仙茅苷5μmol/L＋H2O2μmol/L）、高浓度仙茅苷干预组（仙茅苷50μmol/L＋H2O2200μmol/L）。用H2O2氧化损伤经槲皮素及不同浓度仙茅苷预培养24 h的心肌细胞,18 h后测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、心肌细胞内丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）含量,并测定心肌细胞的凋亡率和生长抑制率。结果 H2O2氧化损伤后LDH、MDA含量明显升高,GSH-px活性明显下降,细胞抑制率和凋亡率均增加（P〈0.01）;而经槲皮素、不同浓度的仙茅苷预处理组的心肌细胞,LDH、M DA含量明显下降,GSH-px活性明显升高,细胞生长抑制率和凋亡率均降低（P〈0.01）;且仙茅苷对心肌细胞氧化损伤的保护作用呈浓度依赖性。结论仙茅苷预处理心肌细胞可保护H2O2所诱导的氧化损伤,其作用可能与抑制脂质过氧化、增加抗氧化酶活性、减少心肌细胞凋亡有关。     

HSP27对Hcy诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究热休克蛋白27 (HSP27)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法检测Hcy对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)存活率的影响;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测Hcy及HSP27对细胞凋亡的影响;设计实验,采用总一氧化氮检测试剂盒(硝酸还原酶法)检测细胞培养液中NO水平、2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)活性氧(ROS)检测试剂盒及流式细胞术检测细胞内ROS来研究可能的保护机制.结果 HUVECs与不同浓度的Hcy作用后,0 mmol/L组存活率均值为97.33％,Hcy 0.2 mmol/L组存活率均值为95.17％,Hcy 0.4 mmol/L组存活率均值为90.72％,Hcy 0.6 mmol/L组存活率均值为78.29％,Hcy 0.8 mmol/L组存活率均值为63.65％,Hcy 1.0 mmol/L组存活率均值为41.51％.0 mmol/L组与Hcy 0.2 mmol/L组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);Hcy 0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L组存活率均低于0 mmol/L组,差异有统计学意义(均P＜0.05).HSP27浓度越高,细胞的存活率越高,呈浓度依赖性,HSP27对HUVECs损伤具有保护作用.Hcy能够诱发内皮细胞凋亡,而HSP27能显著抑制这种凋亡,表明HSP27能减少Hcy对内皮细胞的损害.HSP27能抑制Hcy引起NO的减少和抑制Hcy诱导ROS的产生.结论 HSP27通过影响NO表达和调节细胞内ROS水平保护Hcy诱导的受损伤内皮细胞.     

异丙酚对H2O2增强肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞凋亡效应的抑制作用

目的:探索H2O2对TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的作用及异丙酚(propofol)对细胞凋亡的保护作用和可能的机制。方法:将体外培养的ECV304细胞分为5组:①对照组(Control);②10μmol/L H2O2组(H);③40 nmol/L TNF-α组(T);④TNF-α+H2O2组(T+H);⑤TNF-α+H2O2+propofol组(T+H+P)。观察:①流式细胞仪检测细胞凋亡率;②丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果:10μmol/L的H2O2仅造成少量细胞凋亡,MDA含量变化不显著(P>0.05);与TNF-α共同作用后细胞凋亡率显著增加,且高于二者分别作用之和,细胞内MDA含量也明显增加,SOD和GSH-Px含量明显减少,与TNF-α组相比差异具有显著性(P<0.05);加入异丙酚预处理可使TNF-α和H2O2组凋亡率明显降低,同时伴随细胞内MDA含量降低,SOD和GSH-Px含量增加。结论:H2O2能显著增强TNF-α诱导细胞凋亡的效应,异丙酚通过降低细胞氧化损伤的机制,有效逆转H2O2增强TNF-α诱导细胞凋亡的效应。     

毛细管电泳电化学法（CE-ECD）检测人全血中的同型半胱氨酸（Hcy）、半胱氨酸（Cys）和还原型谷胱甘肽（GSH）

 目的 建立毛细管电泳电化学技术(capillary electrophoresis with electrochemical detection,CE-ECD)检测人全血中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酸(cysteine,Cys)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)的方法。考察缓冲液的浓度、酸碱度、分离电压、进样时间和检测电压等参数对分离和检测的影响,确定最佳的实验条件。方法 以直径为500 μm的铂圆盘电极作为检测电极,用长度为50 cm的熔融石英毛细管对一系列待检物标准溶液和人全血样本进行毛细管电泳电化学检测。结果 在最优条件下,当电极电位为+1.05 V(相对饱和甘汞电极)、分离电压为18 kV时,Hcy、Cys和GSH于100 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7.8)中在10 min内获得理想分离。检测下限(S/N=3)在0.29～0.80 μmol/L范围内,且在3倍数量级浓度范围内,3种组分的浓度与峰电流呈良好线性关系。对0.5 mmol/L的混合标准溶液连续检测7次,Hcy、Cys和GSH峰高的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD)分别为3.7%、3.1%和2.9%。结论 CE-ECD方法可对Hcy、Cys和GSH等3种生物活性巯基化合物进行高效分离及检测,具有分析速度快、成本低、灵敏度高、试剂及样品用量小等优点,因此在生物医药领域具有广泛的应用前景。本实验采用的铂圆盘电极具有污染少、重复性好的特点。     

同型半胱氨酸对脑微血管内皮细胞损伤的研究

目的：观察同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）对大鼠脑微血管内皮细胞（Rat cerebral microvascular endothelial cecl,RCMEC）的损伤效应,以揭示Hcy致动脉粥样硬化的可能机制.方法：①将不同浓度的Hcy分别加入培养的RCMEC中孵育2、4、6、8、10 h后,测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放率;②观察同型半胱氨酸损伤组和对照组细胞生长曲线以及相差显微镜下、透射电镜下结构改变.结果：Hcy使RCMEC的LDH释放率明显增加,破坏细胞形态结构并抑制其生长.结论：Hcy可能通过氧化应激损伤机制对RCMEC产生毒性损伤作用.     

加味四逆散对D-氨基半乳糖所致急性肝损伤大鼠体内脂质过氧化的影响及病理改变同步观察

为研讨加味四逆散防治肝损伤的作用机理 ,通过动物试验 ,先用加味四逆散预防给药 ,再采用 D-氨基半乳糖 (D- Gal N)造成大鼠急性肝损伤模型 ,然后检测大鼠血清超氧化物岐化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、还原型谷胱甘肽 (GSH)水平 ,同步观察该方对急性肝损伤大鼠体内脂质过氧化反应及肝脏病理改变的影响 ,结果表明该方可明显升高大鼠血清 SOD、 GSH水平 ,降低 MDA水平 ,肝脏病理学检查亦表明该方使肝细胞变性坏死程度减轻。提示加味四逆散有抗脂质过氧化的作用 ,这正是该方防治肝损伤的主要机制之一。