兔血管内膜增生过程中核因子κB活性与氯沙坦的影响

背景：核因子κB可参与细胞增殖反应，其复杂的机制需深入研究。目的：研究氯沙坦对血管内膜增生及核因子κB活性的影响。设计：以实验动物为研究对象，完全随机分组设计，探索性实验研究。单位：一所大学医院心内科。对象：本实验于2001—11／2002-06在武汉大学人民医院实验室及实验动物中心完成。实验选用雄性日本大耳白兔24只，随机取8只作为正常组，始终饲以普通饲料；另外16只造成腹主动脉内皮损伤并以高脂饮食饲养8周后再随机分为对照组、氯沙坦组，每组8只。方法：术后氯沙坦组给予氯沙坦10mg／(b&;#183;d)口服，对照组喂生理盐水。4周后取腹主动脉行组织形态学观察及用免疫组织化学方法分析核因子κB、α-平滑肌肌动蛋白、巨噬细胞、细胞间黏附分子1。主要观察指标：3组动物经不同干预措施后血管内膜厚度、内膜面积、内膜核因子κB，细胞间黏附分子1的表达和平滑肌细胞、巨噬细胞数量比较。结果：对照组兔血管氯沙坦组血管内膜厚度、内膜厚度／中膜厚度、内膜面积、内膜面积／中膜面积明显大于正常组(P&;lt;0．01)。氯沙坦组兔血管内膜厚度、内膜厚度／中膜厚度、内膜面积．内膜面积／中膜面积[(0．42&;#177;0．08)mm，0．43&;#177;0．10，(3．18&;#177;0．83)mm。，0．54&;#177;0．11]均明显小于对照组[(1．35&;#177;0．35)mm，0．67&;#177;0．15，(5．30&;#177;1．71)mm^2，0．77&;#177;0．14](P均&;lt;0．01)。氯沙坦组新生内膜中巨噬细胞、平滑肌细胞数均明显少于对照组(P&;lt;0．01，0．05)。氯沙坦组兔血管核因子KB及其靶基因产物细胞间黏附分子1的水平也明显低于对照组(P&;lt;0．01，0．05)。结论：氯沙坦可阻断血管紧张素Ⅱ受体，进而抑制核因子κB，从而抑制平滑肌细胞迁移、增殖和新生内膜形成。     

核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子在不同病程尖锐湿疣中的表达及其意义

目的:探讨核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在不同病程尖锐湿疣(CA)中的表达情况及其临床意义.方法:将确诊的尖锐湿疣患者40例分为短病程组20例、长病程组20例,同时以20例正常人包皮组织为对照组,用RT-PCR和Western Blot的方法分别检测不同病程CA以及正常皮肤组织中的核转录因子NF-κB和VEGF的mRNA及蛋白表达.结果:(1)短病程组CA疣体中NBκB mRNA、YEGFmRNA的表达水平分别为1.16±0.17、1.01±0.11,长病程组中NF-κB mRNA、VEGF mRNA的表达水平分别为0.75±0.10、1.11±0.10,均明显高于对照组的0.47±0.11和0.61±0.12(均P＜0.05);同时短病程组CA疣体中NF-κB mRNA、VEGF mRNA的表达水平与长病程组比较差异有显著性(P＜0.05).(2)短病程组CA疣体中NF-κB蛋白、VEGF蛋白表达水平分别为0.78±0.12、0.81±0.12,长病程组中NF-κB蛋白、VEGF蛋白表达水平分别为0.66±0.11、0.91±0.11,显著高于对照组的0.31±0.08和0.29±0.09(均P＜0.05).NF-κB蛋白以短病程组表达最高,且短病程组与长病程组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子在尖锐湿疣疣体中高表达并与病程相关,可能共同参与了CA的发病以及转归.     

核因子-κB与细胞间黏附分子-1在角膜移植排斥反应中的表达及环孢素A对两者表达的影响

目的探讨核因子-κB在角膜移植排斥反应中的作用,为进一步研究角膜移植排斥反应发病机制及治疗提供新的思路.方法实验于2004-12/2005-02在南方医科大学珠江医院眼科完成.实验分组同基因移植组Wistar大鼠5只为供者,Wistar大鼠10只为受者;同种异体移植组Wistar大鼠5只为供者,SD大鼠10只为受者.同种异体移植+环孢素A治疗组Wistar大鼠5只为供者,SD大鼠10只为受者.建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,用免疫组织化学染色法检测角膜移植术后植片中核因子-κB和细胞间黏附分子-1表达,显微镜下记数植片中央区400倍视野中阳性细胞数的平均值,并以植片排斥反应指数及病理学表现作参照.结果纳入实验大鼠30只,均进入结果分析.①同基因移植组角膜植片中的角膜上皮细胞、基质细胞及内皮细胞有核因子-κB和细胞间黏附分子-1的微弱表达,表达强度分别为3.16±1.25,2.83±1.54;同种异体移植组角膜上皮细胞、内皮细胞、基质层细胞及新生血管内皮细胞核因子-κB和细胞间黏附分子-1表达增强,分别为16.77±2.76,13.63±1.93;同种异体移植环孢素A治疗组角膜上皮细胞、内皮细胞、基质层细胞及新生血管内皮细胞有核因子-κB和细胞间黏附分子-1的弱表达,分别为6.77±1.86,4.57±1.91.②各组间核因子-κB和细胞间黏附分子-1的表达强度有显著性差异(P＜0.01).③对比观察发现,各组角膜植片中NF-κB和细胞间黏附分子-1的表达部位和强度相似,相关性分析核因子-κB与细胞间黏附分子-1的表达强度呈正相关(r=0.875,P＜0.01),且核因子-κB的表达与排斥反应指数也具有明显的正相关性(r=0.829,P＜0.01).结论核因子-κB可能通过调控细胞间黏附分子-1等基因的表达,参与角膜移植排斥反应的发生,在角膜移植免疫中起着中心调控者的作用.而免疫抑制剂GsA通过减弱核因子-κB核转位和发挥活性,抑制排斥反应.     

