反义bcl—2RNA促进HL—60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础，方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用，结果：ｐ     

足叶乙甙诱导HL—60细胞凋亡及其bcl—2基因表达

目的：研究ＨＬ－６０细胞在足叶乙甙诱导的细胞凋亡中ｂｃｌ－２基因表达，以说明药物致凋亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，ＤＮＡ梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平。     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．     

bcl—2反义寡核苷酸诱导小细胞肺癌细胞凋亡

ｂｃｌ２是一类与细胞凋亡相关的癌基因，其过度表达所致细胞凋亡受抑制是肿瘤发生的重要基础，并增加肿瘤细胞对放疗和化疗的抵抗性。本试验以脂质体为载体，对ｂｃｌ２ｍＲＮＡ翻译起始部位的反义寡核苷酸导入小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）细胞，探讨其对ＳＣＬＣ细胞ｂｃ...     

瑞香狼毒诱导HL—60细胞凋亡和调节SGC—7901细胞bcl—2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

Bcl-2反义RNA对人多发性骨髓瘤凋亡影响的研究

目的　探讨 bcl- 2反义 RNA对人多发性骨髓瘤内源性Bcl- 2蛋白水平及细胞调亡的影响 ,以期为转基因治疗人多发性骨髓瘤提供实验依据。　方法　利用 DNA重组技术 ,构建反义 bcl- 2逆转录病毒表达载体 ,并将其导入人多发性骨髓瘤细胞株 U2 6 6细胞。通过 RT- PCR检测 bcl- 2反义RNA是否导入了细胞 ,应用 Western Blot检测内源性 Bcl- 2蛋白表达的改变 ,应用形态学、流式细胞术、片段化 DNA电泳及定量分析和 TUNEL 法检测靶细胞的凋亡。　结果　(1)成功地构建了反义 bcl- 2逆转录病毒载体 ,获得的重组病毒上清滴度为 4.5 X10 5 CF…     

Generation of bcl-2 antisense RNA promotes apoptosis of human promyelocytic leukemia cell line HL-60

SupportedbytheNationaINaturalScienceFoundationofChina,No.3957o79ONotonlydoesapoptosisplayakeyroleinhomeostasis,butalsohascloserelationshipwithtumorigenesisandtumorregression,aswellaswiththechemotherapeuticandradiotherapeuticef-fectsontumors[lJ.Justasthecellproliferation,thecellapoptosisisalsomodulatedbymanygenes,includingsomeoncogenesandtumorsup-pressorgenes(p53,bcl-2,c-my,etc.)[2].Forex-ample,thehighexpressionofbcl-2inleukemiacellscanobviouslyinhibittheapoptosisinducedbytheremovalofgrowth…     

神经节苷脂GM_3诱导HL-60细胞分化后中性糖脂的变化

为了研究神经节苷脂ＧＭ３（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ，ＧＭ３）对人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞诱导分化后中性糖脂的影响，将神经节苷脂ＧＭ３加到ＨＬ６０细胞的ＤＭＥ／Ｆ１２培养液中，观察其对ＨＬ６０细胞的诱导分化作用及分化后细胞中性糖脂的变化。结果：细胞吞噬功能显著增强，非特异性酯酶活性升高，细胞形态也呈现与这种分化相一致的改变。神经节苷脂ＧＭ３诱导ＨＬ６０细胞分化后细胞中性糖脂各组分的百分含量发生了显著改变，ＣＤＨ、ＣＭＨ及ＣＱＨ显著增多，与分化前相比Ｐ＜００５；ＣＸＨ显著降低，与分化前相比Ｐ＜００５。结果提示：神经节苷脂ＧＭ３诱导ＨＬ６０细胞分化时改变了细胞中性糖脂的代谢     

反义bcl-2 和反义survivin对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生长的作用

目的研究反义bcl-2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SK-N-MC细胞生长的作用.方法利用基因重组技术,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl-2 或反义svv 的逆转录病毒载体PBabe puro-Asbcl-2和PBabe puro-Assvv,并分别经脂质体LipofectamineTM介导转染人NB细胞株SK-N-MC细胞,经嘌呤霉素(2.0 μg/ml)筛选得到抗性克隆,同时以空载体Pbabe puro 转染SK-N-MC作为对照;以免疫组化和Western 印迹分析反义bcl-2、反义svv对细胞内源性Bcl-2、SVV蛋白质的表达抑制作用,应用MTT法研究细胞(5×103 /孔)的生长和增殖情况,并接种于裸鼠(3只/组),观察107 个细胞在6周时的成瘤情况,以研究反义bcl-2、反义svv对SK-N-MC细胞生长的作用.结果反义bcl-2转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Asbcl-2中的Bcl-2表达明显降低,反义svv转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Assvv中的SVV表达也明显降低;且这两种细胞均生长缓慢, 裸鼠移植瘤体积均明显小于SK-N-MC原始细胞或转染空载体的细胞接种形成的移植瘤.结论稳定表达的反义bcl-2、反义svv均能够有效抑制SK-N-MC细胞内源性相应蛋白质Bcl-2、SVV的表达,提示这两个基因在NB细胞的肿瘤形成中均具有一定的作用.     

