雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226的体外抑制作用研究

目的研究雷公藤红素（Celastrol）对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226的抑制作用;方法使用CCK-8试剂研究生长抑制作用,使用An-nexin-V/PI双染色法,研究诱导凋亡作用;使用流式细胞仪进行sub-G1峰及细胞周期分析;结果雷公藤红素能够抑制RPMI 8226细胞生长,呈现剂量依赖性,IC50值为1.87μmol.L-1;通过Annexin-V/PI双染色法以及sub-G1峰分析,证实雷公藤红素可以诱导肿瘤细胞凋亡;并使肿瘤细胞的S期细胞减少;结论雷公藤红素可以抑制骨髓瘤细胞株RPMI 8226生长,诱导细胞凋亡,并使S期细胞减少。     

雷公藤红素通过活性氧诱导结肠癌SW620细胞凋亡

目的:探讨雷公藤红素(celestrol)诱导KRAS驱动的结肠癌SW620细胞产生凋亡的作用和机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测细胞增殖;免疫印迹法检测蛋白表达;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡、细胞周期、线粒体膜电位;荧光显微镜检测细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)。结果:雷公藤红素明显抑制SW620细胞的增殖活性;雷公藤红素下调SW620胞内的p-Akt、NF-κB、Survivin表达,激活caspase-7、caspase-3 和PARP;雷公藤红素增加SW620细胞内的ROS、降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期于G₂/M期和诱导凋亡。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制雷公藤红素引起的上述作用。结论:通过诱导细胞内ROS的累积导致细胞内线粒体膜电位的下降进而触发细胞发生凋亡是雷公藤红素诱导SW620细胞凋亡的作用机制之一。     

雷公藤红素诱导弥漫大B淋巴瘤OCI-LY-19细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨雷公藤红素对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY-19细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用不同浓度的雷公藤红素处理弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY-19细胞,MTT法检测细胞增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting实验分析不同浓度的雷公藤红素诱导细胞凋亡过程中YAP1蛋白水平.结果 雷公藤红素作用OCI-LY-19细胞后,细胞的活力明显抑制,24h的IC50为0.56μM,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05).随着药物作用浓度升高,凋亡细胞逐渐增多(P<0.05),YAP1蛋白水平下降(P<0.05).结论 雷公藤红素能抑制人弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY-19细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制YAP1蛋白表达有关.     

雷公藤红素阻断LP-1人多发性骨髓瘤细胞周期及抑制血管生成的实验研究

目的研究雷公藤红素对于多发性骨髓瘤细胞株LP-1细胞周期及血管生成的影响。方法采用台盼蓝染色法考察雷公藤红素对细胞生长曲线的影响;划痕法检测雷公藤红素对血管内皮细胞体外血管生成能力的影响;采用碘化吡啶(PI)染色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞周期的调控作用。结果雷公藤红素作用浓度为2μM时即可引起细胞生长停滞,雷公藤红素对人多发性骨髓瘤LP-1细胞的生长曲线具有明显的抑制作用,这种效应具有明显的剂量-效应关系。雷公藤红素能剂量依赖性地抑制人血管内皮细胞对划痕损伤的修复能力,雷公藤红素1μM作用24 h即可引起划痕修复停滞,并引起部分血管内皮细胞死亡,在作用48 h后对人脐静脉内皮细胞表现出明显的杀伤活性。雷公藤红素以不同浓度作用24 h后随着雷公藤红素浓度增加,人多发性骨髓瘤细胞进入G1期比例明显增多,S期细胞明显减少。结论雷公藤红素能抑制骨髓瘤细胞株的生长,并抑制人脐静脉血管内皮细胞体外血管生成能力;雷公藤红素可将人多发性骨髓瘤LP-1细胞周期阻断于G1期,从而抑制其后续的DNA合成及有丝分裂。     