核因子κB对血管成形术后平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的影响(英文)

背景:血管壁机械性损伤后的炎症和增殖效应是血管再狭窄的主要原因。核因子κB/Rel家族中的核因子κB在多种细胞类型中表达,激活一系列与血管壁病理生理相关的靶基因。目的:探讨核因子κB的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜和单核细胞化学趋化因子的作用。设计:随机对照动物实验。单位:上海交通大学医学院附属瑞金医院心内科。材料:3个月龄雄性SD大鼠126只,350～380g。引物合成和寡核苷酸合成:根据文献及国际互联网cDNA文库检索、设计,由上海生物工程公司合成;寡核苷酸合成:全硫代修饰,由上海生物工程有限公司合成。方法:实验于2001-05/2003-03在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和瑞金医院心血管实验室完成。采用贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,实验选用3～5代血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原和核因子κB蛋白水平。制作大鼠血管球囊损伤模型。SD大鼠随机分为7组,正常组:除球囊损伤外,其余手术操作同其他组相同;反义组;正义组;诱骗组;Scramble组;反义 诱骗组;模型组。每组分为6个时相点(6h,1,3,5,7,14d),每个时相点3只大鼠。检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子1、核因子κB p65和ERK2的表达水平。主要观察指标:①核因子κB p65寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的效应。②核因子κB p65基因表达定位和蛋白合成。③大鼠颈动脉球囊损伤后病理形态学改变。④单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达。⑤免疫组织化学检测球囊损伤后血管壁单核细胞化学趋化因子1的蛋白质表达。⑥Western blot检测球囊损伤后血管壁核因子κB p65,ERK2的蛋白合成。结果:①增殖的平滑肌细胞内增殖标记物增殖细胞核抗原表达增加。②增殖的平滑肌细胞浆、细胞核内均有核因子κB p65的基因表达;核因子κB p65蛋白水平增加。观察核因子κB p65基因表达水平,反义核酸组较对照正义组降低53.66%,诱骗性寡核苷酸组较诱骗对照组降低57.35%,差异均有统计学意义(P<0.05)。③核因子κB反义和诱骗寡核苷酸抑制增殖细胞核抗原表达,较阳性对照组分别降低45.12%,45.05%。④大鼠血管球囊损伤后第5天,正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值显著升高(P<0.05),7d后达到高峰。反义组、诱骗组显著降低内膜与中膜比值,反义 诱骗组较单独应用无统计学意义的降低效应。⑤反转录-聚合酶链反应显示球囊损伤后6h,单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达明显增加,1d后表达减少,3,5,7d单核细胞化学趋化因子1 mRNA持续而明显的表达增强,14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义 诱骗组在各时间点均能减少单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达。⑥Western Blot检测显示血管球囊损伤后6h,核因子κB p65、ERK2蛋白表达微弱,1d后ERK2蛋白表达略增强,核因子κB的蛋白合成明显增强。7d后p65,ERK2的蛋白合成达到高峰。第14天,ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱。反义组、诱骗组、反义 诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论:增殖的平滑肌细胞核因子κB p65基因表达增加,核因子κB调控单核细胞化学趋化因子1的基因表达和蛋白质水平。血管球囊损伤后,血管平滑肌细胞增殖有动态性变化。局部转染核因子κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因表达。     

靶向核因子κB p65siRNA促人血管内皮细胞EAhy926的凋亡

背景:作者前期工作已经证实,子宫内膜异位症患者的在位、异位内膜中核因子κBmRNA和蛋白均表达升高,核因子κB参与了子宫内膜异位症细胞黏附、侵袭和血管形成的病理过程.目的:观察RNA干扰技术(RNAi)靶向抑制核因子κB p65基因对人血管内皮细胞(EAhy926)增殖的影响.方法:10 μg/L血管内皮生长因子刺激下培养EAhy926细胞,给予转染核因子κB p65 siRNA,同时设立对照组,分别是阴性对照siRNA转染组、空白脂质体组及正常对照组(不给予其他任何处理),48 h后分别采用Heochst 33342荧光检测法、MTT法及流式细胞仪术检测细胞的增殖抑制与凋亡情况.结果与结论:与正常对照组比较,核因子κB p65 siRNA组的细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P＜0.05);而阴性对照siRNA转染组及空白脂质体组的细胞增殖抑制率及细胞凋亡率则差异无显著意义.结果证实,核因子κB p65 siRNA能显著抑制人血管内皮细胞增殖,促进内皮细胞的凋亡发生.     