水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的影响

目的：研究水杨酸钠对HL－60细胞的影响。方法，用MTT法检测水杨酸钠对HL－60细胞存活率的影响，光镜、电镜观察细胞形态学变化；流式细胞术分析DNA含量；Annexin-V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化。结果：水杨酸钠明显抑制HL－60细胞生长，并呈时间，剂量信号性；5mmol.L^-1(IC50)的水杨酸钠作用后，HL－60细胞出现典型的凋亡形态特征，并检测到亚二倍体峰；同时，靶细胞磷脂酰丝氨酸外化率显著高于阴性对照组（0．24vs0.03)。结论：水杨酸钠能抑制HL－60细胞生长并促进其凋亡。     

雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用

目的：探讨雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的增殖及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、荧光染色法、流式细胞仪（FCM）检测、DNA片段化分析等方法研究雷公藤多甙对HL-60细胞的影响。结果：雷公藤多甙能显著抑制白血病细胞的增殖,降低肿瘤细胞的存活率,其半数细胞抑制剂量( IC50 )为5.0 μg/ml,阻滞细胞周期于G2/M期（P<0.05）。雷公藤多甙实验组在形态学上可见明显凋亡细胞,且凋亡细胞百分率显著上升(P<0.05),凝胶电泳分析有DNA梯状条带出现。结论：雷公藤多甙能显著抑制人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖并促进细胞凋亡。     

昆明山海棠总生物碱诱发HL-60细胞凋亡的观察

目的 观察昆明山海棠（TH）总生物碱诱导白血病细胞凋亡的发生情况。方法 应用台盼蓝染色法,荧光双重染色法,DNA电泳结合流式细胞仪对HL-6O细胞的凋亡进行观测。结果 HL-60细胞在TH总生物碱作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变、DNA梯状带及亚G1峰,且动态变化过程较为一致。结论 TH总生物碱具有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,总生物碱是TH诱导凋亡的有效成份之一。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

阿糖胞苷对HL60细胞凋亡及其Bcl-2蛋白表达的影响

目的　探讨阿糖胞苷对白血病细胞的作用及其机制。方法　以人急性早幼粒白血病细胞HL6 0为淋巴细胞 ,分别应用HE染色和透射电镜观察Ara C对HL6 0细胞形态学的影响及其超微结构的变化 ;应用流式细胞术及免疫细胞化学研究Ara C对细胞凋亡和Bcl 2蛋白表达的变化。结果　细胞形态不规则 ,核深染 ,染色质聚边等多种形态改变。电镜下可见典型的凋亡特征。流式细胞仪分析结果显示 ,细胞凋亡率随药物浓度增加和作用时间延长而增加 ,Bcl 2蛋白的表达则下降。结论　Ara C能诱导HL6 0细胞凋亡 ;下调Bcl 2蛋白的表达 ,这可能是Ara C诱导细胞凋亡的机制之一。     

氨基葡萄糖硫酸盐抑制白血病细胞HL60增殖并诱导其分化

目的:研究氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对白血病细胞HL60的增殖和分化的影响. 方法:采用台盼蓝活细胞计数法检测不同浓度的GS对HL60细胞增殖的影响;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪检测药物对HL60细胞周期的影响及细胞表面分化抗原CD11b,CD14,CD13和CD33表达的影响. 结果:GS能明显抑制HL60的增殖;经5 mmol/L GS处理5 d后,HL60细胞体积缩小,核浆比例降低,核仁减少甚至消失,核染色质趋向致密,核形态扭曲折叠或分叶;5 mmol/L GS处理48 h后, G1期细胞由37.8%增加至47.9%,S期由46.8%减低至40.6%,G2期峰轻度减低, 未发现亚二倍体峰. 经1 mmol/L,5 mmol/L GS分别处理120 h后,CD11b和CD14的表达分别由2.3%,0.5%升高至23.0%,11.9%和15.8%, 4.3%,CD33及CD13的表达未见明显变化. 结论:GS能抑制白血病细胞HL60的增殖,并诱导其向成熟单核、粒细胞分化.     

bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的影响

目的:探讨bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌BIU87细胞株的影响.方法:采用bcl-2基因第1外显子的反义寡核苷酸,以硫代磷酸修饰(PS-ASON),序列为5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株BIU87共同孵育作为实验组.加入正义的bcl-2寡核苷酸,序列为5′-TACCGCGTGCGACCCTCT-3′(PS-SON)作为对照组,用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率,电镜观察细胞形态变化.结果:与对照组相比,实验组的细胞坏死率明显上调,电镜下细胞形态呈坏死改变.结论:bcl-2的反义寡核苷酸引起膀胱癌细胞大量坏死,可能成为膀胱癌的治疗方法之一.