雷公藤红素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及其对胃癌MFC细胞增殖的抑制和促凋亡作用机制。方法分别设置对照组和雷公藤红素低、中、高剂量(5、10、20 mmol/L)组,采用MTT法检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞周期的影响及MFC细胞凋亡的情况;Western blotting检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA表达的影响。结果与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制胃癌MFC细胞的增殖(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著引起MFC细胞G2/M期阻滞(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著促进MFC细胞的凋亡(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白和PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达(P0.05),显著促进MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA的表达(P0.05)。结论雷公藤红素能够抑制胃癌MFC细胞的增殖并促进胃癌MFC细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR等蛋白的表达而抑制胃癌MFC细胞的增殖,进而促进胃癌MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进胃癌MFC细胞凋亡。     

定量蛋白组学揭示雷公藤红素抗卵巢癌的作用机制

目的 探讨雷公藤红素对卵巢癌细胞的增殖和迁移能力的抑制作用及其分子机制。方法 通过细胞增殖及迁移实验,明确雷公藤红素抗卵巢癌细胞增殖及迁移的能力;利用定量蛋白组学结合生物信息学分析差异表达蛋白,解析雷公藤红素对卵巢癌的作用机制;通过体外分子生物学技术,检测雷公藤红素对卵巢癌细胞EMT标志物（Cadherin）、细胞迁移关键蛋白（CD44与HMGB）的表达水平,以及对细胞活性氧（ROS）诱导水平的影响。结果 雷公藤红素显著抑制SKOV3及OVCAR3细胞增殖及迁移的能力。通过蛋白组学研究发现,经过雷公藤红素处理后,共有396个DEPs被鉴定出来（126个上调,270个下调）。GO和KEGG通路富集分析均显示雷公藤红素多靶点的抗肿瘤活性与细胞迁移、炎症、缺氧等生物过程密切相关。雷公藤红素下调N-cadherin,上调E-cadherin的表达抑制EMT,抑制CD44与HMGB1、HMGB2的表达来抑制卵巢癌细胞伤口愈合。此外,雷公藤红素诱导ROS的产生。结论 雷公藤红素具有多靶向抗卵巢癌活性,其可通过抑制EMT过程并诱导ROS的产生,抑制细胞迁移与增殖,发挥抗卵巢癌的作用。     

无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的观察无蹼壁虎抗肿瘤活性成分(Gekko Swinhonisanti-neoplasm active component,GSAAC)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法 GSAAC与体外培养的人肝癌HepG2细胞共培养,分别以MTT法和Transwell小室检测其对细胞增殖及迁移、侵袭的影响;免疫组化法检测PCNA的表达;Hochest33342荧光染色法、TUNEL法观察GSAAC对HepG2细胞的作用;流式细胞术检测细胞周期及早期凋亡率。结果 GSAAC(25～400 mg.L-1)可明显抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,呈浓度依赖性;Ho-chest33342、TUNEL染色及流式细胞术结果显示,GSAAC可诱导细胞发生早期凋亡,阻滞HepG2细胞从S期进入G2期。结论 GSAAC可能通过影响细胞周期进而抑制HepG2细胞增殖和迁移并诱导细胞发生凋亡,进而实现抑制肿瘤的作用。     

雷公藤红素对体外人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:研究雷公藤红素对体外人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用CCK-8法测定2、5、10μmol/L雷公藤红素分别作用24、48、72 h后的细胞活性,并计算增殖抑制率和半数抑制浓度(IC_(50));采用流式细胞术检测2、5、10μmol/L雷公藤红素分别作用24 h后细胞的凋亡率及周期变化,并以二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照;采用罗丹明123染色法测定2、5、10μmol/L雷公藤红素分别作用48 h后的细胞线粒体膜电位,并以DMSO为阴性对照;采用Western blot法检测5μmol/L雷公藤红素作用0、12、24、36 h后细胞中促凋亡相关基因Bax和B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)的蛋白表达。结果:2、5、10μmol/L雷公藤红素均可抑制细胞的增殖,IC_(50)为5.834μmol/L。2、5、10μmol/L雷公藤红素均可诱导细胞凋亡。5、10μmol/L雷公藤红素可阻滞细胞于G_0/G_1、S期,并可降低线粒体膜电位,较阴性对照差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且以上作用均具有浓度依赖性。5μmol/L雷公藤红素作用12、24、36 h后可上调细胞中Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达,并呈现一定的时间依赖性,较0 h时差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:雷公藤红素可明显抑制体外人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与增强线粒体通透性、促使凋亡诱导因子释放有关。     