重组组织因子途径抑制物对兔髂动脉粥样硬化新生内膜增生的抑制

目的:探讨兔髂动脉球囊剥脱术后局部灌注重组组织因子途径抑制物蛋白对血管内膜增生的抑制作用。方法:实验于2003-02/2004-11在哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心及心内科完成。选择雄性日本大耳白兔24只,随机分为2组,重组组织因子途径抑制物组12只和生理盐水组12只。①建立髂动脉球囊损伤模型:将3.0～3.5mmOTW球囊导管沿导丝送入左髂动脉,使球囊近端距腹主动脉远端1cm。以606kPa扩张球囊,反复推拉3次,以剥脱血管内膜。撤出导丝,经OTW球囊按分组分别注入重组组织因子途径抑制物蛋白300μg和生理盐水1.5mL。球囊压力50kPa,保留20min后撤除。术后给予动物高胆固醇饮食(胆固醇、蛋黄粉、脂肪)4周。②测定横切面管腔面积、内弹力板内管腔面积、外弹力板内管腔面积、计算新生内膜面积(内膜面积=内弹力板内管腔面积-横切面管腔面积)、中膜面积(中膜面积=外弹力板内管腔面积-内弹力板内管腔面积)和新生内膜与中膜面积比,采用组织病理学方法,利用计算机图像处理。每段血管的数值均由2名人员读取3张切片(间隔30μm)数值计算均值而得。观察局部血管组织病理学变化,观察实验血管段新生内膜增生情况。结果:2组24只动物均进入结果分析,实验过程中无脱失值。①造膜结果:经过2周高胆固醇饮食饲养后兔血清总胆固醇水平高于饲养前犤(17.73±7.42),(1.10±0.26)mmol/L,P<0.01犦,经形态学观察确认为典型的髂动脉粥样硬化损伤模型。②组织病理图像分析:重组组织因子途径抑制物组外弹力板内管腔面积、内弹力板内管腔面积、横切面管腔面积分别高于生理盐水组犤(1.59±0.41),(1.21±0.40),(0.80±0.22)mm2,(1.16±0.36),(0.79±0.47),(0.24±0.19)mm2,P<0.01犦。重组组织因子途径抑制物组新生内膜面积、新生内膜与中膜面积比显著少于生理盐水组犤(0.23±0.21)mm2,0.74±0.64,(0.55±0.24)mm2,1.61±0.79,P<0.01犦。结论:应用重组组织因子途径抑制物灌注的方法,经病理学验证可以有效地抑制兔髂动脉球囊损伤后动脉粥样硬化血管的新生内膜增生。     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达的干预作用

目的观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达水平的变化,并探讨地塞米松对骨代谢的影响.方法实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成.选择雄性6周龄SD大鼠4只,抽取大鼠股骨骨髓,使用密度梯度离心分离有核细胞,贴壁分离法获取骨髓基质细胞,以2×104/cm2的密度接种进行细胞传代与分组实验.实验分2组,对照组继续用原培养液培养;实验组在原培养液基础上加入地塞米松(浓度10-7mol/L)诱导培养.两组细胞继续培养1周后,抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析.比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平.骨保护素与核因子κB活化受体配体mRNA表达量用β-actin表达量来标准化.结果①骨保护素mRNA表达水平(骨保护素/β-actin)实验组显著低于对照组[1.21±0.12,2.05±0.11(t=10.320,P＜0.01)].②核因子κB活化受体配体mRNA表达水平(核因子κB活化受体配体/β-actin)实验组显著高于对照组[2.53±0.14,1.17±0.19(t=11.525,P＜0.01)].③核因子κB活化受体配体/骨保护素mRNA表达水平比值实验组显著高于对照组[2.21±0.17,0.62±0.08(t=16.925,P＜0.01)].结论加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少,从而减弱其对核因子κB活化受体配体-核因子κB活化受体信号轴的抑制作用,因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强,导致骨重建失衡.     

颈动脉损伤大鼠新生内膜增生与局部平滑肌细胞的增殖

目的:观察大鼠颈动脉损伤后高同型半胱氨酸血症对新生内膜形成和局部炎症因子单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达及局部平滑肌细胞增殖的影响。方法:实验于2004-10/2005-02在北京大学第一临床医院心血管研究所完成。①Wistar雄性大鼠50只,采用随机数字法分为蛋氨酸组:1g/(kg·d)L-蛋氨酸灌胃;对照组:饮用水灌胃,每组25只。4周后检测两组血浆同型半胱氨酸浓度,并行左颈动脉球囊拉伤,分别于3,7,14,28d取材,检测血管损伤后新生内膜增生和局部单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达情况。结果:①两组大鼠血浆同型半胱氨酸浓度:蛋氨酸组血浆同型半胱氨酸浓度明显高于对照组[(106.19±19.75),(4.90±0.10)μmol/L]。②两组大鼠血管组织形态学观察结果:苏木精-伊红染色血管损伤后7d可见内膜增生,14,28d蛋氨酸组新生内膜增生厚度比对照组增加36%,33%;新生内膜面积增加41%,30%;内膜面积/中膜面积增加36%,21%;管腔面积减少47%,61%;两组间比较差异均有显著性,但中膜面积无显著性差别。蛋氨酸组14d血管内膜和中膜平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性颗粒百分比是对照组的1.7倍和2.3倍[(84.40±9.05)%比(49.00±4.51)%,P<0.01;(53.30±5.25)%比(23.70±6.17)%,P<0.01]。未损伤的右颈总动脉两组血管内膜及中膜增殖细胞核抗原阳性颗粒数小于0.1%。蛋氨酸组血管损伤局部单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达增强,单核细胞趋化因子1主要分布在新生内膜和中膜,细胞间黏附分子1主要分布在内皮下和新生内膜,3d,7d明显,持续28d。结论:高同型半胱氨酸血症上调血管损伤局部炎症因子单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达,促使局部平滑肌细胞增殖,使新生内膜增生。     

κ阿片受体选择性激动剂U50488H对心肌梗死大鼠血管紧张素Ⅱ、内皮素和一氧化氮的影响

目的采用选择性κ阿片受体激动剂U50488H激活κ阿片受体,观察其对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积以及血管紧张素Ⅱ、内皮素和NO的影响.方法实验于2002-03/2003-05在解放军第四军医大学生理学教研室完成.选用健康雄性成年SD大鼠32只,随机分为4组(n=8)①对照组未结扎冠状动脉左前降支.②缺血再灌注组结扎冠状动脉左前降支,给予心肌缺血45 min,并再灌注15 min.③U50488H组预先给予U50488H 1.5 mg/kg,15 min后造模,方法同缺血再灌注组.④NorBNI组在给予U50488H 10 min前先给予选择性κ阿片受体阻断剂Nor-BNI 0.5 mg/kg,余同U50488H组.观察各组大鼠心肌超微结构、心肌梗死面积以及血浆肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶、血管紧张素Ⅱ、内皮素和一氧化氮等因子的水平.结果32只大鼠进入结果分析.①心肌梗死面积U50488H组小于缺血再灌注组和Nor-BNI组[(0.039±0.01),(0.085±0.01),(0.077±0.02)cm2,P＜0.01],后两组差异不显著.②血浆中肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶活性缺血再灌注组大鼠高于对照组(P＜0.01),U50488H组明显低于缺血再灌注组(P＜0.01).③血管紧张素Ⅱ水平缺血再灌注组大鼠高于对照组[(305±38),(134±26)ng/L,P＜0.01],U50488H组明显低于缺血再灌注组[(197±23)ng/L,P＜0.01].④内皮素缺血再灌注组大鼠高于对照组[(366±32),(179±24)ng/L,P＜0.01],U50488H组明显低于缺血再灌注组[(242±27)ng/L,P＜0.01].⑤一氧化氮浓度缺血再灌注组大鼠低于对照组[(21±6),(58±9)mol/L,P＜0.01],U50488H组明显高于缺血再灌注组[(44±8)mol/L,P＜0.01].结论U50488H可通过激活心脏κ阿片受体发挥心脏保护作用,并可以减少心肌酶的漏出,下调血管紧张素Ⅱ、内皮素水平以及上调一氧化氮水平.     

颈动脉球囊损伤模型大鼠核转录因子κB变化与颈动脉血管内膜增生的关系

目的:新生内膜异常增殖是血管成形术后再狭窄的主要原因,但其机制目前还不清楚.观察大鼠颈动脉球囊损伤术后核因子κB表达的变化及其与动脉内膜增生和血管重塑的关系.方法:实验于2007-01/05在深圳市人民医院动物实验中心完成.①实验材料:SPF级雄性SD大鼠36只,体质量350 g 左右.②实验方法:将大鼠一侧颈动脉行球囊损伤术作为实验组,另一侧颈动脉作为对照组,分别在颈总动脉球囊损伤后6 h,3,7,14,28 d 后麻醉并处死大鼠,留取两侧颈总动脉标本.③实验评估:应用组织形态学方法检测内膜增生并进行计算机图像分析;同时通过凝胶电泳迁移率实验测定核因子κB的活性.结果:纳入大鼠36只,因造模失败和死亡排除6只,进入结果分析30只.①球囊损伤后,内膜面积在7,14,28 d 逐渐增厚,内膜/中层比率增长,与对照组比较,差异显著(P ＜ 0.05).两组的中膜面积无明显变化.血管重塑指数在损伤后6 h 最大,之后不断减小.②核因子κB在对照组几乎不表达.而球囊损伤后6 h 即可见核因子κB表达,并于14 d 达高峰,28 d 仍有较强表达.实验组核因子κB各时间点与对照组比较差异均有显著性(P ＜ 0.05).结论:大鼠颈动脉球囊损伤术后,核因子κB被迅速激活并持续增加,可能是内膜增生、血管重塑的重要机制之一.     