雷公藤红素及其制剂的抗肿瘤研究进展

在2006年Huanjie Yang等发现雷公藤红素可以诱导前列腺癌细胞凋亡及肿瘤坏死,是一种有效的天然蛋白酶抑制剂,自此引发了雷公藤红素抗癌作用及其机制的研究热潮。雷公藤红素可以通过多方面发挥其抗癌作用,包括抑制肿瘤细胞生长、阻滞细胞周期和诱导凋亡,抑制癌细胞蛋白酶,抑制信号通路,影响肿瘤相关蛋白、肿瘤坏死因子等,是一种潜在的天然抗肿瘤药物,对前列腺癌、肺癌、肝癌、白血病、胶质瘤、黑色素瘤、结肠癌、卵巢癌、乳腺癌等肿瘤细胞具有一定的抗肿瘤作用。然而由于其性质较为不稳定,而且存在毒性,为了拓宽雷公藤红素的临床应用,充分发挥其药理药效作用,采用药物制剂新技术降低雷公藤红素毒性,提高其溶解度是目前重要的研究方向之一。本文对2006年以来雷公藤红素及其制剂的抗肿瘤作用相关文献资料进行分析和综述,为今后雷公藤红素抗肿瘤新型制剂的研究提供参考。     

雷公藤内酯醇对肺腺癌细胞系A549的体外抑制作用的研究

目的观察雷公藤内酯醇对肺腺癌细胞系A549体外生长特性的影响。方法分别采用MTT法、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳以及荧光染色观察雷公藤内酯醇肺腺癌细胞系A549增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果14nmol.L-1～896nmol.L-1的雷公藤内酯醇均能抑制A549细胞的生长且生长抑制作用呈剂量以及时间依赖性。雷公藤内酯醇在低浓度(14nmol.L-1)条件下,能诱导A549细胞发生细胞周期阻滞,阻滞部位在S期;高浓度(55,112mol.L-1)的雷公藤内酯醇使A549阻滞在G2/M期,并诱导其发生凋亡。结论雷公藤内酯醇能抑制A549细胞的生长,使其阻滞在S期和G2/M期,并诱导其发生凋亡。     

雷公藤红素升高ROS和抑制NF-κB通路抑制肺癌H460细胞生长

摘要：目的:探究雷公藤红素对人肺癌H460细胞的体外抑制作用。方法:使用MTT法检测雷公藤红素对H460细胞生长的影响;使用细胞集落实验检测雷公藤红素对H460细胞集落形成的影响;采用细胞流式仪检测雷公藤红素及雷公藤红素联用N-乙酰半胱氨酸（NAC）对活性氧（ROS）水平的影响;采用MTT法检测雷公藤红素联用NAC对H460细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测雷公藤红素及联用NAC后对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平影响。同时,进一步使用蛋白质印迹法检测雷公藤红素对核因子κB（NF-κB）通路中IκBα表达水平的影响。结果:雷公藤红素浓度依赖性的抑制H460细胞的生长和集落形成（P<0.05或P<0.01）,浓度依赖性的促进细胞内ROS水平（P<0.01）,同时能够通过升高ROS水平诱导H460细胞死亡（P<0.01）,升高Bax蛋白及抑制Bcl-2蛋白的表达（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,促进IκBα的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:雷公藤红素表现出高效抗肺癌作用,能升高ROS水平介导凋亡相关蛋白的表达以及抑制NF-κB通路来抑制人肺癌H460细胞的生长。     

番茄红素对EC-9706细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究番茄红素对人食管癌细胞EC-9706的增殖及细胞周期的影响。方法：MTT法检测番茄红素对EC-9706增殖的抑制作用,采用流式细胞仪检测同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期和凋亡的变化。结果：番茄红素能够明显抑制EC-9706细胞的生长,呈现时间和剂量依赖性;且诱导细胞凋亡;并阻滞细胞周期于S期。结论：番茄红素可抑制EC-9706细胞的增殖,其机制可能为诱导细胞凋亡和改变细胞周期。     