血管紧张素-Ⅱ活化肺微血管内皮细胞核因子-κB的研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-κB(NF-κB)的活性的影响,以及经典途径在Ang Ⅱ介导的NF-κB活化过程中的作用.方法 本实验分为:Ang Ⅱ组:10-6 mol/L AngⅡ分别刺激HPMEC 0、0.5、1、2、4 h;氯沙坦组:10-6mol/L氯沙坦(AngⅡ 1型受体阻滞剂)预先处理HPMEC 1 h,再予相同10-6mol/L AngⅡ刺激细胞2 h,提取胞浆蛋白和胞核蛋白.凝胶电泳迁移率分析实验(EMSA)观察细胞中NF-κB的DNA结合活性.Western印迹检测细胞浆中抑制因子κBα(IκBα)的含量.结果 AngⅡ刺激HPMEC 0.5 h后细胞中NF-κB活性明显上升(144.5±16.1),在2h达到峰值(270.1±27.2),4 h(215.1±17.8)较2 h有所下降,但仍高于0 h水平,以上各时间点与AngⅡ刺激细胞0 h(100.0±25.1)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).与Ang Ⅱ刺激HPMEC 0 h IκBα含量(44.4%±2.1%)相比,0.5 h后IκBα含量即开始明显下降(38.9%±3.6%,P＜0.05),2 h后IκBα含量下降最为明显(32.6%±2.3%,P＜0.05),4 h细胞中IκBα含量较2 h有所上升,但仍然明显低于ArgⅡ刺激0 h细胞中IκBα的含量(40.1%±4.7%,P＜0.05).氯沙坦组NF-κB活性(115.4±10.7)和IκBα含量(43.6%±3.7%)与AngⅡ组0 h相比无明显差异.氯沙坦组中NF-κB活性明显低于AngⅡ组2 h,氯沙坦组中iκBα的含量亦明显高于AngⅡ组2 h.结论 AugⅡ能通过AT1介导HPMEC中NF-κB活化.经典途径参与了AagⅡ诱导的HPMEC中NF-κB活化过程.     

动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB表达及银杏叶提取物的抑制作用

背景:以往的很多研究表明高同型半胱氨酸血症通过增强氧化应激诱导动脉粥样硬化,而银杏叶提取物可以清除氧自由基。目的:观察在同型半胱氨酸诱导细胞黏附分子表达中活性氧基团和核因子κB的作用及银杏叶提取物对这一过程的影响。设计:随机对照动物实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料:选用健康雄性家兔24只,6月龄。蛋氨酸(Sigma公司);银杏叶提取物(贵州益佰制药股份有限公司提供,粉剂)。方法:实验于2003-02/2004-03在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室完成。①适应性喂养2周后,按随机摸球法分为3组:模型组(12只):按80mg/(kg·d)剂量皮下注射蛋氨酸;银杏叶提取物组(8只):皮下注射蛋氨酸前1h予喂饲(与食物混合)银杏叶提取物50mg/(kg·d);对照组(4只):注射与蛋白氨酸等剂量的生理盐水。连续用药7周。②光镜和透射电镜下观察动脉组织学变化;比色法(721型分光光度计)测定活性氧水平;免疫组织化学方法检测动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB的表达。高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸浓度。主要观察指标:各组动物动脉组织学变化、活性氧水平,以及动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB的表达。结果:家兔24只均进入结果分析。①动脉内皮细胞活性氧水平:模型组给药结束时活性氧水平明显增高(2.92±0.20,2.48±0.26,P<0.05),银杏叶提取物组和对照组给药结束时分别为2.41±0.23和2.43±0.20,与给药前比较,差异不明显(2.31±0.27,2.47±0.32,P>0.05)。②动脉组织学变化:模型组颈总动脉动脉组织表现为早期动脉粥样硬化形态(内皮细胞脱落,平滑肌细胞排列紊乱);对照组和银杏叶提取物组动脉壁结构基本正常。③动脉内皮细胞细胞黏附分子和核因子κB表达:模型组细胞黏附分子和核因子κB表达明显高于对照组(P<0.05),银杏叶提取物组与对照组相近(P>0.05)。④血浆同型半胱氨酸浓度:给药7周后,模型组与银杏叶提取物组血浆同型半胱氨酸浓度分别为(25.01±6.80),(26.71±2.36)μmol/L,高于对照组[(16.85±1.64)μmol/L,P<0.05]。结论:同型半胱氨酸可诱导家兔主动脉上皮细胞表达细胞黏附分子,主要由氧化应激作用激活核因子κB而介导。银杏叶提取物通过抑制活性氧水平和核因子κB活性而抑制细胞黏附分子的表达。     

产兔与非孕兔休克复苏后肺损伤的比较研究

目的 探讨产兔和非孕兔失血性休克复苏后急性肺损伤的差异.方法 将18只新西兰兔按随机数字表法分为产兔组和非孕兔组,每组9只.采用颈动脉放血致失血性休克1h,乳酸林格液复苏持续3h建立失血性休克复苏模型.分别于产前期、产后期(休克前期,0h)、休克期末(1 h)、复苏期间(2.5 h)以及复苏期末(4 h)5个时间点采血测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10);复苏期持续3h后处死动物,取肺组织检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、干/湿重比值(D/W),以及核转录因子-κB(NF-κB)活性和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达.结果 产兔产前期血清TNF-α(ng/L)、IL-10(ng/L)含量与非孕兔差异无统计学意义(TNF-α:87.6±6.8比83.2±5.3;IL-10:44.9±3.9比42.7±3.4,均P＞0.05);休克前期TNF-α水平显著增高(102.5±8.1比87.6±6.8,P＜0.05).产兔与非孕兔休克1h后TNF-α、IL-10均升高;各复苏时期产兔TNF-α水平明显高于非孕兔(1 h:230.0±14.9比202.0±10.1,2.5 h:290.0±18.6比236.0±14.4,4 h:265.0±15.9比217.0±12.8,均P＜0.05),而IL-10水平明显低于非孕兔(1 h:104.3±6.9比135.0±7.8,2.5 h:146.8±9.4比178.3±11.7,4 h:126.0±7.9比165.8±9.6,均P＜0.05).休克复苏后产兔肺组织MDA、MPO、D/W比值、NF-κB活性和ICAM-1 mRNA表达均显著高于非孕兔[MDA(nmol/mg):52.6±5.9比39.4±4.7,MPO(U/mg):4.62±0.85比3.26±0.62,D/W比值:0.186±0.025比0.143±0.016,NF-κB(A值):0.89±0.27比0.46±0.15,ICAM-1mRNA:4.6±1.2比2.5±0.7,均P＜0.05];而SOD(U/mg)水平较低(47.8±6.7比63.5±8.2,P＜0.05).结论 分娩可致产兔血清炎症因子TNF-α显著升高,失血性休克复苏后产兔出现肺组织炎症损伤较非孕兔更为严重,炎症因子的差异可能是导致休克复苏后炎症应答差异的原因之一.     

核因子-κB在大鼠烧伤后中性粒细胞致心功能损害中的作用

目的 探讨大鼠烧伤早期核因子-κB(NF-κB)活化对中性粒细胞(PMN)在心肌组织中聚集和发生损害作用的影响.方法 将170只Wistar大鼠随机分正常对照组(20只)、烧伤组(90只)、烧伤后吡咯烷二硫代氨基甲酸盐干预组(PDTC组,60只).后两组大鼠均于背部造成35%体表总面积Ⅲ度烧伤后,立即腹腔注射等渗盐水,且PDTC组同时皮下注射PDTC 250 mg/kg.对照组除不烧伤外,其余处理同烧伤组.伤后1、3、6、12、24 h,凝胶电泳迁移率分析法检测心肌组织NF-κB活性;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌组织白细胞介素8(IL-8)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达;八导生理记录仪记录左心室最大收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)及心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和下降速率(-dp/dtmax);并测定心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性.对照组作相同检测.数据采用SPSS 10.0统计软件行单因素方差分析.结果 烧伤组大鼠心肌组织NF-κB活性伤后迅速增高,伤后1 h达峰值(20.27±3.43)×104积分灰度值(A),明显高于对照组[(2.18±0.38)× 104A,P＜0.01],伤后24 h仍高于对照组(P＜0.01).伤后3、6、12、24 h心肌组织ICAM-1和IL-8mRNA表达、MPO活性均较对正常对照组明显升高(P＜0.01),:LVSP、±dp/dtmax明显低于正常对照组(P＜0.01),而LVEDP高于正常对照组(P＜0.01).与烧伤组比较,PDTC组上述指标指标均有明显的改善(P＜0.01).结论 严重烧伤可活化心肌组织NF-κB,从而上调黏附分子和趋化因子等的合成和释放,导致PMN在心肌组织中聚集,引起心肌功能损害.     

血管紧张素Ⅱ诱导A549细胞趋化因子的分泌

目的 通过研究人重组血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人肺腺癌A549细胞核转录因子-κB(NF-κB)和趋化因子白细胞介素-8(IL-8)的影响,探讨机械通气肺损伤的致病机制.方法 人肺腺癌A549细胞株以2.0×105/mL接种在12孔细胞培养板内,随机(随机数字法)将细胞分为4组(n=24):(A)对照组不加药物;(B)AngⅡ1 h组培养液中加入终浓度为1×10-6mmol/L的AngⅡ刺激1 h;(C)AngⅡ2 h组培养液中加入终浓度为1×10-6 mmol/L的AngⅡ刺激2 h;(D)AngⅡ4 h组培养液中加入终浓度为1×10-6 mmol/L的AngⅡ刺激4 h.收集细胞培养上清液,用ELISA法测定IL-8含量;提取细胞总RNA,采用逆转录PCR技术检测Ⅱ-8 mRNA的表达水平;提取细胞核蛋白,用凝胶电泳迁移率法检测NF-κB的活性,Western Blot法检测NF-κB p65亚基的水平.采用方差分析检验总体差异,组间两两比较使用q检验.结果 ELISA法测得AngⅡ1 h组细胞培养上清液中IL-8含量(135.35±28.93)pg/mL较对照组(29.59±8.36)pg/mL显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组IL-8含量(357.12±57.21)pg/mL较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组IL-8含量(1732.13±261.73)pg/mL较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异具有统计学意义(F=58.41,P＜0.05).PCR检测AngⅡ1 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.49±0.08)较对照组(0.13±0.03)显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.71±0.10)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.88±0.11)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.05),4组总体差异具有统计学意义(F=19.08,P＜0.05).凝胶电泳迁移率法测得AngⅡ1 h组NF-κB的活性(Au·mm)(139.76±11.72)较对照组(70.37±6.57)显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组NF-κcB的活性(Au·mm)(198.90±18.95)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.05);AngⅡ4 h组NF-κB的活性(388.73±26.27)(Au·m)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异具有统计学意义(F=23.15,P＜0.05).Western blot法检测AngⅡ1 h组NF-κB p65的水平(Au·mm)(73.97±5.34)较对照组(33.05±6.23)显著增高(P＜0.01);Ang Ⅱ2 h组NF-κB p65的水平(Au·m)(168.72±8.40)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组NF-κB p65的水平(254.63±12.26)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异有统计学意义(F=16.33,P＜0.05).结论 AngⅡ可通过激活人肺腺癌A549细胞的NF-κB系统,显著上调趋化因子IL-8的表达,引起中性粒细胞的浸润和活化,造成急性肺损伤,其作用呈时间依赖性,这可能是机械通气肺损伤的致病机制之一.     