新型化合物XN4抑制急性粒细胞白血病细胞增殖与其诱导氧化性的DNA损伤的关系

目的研究XN4在体外抑制急性粒细胞白血病细胞(AML)增殖的作用与诱导DNA损伤的关系。方法 MTT法检测XN4对AML细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测AML细胞反应性氧自由基(ROS)、DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡;Western blot探讨XN4对相关蛋白表达的影响。结果 XN4明显抑制AML细胞增殖,半数抑制率(IC50)分别为(2.79±0.15)μmol·L-1和(2.76±0.20)μmol·L-1;XN4增加细胞ROS水平和r-H2AX的表达,诱导细胞阻滞在S期并增加细胞凋亡率;XN4能增加H2AX、ATM的磷酸化以及Parp和Caspase-3的切割,而减少CDK2和Cyclin E1的表达。结论 XN4通过激活ROS,诱导DNA的损伤和细胞周期S期阻滞,抑制DNA损伤修复和诱导细胞的凋亡,抑制HL-60及KG1α细胞的增殖,抗氧化剂NAC(N-乙酰半胱氨酸)能减少ROS的产生逆转XN4的作用。     

辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖及凋亡作用研究

目的探讨辛基酚（octylphenols,OP）诱导乳腺癌细胞凋亡及抑制乳腺癌细胞增殖的可能机制。方法应用MTT法及流式细胞仪检测OP对乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制及细胞周期的变化;Real Time PCR和Western blot法检测OP对MCF-7乳腺癌细胞中细胞周期相关蛋白p27Kip1和CyclinE的mRNA及蛋白表达的影响及对凋亡抑制蛋白PAK4表达的影响。结果 OP对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,MCF-7细胞阻滞在G0/G1期,使S期的细胞减少;Real Time PCR和Western Blot检测发现培养的MCF-7细胞,随着OP的处理浓度增加,CyclinE蛋白在分子水平和蛋白水平均降低,p27Kip1的表达量升高。结论 OP可能通过调控细胞周期相关蛋白的表达,抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。     

白术内酯Ⅰ体内外的抗黑色素瘤研究

目的:探讨自术内酯Ⅰ对人黑色素瘤细胞A875的作用、对肿瘤血管生成的作用和对小鼠黑色素瘤荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制.方法:MTT法检测白术内酯Ⅰ对A875细胞增殖的影响,流式细胞仪检测白术内酯Ⅰ对A875细胞周期及其凋亡的影响;白术内酯Ⅰ对体外血管内皮细胞成管的影响;白术内酯Ⅰ对荷瘤小鼠肿瘤生长及小鼠体质量的影响.结果:白术内酯Ⅰ抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖;作用48 h后,细胞周期中G2/M期和S期细胞比例显著提高,G0/G1期细胞比例减少;细胞凋亡比例显著增加;白术内酯Ⅰ显著抑制内皮细胞成管;白术内酯Ⅰ显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,而对小鼠体质量无影响.结论:白术内酯Ⅰ抑制黑色素瘤细胞A875增殖,诱导细胞凋亡,发生细胞周期阻滞;并且能够抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,不影响荷瘤小鼠的体质量.     

槐定碱对人结肠腺癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

目的考察槐定碱对人结肠癌SW620细胞的增殖影响及探讨其诱导凋亡作用。方法MTT法测定槐定碱对SW620细胞的半数抑制浓度;光学显微镜、荧光显微镜及电镜观察细胞凋亡形态变化;流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果实验结果显示槐定碱对体外培养的SW620细胞增殖具有明显抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48hIC50=2.8mmol.L-1。凋亡细胞表现为细胞固缩、变圆、核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化。DNA ladder结果显示有凋亡引起的"梯状"条带出现。流式细胞仪细胞周期分析结果表明,随着槐定碱作用时间的延长,G0-G1期细胞增多,同时S期细胞比例也相应增高。结论槐定碱对体外培养SW620细胞生长增殖有明显抑制作用,其作用机制与阻滞细胞周期的进程,诱导细胞凋亡相关。     