吡格列酮抑制实验鼠损伤血管的IL-1β和NF-кB表达及内膜增生研究

摘要：目的：观察吡格列酮对非糖尿病血管损伤模型鼠内膜增生反应、血管组织局部核因子kappa B(NF-кB)和外周血单个核细胞白介素-1β（IL-1β）表达的影响。方法：建立实验鼠颈总动脉通气—干燥法损伤模型，观察吡格列酮干预后实验大鼠颈总动脉血管内膜增生情况，并应用原位杂交技术分析NF-кB的表达和用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）的方法检测外周血单个核细胞IL-1βmRNA的表达。结果：两组损伤血管管腔均较对照侧显著狭窄；实验组和安慰组的对照侧血管均几乎未见NF-Kappa B P65mRNA表达，损伤侧血管在手术后1周见NF-Kappa B P65mRNA表达，且实验组与安慰组表达无显著性差异，第2周时两组均较第1周时表达更为显著（P<0.05），且安慰组相对实验组表达增加；吡格列酮干预后，实验组IL-1βmRNA的相对半定量值较安慰剂组差异具有显著性（P<0.05）。结论：1． 通气-干燥法血管损伤后外周血单个核细胞IL-1βmRNA表达及血管局部NF-кB原位表达增加、血管内膜面积增大。2. 外周血单个核细胞IL-1βmRNA和血管壁局部NF-кB表达水平与血管内膜面积存在正相关关系。3. 吡格列酮抑制损伤血管的内膜增生及NF-кB原位表达和外周血单个核细胞IL-1βmRNA的表达，且不依赖其代谢调节作用。     

血管紧张素Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的影响

目的 阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺泡巨噬细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 收集正常或其他肺病患者正常肺叶组织肺泡灌洗液,分离、纯化、培养肺泡巨噬细胞.予10-6M AngⅡ刺激15,30,60,120 min.另外,予AT-1受体阻断剂irbesartan(10-6M)预处理肺泡巨噬细胞60 min后再予10-6 M AngⅡ刺激60 min.设置对照组.凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NFκB的结合活性.免疫蛋白质印迹检测胞浆内IκBα的表达.RT-PCR检测TNF-α和ICAM-1的表达.应用SPSS 13.0软件进行One-Way ANOVA方差分析,多重比较采用LSD法.以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 AngⅡ刺激肺泡巨噬细胞15 min NF-xB结合活性增强,60 min达到峰值.AT-1受体阻断剂irbesartan可阻断NF-κB结合活性增强.与对照组(1.0)相比,AngⅡ处理组(0.29±0.11)ⅠκBα旺表达减弱,且差异具有统计学意义(P=0.013).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组ⅠκBα表达(0.83±0.12)则增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与对照组(0.42±0.099)相比,AngⅡ处理组TNF-α(1.13±0.17)表达增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.77±0.15)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.02).与对照组ICAM-1表达(0.16±0.050)相比,AngⅡ处理组(0.55±0.08)增强且差异具有统计学意义(P=0.003).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.32±0.07)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.001).结论 Ang Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB通路有正向调节作用.     

糖尿病大鼠肺组织中核转录因子-κB及其抑制因子信号通路的表达变化

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)信号通路激活对糖尿病肺损伤的影响.方法 通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链尿佐菌素(STZ)的方法,建立2型糖尿病大鼠模型,采用光镜动态观察12、24周时,对照组(20只)、糖尿病组(30只)大鼠肺组织的形态学改变情况,用Masson三色染色观察肺组织胶原沉积情况,应用免疫组织化学方法检测2组肺组织NF-κB p65、IκBα、蛋白激酶C的变化情况.结果 光镜下糖尿病大鼠肺组织结构紊乱,肺泡间隔增厚,周围细胞外基质增多,局部纤维化,随病情进展,表达愈加明显.12、24周糖尿病大鼠肺组织NF-κB p65的吸光度值为0.20±0.0l、0.35±0.06,高于同期对照组的0.12±0.02、0.17±0.03,差异有统计学意义(P均＜0.01),12、24周糖尿病肺组织IκB的吸光度为0.29±0.02、0.36±0.03,分别高于同期对照组的0.08±0.02、0.22±0.08,差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 NF-κB及其IκB信号通路的激活参与糖尿病肺组织病变的发生发展,可能是肺损伤的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effect of activation of NF-κB signaling pathway on pathogenesis of lung in diabetes mellitus(DM) rat. Methods The experimental type 2 diabetic rats were built by injecting streptozotocin (STZ) and feeding with high fat and glucose food. At the 12nd and 24th week, we observed the alteration of morphology in the lung of rats in the control group(20 rats) ,the DM group(30 rats)using spectroscopic analysis. The collagen accumulation of lung was observed by masson trihrome staining, and alteration of NF-κB P65, IκBα, and PKC in lung was observed by immunohistochemistry. Results The tissue structure of lung in the DM rats distributed deranged in the light microscope, alveolar wall were thicken, extracellular matrixes increased and pulmonary fibrosis appeared. With the development of pathogenic condition, the expression increased obviously. The staining optical density value of NF-κB P65 in tissue of lung in the 12 w and 24 w DM group were 0. 20 ± 0. 01 and 0. 35 ± 0. 06 respectively, which was significantly higher than those of the control group at the corresponding time point ( 0. 12 ± 0. 02 and 0. 17 ± 0. 03, respectively, Ps ＜ 0. 0l ). The staining optical density value of IκB in tissue of lung in the 12 w and 24 w DM group were 0. 29 ±0. 02 and 0. 36 ± 0. 03, respectively, which were significantly higher than those of the control at the corresponding time point (0. 08 ± 0. 02 and 0. 22 ± 0. 08, respectively, Ps ＜ 0. 01 ). Conclusion The signaling pathway of NF-κB/IκB participate in the occurrence and development in the pathogenesis of lung in DM, and may be one of the mechanisms of lung injury.     

血管内皮生长因子和核转录因子p65在多形性腺瘤中的表达及其意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和核转录因子(NF-κB)p65在不同分型的多形性腺瘤中的表达及意义.方法 涎腺多形性腺瘤患者60例,其中细胞丰富型31例,基质丰富型29例,取瘤旁正常涎腺组织30份,应用免疫组织化学技术检测组织中VEGF、NF-κBp65的表达.结果 (1)VEGF表达主要以肿瘤性上皮组织较多,多为实性上皮条索、腺管样结构区域,染色强度不尽相同.(2)多形性腺瘤组织中NF-κB p65阳性表达主要见于腺泡上皮和导管上皮,呈强阳性染色;间质成分中血管上皮呈弱阳性表达、纤维结缔组织呈弱阳性表达;黏液样组织和软骨样组织未见明显阳性表达.(3)VEGF在细胞丰富型腺瘤中平均吸光度(MA)值为955.67±305.79,基质丰富型MA值为149.13±60.85,正常对照组MA值为53.46±9.66,两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).(4)NF-κB p65在细胞丰富型腺瘤MA值为529.80±164.81,基质丰富型为43.40±5.46,正常对照组为6.84±1.91,两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).<5)涎腺多形性腺瘤中NF-κB p65与VEGF表达呈正相关(r=0.854,P＜0.05).结论 (1)涎腺多形性腺瘤新生血管形成能力及细胞增殖活性随着瘤体中细胞成分的增多而逐渐升高,细胞丰富型多形性腺瘤较基质丰富型多形性腺瘤具有更易恶变的倾向.(2)NF-κB p65可能是通过作用于VEGF来实现对新生血管的调控作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression and significance of VEGF and NF-κB/p65 in the two subtypes of pleomorphic adenoma. Methods Immunohistochemistry was applied to detect the expression of VEGF and NF-κB/p65 in pleomorphic adenoma of 60 patients including 31 cases of cell-rich and 29 cases of stroma-rich as well as normal salivary gland tissues of 30 cases from adjacent tumor. Results VEGF positive staining was mainly found in tumor epithelia,while NF-κB/p65 positive was detected in gland alveolus cell and ductal epithelia. The Mean optical density( MA ) values of VEGF were 955.67 ± 305.79,149. 13 ± 60. 85 and 53.46 ± 9. 66, respectively, in cell-rich adenoma, stroma-rich adenoma and normal control. The difference in VEGF expression between the groups was significant (Ps ＜ 0. 05 ) . The MA values of NF-κB/p65 were 529. 80 ± 164. 81,43.40 ±5.46 and 6. 84 ± 1.91 ,respectively,in three groups mentioned above. The difference in NF-κB/p65 expression between the groups was significant ( Ps ＜ 0. 05 ). In pleomorphic adenoma, the expression level of NF-κB/p65 was positively correlated with VEGF. Conclusion ( 1 ) The angiogenesis and proliferation potential of carcinomas increased with the cell component in pleomorphic adenoma. Stroma-poor adenoma is more frequently subjected to malignant transformation than stroma-rich adenoma. (2) NF-κB/p65 may have effects on angiogenesis by activating VEGF. Detecting the expression of VEGF and NF-κB/p65 may be helpful to predict the biological behavior of pleomorphic adenoma and prognosis of the patients, which couldprovide useful information for future targeted therapy of pleomorphic adenoma.