雷公藤红素通过抑制PAK1抗胰腺癌作用及其机制研究

P21活化蛋白激酶1 (p21-activated kinases 1, PAK1)是P21活化蛋白激酶家族成员之一,在胰腺癌细胞增殖和肿瘤形成过程中起着十分重要的作用,是胰腺癌治疗的重要靶点。目前,靶向PAK1的激酶抑制剂尚处于临床前研究阶段。因此,筛选开发出新的PAK1激酶抑制剂对于胰腺癌治疗具有重要的意义。本研究发现天然产物雷公藤红素(celastrol)对PAK1具有显著的抑制作用,其IC50约为3.614μmol·L-1。分子对接结果显示,雷公藤红素与PAK1激酶结构域的ATP结合口袋结合。MTT实验结果表明,雷公藤红素对胰腺癌细胞BxPC-3、PANC-1的增殖均具有抑制作用。进一步机制研究显示,干扰PAK1后,雷公藤红素对胰腺癌细胞BxPC-3的抑制作用发生逆转。同时,雷公藤红素可以抑制PAK1及其下游信号通路蛋白的表达,从而激活凋亡信号通路引发胰腺癌细胞发生凋亡。上述研究结果表明,雷公藤红素可以通过靶向抑制PAK1激酶信号通路诱导胰腺癌细胞的凋亡,具有用于治疗胰腺癌的潜在价值。     

雷公藤甲素对ERα蛋白介导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制的影响

目的：研究雷公藤甲素对激素依赖性人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用及可能的机制。方法：MTT法检测雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖的抑制作用,Hoechst染色法检测其对细胞凋亡的影响,Western blotting法观察雷公藤甲素对雌激素受体（ER）α蛋白表达的影响。结果：雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖有显著的抑制作用,并且呈现良好的时效和量效关系,雷公藤甲素能有效诱导MCF-7细胞凋亡,并且对ERα具有明显的下调作用。结论：雷公藤甲素能抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖并且诱导其凋亡,其诱导MCF-7细胞凋亡的作用机制可能与其下调ERα的表达有关。     

雌、孕激素对人子宫内膜癌细胞体外生长的影响研究

目的探讨雌二醇(E2)、孕酮(P)对人子宫内膜癌细胞体外增殖及凋亡的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞,采用流式细胞仪观察不同浓度E2、P和E2+P对细胞周期及细胞凋亡率的影响、MTT比色法观察HEC-1B细胞的增殖。结果流式细胞仪分析,E2组细胞周期S期比例上升,凋亡率下降;P组和E2+P组G0/G1期上升,S期下降,细胞凋亡率上升;MTT结果显示,随着孕酮浓度的增加,E2对HEC-1B细胞有明显促生长作用(P<0.01),P和E2+P对细胞生长有明显抑制作用(P<0.01),增殖抑制率与浓度呈正相关(P<0.05)。结论 E2对HEC-1B细胞具有促进增殖作用;P则抑制HEC-1B细胞增殖,并诱导其凋亡;E2+P显示了抑制增殖、诱导凋亡的作用增强。足量的P可拮抗E2对内膜癌细胞的促增殖作用。     

色胺酮对人白血病细胞株K562细胞增殖抑制、凋亡诱导的影响

目的探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法K562细胞进行常规培养后,利用MTT方法进行Try(1.56～50)mg.L-1的细胞增殖影响;Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡情况等指标;综合评价Try对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果Try在3.12～50mg.L-1浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪结果显示,不同浓度Try作用48h后,K562细胞可发生明显的凋亡;同时Try也可影响K562的细胞周期,将细胞阻滞于G0/G1期,随Try剂量增大G0/G1期细胞比例也逐渐增高,并出现明显的亚二倍体凋亡峰;同时,S期细胞比例随剂量增大而逐渐降低。结论色胺酮能明显抑制K562细胞增殖并具有诱导K562细胞发生凋亡的作用。